1、食品微生物學(xué)食品微生物學(xué)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組第四章第四章 非細(xì)胞微生物非細(xì)胞微生物 病毒病毒acellular organization Virusesn 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述n 第二節(jié)第二節(jié) 病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)n 第三節(jié)第三節(jié) 病毒的復(fù)制病毒的復(fù)制n 第四節(jié)第四節(jié) 病毒的檢出與定量病毒的檢出與定量n 第五節(jié)第五節(jié) 病毒與實(shí)踐病毒與實(shí)踐南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、病毒的發(fā)現(xiàn)和研究歷史1886年，A. Mayer 發(fā)現(xiàn)具有傳染性的煙草花葉病；1892年，D. Ivanovsky煙草花葉病病原體能通過

2、細(xì)菌濾器： 一種能通過細(xì)菌濾器的”細(xì)菌毒素”或極小的細(xì)菌南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組1898年，M W Beijerinck對(duì)煙草花葉病病原體的研究結(jié)果：t 能通過細(xì)菌濾器；t 可被乙醇沉淀而不失去其感染性，t 能在瓊脂凝膠中擴(kuò)散；t 用培養(yǎng)細(xì)菌的方法不能被培養(yǎng)出來，推測只能在植物活細(xì)胞中生活；比細(xì)菌小的具有傳染性的活的流質(zhì)（contagium vivum fluidum）南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組1900年前后，包括口蹄疫（foot and mouth disease）(Loeffer和Frosch發(fā)現(xiàn)，1989年)在內(nèi)的多種動(dòng)植物疾病病原體的濾過性特性被證明。filterable v

3、iruses（濾過性病毒）viruses（病毒）F W Twort（1915年）、F dHerelle（1917年），分別發(fā)現(xiàn)細(xì)菌（Shigella dysenteriae）病毒bacteriophages噬菌體（phage）1935年，W M Stanley首次提純并結(jié)晶了煙草花葉病毒 (tobacco mosaic virus,TMV)； Bawden等證明煙草花葉病毒的本質(zhì)為核蛋白；1940年，Kausche首先用電鏡觀察到煙草花葉病毒顆粒；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組極大地豐富了現(xiàn)代生物學(xué)（微生物學(xué)、分子生物學(xué)、分子極大地豐富了現(xiàn)代生物學(xué)（微生物學(xué)、分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)）的理論與技

4、術(shù)；遺傳學(xué)）的理論與技術(shù)；病毒學(xué)（病毒學(xué)（viruology） ：研究病毒（研究病毒（virus）的本質(zhì)及其與）的本質(zhì)及其與宿主的相互作用的科學(xué)，是微生物學(xué)的重要分支學(xué)科。宿主的相互作用的科學(xué)，是微生物學(xué)的重要分支學(xué)科。有效地控制和消滅人及有益生物的病毒病害；有效地控制和消滅人及有益生物的病毒病害；利用病毒對(duì)有害生物、特別是害蟲進(jìn)行生物防治；利用病毒對(duì)有害生物、特別是害蟲進(jìn)行生物防治；發(fā)展以基因工程為中心的生物高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)；發(fā)展以基因工程為中心的生物高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組二、病毒的特點(diǎn)和定義1、特點(diǎn)1 1）不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有一般化學(xué)大分子的特征。）不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有一

5、般化學(xué)大分子的特征。2 2）一種病毒的毒粒內(nèi)只含有一種核酸，）一種病毒的毒粒內(nèi)只含有一種核酸，DNADNA或者或者RNARNA。3 3）大部分病毒沒有酶或酶系極不完全，不含催化能量代謝）大部分病毒沒有酶或酶系極不完全，不含催化能量代謝 的酶，不能進(jìn)行獨(dú)立的代謝作用。的酶，不能進(jìn)行獨(dú)立的代謝作用。4 4）嚴(yán)格的活細(xì)胞內(nèi)寄生，沒有自身的核糖體，沒有個(gè)體生）嚴(yán)格的活細(xì)胞內(nèi)寄生，沒有自身的核糖體，沒有個(gè)體生 長，也不進(jìn)行二均分裂，必須依賴宿主細(xì)胞進(jìn)行自身的長，也不進(jìn)行二均分裂，必須依賴宿主細(xì)胞進(jìn)行自身的 核酸復(fù)制，形成子代。核酸復(fù)制，形成子代。5 5）個(gè)體微小，在電子顯微鏡下才能看見。）個(gè)體微小，在電

