1、人類白細胞抗原等位基因與HBV宮內感染關系    【關鍵詞】  乙型肝炎病毒；宮內感染；人類白細胞抗原DR等位基因(HLA-DR)摘要： 目的   研究人類白細胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因與乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)宮內感染的關系，探討HBV宮內感染的遺傳易感性，確定HBV宮內感染的易感基因和保護基因。方法   采用聚合酶鏈反應/序列特異性引物(PCR-SSP)技術檢測HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR

2、7、DRl3、DR53等位基因型分布及頻率。結果   (1)宮內感染組孕婦HLA-DR3基因頻率為2414(729)，顯著高于非宮內感染組孕婦的633(10158)(P=0007)。其余各表型比較，差異無統計學意義(P>005)。(2)宮內感染組新生兒HLA-DR3基因頻率為1724(529)，顯著高于非宮內感染組新生兒的506(8158)(P=0033)。其余各表型比較，差異無統計學意義(P>005)。(3)母嬰HLA-DR3同陽性在宮內感染組與宮內未感染組間比較差異有統計學意義(P=0049)；母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內感染組與宮內未

3、感染組間比較，差異無統計學意義(P>005)。結論   HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時或任一攜帶HLA-DR3，易導致HBV宮內感染；HLA-DR3是HBV宮內感染的易感基因。關鍵詞： 乙型肝炎病毒；宮內感染；人類白細胞抗原DR等位基因(HLA-DR)Association between HLA-DR alleles and HBV intrauterine infection   Abstract： Objective   To study the association between HLA-DR3,DR7,DR13,D

4、R53 and HBV intrauterine infection to probe into the susceptibility to intrauterine infection of hepatitis B virus and to find its predisposing genes and protecting genes.Methods   HLA-DR3,DR7,DR13,DR53 were detected by the technique of polymerase chain reaction-sequence specific primers(P

5、CR-SSP) in maternal and neonatal blood clot.Results   (1) The frequency of HLA-DR was 24.14% in women with intrauterine infection,which was higher than that (6.33%) in women without intrauterine infection(P=0.007).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in pregnant wome

6、n and HBV intrauterine infection(P>0.05).(2) The frequeney of HLA-R of newborns was 17.24% in women with intrauterine infection,which is higher that (5.06%) in women withotll infection(P=0.033).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in newborns and HBV intrauterine infection(

7、P>0.05).(3)There was significant association between HLA-DR3 concordance and HBVintrauterine infection(P=0.049).There was no association between DR7,DR13,DR53 concordance and HBV intrauterine infection(P>0.05).Conclusion   HLA-DR3 carriers of pregnant women and their newborns have su

8、sceptibility to HBV intrauterine infection.HLA-DR3 is the predisposing gene of HBV intrauterine infection.Key words： HBV；intrauterine infection；HLA-DR antigen      肝炎是一種嚴重危害人類健康的世界性傳染病，我國是乙肝高發區，乙肝病毒的母嬰傳播不僅造成人群中眾多的HBsAg攜帶者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多數學者認為，人類白細胞抗原DR等位基因(HLA-

9、DR)與乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相關，而HLA-DR等位基因與HBV宮內感染的關系爭議較多。本文通過研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53與HBV宮內感染的關系，探討HBV宮內感染的遺傳易感性，為防制HBV宮內感染提供理論依據。1   對象與方法11   對象   以2003年6月2004年11月太原市省各市級醫院篩檢，并在太原市傳染病院婦產科進行產前檢查及分娩的HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例作為研究對象。并根據新生兒有無宮內感染，分為宮內感染組(29例)和宮內未感染組(158例)，2組在年齡分布、文化程度、職業

10、構成等均衡可比。12   方法   121   標本采集及處理   收集孕婦肘靜脈血及新生兒出生24h內且未注射高效價免疫球蛋白(HBIG，hepatitis B immune globulin)的股靜脈血各2ml，4冰箱保存，6h內以4000r/min4離心15min，分離血清與血塊，-20保存備檢。122   乙肝血清標志物檢測   采用酶聯免疫吸附(ELISA)法，試劑盒（上海科華實業總公司）。123   HBV DNA檢測  

11、(1)HBV DNA提取：參考文獻1，采用異硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBV DNA的擴增：采用巢式聚合酶鏈反應(nPCR)。124   HLA-DR等位基因檢測   (1)人類基因組DNA的提取十二烷基磺酸鈉（SDS）蛋自酶K法提取血塊基因組DNA。(2)HLA-DR等位基因擴增：參考文獻2的引物設計采用聚合酶鏈反應序列特異性引物(PCR-SSP)技術檢測孕婦及其新生兒外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及頻率。(3)PCR產物的檢測：取擴增產物510l，按5：1(V：V)與溴酚蘭混勻，加樣于15瓊脂糖凝膠(含0

12、5gml溴化乙錠)板，在60Vcm電壓下泳動50min，紫外燈下觀察結果。125   新生兒HBV宮內感染診斷標準   新生兒外周血血清HBsAg和/或HBV DNA陽性，即診斷為HBV宮內感染。13   統計分析   資料輸入SPSS115軟件進行統計分析；計算各指標的陽性率，四格表2、Fisher確切概率、OR值及OR95%CI。2   結果21   HBsAg陽性孕婦及其新生兒HLA-DR擴增圖譜   提取的血塊DNA經PCR擴增后呈現明顯條帶，與標

13、準分子標記物（Marker）條帶比較，確定HLA-DR基因型（圖1，2，3，4）。DR3+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陽性擴增產物，擴增產物片斷長度為151bp;DR3-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陰性擴增產物；M：標準分子標記物(Marker)圖1   HLA-DR3等位基因的PCR擴增產物電泳結果（略）DR7+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陽性擴增產物，擴增產物片斷長度為232bp；DRT-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陰性擴增產物；M：標準分子標記物(Marker)圖2   HLA-DR7等位基因的PCR擴增產物電泳結果

14、（略）DR13+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陽性擴增產物，擴增產物片斷長度為130bp；DR13-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陰性擴增產物；M：標準分子標記物(Marker)圖3   HLA-DR13等位基因的PCR擴增產物電泳結果（略）DR53+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陽性擴增產物，擴增產物片斷長度為213bp；DR53-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陰性擴增產物；C：內對照注：DR53引物與內對照引物可能發生了引物間的錯配等，故分管同時擴增圖4   HLA-DR53等位基因的PCR擴增產物電泳結果（略）22&

15、#160;  HLA-DR與HBV宮內感染的關系   221   孕婦HLA-DR等位基因分布及頻率比較（表1）   宮內感染組孕婦HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內未感染組，經檢驗，差異有統計學意義（OR=4709,P=0007）；HLA-DR7、DR13、DR53基因頻率在宮內感染組與宮內未感染組孕婦比較，經檢驗，差異無統計學意義（P>005）。表1   宮內感染組與宮內未感染組孕婦HLA-DR基因分布及頻率比較（略）注：*為fisher確切概率法計算結果222   新生兒HLA