1、第十四章第十四章 免疫細(xì)胞的分別及免疫細(xì)胞的分別及其外表標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)其外表標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分別免疫細(xì)胞的分別 一、一、 外周血單個(gè)核細(xì)胞分別外周血單個(gè)核細(xì)胞分別 二、二、 淋巴細(xì)胞的分別淋巴細(xì)胞的分別 三、三、 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分別細(xì)胞的分別 四、四、 T T細(xì)胞亞群的分別細(xì)胞亞群的分別第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 一、一、 細(xì)胞外表標(biāo)志及亞群細(xì)胞外表標(biāo)志及亞群 二、二、 B B細(xì)胞外表標(biāo)志細(xì)胞外表標(biāo)志 三、三、 NK NK細(xì)胞外表標(biāo)志細(xì)胞外表標(biāo)志第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)及運(yùn)用

2、免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)及運(yùn)用 一、一、 免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法 二、二、 淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義思索題思索題小結(jié)小結(jié) 第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分別免疫細(xì)胞的分別 外周血單個(gè)核細(xì)胞分別外周血單個(gè)核細(xì)胞分別 淋巴細(xì)胞的分別淋巴細(xì)胞的分別 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分別細(xì)胞的分別 T T細(xì)胞亞群的分別細(xì)胞亞群的分別一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分別一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分別 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞peripheral mononuclear peripheral mononuclear cells, PMNCcells, PMNC

3、包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞monocytemonocyte。 FicollFicoll分別液法主要用于分別外周血中的單個(gè)分別液法主要用于分別外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分別核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分別法。法。 細(xì)胞分別根本原理細(xì)胞分別根本原理不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞外表生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞外表生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞外表分化抗原不同不同細(xì)胞外表分化抗原不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同人的紅細(xì)胞密度為人的紅細(xì)胞密度為1.093 1.093 粒細(xì)胞密度為粒細(xì)胞密度為1.092 1.092 單個(gè)核細(xì)胞淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度為單

4、個(gè)核細(xì)胞淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度為1.075-1.090 1.075-1.090 不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同用用1.0771.0770.0010.001的分層液可將細(xì)胞分別的分層液可將細(xì)胞分別 密度梯度離心密度梯度離心(Ficoll)(Ficoll)離心離心二二 、淋巴細(xì)胞分別、淋巴細(xì)胞分別貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過(guò)濾法吸附柱過(guò)濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分別液法分別液法 延續(xù)密度梯度離心延續(xù)密度梯度離心去單核細(xì)胞去單核細(xì)胞E E花環(huán)沉降法花環(huán)沉降法 尼龍毛柱分別法尼龍毛柱分別法 三、三、T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分別細(xì)胞的分別四、四、T T細(xì)胞亞

5、群的分別細(xì)胞亞群的分別 親和板結(jié)合分別法親和板結(jié)合分別法 磁性微球分別法磁性微球分別法 熒光激活細(xì)胞分別儀分別法熒光激活細(xì)胞分別儀分別法 熒光激活細(xì)胞分別儀分別法熒光激活細(xì)胞分別儀分別法 磁珠大小可以選擇磁珠大小可以選擇大小免疫磁珠分別細(xì)胞的特點(diǎn)比較大小免疫磁珠分別細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較工程比較工程大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞呵斥機(jī)械壓力，影響對(duì)細(xì)胞呵斥機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分別其生物學(xué)活性，不利于分別后培育。后培育。對(duì)細(xì)胞溫暖，不影響分別細(xì)對(duì)細(xì)胞溫暖，不影響分別細(xì)胞的后續(xù)培育。胞的后續(xù)培育。對(duì)流式細(xì)胞儀的影響對(duì)流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影阻塞流

6、式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光。響散射光。可直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，可直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，不影響散射光。不影響散射光。分別條件要求分別條件要求技術(shù)簡(jiǎn)單，分別可在試管中技術(shù)簡(jiǎn)單，分別可在試管中完成。完成。需求很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分別細(xì)胞。需求很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分別細(xì)胞。 收率收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。純度純度純度低。純度低。純度高。純度高。分別時(shí)間分別時(shí)間分別速度快。分別速度快。分別速度慢。分別速度慢。分別本錢分別本錢本錢低。本錢低。需求很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分別細(xì)胞，需求很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分別細(xì)胞，需求一次性的分別柱，不能需求一次性的分別柱，不能在普通試管進(jìn)展。在普通試管進(jìn)展。免疫磁珠法細(xì)胞分選過(guò)程免疫磁珠法細(xì)胞

7、分選過(guò)程免免疫疫磁磁珠珠細(xì)細(xì)胞胞分分選選裝裝置置全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)流式細(xì)胞分析儀流式細(xì)胞分析儀第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 常用于鑒定和檢測(cè)淋巴細(xì)胞外表常用于鑒定和檢測(cè)淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志是簇分化抗原標(biāo)志是簇分化抗原Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD。 細(xì)胞外表分化抗原細(xì)胞外表分化抗原CDCD抗原抗原適用于適用于T T、B B細(xì)胞的分別細(xì)胞的分別知知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分別抗原細(xì)胞亞群的分別未知未知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分別抗原細(xì)胞亞群的分別陰性分選陰性分選一、一、T