6、子顯微鏡下才能看見。6 6）對(duì)大多數(shù)抗生素不敏感，對(duì)干擾素敏感。）對(duì)大多數(shù)抗生素不敏感，對(duì)干擾素敏感。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組病毒是一類既具有化學(xué)大分子屬性，又具有生物體基本特征；病毒是一類既具有化學(xué)大分子屬性，又具有生物體基本特征；既具有細(xì)胞外的感染性顆粒形式，又具有細(xì)胞內(nèi)的繁殖性基因既具有細(xì)胞外的感染性顆粒形式，又具有細(xì)胞內(nèi)的繁殖性基因形式的獨(dú)特生物類群。形式的獨(dú)特生物類群。超顯微的、沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的、專性活細(xì)胞內(nèi)寄生的實(shí)體南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組細(xì)菌與病毒性質(zhì)的比較南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組2、定義病毒為具有獨(dú)立于其宿主的進(jìn)化史的絕對(duì)細(xì)胞內(nèi)寄生物，它的DNA或RNA基因組被

7、其所編碼的蛋白質(zhì)殼體化（encapsidation）。 -（Fields等，1990年）非細(xì)胞生物（真）病毒：至少含核酸和蛋白質(zhì)二種組分亞病毒類病毒： 只含具侵染性的RNA組分衛(wèi)星RNA：只含有不具侵染性的RNA組分朊病毒： 只含蛋白質(zhì)（euvirus）（subvirus)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組三、病毒的宿主范圍病毒幾乎可以感染所有的細(xì)胞生物，并具有宿主特異性噬菌體（phage）、植物病毒（plant viruses）動(dòng)物病毒（animal viruses）南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組第二節(jié)第二節(jié) 病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)病毒是一類既具有化學(xué)大分子屬性，又具有生物體基本特征；病毒

8、是一類既具有化學(xué)大分子屬性，又具有生物體基本特征；既具有細(xì)胞外的感染性顆粒形式，又具有細(xì)胞內(nèi)的繁殖性基因既具有細(xì)胞外的感染性顆粒形式，又具有細(xì)胞內(nèi)的繁殖性基因形式的獨(dú)特生物類群。形式的獨(dú)特生物類群。毒粒(virion)病毒顆粒(virus particle)： 病毒的細(xì)胞外顆粒形式，也是病毒的感染性形式。一團(tuán)能夠自主復(fù)制的遺傳物質(zhì)保護(hù)遺傳物質(zhì)免遭環(huán)境破壞，并作為將遺傳物質(zhì)從一個(gè)宿主細(xì)胞傳遞給另一個(gè)宿主細(xì)胞的載體。蛋白質(zhì)外殼 包膜南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組一、毒粒的形態(tài)結(jié)構(gòu)1、病毒的大小和形狀、病毒的大小和形狀個(gè)體小，必需在電鏡下觀察；不同病毒的毒粒大小差別很大；毒粒的形狀大致可分球形顆粒(

9、或稱擬球形顆粒)、桿狀顆粒和復(fù)雜形狀顆粒（如蝌蚪狀，卵形）等少數(shù)幾類。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組病 毒 的 形 狀南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組病毒的形體微小，只能以nm計(jì)量，一般為 10 300 nm。 各種毒粒的大小、形態(tài)差異很大南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組二、毒粒的化學(xué)組成毒粒（化學(xué)組成）核酸；蛋白質(zhì)；脂類；碳水化合物；基本化學(xué)組成南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組二、毒粒的化學(xué)組成1、 病毒的核酸t(yī) 核酸是病毒的遺傳物質(zhì)；t 一種病毒的毒粒只含有一種核酸：DNA或是RNA；病毒核酸單鏈DNA（ss DNA）；雙鏈DNA（ds DNA）；單鏈RNA（ss RNA）；雙鏈RNA（ds R

