1、注射用右丙亞胺制備,質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察    【關(guān)鍵詞】 注射用右丙亞胺;制備;質(zhì)量控制;穩(wěn)定性 Dexrazoxane for injection: preparation, quality control and stability study CHEN Xiang-feng, ZHAO Yan-rong, LIU Liu-cheng.Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.,Ltd(Nanjing 211112, China 【Abstract】 Objective To prepare Dexrazoxane f

2、or injection,establish its quality control and determine its stability.Methods The dexrazoxane for injection was prepared and its content determined by HPLC. Meanwhile its stability was tested. Results 100 mg per bottle Mannitol solution was selected with 0.1 mol/L hydrochloric acid as the major adj

3、uvant adjusting pH of 1.9 .The linear range of Dexrazoxane was 4.444 g/ml,r =0.999 9(n =5).No obvious changes were observed at 6 months of an accelerated test or 24 months of long-term storage test. Conclusion The preparation is controllable and stable in quality, and the established method is relia

4、ble and specific for the quantitation of Dexrazoxane. 【Key words】 Dexrazoxane for injection;Preparation;quality control;Stability 右丙亞胺(dexrazoxane)1為雙內(nèi)酰類化合物,1970年由Creighton合成,是一種強(qiáng)有力的細(xì)胞內(nèi)交聯(lián)劑。經(jīng)研究表明2,3:右丙亞胺可以對抗阿霉素累積量誘導(dǎo)的心臟毒性,提供較為有效的臨床安全性,這就允許應(yīng)用較大劑量的阿霉素和更多的治療療程。本品由美國Pharmacia Upiohn生產(chǎn)上市,商品名為Zinecard,為右旋光學(xué)

5、異構(gòu)體。本公司研發(fā)了注射用右丙亞胺,并同時(shí)建立其質(zhì)量控制方法和考察其穩(wěn)定性。 圖1 右丙亞胺結(jié)構(gòu)式 1 儀器及試藥 1.1 儀器 島津高效液相色譜儀系統(tǒng)包括LC-10ATvp泵,SPD-10Avp紫外檢測器,C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理儀;PHS-3C型精密數(shù)顯 pH計(jì)(上海精科);303-1電熱培養(yǎng)箱(江蘇東臺儀器廠)。 1.2 試藥 右丙亞胺對照品(純度99.76%,批號:051205);右丙亞胺原料(批號:051201)由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提供;注射用右丙亞胺(規(guī)格:0.25 g/支,批號:20060101、20060105、20060109)由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提供;甘露醇(山東煙臺

6、海藻工業(yè)公司提供);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純;注射用水(自制)。 2 制備工藝 2.1 輔料的選擇及用量與中間體pH的確定 按表1中的處方設(shè)計(jì)不同的凍干藥液進(jìn)行配制,觀察右丙亞胺溶解性及溶液的顏色。配制方法為按下述處方稱取相應(yīng)的主藥,取鹽酸置無菌容器,加注射用水至80%配制量,使溶液的pH約為2.5,降溫并保溫在26之間,加入右丙亞胺,攪勻,加注射用水至全量,在攪拌下慢慢滴加1.0 mol/L鹽酸至表1規(guī)定的pH值,加0.2%活性炭吸附30 min,脫炭,測定中間體含量合格后,用0.22 m微孔濾膜過濾,濾液按每瓶10 ml的裝量灌裝于25 ml西林瓶中,部分塞上丁橡膠塞,裝盤,送入凍干

7、箱中,插入溫度探頭,關(guān)閉箱門,分階段升溫升華干燥,充氮?dú)?壓塞,出箱,軋口,質(zhì)檢,包裝即得注射用右丙亞胺。 表1 輔料及pH選擇試驗(yàn)結(jié)果 編號主藥/mg #8226;瓶-1甘露醇/mg #8226;瓶-1中間體pH溶解性成型性制品pH可見異物 125002.1不溶 225001.9溶解粉末4.27合格 3250501.9溶解一般4.25不合格 42501001.9溶解塊狀物4.22不合格 表1本品在pH1.9時(shí)有良好的溶解性,同時(shí)考慮到人體對pH的耐受程度,故將本品的pH定為1.9。處方中加入甘露醇作為賦型劑,凍干制品顏色變深,凍干制品復(fù)溶后不能 作者單位:211112江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司

