1、預測指標：1.抗氧化酶系統、MDA2 .可溶蛋白、超氧陰離子自由基3.葉綠素、類胡蘿卜素4.可溶性糖5.游離氨基酸6.過氧化氫7 .谷胱甘肽、ASA1.抗氧化酶系統、MDAA酶活測定試齊I：PB賽沖液0.05MpH7.8:取0.663gNaH2PO42H2O和16.384gNa2HPO412H20力口PVP10g并加EDTA者EDTAa,使其濃度為2mM加蒸儲水定容至1L.用前冰箱或冰上預冷.樣品制備鮮樣0.1-0.5g參加1ml磷酸緩沖液0.05M,pH7.8,稍許石英砂,研磨成勻漿；移入10ml離心管中,再用4ml磷酸緩沖液分兩次洗滌研缽并全部轉入離心管中；10000Xg4C下離心20mi

2、n;上清夜貯于4c冰箱中保存備測.同時稱取鮮樣一份0.1g左右烘干稱重.SOD入=560nm試劑配制：1LPBS緩沖液中參加Met1.93973gNBT氮藍四陛0.061323gEDTA-Na20.0037224g核更系0.00075272g實驗步驟：2.725mL反響液+250uL蒸儲水+25uL酶液【樣品管】2.75mL反響液+250uL蒸儲水光照作為100%CK1照光對照管】2.75mL反響液+250uL蒸儲水黑暗作為調零【空白調零管】4000lx日光燈下反響20分鐘,560nm比色.反響溫度2535C.SODM生單位以抑制NBT光化復原的50%為一個酶活性單位表示按下式計算SODM生：

3、SOD總活性=Ack-AE*V/0.5*Ack*w*Vt式中SOD總活性以鮮重酶單位每克表示,Ack為照光對照管的吸光度,AE為樣品管的吸光度,V為樣品液的總體積ml,Vt為測定時樣品用量ml,w為樣品鮮重g【空白調零管】可在光反響快結束前配制并用黑色紙或鋁箔包裹以避光.【樣品管】和【照光對照管】在光反響快結束后至測定前應避光處理.POD入=470nm比色試劑配制：1.5%愈創木酚1.5ml愈創木酚,用蒸儲水定容到100ml300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸儲水定容到50ml;實驗步驟：100ul酶液+2700ulPBS+100ul愈創木酚+100ulH2O2于普通比色皿

4、,輕輕搖勻2-秒,A470動力學測定1分鐘.選擇時間段較為筆直的曲線斜率為activity,此后測定均參考該時間段.結果計算：PODmmol/g尸activityxAxVxa/ExwA反響液總體積/ml;V提取液總體積/ml;a測定液體積/ml;w材料鮮重/g;E吸光系數/mM-cm-1CAT240nm比色試劑配制：300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸儲水定容到50ml;實驗步驟：100ul酶液+2800ulPBS+100ulH2O2,于石英比色皿,輕輕搖勻2-秒,A240動力學測定1分鐘.選擇時間段較為筆直的曲線斜率為activity,此后測定均參考該時間段.結果計算：C

5、ATmmol/g尸activityXAXVxa/ExwAPX入=290nm比色試劑配制：7.5mM的抗壞血酸AsA:66mgAsA用蒸儲水定容到50ml;300uM的H2O2取30%的H2O21.53ml,用蒸儲水定容到50ml;實驗步驟：100ul酶液+2700ulPBS+100ulAsA+100ulH2O2,于石英比色皿,輕輕搖勻2-秒,A290動力學測定1分鐘.選擇時間段較為筆直的曲線斜率為activity,此后測定均參考該時間段.結果計算：CATmmol/g尸activityXAXVxa/ExwB.丙二醛MDA含量的測定入=450,532,600nm比色試劑配制：5獷氯乙酸TCA:25

6、g三氯乙酸定容到500mLMDA反響液：2.5g硫代巴比妥酸,先用少量1M的氫氧化鈉溶解,再用5獷氯乙酸定容到500mL實驗步驟：0.5mL酶液+2.5mL反響液,沸水浴反響15分鐘,立即冰浴,4800rpm離心10分鐘,上清轉入新管,波長450,532和600下比色,MD順應液調零.結果計算：丙二醛含量nmol.g-1=D532D600*A*V/a*1.55*10-1*w式中A為反響液總量 mD;V為提取液總量 mL ;a為測量用提取液量 mL ;w為材料鮮重 g.1.55X10-1為丙二醛的umol/L消光系數nmol/mL消光系數或者：MD除度umol/L=6.45D532D6000.5