10、NA）；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組病毒的核酸類型病毒的核酸類型動(dòng)物病毒動(dòng)物病毒含含DNADNA雙鏈雙鏈牛痘病毒牛痘病毒單鏈單鏈小鼠細(xì)小病毒小鼠細(xì)小病毒含含RNARNA雙鏈雙鏈呼腸弧病毒呼腸弧病毒單鏈單鏈脊髓灰質(zhì)炎病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒植物病毒植物病毒含含RNARNA雙鏈雙鏈水稻矮縮病毒水稻矮縮病毒單鏈單鏈煙草花葉病毒煙草花葉病毒含含DNADNA雙鏈雙鏈花椰菜花葉病毒花椰菜花葉病毒細(xì)菌病毒細(xì)菌病毒含含DNADNA雙鏈雙鏈大腸桿菌大腸桿菌T T系噬菌體系噬菌體單鏈單鏈大腸桿菌大腸桿菌X174X174，M13M13含含RNARNA單鏈單鏈大腸桿菌大腸桿菌f f2 2噬菌體噬菌體(5(5群群) )南京

11、農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組核酸功能核酸功能：核酸功能核酸功能儲(chǔ)存病毒的遺傳信息儲(chǔ)存病毒的遺傳信息控制病毒的遺傳變異控制病毒的遺傳變異控制病毒的增殖控制病毒的增殖控制病毒對(duì)宿主的感染性控制病毒對(duì)宿主的感染性南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組2、病毒的蛋白質(zhì)病毒蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)蛋白病毒基因組編碼的，在病毒復(fù)制過程中產(chǎn)生并具有一定功能，但并不結(jié)合于毒粒中的蛋白質(zhì)。構(gòu)成一個(gè)形態(tài)成熟的有感染性的病毒顆粒所必需的蛋白質(zhì)殼體蛋白；基質(zhì)蛋白；囊膜蛋白；酶蛋白；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組病毒結(jié)構(gòu)蛋白的主要生理功能：1）構(gòu)成蛋白質(zhì)外殼，保護(hù)病毒核酸破壞；2）決定病毒感染的特異性；3）決定病毒的抗原性，能刺激機(jī)

12、體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體；4）構(gòu)成毒粒酶，或參與病毒對(duì)宿主細(xì)胞的入侵（如T4噬菌體的溶菌酶等），或參與病毒復(fù)制過程中所需要病毒大分子的合成（如逆轉(zhuǎn)錄酶等）；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組3.其他成分：較復(fù)雜病毒中還含有較復(fù)雜病毒中還含有: : n脂類：有些病毒包膜中脂類：有些病毒包膜中含有來源于宿主細(xì)胞的脂類化合含有來源于宿主細(xì)胞的脂類化合物，其中物，其中50-60%50-60%為為磷脂，余為磷脂，余為膽膽固醇。固醇。 n多糖：以糖脂、糖蛋白的形式存在。多糖：以糖脂、糖蛋白的形式存在。 n有的病毒還含胺類有的病毒還含胺類（丁二胺，亞精胺等）（丁二胺，亞精胺等）、金屬離子等、金屬離子等，它們是病毒裝配時(shí)

13、從環(huán)境中獲得的不恒定成分它們是病毒裝配時(shí)從環(huán)境中獲得的不恒定成分。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組三、毒粒的結(jié)構(gòu)毒粒的結(jié)構(gòu)衣殼粒衣殼粒(Capsomere)衣殼衣殼(Capsid)核酸核酸核殼（核殼（nucleocapsid）包膜包膜(envelope)刺突刺突(spike)由一種或幾種多肽鏈折疊由一種或幾種多肽鏈折疊而成的蛋白質(zhì)亞單位而成的蛋白質(zhì)亞單位。病毒的蛋白質(zhì)殼體和病毒核酸病毒的蛋白質(zhì)殼體和病毒核酸（核心）構(gòu)成的復(fù)合物，又稱核（核心）構(gòu)成的復(fù)合物，又稱核衣殼。衣殼。包膜或核衣殼上的突起。包膜或核衣殼上的突起。 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組殼體結(jié)構(gòu)類型螺旋

14、對(duì)稱（helical symmetry）殼體二十面體對(duì)稱(icosahedral symmetry)殼體復(fù)合對(duì)稱( complex symmetry)結(jié)構(gòu)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組亞基有規(guī)律地沿著中心軸（核酸）呈螺旋排列，進(jìn)而形成高度有序、對(duì)稱的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。此形狀多為RNA病毒，具螺旋對(duì)稱的動(dòng)物病毒多有包膜。1. 螺旋對(duì)稱（helical symmetry）殼體：有包膜的螺旋毒粒裸露的螺旋毒粒；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組2.二十面體對(duì)稱(icosahedral symmetry)殼體：1)球或近球形球或近球形，沒有包膜，直徑?jīng)]有包膜，直徑70-8070-80nm。 2)高倍電鏡下為多面體

