1、食品中維生素 C 的測定摘要:維生素 C (抗壞血酸是一種己糖醛基酸,有四種異構(gòu)體,其中 L-(+ -抗壞 血酸的活性最強,極易被氧化。它在細胞氧化、膠原蛋白的形成、鐵離子由血漿到組織 器官中的轉(zhuǎn)運、 肌體免疫及抗體形成中起著重要的作用。 測定維生素 C 常用的方法有 2, 6-二氯靛粉滴定法、 2, 4-二硝基苯肼法、熒光法及高效液相色譜法、極譜法等。 2, 6-二氯靛酚滴定法測定的是還原型抗壞血酸, 該法簡便、 快速, 但易受其他還原物質(zhì)干擾、 對深色樣液難辨終點; 熒光法、 高效液相色譜法及極譜法對實驗儀器和技術(shù)的要求比較 高,綜合各方面本文采用 2, 4-二硝基苯肼法,利用分光光度計分

2、別測定橙汁、獼猴桃 汁、梨汁的汁,再根據(jù)標準曲線計算其維生素 C 含量。關(guān)鍵詞:維生素 C 、 2, 4-二硝基苯肼法、分光光度計、標準曲線前言:本文介紹了靛粉滴定法、高效液相色譜法及 2, 4-二硝基苯肼法這三種維生素 C 含量的測定方法, 通過分析比較并結(jié)合實驗室的設備條件及對操作技術(shù)的要求, 采用 2, 4-二硝基苯肼法。先測總抗壞血酸,總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖 酸型。此法是將樣品的還原型抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸,然后與 2, 4-二硝基苯 肼作用,生成紅色的脎。脎的量與總抗壞血酸含量成正比,將紅色脎溶于硫酸后進行比 色,由標準曲線計算樣品中總 Vc 。用酸處理過的活

3、性炭把還原型的抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸, 再繼續(xù)氧化為二 酮古樂糖酸。二酮古樂糖酸與 2, 4-二硝基苯肼偶聯(lián)生成紅色的脎,其成色的強度與二 酮古樂糖酸濃度呈正比,可以比色定量。由于橙汁中的 Vc 含量較高,所以所測樣品為 1:10樣液;梨的 Vc 含量較低,所 以測其原液;而獼猴桃中 Vc 含量也較高,為了實驗的完整性及對照性,測定獼猴桃原 液及 1:10樣液。實驗方案:方案一:2, 6-二氯靛酚滴定法水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個新鮮水果,用紗布或吸水紙吸干表面水分。然后稱取 20g ,加入 20ml 2%草酸,用研缽研磨,四層紗布過濾,濾液備用。紗布可用少量 2%草酸洗幾次,合并濾液,濾

4、液總體積定容至 50ml 。準確吸取標準抗壞血酸溶液 1ml 臵 100ml 錐形瓶中,加 9ml 1%草酸,用微量滴定管以 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡紅色,并保持 15s 不褪色,即達終點。由所用 染料的體積計算出 1ml 染料相當于多少毫克抗壞血酸(取 10ml 1%草酸作空白對照, 按以上方法滴定 。準確吸取濾液兩份,每份 10ml, 分別放入 2個錐形瓶內(nèi),滴定方法同前。另取 10ml 1%草酸作空白對照滴定。方案二:高效液相色譜法高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組 成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng) , 樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動

5、相 , 被流動相載入 色譜柱 (固定相 內(nèi) , 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù) , 在兩相 中作相對運動時 , 經(jīng)過反復多次的吸附 - 解吸的分配過程 , 各組分在移動速度上產(chǎn)生較 大的差別 , 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出 , 通過檢測器時 , 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信 號傳送到記錄儀 , 數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。方案三:2, 4-二硝基苯肼法實驗儀器與藥品 :吸量管、容量瓶、分光光度計、保溫箱、比色管多支、草酸、活 性炭、硫脲、 2, 4-二硝基苯肼、 85%H2SO 4、橙汁、新鮮獼猴桃一個、梨實驗步驟:1. 樣品處理1.1稱取獼猴桃 122g 加等量 2%草酸 于高速搗

6、碎機搗碎 取勻漿 20g 用 1%草酸 定容 100ml 過濾 取濾液 10ml 加 1%草酸 10ml 原液 配臵 1:10樣品溶液1.2取一定量橙汁 用 1%草酸定容 100m l 配臵 1:10樣品溶液1.3稱取一定量梨 加等量 2%草酸 于高速搗碎機搗碎 取勻漿 20g 用 1%草酸定容100ml 過濾 取濾液 10ml 加 1%草酸 10ml 原液2. 樣品還原型抗壞血酸的氧化處理加少量活性炭 用玻棒攪拌 1分鐘 靜臵過濾 各取濾液 2ml 于樣品管和樣品空白管 各管加入 1d 硫脲溶液3. 呈色反應于樣品管中加入 2, 4-二硝基苯肼 0.5ml 分別于兩個管加蓋 于 37 保溫箱