7、6D450丙二醛含量umol.g-1=MDA濃度X提取液總體積ml/組織鮮重g/1000植物體可溶性蛋白質含量測定比色原理：染料考馬斯亮藍G-250在游離態下呈紅色,當它與蛋白質的疏水區結合后變為青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595ns在一定蛋白質濃度范圍內0100g/ml,蛋白質色素結合物在595nm波長下的光吸收與蛋白質含量成正比.故可用于蛋白質的定量測定.蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內到達平衡,完成反響十分迅速,其結合物在室溫下1h內保持穩定.該反響非常靈敏,可測微克級蛋白質含量,所以是一種比擬好的蛋白質定量法.【試劑】1、65mmol/L磷酸鉀緩沖液p

8、H7.8;如超氧陰離子自由基含量測定用.稱取K2HPO43H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸儲水定容至U1L.或K2HPO43H2O4.562g和KH2PO41.703g,蒸儲水定容至U0.5L.2、考馬斯亮藍G-250:稱取100mg考馬斯亮藍G-250溶于50ml90叱醇中,參加85%W/V磷酸100ml,最后用蒸儲水定容至1000mlo濾紙過濾后低溫儲存.常溫下可放置一個月；3、磷酸85%W/V:也即商業磷酸濃度85%.直接用.4、0.15M的NaCl標準曲線用：NaCl0.8766g蒸儲水定容到100ml.【方法】【方法】1.標準曲線

9、的繪制血清白蛋白BSA先用0.15M的NaCl配制成2mg/ml的原液.表1配制01000dg/ml血清白蛋白液123456牛血清蛋白原液ml00.10.20.30.40.5磷酸鉀緩沖液量ml1.00.90.80.70.60.5蛋白質含量g/ml02004006008001000以上各管混勻后,各取0.1ml于新的10ml離心管內,各加5ml考馬斯亮藍染液,混勻放置2min,在595nm下比色,繪制標準曲線.折衷：表2配制01000dg/ml血清白蛋白液-123456牛血清蛋白原液ul01020304050磷酸鉀緩沖液量ul1009080706050蛋白質含量g/ml0200400600800

10、1000以上各管混勻后,各加5ml考馬斯亮藍染液,曲線.2.樣品提取液中蛋白質濃度的測定混勻放置2min,在595nm下比色, 繪制標準樣品制備參見超氧陰離子自由基含量測定方案.各加5ml考馬斯鳧藍染液,混勻放置2min,3.結果計算取樣品上清液在595nm下比色.0.1ml于新的10ml離心管內,式中C查林軸喇嘛!銜由童儂魯iff=CgVW;V提取液總積 ml ;此為樣品提取液總體積為3ml;W取樣量g.X測定以上3工程時,同時取局部同批剩余鮮樣稱重后轉入紙袋烘干稱重.2.可溶蛋白、超氧陰離子自由基_植物材料0.1-0.2g左右記錄準確稱量值65mmol/L磷酸鉀緩沖液pH7.81ml一少許

11、石英砂一冰上充分研磨一轉入離心管一磷酸鉀緩沖液洗滌研缽2次,每次1ml全部轉入離心管樣品提取液總體積為3ml-4c10000r/min離心15min一取上清液轉入新管標記低溫保存待測液.A.超氧陰離子自由基入=530nm比色原理：2Q.-+鹽酸羥胺一NQ-+磺胺一重氮化磺胺+一泰胺一偶氮化合物粉紅色,在波長530nm處有顯著的光吸收試劑準備：1、65mmol/L磷酸鉀緩沖液pH7.8;【不用磷酸鈉】稱取&HPO-3H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸儲水定容到1L.或KHPO-3H2.4.562g和KHPO1.703g,蒸儲水定容到0.