15、高倍電鏡下為多面體, 它它有有12個(gè)角，個(gè)角，20個(gè)面，個(gè)面，30條棱。呈條棱。呈5（角）：（角）：3（面）：（面）：2（線）軸對(duì)稱結(jié)構(gòu)。（線）軸對(duì)稱結(jié)構(gòu)。3)衣殼由衣殼由252個(gè)衣殼粒組成，每個(gè)衣殼粒通常是由個(gè)衣殼粒組成，每個(gè)衣殼粒通常是由5個(gè)或個(gè)或6個(gè)蛋白質(zhì)亞基個(gè)蛋白質(zhì)亞基聚集形成。有聚集形成。有12個(gè)稱做五鄰體（個(gè)稱做五鄰體（penton）的衣殼粒（分子量各為）的衣殼粒（分子量各為70000Da），位于），位于12個(gè)角上。每個(gè)五鄰體上突出一根末端帶有頂球的蛋個(gè)角上。每個(gè)五鄰體上突出一根末端帶有頂球的蛋白纖維，稱為觸須樣纖維（也叫刺突）。有白纖維，稱為觸須樣纖維（也叫刺突）。有240個(gè)六鄰

16、體（個(gè)六鄰體（hexon）（分子量各為（分子量各為120000Da）位于均勻分布在）位于均勻分布在20個(gè)面上。個(gè)面上。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組構(gòu)成對(duì)稱結(jié)構(gòu)殼體的第二種方式是蛋白質(zhì)亞基圍繞具立方對(duì)稱的正多面體的角或邊排列，進(jìn)而形成一個(gè)封閉的蛋白質(zhì)的鞘。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組3. 復(fù)合對(duì)稱( complex symmetry)大腸桿菌的大腸桿菌的T4噬菌體是噬菌體是由橢圓形的二十面體頭部由橢圓形的二十面體頭部和螺旋對(duì)稱的尾部組合而和螺旋對(duì)稱的尾部組合而成，是病毒中復(fù)合對(duì)稱的成，是病毒中復(fù)合對(duì)稱的代表。代表。有尾噬菌體（有尾噬菌體（tailed phage），），其殼體由頭部和尾部組成

17、。其殼體由頭部和尾部組成。包裝有病毒核酸的頭部通常呈二十面體對(duì)稱，尾部呈螺旋對(duì)稱。包裝有病毒核酸的頭部通常呈二十面體對(duì)稱，尾部呈螺旋對(duì)稱。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組第三節(jié)第三節(jié) 病毒的復(fù)制病毒的復(fù)制病毒的特點(diǎn)：嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生物，只能在活細(xì)胞內(nèi)繁殖。病毒感染敏感宿主細(xì)胞后，病毒核酸進(jìn)入細(xì)胞，通過其復(fù)制與病毒感染敏感宿主細(xì)胞后，病毒核酸進(jìn)入細(xì)胞，通過其復(fù)制與表達(dá)產(chǎn)生子代病毒基因組和新的蛋白質(zhì)，然后由這些新合成的表達(dá)產(chǎn)生子代病毒基因組和新的蛋白質(zhì)，然后由這些新合成的病毒組分裝配（病毒組分裝配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式釋放到）成子代毒粒，并以一定方式釋放到細(xì)胞外。病毒的這種特殊繁

18、殖方式稱做復(fù)制（細(xì)胞外。病毒的這種特殊繁殖方式稱做復(fù)制（replication）。）。病毒的復(fù)制：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組一、病毒的復(fù)制周期復(fù)制周期（replicative circle）或稱復(fù)制循環(huán)：自病毒吸附于細(xì)胞開始，到子代病毒從感染細(xì)胞釋放到細(xì)胞外的病毒復(fù)制過程。 吸附(absorption)； 侵入(penetration)； 復(fù)制(replication)； 裝配(assembly)（成熟）； 釋放(release)；南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組烈性噬菌體的繁殖過程烈性噬菌體的繁殖過程南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組吸附：吸附：噬菌體和宿主細(xì)胞上的特異噬菌體和宿主細(xì)胞上的特異