8、T細(xì)胞外表標(biāo)志及其亞群細(xì)胞外表標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細(xì)胞細(xì)胞 help T cell,Th CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T細(xì)胞細(xì)胞 cytotoxic T cell,Tc or CTL CD4+CD25+調(diào)理性調(diào)理性T細(xì)胞細(xì)胞 regulatory T cell,Tr or Treg二、二、B B細(xì)胞外表標(biāo)志細(xì)胞外表標(biāo)志 SmIgSmIg、FcFc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分子是分子是B B細(xì)胞的重要外表標(biāo)志，其中以細(xì)胞的重要外表標(biāo)志，其中以SmIgSmIg為為B B細(xì)胞所特有，是鑒定細(xì)胞所特有，是鑒定

9、B B細(xì)胞可靠的目的。細(xì)胞可靠的目的。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細(xì)胞區(qū)分為細(xì)胞區(qū)分為B1B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2B2細(xì)胞，細(xì)胞，B1B1細(xì)胞為細(xì)胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽(yáng)性，而雙陽(yáng)性，而B2B2細(xì)胞細(xì)胞僅為僅為CD19CD19陽(yáng)性，陽(yáng)性，B2B2細(xì)胞為通常所指的細(xì)胞為通常所指的B B細(xì)胞。細(xì)胞。 三、三、NKNK細(xì)胞外表標(biāo)志細(xì)胞外表標(biāo)志 人類人類NKNK細(xì)胞外表標(biāo)志主要以細(xì)胞外表標(biāo)志主要以CD16CD16、CD56CD56來(lái)認(rèn)定，臨床上將來(lái)認(rèn)定，臨床上將CD3-CD3-CD56+CD16+CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NKNK細(xì)胞。

10、細(xì)胞。 T細(xì)胞及細(xì)胞及NK細(xì)胞細(xì)胞第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞外表標(biāo)志抗原提呈類細(xì)胞外表標(biāo)志第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)及運(yùn)用免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)及運(yùn)用免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義一、免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)一、免疫細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法流式細(xì)胞分析法 二、淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義二、淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義 淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)是評(píng)價(jià)免疫功淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)是評(píng)

11、價(jià)免疫功能的重要目的。能的重要目的。 對(duì)對(duì)CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細(xì)胞的測(cè)定，有助于免細(xì)胞的測(cè)定，有助于免疫缺陷疾病、本身免疫性疾病和移植疫缺陷疾病、本身免疫性疾病和移植排斥反響的監(jiān)測(cè)。排斥反響的監(jiān)測(cè)。 臨床常見疾病中的臨床常見疾病中的T 淋巴細(xì)胞的變化淋巴細(xì)胞的變化 思索題思索題1.1.免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分別免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分別純化？純化？2.2.淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形狀學(xué)的方法加淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形狀學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？以區(qū)別嗎？3.3.將細(xì)胞分別的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？將細(xì)胞分別的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？4.4.形

12、狀學(xué)一樣的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？形狀學(xué)一樣的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？5.T5.T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的根據(jù)是什么？細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的根據(jù)是什么？6.6.什么是細(xì)胞外表標(biāo)志？其作用是什么？什么是細(xì)胞外表標(biāo)志？其作用是什么？7.7.細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法有哪些？細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)方法有哪些？8.8.利用細(xì)胞外表標(biāo)志利用細(xì)胞外表標(biāo)志CDCD抗原分別細(xì)胞的方法抗原分別細(xì)胞的方法有哪幾種？有哪幾種？9.T9.T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、細(xì)胞、NKNK細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)志是什么？標(biāo)志是什么？10.10.淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義是什么？淋巴細(xì)胞外表

13、標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義是什么？小小 結(jié)結(jié)淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形狀根本是一樣的，在光學(xué)顯微鏡下的形狀根本是一樣的，因此要對(duì)其進(jìn)展進(jìn)一步的分類和察看就因此要對(duì)其進(jìn)展進(jìn)一步的分類和察看就不能采用形狀學(xué)的方法，而要依托對(duì)其不能采用形狀學(xué)的方法，而要依托對(duì)其外表標(biāo)志的檢測(cè)。常用于鑒定和檢測(cè)計(jì)外表標(biāo)志的檢測(cè)。常用于鑒定和檢測(cè)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的外表標(biāo)志是數(shù)淋巴細(xì)胞的外表標(biāo)志是CDCD抗原。抗原。進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴細(xì)胞的功能趨向一致和單一。但目前巴細(xì)胞的功能趨向一致和單一。但目前看來(lái)，還很少有只經(jīng)過(guò)一個(gè)看來(lái)，還很少有只經(jīng)過(guò)一個(gè)CDCD抗原就能抗原就能將某一類淋巴細(xì)胞亞群指示出來(lái)的將某一類淋巴細(xì)胞亞群指示出來(lái)的CDCD抗抗原，原，CDCD抗原指示出來(lái)的淋巴細(xì)胞亞群多抗原指示出來(lái)的淋巴細(xì)胞亞群多數(shù)都是相對(duì)特異。數(shù)都是相對(duì)特異。根據(jù)根據(jù)T T細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能和外表細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能和外表CDCD分子分子表達(dá)至少可以分為：輔助性表達(dá)至少可以分為：輔助性