1、第十章 磺胺類、硝基呋喃類獸藥 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)第一節(jié) 磺胺類v一、概述 v磺胺類藥物 SAs 是人工合成的具有對(duì)氨基苯磺酰胺構(gòu)造的一類抗菌藥物的總稱。v藥理作用：干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)對(duì)對(duì)氨基苯甲酸 ( PA - BA 的利用，影響細(xì)胞核蛋白質(zhì)的合成，從而抑制細(xì)菌的繁衍。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v普通為白色或黃色結(jié)晶粉末，無(wú)臭，根本無(wú)味。具有芳伯氨基和磺酸氨基，因此呈酸堿兩性。 v SAs具有抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、吸收迅速完全和價(jià)廉易得等特點(diǎn)，因此廣泛用在畜牧業(yè)和獸醫(yī)臨床上來(lái)預(yù)防和治療畜禽細(xì)菌性疾病，兼有抗球蟲活性。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科

2、學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v由于 SAs 在體內(nèi)作用和代謝時(shí)間較長(zhǎng)，經(jīng)過任何途徑攝入的磺胺都有能夠在人體內(nèi)蓄積。蓄積濃度超越一定值時(shí)對(duì)人體有害。短時(shí)間大劑量或長(zhǎng)時(shí)間小劑量的刺激可分別引起急性或慢性中毒，影響機(jī)體的泌尿、免疫系統(tǒng)，破壞肌肉、腎臟和甲狀腺等組織，如誘發(fā)人的甲狀腺癌等。v人體中長(zhǎng)期存在磺胺會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì) SAs 產(chǎn)生抗藥性。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v國(guó)際食品法典委員會(huì) CAC 和許多國(guó)家規(guī)定，食品中 SAs 總量以及磺胺二甲嘧啶等單個(gè)磺胺的最大殘留限量 MRL為 0.1 mg / kg 。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v二、提取方法v提

3、取樣品中 SAs 的方法很多，歸納起來(lái)主要有四大類：v 單一溶劑提取，如丙酮、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷等； v 混合溶劑提取，如二氯甲烷-丙酮、三氯甲烷-丙酮、三氯甲烷-乙酸乙酯、三氯甲烷-甲醇、乙腈-氯仿、丙酮-乙酸乙酯、氯仿-丙酮等；v 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v 酸、堿、緩沖溶液提取，如0.1mol / L 、 1.0mol / L 、 3.0mol / L 鹽酸溶液，三氯乙酸-鹽酸溶液，磷酸緩沖溶液， EDTA 緩沖溶液；v 酸或緩沖溶液加溶劑，如 0 . 2 偏磷酸-甲醇、鹽酸-甲醇、乙酸-丙酮、三氯甲烷-乙酸。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸

4、藥殘留檢測(cè)v三、凈化方法v液液分配v由于 SAs 具有酸堿兩性，使得液液萃取成為磺胺藥凈化的一種重要手段。將萃取液用正己烷萃取除去脂肪后蒸干，參與稀酸溶液溶解殘?jiān){(diào)理 pH 值，用二氯甲烷萃取，然后進(jìn)展測(cè)定。該方法可以用于許多樣品中多種磺胺殘留的凈化。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v當(dāng)磺胺藥從有機(jī)相向水相分配時(shí)，為獲得稱心的回收率，水相 pH 值的調(diào)理非常關(guān)鍵。v磺胺藥普通從有機(jī)相提取進(jìn)入強(qiáng)酸或堿溶液。為了更好的凈化，調(diào)理水相的 pH 值在 5 . 1 5 . 6 之間，分析物然后被反提溶于二氯甲烷或乙酸乙酯。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v四、測(cè)定

5、方法v幾十年來(lái)，人們對(duì)食品和飼料中 SAs 殘留的檢測(cè)進(jìn)展了深化全面的研討。從早期的分光光度法 UV 、熒光法 FL 、薄層色譜法 TLC 、氣相色譜法 GC 到 20 世紀(jì) 80 年代以來(lái)的液相色譜法 HPLC 、氣相色譜-質(zhì)譜法 GC-MS 、液相色譜-質(zhì)譜法 HPLC - MS 。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v分析 SAs 的氣相色譜法主要為氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器法 GC- ECD 。v HPLC 法是目前可食性動(dòng)物產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留檢測(cè)中運(yùn)用最廣泛的方法早期研討通常運(yùn)用正相 HPLC 。v近十多年主要用反相 HPLC 法，磺胺藥普統(tǒng)統(tǒng)過非極性反相色譜柱十八烷基