19、性吸附部位進(jìn)行特異性結(jié)合，噬菌體性吸附部位進(jìn)行特異性結(jié)合，噬菌體以尾絲牢固吸附在受體上后，靠刺突以尾絲牢固吸附在受體上后，靠刺突“釘釘”在細(xì)胞表面上。在細(xì)胞表面上。侵入：侵入：核酸注入細(xì)胞的過程。噬菌核酸注入細(xì)胞的過程。噬菌體尾部所含酶類物質(zhì)可使細(xì)胞壁產(chǎn)生體尾部所含酶類物質(zhì)可使細(xì)胞壁產(chǎn)生一些小孔，然后尾鞘收縮，尾髓刺入一些小孔，然后尾鞘收縮，尾髓刺入細(xì)胞壁，并將核酸注入細(xì)胞內(nèi)，蛋白細(xì)胞壁，并將核酸注入細(xì)胞內(nèi)，蛋白質(zhì)外殼留在細(xì)胞外。質(zhì)外殼留在細(xì)胞外。復(fù)制復(fù)制 ：包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成。噬菌體核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞后，合成。噬菌體核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞后，會(huì)控制宿主細(xì)胞的合成系統(tǒng)，然

20、后以會(huì)控制宿主細(xì)胞的合成系統(tǒng)，然后以噬菌體核酸中的指令合成噬菌體所需噬菌體核酸中的指令合成噬菌體所需的核酸和蛋白質(zhì)。的核酸和蛋白質(zhì)。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組裝配：裝配：主要步驟有：主要步驟有：DNADNA分子的縮合分子的縮合通過衣殼包裹通過衣殼包裹DNADNA而形成頭部而形成頭部尾絲及尾部的其它部件獨(dú)立裝配完成尾絲及尾部的其它部件獨(dú)立裝配完成頭部與尾部頭部與尾部相結(jié)合相結(jié)合最后裝上尾絲，至此，一個(gè)個(gè)成熟的形狀、最后裝上尾絲，至此，一個(gè)個(gè)成熟的形狀、大小相同的噬菌體裝配完成。大小相同的噬菌體裝配完成。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組釋放：釋放：方式：方式：裂解：多以裂解細(xì)胞的裂解：多以裂解細(xì)

21、胞的方式釋放。方式釋放。分泌：噬菌體穿出細(xì)胞，分泌：噬菌體穿出細(xì)胞，細(xì)胞并不裂解。細(xì)胞并不裂解。通常情況下，一個(gè)噬菌通常情況下，一個(gè)噬菌體通過上述五個(gè)過程能體通過上述五個(gè)過程能合成合成100100300300個(gè)噬菌個(gè)噬菌體。烈性噬菌體的這種體。烈性噬菌體的這種生長繁殖方式也稱為一生長繁殖方式也稱為一步生長，步生長，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組二、烈性噬菌體與一步生長曲線烈性噬菌體(virulent phage):能在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生大量子噬菌體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體烈性噬菌體的這種生長方式稱一步生長。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組一步生長曲線（one step growth curve）

22、1939年，Max Delbruck & Emory Ellis：E. coli / bacteriopage1、用噬菌體的稀釋液感染高濃度的宿主細(xì)胞；2、數(shù)分鐘后，加入抗噬菌體的抗血清；3、將上述混合物大量稀釋，終止抗血清的作用和防止新釋放 的噬菌體感染其它細(xì)胞；4、保溫培養(yǎng)并定期檢測培養(yǎng)物中的噬菌體效價(jià)；5、以感染時(shí)間為橫坐標(biāo)，病毒的感染效價(jià)為縱坐標(biāo)，繪制出 病毒特征性的繁殖曲線；概念：經(jīng)過一步生長實(shí)驗(yàn)后,得到以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),以噬菌斑數(shù)為縱坐標(biāo)繪制成的有潛伏期、裂解期和穩(wěn)定期的特征性曲線。實(shí)驗(yàn)過程:敏感菌10ml + Phage 1ml混勻，5min,使之吸附離心或用抗phage血清處