12、5L.2、10mmol/L鹽酸羥胺；稱取鹽酸羥胺MW=69.490.06949g蒸儲水定容到100mL3、12mol/L乙酸：稱取冰乙酸MW=60.05144.1g蒸儲水定容到200mL4、58mmol/L磺胺12mol/L乙酸為溶劑配制;稱取磺胺MW=172.210.9988g,用12mol/L乙酸溶解并定容到100mL5、7mmol/L-泰胺12mol/L乙酸為溶劑配制；稱取a-蔡胺MW=143.190.100233g0.1g,用12mol/L乙酸溶解并定容到100mL6、三氯甲烷氯仿；7、NaNO230umol/LNaNO2用65mmol/L磷酸鉀緩沖液配制和稀釋：稱取NaNO2MW=6

13、9.000.207g用65mmol/L磷酸鉀緩沖?定容到1L此時NaNO2濃度3mM從中吸取5ul,加65mmol/L磷酸鉀緩沖液495ul即可30uM.其它25,20,15,10,5umol/LNaNO2,依此.測定流程圖空白調零組：磷酸鉀緩沖液0.5ml一鹽酸羥胺0.1ml一搖勻一25c水浴10min一冰浴一磷酸鉀緩沖液0.5ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml-“-泰胺1ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml-4c10000r/min離心3min一上層水相測定A530.試驗組：磷酸鉀緩沖液0.5ml一鹽酸羥胺0.1ml一搖勻一25c水浴10min一冰浴一上清

14、液0.5ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml一“-蔡月堂1ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml-4c10000r/min離心3min一粉紅色水相上層測定A530.標準曲線：NaNO2i65mmol/L磷酸鉀緩沖全彼配置成30umol/L,再稀釋成25,20,15,10,5和0umol/L.磷酸鉀緩沖液0.5ml一鹽酸羥胺0.1ml一搖勻一25c水浴10min一冰浴一加各種不同濃度的NaNO2各取0.5ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一磺胺1ml-“-泰胺1ml一搖勻一25c水浴20min一冰浴一三氯甲烷3ml一10000r/min離心3min一粉紅色水相上

15、層測定A530.結果計算：通過標準曲線生成的NO2與A530的方程,求出NO2-,乘2那么得O2.-.O2.-產生速率=O2.-/樣品Pr含量/20min;O2.-產生總量=O2.-/樣品Pr含量25c水浴共培養60min.說明：鮮樣測定,不能用于干樣品,樣品也不宜液氮速凍后超低溫冰箱儲存后測定.鹽酸羥胺與樣品上清液的25c水浴共培養20min用于O2.-產生速率測定；如果25c水浴共培養60min那么用于O2.-含量測定.25c水浴共培養的時間為關鍵時間,必須掌握好,此步處理前后樣品試劑溶液盡量處于冰浴狀態.待測液制備后應盡快測定.干旱脅迫處理,要同時稱量所取用的同一樣品烘干至恒重稱出烘干重

16、,以便計算單位干重樣品的O2.-產生速率； 或者用的同一新鮮樣品測定蛋白質含量,以便計算單位蛋白質質量的O2.-產生速率.B.可溶性蛋白質含量測定比色原理：染料考馬斯亮藍G-250在游離態下呈紅色,當它與蛋白質的疏水區結合后變為青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595ns在一定蛋白質濃度范圍內0100g/ml,蛋白質色素結合物在595nm波長下的光吸收與蛋白質含量成正比.故可用于蛋白質的定量測定.蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內到達平衡,完成反響十分迅速,其結合物在室溫下1h內保持穩定.該反響非常靈敏,可測微克級蛋白質含量,所以是一種比擬好的蛋白質定量法.【試劑】1

17、、65mmol/L磷酸鉀緩沖液pH7.8;如超氧陰離子自由基含量測定用.稱取K2HPO43H2OMW=228.229.1234g和KH2PO4MW=136.093.406g,蒸儲水定容至U1L.或K2HPO43H2O4.562g和KH2PO41.703g,蒸儲水定容至U0.5L.2、考馬斯亮藍G-250:稱取100mg考馬斯亮藍G-250溶于50ml90叱醇中,參加85%W/V磷酸100ml,最后用蒸儲水定容至1000mlo濾紙過濾后低溫儲存.常溫下可放置一個月；3、磷酸85%W/V:也即商業磷酸濃度85%.直接用.4、0.15M的NaCl標準曲線用：NaCl0.8766g蒸儲水定容到100m

18、l.【方法】【方法】1.標準曲線的繪制血清白蛋白BSA先用0.15M的NaCl配制成2mg/ml的原液.表1配制01000Pg/ml血清白蛋白液123456牛血清蛋白原液ml00.10.20.30.40.5磷酸鉀緩沖液量ml1.00.90.80.70.60.5蛋白質含量g/ml02004006008001000以上各管混勻后,各取0.1ml于新的10ml離心管內,2min,在595nm下比色,繪制標準曲線.折衷：表2配制01000dg/ml血清白蛋白液各加5ml考馬斯鳧藍染液,混勻放置123456牛血清蛋白原液ul01020304050磷酸鉀緩沖液量ul1009080706050蛋白質含量g/