6、、辛烷基和苯基，柱子尺寸普通長(zhǎng) 15cm ，內(nèi)徑 4 .6mm 。其中要數(shù)十八烷基鍵合相硅膠柱的性能最為優(yōu)良。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v磺胺藥的 HPLC 檢測(cè)通常運(yùn)用紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器或電化學(xué)檢測(cè)器。v紫外檢測(cè)器最為常用，應(yīng)盡能夠選取最大吸收波長(zhǎng)并且干擾組分相應(yīng)值較小的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。在進(jìn)展多殘留檢測(cè)時(shí)，選擇波長(zhǎng)還要保證各組分的呼應(yīng)因子之間差別不致太大。磺胺藥普通均有較強(qiáng)的紫外吸收，無(wú)需衍生化即可直接進(jìn)展液相色譜測(cè)定。檢測(cè)波長(zhǎng)普通為 254 288nm 。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)第二節(jié) 硝基呋喃類 v一、概述v硝基呋喃類藥物是一類

7、人工合成的廣譜抗菌藥，它主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、吠喃它酮和呋喃妥因等。此類化合物具有一樣的藥效基團(tuán)，是由呋喃核的 5 位引入硝基基團(tuán)，而 2 位上引入不同的取代基組成。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v硝基呋喃有非常好的抗菌作用，對(duì)大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、某些真菌和原蟲有滅殺作用，曾經(jīng)被廣泛運(yùn)用于治療和預(yù)防由埃希菌和沙門菌引起的哺乳動(dòng)物消化道疾病。 v研討闡明，硝基呋喃類藥物是一種誘導(dǎo)基因突變的有害物質(zhì)，硝基呋喃及其代謝產(chǎn)物均可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其具有慢性毒性，可引起消化道反響，出于平安性思索

8、，歐盟已于 2019 年制止在食用動(dòng)物中運(yùn)用硝基呋喃類藥物。v我國(guó)也于 2019 年公布了制止運(yùn)用該類獸藥的禁令。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v由于硝基呋喃類藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝極快，半衰期不過幾小時(shí)，所以待測(cè)組織中通常不太能夠檢出硝基呋喃原藥殘留，檢測(cè)硝基呋喃類藥物母體化合物已不能反映真實(shí)的用藥情況。陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v由于組織中結(jié)合殘留物的濃度能夠非常低，需求采用高靈敏度的檢測(cè)方法。此外這類藥物屬光敏物質(zhì)，對(duì)太陽(yáng)光特別敏感，因此操作必需在柔和的光線下進(jìn)展。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v二、樣品處置v1.提取和衍生

9、化v1溶劑提取v在樣品的提取步驟，要求可以將動(dòng)物源性食品中的硝基呋喃殘留物釋放至溶液中，普通運(yùn)用水和酸化的有機(jī)溶劑，以到達(dá)去除大部分蛋白質(zhì)和萃取殘留物的目的。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v2 水解和衍生化v對(duì)于硝基呋喃代謝物的測(cè)定，鑒于其殘留物主要以蛋白結(jié)合物形狀存在，只需在適當(dāng)?shù)乃嵝詶l件下經(jīng)水解過程，才干釋放出游離代謝產(chǎn)物，而且因殘留物的濃度普通非常低，需求采用衍生化手段提高靈敏度，故樣品的處置需求經(jīng)過水解和衍生化。v通常水解選用稀鹽酸，濃度為 0.1 mol / L 。對(duì)衍生化試劑，2-硝基苯甲醛2-NBA)是采用最多的陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留

10、檢測(cè)v2.凈化v液液萃取v實(shí)驗(yàn)證明，在酸性條件下，乙酸乙酯、二氯甲烷對(duì)溶液中的硝基呋喃殘留物萃取效果好，也有參與氯化鈉以進(jìn)一步提高二氯甲烷萃取效率的報(bào)道。v為到達(dá)更好的凈化效果，正己烷常被用于對(duì)樣品萃取液的進(jìn)一步脫脂。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v三、檢測(cè)v樣品經(jīng)處置后，殘留物的檢測(cè)可用酶聯(lián)免疫吸附法，薄層色譜 ，液相色譜，液相色譜-質(zhì)譜進(jìn)展檢測(cè)。 v 1 .酶聯(lián)免疫吸附法v目前已有商品化的呋喃唑酮檢測(cè)試劑盒，采用 AOZ 的特異性抗體，競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)免疫反響測(cè)定肉類、魚蝦、肉雞、豬、牛和牛奶中的呋喃唑酮藥物殘留。其特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便快捷 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v2.薄層色譜法v樣品萃取和凈化后，用薄層色譜分別硝基呋喃殘留物。v由于靈敏度不高，通常不能滿足在食源性動(dòng)物中確認(rèn)微量的硝基呋喃殘留物的要求。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)v3 液相色譜法v液相色譜方法是廣泛運(yùn)用的一種理