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1、 二、實(shí)驗(yàn)器材與試劑 1. 器具: 顯微鏡 離心機(jī) 天平 離心管 細(xì)滴管 載片、蓋片 酒精燈 試管 2 試劑: 50%聚乙二醇(PEG:稱取一定量的PEG(MW=4000放入刻度試 管中在 至 酒精燈火或沸水中加熱溶化。待冷至50時(shí),加入等體積并預(yù)熱 50的GKN液混勻。 Alsver液:葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g,加重蒸水至100ml。 GKN 液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4.2H2O 1.77g, NaH2PO4.2H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚紅0.01g,溶于1000ml重蒸水中。 0.85%NaCl液 三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法 1.用
2、注射器取2ml Alsver液,再?gòu)囊硐蚂o脈取雞血2ml,注入 管內(nèi),再加6ml Alsver液,混勻后置4冰箱中可備作3-4 用。 2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)取“1”液1ml于離心管中,加入4ml 0.85%的NaCl 液,混勻平衡后以1200rpm離心5min。 3. 去上清液。再重復(fù)“2”兩次,最后一次離心10min。 4. 在沉降血球中加入1mlGKN液,混勻使之成為細(xì)胞懸液。 5. 在“4”液中加入68滴(約0.5ml)50%的PEG液,迅速 混勻,常溫下2-3min滴片鏡檢。 v 四、結(jié)果觀察 在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞血細(xì)胞膜 融合在一起,形成一個(gè)異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞 與重疊的雞血細(xì)胞。 v 五、融合率的計(jì)算 在高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞(包括融合的與未融合 的細(xì)胞,以融合細(xì)胞(含兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞核的細(xì)胞
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