19、ml02004006008001000以上各管混勻后,各加5ml考馬斯鳧藍染液,混勻放置2min,595nm繪制標準曲線.2.樣品提取液中蛋白質濃度的測定樣品制備參見超氧陰離子自由基含量測定方案.取樣品上清液0.1ml于新的10ml離心管內,各加5ml考馬斯亮藍染液,混勻放置2min,在595nm下比色.3.結果計算式中C查械貓喇岬際瘠fiOTg/t爵由)=CgVW;V提取液總積(ml);此為樣品提取液總體積為3ml;W取樣量(g).X測定以上3工程時,同時取局部同批剩余鮮樣稱重后轉入紙袋烘干稱重.3.葉綠素、類胡蘿卜素葉綠素、類胡蘿卜素測量實驗步驟：葉片快速剪取并精確稱重0.1g左右,重復3

20、次.再快速剪成細絲(或用打孔器打成小的葉圓片)轉入潔凈離心管,管內加提取液10ml,于室溫下遮光靜置至樣品完全發白(期間屢次搖動提取液),對提取液比色(以不加葉片的提取液調零),然后據提取液類型按下面公式計算葉綠素和類胡卜素含量.剪取葉片同時再精確稱取0.1-0.2g左右葉片,1050c殺青10min,80oC烘干恒重后稱重.結果計算：一、采用丙酮、無水乙醇、蒸儲水混合提取液(三者體積比4.5:4.5：1)Chla(mg/L尸9.784OD6630.990OD645,Chlb(mg/L尸21.426OD6454.650OD663,Chl(a+b)(mg/L)=5.134OD663+20.436

21、OD645,Car(mg/L)=4.695OD4400.268(Chla+Chlb),采用波長663,645和440nmo唐延林,黃敬峰,王人潮.水稻不同發育時期高光譜與葉綠素和類胡蘿卜素的變化規律.中國水稻科學2004,18(1)59-66二、采用80斷酮提取液采用波長663,646和470ns(ArnonandLichtenthale)Chla(mg/L)=12.21D663-2.81D646;Chlb(mg/L)=20.13D646-5.03D663;Chl(a+b)(mg/L)=Chla+Chlb=17.32D645+7.18D663;Car(mg/L)=(1000D470-3.27C

22、hla-104Chlb)/229三、采用采用95叱醇提取液-采用波長665,649和470ns(鄒琦等)Chla(mg/L)=13.95D665-6.88D649;Chlb(mg/L)=24.96D649-7.32D665;Chl(a+b)(mg/L)=Chla+Chlb=18.08D645+6.63D663;Car(mg/L)=(1000D470-2.05Chla-114.8Chlb)/245結果：Chl(mg/g)=濃度(mg/L)x提取液體積(ml)/質量(g)x10004.可溶性糖意酮法測定可溶性糖樣品制備測定：取新鮮植物葉片(或干材料),擦凈外表污物,剪碎混勻,精確稱取0.05-0.

23、1g左右,轉入研缽,加少許石英砂,1ml蒸儲水充分研磨后轉入10ml離心管,4ml蒸儲水分次洗滌研缽后也完全轉入離心管內.離心管沸水浴30min,5000rpm離心5min,上清轉入新管,原來離心管殘渣再加水5ml,混勻后沸水浴10min,5000rpm離心5min,上清一并轉入新管,并蒸儲水定容到10ml混勻備測.【原理】糖在濃硫酸作用下,可經脫水反響生成糠醛或羥甲基糠醛,生成的糠醛或羥甲基糠醛可與慈酮反響生成藍綠色糠醛衍生物,在一定范圍內,顏色深淺與糖含量成正比.用意酮法測出的碳水化合物含量,實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量.【試劑】1 .慈酮乙酸乙酯試劑：取分析純慈酮1g,溶于50

24、ml乙酸乙酯中,貯于棕色瓶中,在黑暗中可保存數星期,如有結晶析出,可微熱溶解.2 .濃硫酸(比重1.84).標準曲線制備：100g/ml蔗糖標準液：將分析純蔗糖在80c下烘至恒重,精確稱取1.000g.加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,參加0.5ml濃硫酸,用蒸儲水定容至刻度；精確吸取1%蔗糖標準液1ml參加100ml容量瓶中,加水定容.表各試管加溶液和水的量管號012345678910100g/ml蔗糖液(ul)04080120160200水(ul)400360320280P240200此時蔗糖濃度科g/ml01020304050取10ml離心管11支,從010分別編號,根據上表參加蔗糖

