1、磺丁基B-環(huán)糊精研究綜述一、產(chǎn)品根本信息1、歷史背景：SBE-B-CD商品名 Captisol是美國 20 世紀 90 年代由美國 Cydex 公司開發(fā)成功的陰離子、高水溶性的 B-CD 衍生物,能很好地與藥物分子包合形成非共價復(fù)合物,從而提升藥物的穩(wěn)定性、水溶性、平安性,降低腎毒性、緩和藥物溶血性,限制藥物釋放速率,掩蓋不良氣味等.與 B-CD 相比,其具有更好的水溶性,且溶血作用小、腎毒性低,是一種應(yīng)用前景非常廣闊的新型藥用輔料.2、 結(jié)構(gòu)特點： 磺丁基-B-環(huán)糊精 SBE-B-CD 是 B-環(huán)糊精與 1,4-丁烷磺內(nèi)酯發(fā)生取代的產(chǎn)物,取代反響可發(fā)生在 B-CD 葡萄糖單元 2,3,6 碳

2、羥基位置上,由于 B-CD 是由 7 個叱喃葡萄糖通過 a-1、4糖昔鍵連接而成,有 21 個可能發(fā)生取代反響的位點,理論上可以到的取代度為 21 的 B-環(huán)糊精衍生物7 個伯羥基,6-OH,14 個仲羥基 2,3-OH,但由于立體位阻既反響條件的限制,取代度一般不超過 10%因此通過該反響所得到的產(chǎn)物是非常復(fù)雜的混合物.SBE-B-CD 相對分子量和取代度關(guān)系為： MW=1135.01+CDs*157.0 職中 CDs 為取代度.常見SBE-B-CD 取代度及分子量如下：代號SBE-B-CDSBE-B-CD取代度47分子量170422411347CAS.NO.25167-62-8194615

3、-04-8182410-00-03、產(chǎn)品根本信息通用名磺基醒-3-環(huán)糊精CDESulfobutylether-3-Cyclodextrin磺基-3-環(huán)糊精SBE-B-CD環(huán)糊精,中文同義詞：磺基醒-3-環(huán)糊精,磺基醒倍他環(huán)糊精,硫代基醒-3-環(huán)糊精鈉,硫代.基醒倍他環(huán)糊精鈉,廿二碳六烯酸磺丁基-3-環(huán)糊精鈉鹽USP藥典英義名稱BetadexSulfobutylEtherSodium英文同義詞：DocosahexaenoicAcids,Docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoicacidCAS號：25167-62-8,182410-00-0(鈉鹽),194615-04-8分子式C

4、42H0-nO35(CH8SONa)n分子量2-O-磺基-3-環(huán)糊精6-O-磺基-3-環(huán)糊精2,3,6-三-0-磺基-3-環(huán)糊精n=4n=6.5n=7C44H79033sC44149c33SC56H97033s3121712171393170421632241上一一巾作為賦形劑,主要用于含氮類藥物中；功能與應(yīng)用對于含氮類藥物具有特殊的親和力和包合性.結(jié)構(gòu)式2給藥途徑注射藥、口服藥、鼻部用藥、眼部用藥,對于含氮類藥物具有特殊的親和力和包合性0配伍禁忌水溶液中,環(huán)糊精的存在可能導(dǎo)致有些抗菌防腐劑的活性降低.常用量及最用量匹MK；66.67kg/d.放射性和口服、靜脈注射的最大維持劑量為320mg/

5、kg/d理化性質(zhì)本品為白色或類白色無固定型粉末,無臭,微甜.100ml 水中溶解度大于 50,30%K 溶液 PH 值為 5.46.8.其他溶劑中溶解度信息如下：溶劑SBE叩-CD參加量(g)溶劑體積(ml)溶解結(jié)果結(jié)果判定水0.10.1DVerysolublepH6.8的磷酸緩沖液0.10.1DVerysolublepH7.4的磷酸緩沖液0.10.1DVerysoluble0.1mol/LHCl0.10.1DVerysoluble0.1mol/LNaOH0.10.1DVerysoluble甲醇0.0110NVerylightly99.9Dsoluble乙睛0.01100NScarcelyso