23、理, 去除過量phage高倍稀釋,吸附phage的菌懸液 (避免多次吸附)37培養(yǎng),定時(shí)取樣樣品中加入氯仿裂解細(xì)胞24-48h裂解液加入敏感菌液中 適當(dāng)稀釋混合液涂布于瓊脂培養(yǎng)基上計(jì)數(shù)噬菌斑人為裂解處理（每人為裂解處理（每5min）一步生長曲線（one step growth curve）噬菌體復(fù)制（繁殖）的三個(gè)階段：1、吸附期(adsorption period)；游離的噬菌體吸附到宿主細(xì)胞2、潛伏期(latent period)；從噬菌體吸附到細(xì)胞到釋放出新噬菌體的最短時(shí)期3、裂解期(lysis period)；隨著菌體不斷破裂，新噬菌體數(shù)目增加，直到最高值 平穩(wěn)期（plateau pha

24、se）南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組潛伏期（latent period） ：毒粒吸附于細(xì)胞到受染細(xì)胞釋放出子代毒粒所需要的最短時(shí)間。噬菌體幾分鐘，動(dòng)物病毒與植物病毒以小時(shí)或天計(jì)算。裂解量（burst size) ：每個(gè)受染細(xì)胞所產(chǎn)生的子代病毒顆粒的平均數(shù)目。等于潛伏期受染細(xì)胞的數(shù)目除以穩(wěn)定期受染細(xì)胞所釋放的全部子代病毒的數(shù)目，噬菌體的裂解量一般為幾十到幾百，動(dòng)植物病毒幾百到上萬個(gè)。 一步生長曲線的特征性數(shù)據(jù)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組三、溫和噬菌體和溶源性溫和噬菌體(temperate phage )或稱溶源性噬菌體（lysogenic phage）：侵染細(xì)菌后不產(chǎn)生子噬菌體和引起細(xì)菌裂解的

25、噬菌體。溶源性溶源性(lysogeny)：溫和噬菌體侵染敏感細(xì)菌后不裂解它們，而與細(xì)菌共存的特性。前噬菌體前噬菌體(prophage)：整合于細(xì)菌染色體或以質(zhì)粒形成存在的溫和噬菌體基因組稱做原噬菌體。（一）溫和噬菌體溫和噬菌體的溶源性反應(yīng)：在原噬菌體階段，噬菌體的復(fù)制被抑制，宿主細(xì)胞正常地生長繁殖，而噬菌體基因組與宿主細(xì)菌染色體同步復(fù)制，并隨細(xì)胞分裂而傳遞給子代細(xì)胞。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組（二）溶源性細(xì)菌及其檢出溶源性感染對(duì)細(xì)胞的影響：溶源菌的特性：溶源菌的特性：1.溶源性細(xì)菌（溶源性細(xì)菌（lysogenic bacteria） 細(xì)胞中含有以原噬菌體狀態(tài)存在的溫和噬菌體基因組的細(xì)菌稱做

26、溶源性細(xì)菌。(2) 裂解： 自發(fā)裂解(spontaneous lysis) 誘發(fā)裂解(inductive lysis)；(1)具有遺傳的、產(chǎn)生前噬菌體的能力；(3)復(fù)愈； (4)免疫性(5)溶源轉(zhuǎn)變(6) 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組2.溶源性細(xì)菌的檢出：培養(yǎng)UV輻射（誘導(dǎo)裂解）復(fù)制培養(yǎng)（進(jìn)入裂解周期）離心取上清與敏感菌倒平板菌落周圍出現(xiàn)透明圈即為溶源性細(xì)菌南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組一、直接法一、直接法: :電子顯微鏡電子顯微鏡二、間接法二、間接法 間接法的基礎(chǔ)：細(xì)胞病變效應(yīng)間接法的基礎(chǔ)：細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE)病毒感染單位病毒感染單位(virus infection unit)：是指當(dāng)病毒和敏感宿主混合：是指當(dāng)病毒和敏感宿主混合時(shí)能產(chǎn)生可檢測的效應(yīng)的最小單位。時(shí)能產(chǎn)生可檢測的效應(yīng)的最小單位。是指由于病毒感染出現(xiàn)的宏觀、局部或普遍的退化性病變是指由于病毒感染出現(xiàn)的宏觀、局部或普遍的退化性病變或異常。或異常。第四節(jié)第四節(jié) 病毒的檢出與定量病毒的檢出與定量 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品院食品微生物組由于病毒感染引起的敏感由于病毒感染引起的敏感細(xì)胞層上出現(xiàn)的裂解圈或細(xì)胞層上出現(xiàn)的裂解圈或細(xì)胞抑制圈。細(xì)胞抑制圈。(一一) 噬菌斑噬菌斑 （plaque） Quantification of bacterial