25、標準液和水后,逐管參加意酮乙酸乙酯試劑0.1ml并小心參加濃硫酸1ml,加蓋后充分震蕩,立即沸水浴1min,取出冷卻后630nm比色,蒸儲水調零.上清液0.2ml加蒸儲水0.2ml,參加慈酮乙酸乙酯試劑0.1ml并小心參加濃硫酸1ml,加蓋后充分震蕩,立即沸水浴1min,取出冷卻后630nm比色,蒸儲水調零.結果計算：可溶糖含量mg/gFWorDW=C*V/W/1000C：標曲所得可溶糖含量ug/ml;V:樣品提取液體積10ml;W樣品鮮重或干重g.5.游離氨基酸游離氨基酸含量測定樣品制備測定：葉片準確稱取0.05-0.1g于研缽,1ml的10叱酸重復研磨,轉入10ml潔凈離心管,2ml的10

26、叱酸分兩次洗滌研缽并完全轉入離心管內,加無氨蒸儲水可以超純水替代定容到10ml離心管口位置,搖勻后5000rpm離心10min,上清液轉入新管備測.同時取局部同批剩余鮮樣稱重后轉入紙袋烘干稱重.試劑配制：1、醋酸鈉-醋酸緩沖液pH=4.9:9.679g的醋酸鈉CH3COON由口4.924g的醋酸CH3COOH蒸儲水定容到100ml.2、苛三酮緩沖顯色液1%:1.05g苛三酮+18ml正丙醇+25ml正丁醇+50ml乙二醇+12ml醋酸鈉-醋酸緩沖液.3、ASA抗壞血酸0.1%:50mg的ASA溶于50ml的無氨蒸儲水可以超純水替代.現用現4、10叱酸：10ml冰乙酸加90ml蒸儲水.5、80叱

27、醇：850ml的95%勺乙醇可以組培間大桶酒精替代力口150ml蒸儲水.6、氨基酸標準溶液5.0ug/ml:烘干恒重的谷氨酸0.0536g,先用少量的10%勺異丙醇0.5ml異丙醇加4.5ml蒸儲水混勻溶解后,轉入100ml潔凈容量瓶,用蒸儲水定容至刻度.從中取5ml用水稀釋到50ml即可.標準曲線制備：試齊一一離心唯字號p2回456氨基酸標準溶液ul04080120160200無氨蒸溜水ul20016012080400前二酮緩沖顯色液ul700700700700700700抗壞血酸ul202020202020氨基酸含量ug/ml012345根據上表依次參加各試劑,搖勻后,沸水浴顯色20min

28、,取出后迅速冰浴,并不時搖動離心管,當溶液呈藍紫色時各加80叱酉I2ml和蒸儲水2.08ml,搖勻后,570nm比色繪制標曲.上清液200ul參加到10ml離心管內一加苛三酮緩沖顯色液700ul0.1%抗壞血酸20ul一沸水浴顯色20min一迅速冰浴一溶液呈藍紫色時一加80叱酉12ml一蒸儲水2.08ml570nm比結果計算：AA含量mg/gFWorDW=C*V/W/1000C：標曲所得AA含量ug/ml;V:樣品提取液體積10ml;W樣品鮮重或干重g.6.過氧化氫植物組織中過氧化氫含量測定入=415nm樣品提取和測定：1稱取新鮮植物組織0.2g左右視H2O2含量多少而定,參加4c下預冷的丙酮

29、1ml和少許石英砂研磨成勻漿后轉入離心管,再用2-3ml冷丙酮分次洗滌研缽并把洗滌液轉入離心管,3000r/min下離心10min或8000rpm離心5min,同時準備新的離心管并編號標記并稱重記錄,離心完以后,上清液轉入新離心管后,再次稱重,兩次稱重差值除以丙酮密度0.792g/ml,即為樣品提取液總體積.【原理】H2O2與硫酸鈦或氯化鈦生成過氧化物一鈦復合物黃色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波長下比色測定.在一定范圍內,其顏色深淺與H2O凝度呈線性關系.【試劑】1、100mol/LH2O2丙酮試劑：取30附析純H2O210.2口,溶于100ml的丙酮此時H2O2為1mmol/L,