6、luble內(nèi)酮0.01100NScarcelysoluble三、制備工藝(一)工藝路線 11、工藝原理2、 工藝說明： 以 B-環(huán)糊精和 1,4-磺丁內(nèi)酯為原料,通過向堿性水溶液中引入適量有機溶劑,增加了 1,4-磺丁內(nèi)酯的溶解度,提升了磺丁基醴-B-環(huán)糊精的合成收率；所得產(chǎn)品溶液經(jīng)過超聲透析,活性炭脫色,冷凍枯燥等操作得到磺丁基醴-B-環(huán)糊精粉末產(chǎn)品.(二)工藝路線 2-磺丁內(nèi)酯的制備 1、工藝原理ZnChZnChCHCH O O式CHzKCICHzKCI(1)(1)CHCH O O式C C O(CH,C1O(CH,C1(2)(2)CHXCHX：O Oa a(CH(CH2 2)4O(CHO(

7、CH)4O(CHO(CH2 2)4Cl3)4Cl3)2、工藝說明將 76mL 枯燥處理的四氫吠喃(THF)置于 250m 成瓶中,參加 50mgZnCl,攪拌均勻后,將65g 重蒸處理的乙酰氯慢慢參加,加熱回流反響 1.5h 后,減壓蒸儲(5.36.0kPa),收取沸點98512c 的微分,彳評到乙酸 6-氯丁酯 103.6g;(2 量取 60mL(65g,p=1.0805g/cm3)乙酸 6-氯丁酯置于 500mL 的三頸瓶中,力口入 300mLH2O 再力口入 100g 的 NaSO,攪拌回流 10h,然后將大局部的H2O減壓蒸除,剩余局部參加270mL甲醇,攪拌回流,并通入過量的HCl氣

8、體,反響持續(xù)8h 后,使反響液冷卻至室溫,經(jīng)過濾濃縮后減壓蒸儲(2.73.3kPa),收集152165c的微分,得到 43g 暗紅色產(chǎn)物磺丁內(nèi)酯,產(chǎn)率 73%三工藝路線 3-3-多取代磺丁基-B-環(huán)糊精SBE4-B-CD的合成稱取 5gB-CD4.4mmol置于 50mL瓶中,力口入 10mL200g/LNaOHS 液,攪拌加熱至溶解,量取 2.3mL3.1g,p=1.331g/cm3,22.5mmol磺丁內(nèi)酯,慢慢加到反響液中,同時劇烈攪拌,數(shù)小時后,反響物成均相,停止反響,冷卻至室CHjCOClCHjCOCl+ +媼SOU1SOU1OHOHO O溫,參加 20mLH2Offi 釋,用 HC

9、l 中和,除水,真空枯燥,得微黃色物質(zhì),加少量水溶解,過葡聚糖凝膠柱G-25除鹽純化,得到 4.3g 微黃色產(chǎn)物.比旋度aD20=+3252g/L 水溶液.元素分析:實測值 wC32.80%wH8.68%,wS5.77%wC/wS=5.68,計算值取代度為 3.8,wC/wS=5.64四工藝路線 4-4-單取代磺丁基-B-環(huán)糊精SBE1-B-CD的合成合成步驟同上,10gB-CD8.8mmol,25mL250g/LNaOHS 液加熱攪拌至溶解,慢慢參加1.8mL2.4g,p=1.331g/cm3,17.6mmol磺丁內(nèi)酯,同時劇烈攪拌,數(shù)小時后,反響物呈均相,停止反響,冷卻至室溫,加 20mL

10、HO 稀釋,用 HCl 中和,過濾除去未反響的 B-CD,濾液濃縮,過葡聚糖凝膠柱 G-25 除鹽純化,得 0.9g 微黃色產(chǎn)物.aD20=+580 2g/L 水溶液 .元素分析： 實測值 wC36.71%wH6.22%wS2.77%wC/wS=13.2計算值取代度為 1.3wC/wS=13.62四、質(zhì)量研究及質(zhì)量標準一質(zhì)量限制方法研究第一局部 SBE-7-B-CD 單一取代組分的別離和制備目的：別離、純化和制備 SB-7-B-CD 單一取代組分,確證其取代度.方法：采用 DEAESephadexA-251 聚糖凝膠為填料,玻璃砂芯色譜柱29cmX4cm為填裝柱,自制別離柱,通過硫酸鈉濃度梯度