7、 2.5小時 取出后樣品管放入冰水中 樣品空白管取出后冷至室溫 在樣品空白管加入 2, 4-二 硝基苯肼 0.5ml 樣品管和空白管都于冰浴中4. 85%硫酸處理滴加 85%H2SO 42ml 于各管中 邊滴邊搖 防止溫度升高炭化后呈黑色 冰浴中 30min 后取出 室溫下放臵 30min5. 樣品比色測定用 1cm 比色皿,以空白液調(diào)零點,在 540nm 測吸光值,從標準曲線上查出相應的含 量。6. 標準曲線的繪制試管號 0 1 2 3 4 50.2mg/Vc(ml 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 H 2O(ml 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0.0 20g/L硫脲

8、 2d 2d 2d 2d 2d 2d 2,4-二硝基苯肼 (ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5方案討論:以上三種方案都是常用的維生素 C 含量的測定方案,其中 2, 6-二氯靛酚滴定法測定的 是還原型抗壞血酸, 該法簡便、 快速, 但易受其他還原物質(zhì)干擾、 對深色樣液難辨終點; 而高效液相色譜法對實驗儀器和技術(shù)的要求比較高, 不適合實驗室的操作環(huán)境。 所以綜 合各方面考慮本文采用 2, 4-二硝基苯肼法, 利用分光光度計分別測定橙汁 1:10樣液、 獼猴桃原液及 1:10樣液、梨汁原液中維生素 C 的含量。結(jié)果與分析:標準曲線:試管號 0 1 2 3 4 5 0.2mg/Vc

9、(ml 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 總抗壞血酸含量 (mg 0.00 0.08 0.16 0.24 0.32 0.40 吸光值 0 0.069 0.089 0.149 0.165 0.222 計算:X=100C/W式中 X 樣品中抗壞血酸的含量, mg/100ml;C 由標準曲線查得或由回歸方程算得試樣測定液總抗壞血酸含量(mg ; W 測定時所取濾液相當于樣品的用量(ml 。1. 獼猴桃原液的吸光值為 0.567,根據(jù)標準曲線,其總抗壞血酸含量 C 為 1.067mg ; 則 X=100×1.067/2=53.35mg/100ml;2. 獼猴桃 1:10樣液的吸

10、光值為 0.134, 根據(jù)標準曲線, 其總抗壞血酸含量 C 為 0.235mg ; 則 x=100×0.235/2=11.75mg/100ml;3. 橙汁 1:10樣液的吸光值為 0.393, 根據(jù)標準曲線, 其總抗壞血酸含量 C 為 0.733mg , 則 X=100×0.733/2=36.65mg/100ml;4. 梨汁原液的吸光值為 0.022, 根據(jù)標準曲線 , 其總抗壞血酸含量 C 為 0.020mg;則 X=100×0.020/2=1.00mg/100ml;數(shù)據(jù)分析:根據(jù)計算結(jié)果可知,獼猴桃汁、橙汁中的維生素 C 含量較高,而梨汁中的維生素 C 含量較

11、低。獼猴桃原液中的維生素 C 含量為 53.35mg/100ml,其 1:10樣液的維生素 C 含量為 11.75mg/100ml,兩者維生素 C 含量相差不是很大,不能很好的體現(xiàn)稀釋 10倍的關(guān)系。 梨汁原液的維生素 C 含量為 1.00mg/100ml,含量較低。誤差可能來源:樣品在恒溫水浴中加熱時間不夠,導致生成脎的量不夠,而生成脎的量與總抗壞血 酸含量成正比,即最后測得總抗壞血酸含量較少,致使實驗誤差;加入 85%硫酸后, 將試管從冰水中取出, 溶液的顏色會繼續(xù)變深, 所以必須計算好, 加入硫酸后準時在 30min 內(nèi)比色,實驗過程中加入硫酸后沒有估計好時間。硫脲可防止抗壞血酸被氧化,

12、 且可幫助脲的形成, 最終溶液中硫脲的濃度均需一致, 否則影響色度,而在實驗過程中加硫脲時,每次所滴的量可能有所偏差。本實驗中的總抗壞血酸是指抗壞血酸和脫氫抗壞血酸二者的總量,若所測樣品本身 含有二酮古樂糖酸抗壞血酸的氧化產(chǎn)物,則導致檢測總抗壞血酸含量偏高。注意事項及說明1、硫脲的作用在于防止抗壞血酸的繼續(xù)被氧化和有助于脎的形成。2、 加硫酸顯色后, 溶液顏色可隨時間的延長而加深, 因此, 在加入硫酸溶液 30min 后, 應即立比色測定。3、檢測過程中,測定樣的吸光值不落在標準曲線上,可重新調(diào)整測定樣品的量或標準 曲線的濃度范圍。4、本實驗適用于水果、蔬菜及其制品中總抗壞血酸的測定。5、硫酸可防止抗壞血酸被氧化,且可幫助準于的形成,最終溶液中硫酸的濃度均需一 致,否則影響色度。參考文獻:【 1】張起書 食品中維生素的測定 食品檢驗與分析實驗教程 寧夏人民教育 出版社 2006【 2】 王元紅、 徐家敏 食品中維生素 C 的測定 食品檢驗與分