30、混勻后從中吸取506再加丙酮4506混勻 此時H2O2為100科mol/L.2、1mol/L硫酸： 濃硫酸56ml,緩慢加蒸儲水944ml,混勻冷卻.3、5%W/V硫酸鈦：稱取5g硫酸鈦,加蒸儲水100ml溶解.4、丙酮冰浴或冰箱預冷；5、濃氨水.【方法】【方法】1.制作標準曲線：取10ml離心管7支,順序編號,并按表1和2參加試劑.表1測定H2O2濃度標準曲線配置表試齊J(ml)離心管號12345167100科mol/LH2O200.10.20.40.60.81.04C卜預冷丙酮1.00.90.80.60.40.205%1酸鈦0.10.10.10.10.10.10.1濃氨水0.20.20.2

31、0.20.20.20.23000r/min離心10min,棄去上清夜,留沉淀1mol/L硫酸5.05.05.05.05.05.05.0表2測定H2O2濃度標準曲線配置表試齊J(ml)離心管號12345671mmol/LH2O200.10.20.40.60.81.04C卜預冷丙酮1.00.90.80.60.40.205%|酸鈦0.10.10.10.10.10.10.1濃氨水0.20.20.20.20.20.20.23000r/min離心10min,棄去上清夜,留沉淀1mol/L硫酸5.05.05.05.05.05.05.0待沉淀完全溶解后,將其小心轉入新的10ml離心管中,并用蒸儲水少量屢次沖洗

32、原來的離心管,將洗滌液合并后定容至10ml刻度,415nm波長下比色.2.2用移液管吸取樣品提取液1ml,按表1或2參加5%1酸鈦0.1ml和濃氨水0.2ml,待沉淀形成后3000rpm/min離心10min或8000rpm離心5min,棄去上清液.沉淀用冷丙酮反復洗滌35次,每次1ml具體為：沉淀加冷丙酮1ml,混勻,8000rpm離心1min,棄掉丙酮；重復此步驟三次,直到去除植物色素.3向洗滌后的沉淀中參加1mol/L硫酸5ml,搖勻,待完全溶解后,與標準曲線同樣的方法定容并比色.3.結果計算：植物組織中H2O2含量mol/gFw尸FWV1式中C一標準曲線上查得樣品中H2O2濃度Wmol

33、;Vt一樣品提取液總體積ml;V1測定時用樣品提取液體積ml;即1ml.FW一植物組織鮮重g.7.谷胱甘肽、ASAA.谷胱甘肽含量的測定復原型谷胱甘肽GSH是植物細胞內另一種重要的抗氧化劑.它含有活性的萌基,極易被氧化.本實驗利用疏基試劑DTN創U定GSH的含量.試劑藥品：GSH勺提取下面的ASA測定也使用該提取液精確稱0.2g左右葉片,將樣品剪碎參加5mL10%三氯乙酸,研磨,15000Xg離心10min,留取上清液備測.同時再精確稱取0.2g左右葉片,1050c殺青10min,80oC烘干恒重后稱重.1、10%三氯乙酸TCA溶?夜W/V:10g三氯乙酸,用蒸儲水配成100mL溶液；2、15

34、0mM磷酸緩沖液pH7.5;含有5mMEDTA:Na2HPO412H2c38.679g和NaH2P042H2O3.952g溶于約1L水；參加EDTA#其濃度為5mM攪勻后蒸儲水定容.3、6mMDTNB上面的150mMNaH2PO4pH7.5;含有5mMEDTA配制實驗步驟：1、GSHB推曲線的制作配制濃度分別為0mM0.02mM、0.04mM0.06mM、0.08mM、0.10mM0.12mM的標淮GSH液,吸取上述標準液各0.25mL.分別參加150mMNaH2P04pH7.42.60mL,混合均勾后,往各管中加人DTNB式劑0.15mL,搖勻厲,30c保溫反響5min,測A412nm以加磷酸緩沖?代替DTNB式齊IJ作空白對照.將測定結果以GSHB度為橫坐標、光密度值為縱坐標制作標淮曲線.2、GSH的提取下面的ASA測定也使用該提取液精確稱0.2g左右葉片,將樣品剪碎參加5mL10%三氯乙酸,研磨,15000Xg離心10min,留取上清液備測.同時再精確稱取0.2g左右葉片,1050c殺青10min,80