11、01.4mol/L洗脫對 SBE-7-B-CD 進行別離,得到單一取代組分.采用 SephadexG-25 葡聚糖凝膠為填料,玻璃砂芯色譜柱 40cmx18mm 為填裝柱,自制脫鹽柱,通過去離子水的洗脫將各單一取代組分脫鹽純化.分別采用核磁共振波譜法和質(zhì)譜法對得到的各單一取代組分進行取代度的測定.結(jié)果：共得到 6 種 SBE_7-B-CD 單一取代組分,其取代度分別為 3、4、5、6、7、8.核磁共振波譜法和質(zhì)譜法取代度檢測結(jié)果一致.結(jié)論：本實驗成功別離、純化和制備了 6 種 SBE-7-B-CD 單一取代組分,為 SBE_7-B-CD 的組分分析和平均取代度的測定奠定了物質(zhì)根底.第二局部 S

12、BE7-B-CD 的高效毛細管電泳-間接紫外法組分分析和平均取代度測目的：建立SBE-7-B-CD 的組分分析和平均取代度測定方法.方法：采用高效毛細管電泳-間接紫外檢測分析方法.未涂層熔融石英毛細管柱(60.2cmX50mx50cm;運行緩沖液 30mmol/L 苯甲酸-Tris 緩沖液(pH7.5);溫度 25C；壓力進樣 6s(0.5psi);別離電壓 30kV;檢測波長 214nm 間接檢測模式.平均取代度的計算：峰面租注毛細管有效長度校峰面機兒百麗校正除面葩百分比名福=給一4 4加日包備峰的取代如A A陷平均取代度二宣-通過比擬校正峰面積百分比對各單取代組分進行組分分析.采用所建立的

13、方法對 11 批供試品進行了測定,并與美國藥典論壇(PharmacopoeiaForum,PF)規(guī)定的標準進行比擬.結(jié)果： SBE-7-B-CD 中各組分的別離度符合要求,峰形和基線良好； 該方法精密度和重復(fù)性良好,供試品溶液在 8h 內(nèi)根本穩(wěn)定； SB-7-B-CD 中檢測到取代度分別為 211 的 10 種單取代組分,11 批 SBE-7-B-CD 供試品的平土取代度為 6.76.9,符合 PF 中的規(guī)定,但其組分分析結(jié)果與 PF 的標準規(guī)定有一定的差異.結(jié)論：該方法準確、快速、分析本錢低,能夠評價不同批次供試品的差異,為 SBE-7-B-CD合成工藝的改良提供了幫助.第三局部毛細管氣相色

14、譜法測定SBE-7-B-CD 中雜質(zhì)1,4-丁烷磺內(nèi)酯目的： 建立SBE-7-B-CD中的雜質(zhì) 1,4-BS 的測定方法.方法：采用氣相色譜法.色譜柱：DB1701(30mx0.32mm0.25mAgilentTechnologies)；氫火焰離子化檢測器；載氣為氮氣(純度 99.999%),燃氣為氫氣,助燃氣為空氣；載氣流速30ml/min;進樣口溫度為 200C；柱溫為程序升溫：初始溫度 100C,以 10C/min 的升溫速率升到 200C,恒溫 0min,再以 30C/min 的升溫速率升到 260C,恒溫 3min； 檢測器溫度為 270C； 柱前壓為 9.9psi;分流比為 10:

15、1;進樣 1 口.采用二乙碉作為內(nèi)標.供試品處理： 取 SBE_7-B-CD供試品約 0.2g,精密稱定,置 10ml 離心管中,精密參加水 1ml,渦旋溶解,再精密參加二氯甲烷 1ml,渦旋 1min,靜置分層,取有機相,進樣分析,以標準曲線法計算含量.結(jié)果： 二乙碉與 1,4-BS 的保存時間分別為 6.131min 和 8.615min,別離度遠大于 1.5;1,4-BS的檢測限為0.1126ng,定量限為0.2599ng;1,4-BS在2.984/ml8.952pg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9989);儀器精密度(n=9)的 RSD 為 4.7%;高、 中、 低三種濃度白加樣回

