1、實驗常用試劑、緩沖液的配制方法Ampicillin （氨卡青霉素）100mg/ml口組份濃度100mg/ml Ampicillin口配制量50mL口配置方法1.稱量5g Ampicillin置于50mL離心管中。2 .加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50mL。3 .用m m濾膜過濾除菌。4 .小份分裝（1mL/份）后，-20C保存。Kan （卡那霉素）50mg/ml口組分濃度50mg/ml卡那霉素口配制量50mL口配制方法1.稱取卡那霉素置于50ml塑料離心管中。5 .加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至 50mL。6 .用pm濾膜過濾除菌。7 .小份分裝（1mL/份）后，-

2、20C保存。IPTG肝丙基-B -D順代半乳糖甘）24 mg/ml口組份濃度24mg/L IPTG口配制量50mL口配置方法1.稱量置于50mL離心管中。8 .加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50mL。9 .用m m濾膜過濾除菌。10 小份分裝（1mL/份）后，-20C保存。X- Gal 20mg/m口組份濃度20mg/L X-Gal口配制量50mL口配置方法1.稱取1gX-Ga置于50mL離心管中。2 .加入40mL DMF （二甲基甲酰胺），充分混合溶解, 定容至50mL。3 .小份分裝（1mL/份）后，-20C避光保存。I 口故關苴LBA口仆是口組份濃度 1% （W/V） T

3、ryptone, % （W/V） Yeast Extract 1% （W/V） NaCl口配制量1L口配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Tryptone （胰化蛋白月東）10gYeast Extrac t （酵母提取物）5gNaCl （氯化鈉）10g4 .加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。5 .滴加5N NaOH （約），調節pH值至。6 .加去離子水定容至1L=7 .高溫高壓滅菌后，4c保存。注：1. LB固體培養基每100ml LB培養基加入瓊脂粉。2 . 5N NaOH新配后溶液加入需要重新測定。3 .待培養基溫度降至50c時，以手不燙為準，按比例加入抗生素，以免溫度 過高

4、導致抗生素失效，并充分搖勻。50XTAE Buffer口組份濃度2 M Tris酉昔酸,100 mM EDTA口配制量100m L口配制方法1.稱量下列試劑，置于200mL燒杯中。TrisgNa2EDTA 2H2Og2 .向燒杯中加入約80 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3 .加入ml的冰乙酸，充分攪拌。4 .加去離子水將溶液定容至100mL后，室溫保存。注：1xTAE的稀釋(如500ml1xTAE即10mL 50xTAEffi釋于490mL的去離子水)。1 %瓊脂糖凝膠(核酸電泳用)口組份濃度1 %瓊脂糖凝膠口配制量100m L口配制方法1.稱量1g瓊脂糖置于200mL錐形瓶中。2 .加入

5、100ml1XTAE Buffer 搖動混勻。3 .放入微波爐加熱2min至瓊脂糖完全溶化4 .插入梳子，等溫度降下來，倒膠。Tris-HCl口組份濃度1 M Tris-HC l()口配制量100mL口配置方法1.稱量 置于200mL燒杯中。5 .加入約80mL的去離子水，充分攪拌溶解6 .加入11mL的濃鹽酸。7 .定容至100mL,室溫保存。Tris-HCl口組份濃度M Tris-HC l()口配制量100L口配置方法 1.稱取置于200mL燒杯中。8 .加入約80mL的去離子水，充分攪拌溶解9 .用濃鹽酸調pH值至。10 將溶液定容至100mL。11 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使

6、溶液冷卻至室溫后再調定pH值。5 N NaOH口組份濃度5N NaOH口配制量100mL口配置方法1.量取80mL去離子水置于100200mL塑料燒杯中2 .稱取20g NaOH逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌以放熱3 .待NaOH完全溶解后，定容至100mL。4 .將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。注：NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂。N HCl口組份濃度N HCl口配制量100mL口配置方法1.在 的去離子水中加入的濃鹽酸(),均勻混合。5 .室溫保存。25xPB Buffer 口組份濃度 口配制量 口配制方法25xPB Buffer100mL1 .稱量下列試劑，置于100

7、ML燒杯中。Na2HPO4磷酸氫二鈉)NaH2PO4 (磷酸二氫鈉)2 .向燒杯中加入約80 ML去離子水，充分攪拌溶解。3 . 定容至100 ML。1xPBS Buffer口組份濃度1xPBS Buffer口配制量100mL口配制方法1.稱量Nacl置于100 ML燒杯中。6 .向燒杯中加入40 ML 25xPB Buffer®拌溶解。7 .滴加5N NaoH調節PH值至，將溶液定容至1L.8 .高溫滅菌后，室溫保存。注：PBST勺配制:1L 1xPBSl口 1ml 吐溫-20。10% (W/V)過硫酸俊口組分濃度10% (W/V)過硫酸俊口配制量10mL口配制方法1.稱取1g過硫

8、酸俊；9 .加入10ml的去離子水后攪拌溶解，10 貯存于4C。注：10%過硫酸俊最好現配現用，配好的溶液在 4c保存可使用2周左右，過期 會失去催化效果。10% (W/V) SDS口組份濃度10% (W/V)口配制量100mL口配制方法 1.稱量10gSDSg于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水, 68 c加熱溶解。11 滴加數滴濃鹽酸調節pH值至。12 將溶液定容至100mL后，室溫保存5X Tris-Glycine Buffer 口組分濃度Tris, Glycine, % (W/V)SDS口配制量1L口配制方法1.稱取下列試劑，置于1L的燒杯中Tris Glycine94g

9、SDS13 加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。14 加入去離子水定容至1L后，室溫保存。 注：1X Tris-Glycine Buffer( 500ml 即量取 100ml 稀釋于 400ml 去離子水中)。考馬斯亮藍R-250染色液口組份濃度% (W/V)考馬斯亮藍 R-250, 25% (V/V)異丙醇，10% ( V/V)冰醋酸口配制量1L口配置方法1.稱取1g考馬斯亮藍 R-250置于1L燒杯中。15 量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。16 力口入100mL的冰乙醋酸，均勻攪拌。17 加入650mL的去離子水，均勻攪拌。18 用濾紙去除顆粒物質后，室溫保存。考馬斯亮藍

10、染色脫色液口組份濃度10% (V/V)醋酸，5% (V/V)乙醇口配制量1L口配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。醋酸100mL乙醇50mLdH2O850mL19 充分混合后使用。膜轉移緩沖液(Western雜交用)口組份濃度39mMGlycine, 48mMTris, %(W/V)SDS 20%(V/V)甲醇口配制量1L口配制方法1.稱量下列試劑，置于lL燒杯中。GlycinegTrisgSDSg2.向燒杯中加入約600ml的去離子水，充分攪拌溶解20 加去離子水將溶液定溶至800ml。21 加入200ml的甲醇，室溫保存。封閉緩沖液 （Western雜交用）口組份濃度 5%（W/V）脫脂奶粉/PBSTBuffer口配制量100mL口配制方法 1.稱脫脂奶粉加入到10mlPBSTBuffer中，攪拌溶解