8、完全溶解,有不溶性顆粒物存在。 2.2 中間體穩(wěn)定性考察 按編號6處方配制好右丙亞胺中間體溶液,室溫下放置,與第0、1、2、4、6、8 h分別取樣,考察溶液外觀性狀、可見異物、pH值、含量及有關(guān)物質(zhì),結(jié)果見表2。 表2 中間體溶液穩(wěn)定性考察 時(shí)間(h)外觀性狀可見異物pH含量有關(guān)物質(zhì)/% 0淡黃色符合規(guī)定1.9125.060.64 1淡黃色符合規(guī)定1.9025.080.67 2淡黃色符合規(guī)定1.9325.050.65 4淡黃色符合規(guī)定1.9325.030.71 6淡黃色符合規(guī)定1.9424.990.82 8淡黃色符合規(guī)定1.9824.861.03 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:注射用右丙亞胺中間體溶液于室溫下

9、放置6 h,各項(xiàng)考察指標(biāo)未見明顯變化;放置8 h,pH、含量、有關(guān)物質(zhì)略有變化,但仍在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。故右丙亞胺從配制到灌裝結(jié)束最好在6 h內(nèi)完成。        3 質(zhì)量控制 3.1 色譜條件 色譜柱:shim-pack CLC-ODS(150 mm×4.6 mm,5 m);流動(dòng)相:0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-甲醇(85:15);檢測波長:208 nm;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣體積:20 l。 3.2 系統(tǒng)適應(yīng)性注射用右丙亞胺經(jīng)酸、氧化、高溫、光照破 壞后,產(chǎn)生數(shù)個(gè)降解產(chǎn)物峰。各降解峰與主峰

10、在上述色譜條件下都得到很好分離,同時(shí)本品空白輔料不干擾測定,色譜條件能滿足本品有關(guān)物質(zhì)檢查的需要。 圖1 HPLC色譜圖 A.空白輔料(accessories) B.樣品有關(guān)物質(zhì)(samples related substance) C.酸破壞(samples treated with acid) D.堿破壞(samples treated with alkali) E.熱破壞(samples treated by heat) F.光破壞(samples treated by light)1.右丙亞胺(dexrazoxane) 3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取右丙亞胺對照品適量(約40 mg),精密

11、稱定,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻;分別精密量取該溶液1、3、5、7、10 ml,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液;精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液各20 l,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以進(jìn)樣濃度(C)為橫坐標(biāo),右丙亞胺峰面積(A)縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:A =3165.87C 294.41 r =0.999 9(n =5)。 結(jié)果表明,右丙亞胺在4.444 g/ml的濃度范圍內(nèi),進(jìn)樣濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。 3.4 精密度試驗(yàn) 進(jìn)樣精密度:精密量取標(biāo)準(zhǔn)曲線制備下的中間濃度22 g/ml連續(xù)進(jìn)樣5次,峰面積的RSD=0.3

12、8%,精密度良好。 中間精密度:取同一批樣品,照“含量測定”項(xiàng)下的方法,由2人分2 d在不同的液相色譜儀上分別測定含量,結(jié)果RSD=0.71%。 3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品,照“含量測定”項(xiàng)下的方法,平行制備6份供試品溶液,分別測定其含量,結(jié)果平均含量為99.8%,RSD=0.42%。 3.6 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“重復(fù)性試驗(yàn)”項(xiàng)下供試品溶液1份,分別于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣,測定右丙亞胺峰面積,結(jié)果RSD=0.95%,供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。 3.7 回收率試驗(yàn) 按本品處方主藥量的80%、100%、120%,精密稱取右丙亞胺對照品,按處方工藝加入輔料配制,精密分裝后凍干

13、,取凍干品,照“含量測定”項(xiàng)下方法,分別測定每批樣品中右丙亞胺的含量,根據(jù)測得量與加入量的比值,計(jì)算回收率,結(jié)果見表3。 表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果 投料量加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%) 80.0318.20100.9100.80.20 18.4718.57100.5 18.2218.36100.8 100 .6420.5799.799.70.32 20.1720.18100.0 20.9320.8199.4 120$.8824.6599.199.50.43 24.0123.9999.9 25.1225.0399.6 3.8 有關(guān)物質(zhì)測定 取本品內(nèi)容物適量(約相