16、收率分別為101.5%99.3%、100.3%,精密度分別為 1.6%、 1.2%、 1.2%;1,4-BS 高、 中、 低三種濃度的平均萃取率分別為 68.7%、 68.4%、70.0%,RS 防另 1J 為 15.2%、23.5%、17.4%;二乙碉高、中、低三種濃度的平均萃取率分別為 56.1%、57.7%、52.8%,RS 防另 1J 為 18.8%、24.8%13.9%.結(jié)論：本實驗所建立的方法簡單、快速、準確,靈敏度可滿足檢測要求,預(yù)防了 PF 規(guī)定的標準參加法的繁瑣計算,可作為 SBE-7-B-CD 中的雜質(zhì) 1,4-BS 的有效檢測方法.第四局部高效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用同時

17、測定 SBE-7-B-CD 中雜質(zhì) 4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醴鈉目的：建立 SBE-7-B-CD 中的雜質(zhì) 4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醴鈉的測定方法.方法：采用高效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用法.色譜柱：ODSSPC18(4.6X250mm5 仙 mGLSciencesInc.Inertsil),柱溫為 30C；流動相：甲醇-10mmol/L 正戊胺水溶液(pH5.45)(30:70);流速 1.0ml/min,進樣量 10 仙 lo離子源：電噴霧離子(ESI)源；檢測方式：多反響監(jiān)測(MRM 模式；負離子監(jiān)測模式.4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醴鈉的監(jiān)測離子對分別為 m/z153.0/79.

18、8 和 m/z289.0/152.9.結(jié)果：4-羥基丁磺酸鈉與二磺烷基化醚鈉的保存時間分別為 3.41min 和 4.24min,能夠完全別離；4-羥基丁磺酸鈉的檢測限為 0.005294ng,定量限為 0.01018ng,定量限的回收率在 101.9%108.8 應(yīng)問,RSM3.4%;二磺烷基化醴鈉的檢測限為 0.02054ng,定量限為0.03950ng,定量限的回收率在 97.3%107.8 應(yīng)間,RSD 為 4.0%； 4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉分別在 1.018ng/ml3.583ng/ml和 3.950ng/ml13.90ng/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r 分別為 0.999

19、7 和 0.9996；方法精密度 n=6 的 RSD大于 3.8%;力口樣回收率 n=6 為 95.4%96.2%RSD 不大于 4.2%;儀器精密度n=6的 RS 訃大于 3.5%.結(jié)論：該方法專屬性強、靈敏度高,是一種新的 4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉的檢測方法,同時也為其他烷基磺酸鈉鹽化合物的分析提供了參考.第五局部高效液相凝膠色譜-示差折光檢測法測定 SBE-7-B-CD 的含量目的：建立SBE-7-B-CD 的含量測定方法.方法：采用高效液相色譜法.PhenomenexPolySep-GFC-P3000s 膠柱,柱溫 35C；示差折光檢測器,檢測溫度 35；流動相：乙腈-0.1m

20、ol/L 硝酸鉀水溶液35:65,流速 1.0ml/min；進樣量 10 履.結(jié)果： SBE_7-B-CD 的保存時間為 6.8min,主峰與相鄰雜質(zhì)峰的別離度均不小于 1.94;方法的檢測限為 0.32Ng,定量限為 0.48Ng;SBE-7-0-CD 在 0.4985mg/ml1.495mg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好r=0.9998;方法精密度n=6的 RSD 為1.4%;平均回收率 n=6 的平土MS為98.0%,RSD為1.3%;6批供試品的含量均在95.8%99.3%之間.結(jié)論：該方法準確度和重復(fù)性良好,適合 SBE-7-B-CD 的含量測定,為 SBE_7-B-CD 質(zhì)量標準的建立

21、奠定了根底.二離子色譜法測定磺丁基醴-B-環(huán)糊精中 4-羥基丁磺酸目的:建立磺丁基醴-B-環(huán)糊精中 4-羥基丁磺酸的離子色譜檢測方法.方法：采用 IonPacAS23 陰離子型交換柱250mmK4mm 為分析柱,IonPacAG2350m 佛 4mm 為保護柱,7mmol.L-1NaHCOK 溶液為淋洗液,流速為 1.0mL.min-1,以電導(dǎo)檢測器檢測.結(jié)果：在建立的色譜條件下,磺丁基醴-B-環(huán)糊精樣品中 4-羥基丁磺酸與其他雜質(zhì)離子實現(xiàn)基線別離,4-羥基丁磺酸在 220mg.L-1 范圍內(nèi)線性良好 r=0.9998 ,平均回收率為 100.2%RSD=1.3%,n=9,檢測限與定量限分別為

22、 2 和 5ng.結(jié)論：該方法操作簡便,結(jié)果準確、可靠,適用于磺丁基醴-B-環(huán)糊精中 4-羥基丁磺酸的限量檢查.三離子色譜法測定磺丁基倍他環(huán)糊精中 4-羥基丁烷磺酸鈉采用離子色譜法,以陰離子分析柱為別離手段,采用電導(dǎo)檢測器,洗脫液為碳酸鈉碳酸氫鈉系統(tǒng)或者碳酸鈉鉀氫氧化鈉鉀系統(tǒng),以此來解決磺丁基倍他環(huán)糊精中 4羥基丁烷磺酸鈉的限度檢測問題.步驟配制適當濃度的洗脫液,洗脫液是碳酸鈉碳酸氫鈉系統(tǒng)或者碳酸鈉鉀氫氧化鈉鉀系統(tǒng)；配制適當濃度的磺丁基倍他環(huán)糊精樣品溶液和 4-羥基丁烷磺酸鈉對照品溶液；離子色譜采用陰離子色譜柱、電導(dǎo)檢測器,樣品溶液和對照品溶液分別進樣檢測,樣品溶液中 4-羥基丁烷磺酸鈉的峰面

23、積低于對照品峰面積為樣品合格.本檢測方法靈敏,樣品用量少、重現(xiàn)性高、結(jié)果可靠,可對磺丁基倍他環(huán)糊精進行質(zhì)量限制和檢驗,從而提升產(chǎn)品的品質(zhì).四氣相色譜法檢測磺丁基倍他環(huán)糊精中 1,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯方法:.樣品的前處理-1,將磺丁基倍他環(huán)糊精樣品用水溶解,配制成樣品的水溶液；.樣品的前處理-2,采用有機溶劑對樣品水溶液進行液液萃取,合并有機相萃取液,濃縮到適當體積,得到待測樣品溶液；.對照品溶液的配制,將1,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯對照品用有機溶劑溶解,配制成對照品溶液,所用有機溶劑與步驟的有機溶劑相同；.分別將待測樣品溶液和對照品溶液注入氣相色譜儀,根據(jù)結(jié)果,計算得樣品中 1,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯的含

24、量.本檢測方法靈敏、重現(xiàn)性高、結(jié)果可靠,可對磺丁基倍他環(huán)糊精中的 1,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯進行檢驗和質(zhì)量限制,從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量.五高效液相色譜法測定磺丁基-B-環(huán)糊精中的 B-環(huán)糊精殘留含量方法：采用 WatersXTerraMs-C184.6mmx250mm,5imtt;流動相：甲醇-水8:92;檢測器：示差折光率檢測器；流速:0.8mL-min-1;柱溫:25C.結(jié)果：在所選定的色譜條件下,磺丁基-B-環(huán)糊精與 B-環(huán)糊精能別離完全；B環(huán)糊精在 0.11.6mg-mL1 內(nèi),峰面積與濃度線性關(guān)系良好,r=0.9999;最低檢測限為 2pg.結(jié)論： 方法簡便,準確,專屬性強,可用于磺丁基-B

25、-環(huán)糊精中的 B-環(huán)糊精檢測及含量測定質(zhì)量限制.六質(zhì)量指標序號檢驗工程方法限度1外觀白色粉末,無嗅,微甜2鑒別AIR符合規(guī)定BHPLC符合規(guī)定C取代度符合規(guī)定D鈉鹽符合規(guī)定3檢查3-1PH4.06.83-23-環(huán)糊精離子色譜法或HPLC0.1%3-31,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯GC毛細管氣相色譜法0.5ppm3-4氯化鈉離子色譜法0.2%4-羥基丁烷磺酸鈉離子色譜法0.09%二磺烷基化醛鈉離子色譜法0.05%3-5溶液澄清度符合規(guī)定3-6取代度毛細管電泳法舒效毛細管電泳-間接紫外法6.26.93-7枯燥失重10.0%3-8灼燒殘渣20%3-9重金屬5ppm3-10神鹽w4Ppm3-11氯化物0.02

26、%3-12細菌總數(shù)個/g1000霉菌總數(shù)個/g100致病菌不得檢出4含量局效液相凝膠色譜95.0105%-示差折光檢測法局效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用局效毛細管電泳-間接紫外法(七)美國藥典 USP3 吩析方法BetadexSulfobutylEtherSodium磺丁基醍-(3(3-環(huán)糊精鈉G2H0-nO35(GHSONa)n 分子量 2163,當 n=6.5磺丁基醴 B 環(huán)糊精鈉；磺丁基醴 B 環(huán)糊精硫酸鈉182410-00-0.定義磺丁基醴 B 環(huán)糊精鈉是由 B 環(huán)糊精和 1,4-丁烷磺內(nèi)酯在堿性條件下制備而成.B 環(huán)糊精的取代度應(yīng)不小于 6.2 和不高于 6.9.它包含磺丁基醴-B-環(huán)糊

27、精鈉C42H70-nO35-(CHSONai)n 按無水物計算應(yīng)不小于 95.0%和不高于 105.0%.鑒別A.紅外吸收B 在含量測定條件下,樣品溶液的主峰的保存時間應(yīng)與標準溶液一致.C.它滿足了測試平均取代度的要求.D.鑒別試驗,鈉含量測定?程序流動相：乙月青和 0.1M 硝酸鉀溶液1:4標準溶液：10mg/ml 的 USP 磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉 RS樣品溶液：10mg/ml 的磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉色譜系統(tǒng)見色譜,系統(tǒng)適用性.模式：LC檢測器：折射率檢測器溫度：352列：7.8mm30cm 的分析柱；填料 L37.注-沖洗柱,用乙月青和水的溶液1:9在完成運行的系列流速：1.0ml/m

28、in進樣量：20 口系統(tǒng)適用性例如：適用性要求標準的解決方案相對標準偏差：不高于 2.0%分析樣本：標準溶液和樣品溶液計算磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉的比例,C42H7o-nO35-GHSONan的百分比局部磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉采取：結(jié)果=RU/RSxCS/CUX100RU 立丁基醴-B-環(huán)糊精鈉的樣品溶液峰值響應(yīng)RS 巾準溶液的磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉峰值響應(yīng)CS=USP1 照品標準溶 7 中磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉濃度 RSmg/mlCU 樣品溶液中磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉濃度mg/ml驗收標準：基于無水 95.0%-105.0%雜質(zhì)檢查-重金屬：方法 II:不高于 5PPM-0-環(huán)糊精BETADE

29、X溶液 A:25mMol 的氫氧化鈉溶液 B:250mMol 的氫氧化鈉和 1M 硝酸鉀流動相：見表 1.時間A(%)B(%)010004100050100100100111000201000標準溶液：USPB-環(huán)糊精的 2 仙 g/mlRS樣品溶液：磺丁基醴-0-環(huán)糊精鈉 2mg/ml色譜系統(tǒng)見色譜,系統(tǒng)適用性和離子色譜.模式：IC檢測器：脈沖安培金工作電極和銀參考電極電化學(xué)電池保護柱：4.0 毫米 X5 厘米的陰離子交換；包裝 L61分析柱：4.0 毫米 X25 厘米陰離子交換；包裝 L61柱溫度：502流量：1.0ml/分鐘注射量：20pL波形脈沖安培檢測器：見表 2.時間電壓V0.00

30、0.10.30整合開始0.500.10.5整合結(jié)束0.510.60.590.60.60-0.60.65-0.6系統(tǒng)適用性例如：標準溶液適用性要求相對標準偏差：不大于 5.0%分析樣本：標準溶液和樣品溶液計算的 B-環(huán)糊精在磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉中所占的百分比:結(jié)果=RU/RSxCS/CUXFX100RU 測試環(huán)糊精的樣品溶液峰值響應(yīng)RS=測試環(huán)糊精標準溶液峰值響應(yīng)CS=E 標準溶液 USPB-環(huán)糊精 RS 濃度Ng/mlCU 在樣品溶液磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉濃度mg/mlF=轉(zhuǎn)換系數(shù)103mg/Ng驗收標準：不大于 0.1%1,4-丁烷磺內(nèi)酯內(nèi)標溶液：0.25pg/ml 二乙碉標準儲藏溶液 A

31、:0.5pg/ml 的 1,4-丁烷磺內(nèi)酯標準儲藏溶液 B：1.0pg/ml 的 1,4-丁烷磺內(nèi)酯標準儲藏溶液 C：2.0pg/ml 的 1,4-丁烷磺內(nèi)酯樣品原液：磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉的內(nèi)標溶液 250mg/ml 空白溶液和樣品溶液 A,B,C,D樣品名稱溶液 1 添加ml溶液 2 添加ml參加二氯甲烷ml空白溶液內(nèi)標溶液,4.0水,1.01.0樣品溶液 A樣品原液,4.0標準儲藏液 A,1.01.0樣品溶液 B樣品原液,4.0標準儲藏液 B,1.01.0樣品溶液 C樣品原液,4.0標準儲藏液 C,1.01.0樣品溶液 D樣品原液,4.0水,1.01.0注：使用前立即準備.色譜系統(tǒng)見色譜

32、,系統(tǒng)適用性.模式：GC檢測器：氫火焰離子化柱：0.32mm25m 熔融石英毛細管柱；的 0.5m 的 G46 相涂層溫度檢測器：270c注入口：200c柱：溫度方案見表 4.初始溫度C升溫C/min最終溫度C保持時間min10010200200352705載氣：氮氣,入口壓力一般在 12Psi進樣量：1.0pL進樣方式：不分流注入 0.5min,然后以 50ml/min 分流.注意-建議使用適宜的不分流進樣襯管.系統(tǒng)適用性樣品：樣品溶液 B注-二乙基碉和 1,4-丁烷磺內(nèi)酯的相對保存時間分別為 0.7 和 1.0.適用性要求相對標準偏差：不大于 10.0%分析樣品： 空白溶液,試樣溶液 A、

33、 B、 C 和 D 較正的 1,4-丁烷磺內(nèi)酯的峰響應(yīng)值與樣品溶液 A,B,C或 D 中二乙基碉峰響應(yīng)值的比值減去空白溶液中 1,4-丁烷磺內(nèi)酯與乙基碉比值.以試樣溶液 A,B,C 或 D 中 1,4-丁烷磺內(nèi)酯校正峰響應(yīng)值比二乙碉的比值,對所添加的 1,4-丁烷磺內(nèi)酯量pg.繪制標準曲線,曲線和軸線的交點與原點之間的距離代表 1,4-丁烷磺內(nèi)酯的量,計算在樣品母液 4ml 中含有多少 A 仙 g .計算 1,4-丁磺酸內(nèi)酯中 B 環(huán)糊精磺丁基醴鈉含量：結(jié)果二 A/VEXTXCUXFA 二如上確定VEXk 在提取步驟中使用樣品儲藏溶液的體積,4.0ml.=樣品原料溶液中 B 環(huán)糊精磺丁基醴鈉濃

34、度mg/mlF 二換算系數(shù)10-3克/mg驗收標準：不大于 05Ppm-氯化鈉,4-羥基-1-磺酸,和雙4-磺丁基醴二鈉溶液 A:5mM 勺氫氧化鈉,在密閉容器中脫氣 15 分鐘溶液 B:25mM 勺氫氧化鈉,在一個封閉容器脫氣 15 分鐘流動相：見表 5.時間min溶液 A為溶液 B%0100041000107030247030251000401000柱洗滌液 A:50mM 寧檬酸鈉柱洗滌液 B:150mM 勺氫氧化鈉標準溶液：配制一個溶液含有 USPg 化鈉 RS8g/ml,4-羥基丁烷-1-磺酸濃度 4pg/ml 的的,和 4 仙 g/ml 的雙4-磺丁基醴二鈉.樣品溶液：磺丁基醴-0-

35、環(huán)糊精鈉 4mg/ml色譜系統(tǒng)見色譜621,系統(tǒng)適用性和離子色譜1065.模式：IC檢測器：電導(dǎo)率范圍：30 小當前：100mA柱： 注-在每次運行結(jié)束,用柱洗滌液 A 以 1mL/分鐘的流速沖洗 35 分鐘,然后使用柱洗滌液 B 以同樣的流速清洗色譜柱 35 分鐘.保護柱：4.0mnm5.0cm 陰離子交換；包裝 L61分析：4.0mnriX25cm 陰離子交換；包裝 L61柱溫度：30C抑制器：微膜負離子自動抑制 1 或適宜的化學(xué)滅火系統(tǒng)抑制劑：自動抑制流量：1.0ml/min注射量：20pL系統(tǒng)適用性樣品：標準溶液注,提供相對保存時間供參考.相對保存時間分別是 1.0,1.4 和 8.6

36、 的為 4-羥基丁烷-1-磺酸根離子,氯離子,和雙磺丁基醚離子.適用性要求分辨率：不小于 2.0相對標準偏差：不大于 10.0分析樣本：標準溶液和樣品溶液計算氯化鈉,4-羥基丁烷-1-磺酸,二磺丁基B 環(huán)糊精醴百分比鈉含量結(jié)果=rU/rS義CSCU義FX100RU 氯化鈉,4-羥基丁烷-1-磺酸,或樣品溶液中雙磺丁基醴二鈉峰值響應(yīng)RS=氯化鈉,4-羥基丁烷-1-磺酸,或標準溶液中雙磺乙醚二鈉峰值響應(yīng)CS 二氯化鈉,4-羥基丁烷-1-磺酸,或標準溶液中雙磺丁基醴二鈉濃度g/mlCU 樣品溶液中磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉濃度mg/mlF=轉(zhuǎn)換系數(shù)10-3mg/微磺丁基醴-0-環(huán)糊精鈉 g驗收標準氯化鈉

37、：不大于 0.24-羥基丁烷-1-磺酸：不大于 0.09雙磺丁基醚二鈉：不大于 0.05運行電解質(zhì)：用 100mmol 三羥甲基氨基甲烷緩沖液調(diào)節(jié) 30mmol 苯甲酸至 pH 值適用該儀器.由于不同毛細管之間的差異,沒有指定一個單一的普遍適用的電解液的 pH值.相反,每個毛細管相關(guān)的最正確 pH 值應(yīng)根據(jù)儀器說明書確定.標準溶液：10mg/ml 的 USP 磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉 RS樣品溶液：10mg/ml 的磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉毛細管沖洗過程：使用單獨的運行電解質(zhì)的小瓶進行毛細管沖洗和樣品分析.每天進行分析前及每個分析之前的沖洗：用 0.1N 氫氧化鈉沖洗毛細管 30 分鐘,并且用水沖

38、洗不少于 2h,并運行電解質(zhì)不少于 1 小時.執(zhí)行預(yù)噴射沖洗每次進樣之前.用 0.1N 氫氧化鈉沖洗毛細管不少于 1 分鐘,并且運行電解質(zhì)不少于 3 分鐘.如果正在使用新的毛細管中,除了上述的常規(guī)沖洗,新的毛細管,需要在第一次使用之前漂洗.新毛細管用 1M 氫氧化鈉沖洗 1 小時,接著用水沖洗 2 小時.電泳系統(tǒng)見毛細管電泳1053.模式：高效毛細管電泳檢測器：反相紫外檢測波長 200nm,具有 20nm 的帶寬.【注-A205nm 檢測波長 10nm 帶寬,可以作為替代.柱：50M50 厘米的熔融石英柱柱溫：25電壓：10 分鐘電壓從 0 線性升到 30kV,然后在 30kV 維持 20 分

39、鐘注射量：等量在 0.5psi 壓力差下維持 10 秒系統(tǒng)適用性例如：標準溶液注：見表 6 中近似的相對遷移時間磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉峰 I-X磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉峰 I,II,III,X,含有 B-環(huán)糊精分子與 1,2,3,10 磺丁基取代的 S ,分別.相對遷移時間僅供參考幫助峰識別.表 6磺基醴-3-環(huán)糊精鈉峰 I-X相對遷移時間I0.58II0.63III0.69IV0.77V0.83VI0.91VII1.00VIII1.10IX1.20X1.30適用性要求分辨率：磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉 IX 和磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉峰 X 不小于 0.9,分析：樣品：運行電解質(zhì),水,標準溶液和樣品溶液,注入標準溶液和樣品溶液通過施加 0.5psi 的壓力差,相當于 34mbar,持續(xù) 10 秒,然后注射運行電解質(zhì)在 0.5psi 壓力差下持續(xù) 2 秒注-壓力注射應(yīng)用水的小瓶或運行電解質(zhì)在毛細管出口端.記錄電泳,并測量每個磺丁基醴-B-環(huán)糊精鈉峰的峰值響應(yīng) I-X .計算校正后的峰面積,AI,在電泳圖每個峰：校