14、當(dāng)于右丙亞胺20 mg),精密稱定,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1 ml,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液。照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件,取對照溶液20 l注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測靈敏度,使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%25%,再精密量取供試品溶液與對照溶液各20 ?l注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。按上述方法對批號為20060101、20060105、20060109的樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果有關(guān)物質(zhì)分別為0.71%、0.68%、0.74%,單雜分別為0.42%、0.41%、0.44%。

15、3.9 含量測定 照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件,精密量取濃度約為20 g/ml對照品溶液和供試品溶液各20 l,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,測得批號20060101、20060105、20060109樣品的標(biāo)示量分別為99.6%,99.2%,100.3%。 4 穩(wěn)定性考察4 4.1 影響因素試驗(yàn) 取注射用右丙亞胺在光照(4500±500) lx、高溫(60 ±2 )、低溫(4±2)條件下放置10 d,分別于0、5、10 d取樣考察,比較外觀性狀、溶液的澄清度與顏色、堿度、標(biāo)示量、有關(guān)物質(zhì)等指標(biāo)與放置前相比均無明顯變化。經(jīng)光照條件下放置10 d,

16、其含量有所下降,有關(guān)物質(zhì)增加,溶液顏色變?yōu)闇\紅色。 4.2 恒溫加速試驗(yàn) 取3批注射用右丙亞胺(批號:20060101、20060105、20060109)置于溫度(40±2),RH(75±5)%條件下,放置6個(gè)月,在此期間分別于第0、1、2、3、6月取樣,考察其外觀性狀、溶液的澄清度與顏色、堿度、標(biāo)示量、有關(guān)物質(zhì)等方面的變化,結(jié)果顯示本品在加速試驗(yàn)條件下放置6個(gè)月,各項(xiàng)考察指標(biāo)與放置前比較均未發(fā)生明顯變化。 4.3 長期留樣試驗(yàn) 取3批注射用右丙亞胺(批號:20060101、20060105、20060109)置于溫度(25±2),RH(60±10)%

17、條件下,放置24個(gè)月,在此期間分別于第0、3、6、9、12、18、24月取樣,考察其外觀性狀、溶液的澄清度與顏色、堿度、標(biāo)示量等方面與放置前相比均無明顯變化;12、24月無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查仍合格;但隨著放置時(shí)間的延長,有關(guān)物質(zhì)有所增加,但仍在合格范圍內(nèi)。結(jié)果顯示本品在長期試驗(yàn)條件下放置24個(gè)月較為穩(wěn)定。 5 討論 5.1 由于本品在水及堿性溶液中不穩(wěn)定,顏色變黃,我們參照國外5904方進(jìn)行配制,首先將注射用水配成0.05 mol/L的鹽酸溶液,然后再將右丙亞胺加入,確保其不被水解。        5.2 由于右丙

18、亞胺中間體溶液對溫度及光照極為敏感,故從配制到灌裝完成應(yīng)在6 h內(nèi)。在樣品檢驗(yàn)過程中,配樣要迅速,并采取避光措施,配好的樣品溶液及對照溶液應(yīng)放在冰箱(28)中避光保存。 5.3 右丙亞胺處方中加入甘露醇,凍干過程中溶液粘稠,導(dǎo)致凍干制品中水分很難被抽出,右丙亞胺溶融,濃縮,致使凍干制品成塊狀物;同時(shí)由于凍干制品含水分較多,右丙亞胺極易發(fā)生消旋化,生成丙亞胺,使得凍干制品有關(guān)物質(zhì)超標(biāo)。 5.4 右丙亞胺為丙亞胺的右旋光學(xué)異構(gòu)體,易消旋化,金屬離子對其消旋化起催化作用,故在右丙亞胺整個(gè)配制過程中,應(yīng)盡可能使用玻璃瓶、玻璃棒,而不使用金屬桶,金屬棒,還應(yīng)盡量采用避光操作。 參 考 文 獻(xiàn) 1 Zinecard dexrazoxane for injection 國外說明書. 2 J M Sargent, C J Willianson, et al. Dexrazoxane significantly impairs the induction of doxorubicin resistance in the human leukaemia line, K562. British Journal of Cancer, Apr,2001,84,7: