1、精品文檔基因工程載體的分類及其特性田文曉 1343001125按照來源和性質分類1、 質粒載體1復制：通常情況下一個質粒含有一個與相應的順式作用控制要素結合在一起的復制起始區。在不同的質粒中，復制起始區的組成方式不同，有的可決定復制的方式，例如滾環復制和B 復制；在大腸桿菌中使用的大多數載體都帶有一個來源于pMB1 質粒或 ColEI 質粒的復制起始位點。2拷貝數：質粒拷貝數分為嚴謹型與松馳型。嚴謹型質粒每個細胞中拷貝數大約為1幾個；松馳型質粒拷貝數較多，可達幾百。3不相容性：兩個質粒在同一宿主中不能共存的現象稱質粒的不相容性，它是指在第二個質 粒導入后，在不涉及 DNA 限制系統時出現的現象

2、。 不相容的質粒一般都利用同一復制系統， 從而導致不能共存于同一宿主中。兩個不相容性質粒在同一個細胞中復制時，在分配到子 細胞的過程中會競爭，隨機挑選，微小的差異最終被放大，從而導致在子細胞中只含有其 中一種質粒。4轉移性：指在自然條件下，很多質粒可以通過稱為細菌接合的作用轉移到新宿主內。它需 要移動基因mob ，轉移基因 tra ，順式因子 bom 及其內部的轉移缺口位點 nic 。2、 噬菌體載體（包括入噬菌體、 M13 噬菌體載體）1）入噬菌體載體：大的外援插入片段在質粒中不穩定，轉導是比轉化效率更高的過程，避免出 現無插入片段的空載體。2）M13 噬菌體載體：可以對任意克隆基因進行 D

3、NA 進行誘變，測序方便，可以制備單鏈測序模 板；含有噬菌體 DNA 的噬菌體顆粒從轉化細胞中分泌出來后，可以在生長平板上收集。1超感染免疫性：溶原性細菌在被噬菌體感染并溶原化后，不會被同種噬菌體再次感染。2經過若干世代后，溶原性細菌會開始進入溶菌周期，即溶原性細菌的誘發。此時，原噬菌 體從宿主基因組上切離下來進行增殖。3、 粘粒載體（柯斯質粒）1具有入噬菌體的特性。 柯斯質粒載體在克隆了合適長度的外源DNA 并在體外被包裝成噬菌體顆粒之后，可以高效地轉導對入噬菌體敏感的大腸桿菌寄主細胞。但該載體不包含入噬 菌體的全部必要基因，因此不能夠通過溶菌周期，無法形成子代噬菌體顆粒。1歡迎下載精品文檔

4、2具有質粒載體的持性。柯斯質粒載體具有質粒復制子，因此在寄主細胞內能夠像質粒 一樣進行復制，并且在氯霉素作用下，同樣也會獲得進一步的擴增。此外，柯斯質粒載體 通常也都具有抗菌素抗性基因，可供作重組體分子表型選擇標記。3具有高容量的克隆能力。 柯斯質粒載體的分子僅具有一個復制起點， 一兩個選擇記號和 位點等三個組成部分，其分子量較小，一般只有57kb 左右。因此，柯斯質粒載體的克隆極限可達 45kb 左右。4具有與同源序列的質粒進行重組的能力。一旦柯斯質粒與一種帶有同源序列的質粒共存在 同一個寄主細胞當中時，它們之間便會形成共合體。因此，假若柯斯質粒與質粒各自具有 一個互不相同的抗藥性記號及相容

5、性的復制起點，那么當他們轉化到同一寄主細胞之后，便可容易的篩選出含有兩個不同不同選擇記號的共合體分子。4、 病毒載體1轉導效率高、復雜的裝配過程由細胞完成、不同病毒載體具有不同表達特點。2根據病毒載體在主細胞中的存在情況分為瞬時表達病毒載體和穩定表達病毒載體。5、 人工染色體 可以容納更長的 DNA 片段，用較少的克隆就可以包含特定的基因組全部序列，從而保持了 基因組特定序列的完整性，有利于物理圖譜的制作。按照功能和用途分類1、克隆載體（又分為質粒載體、噬菌體載體、粘粒載體、人工微小染色體特征如上方 的按來源的分類）1能在宿主細胞中復制繁殖，而且最好要有較高的自主復制能力。2容易進入宿主細胞，

6、而且進入效率越高越好。3容易插入外來核酸片段，插入后不影響其進入宿主細胞和在細胞中的復制。這就要求載體DNA 上要有合適的限制性核酸內切酶位點。4容易從宿主細胞中分離純化出來， 這才便于重組操作。5有容易被識別篩選的標志，當其進入宿主細胞、或攜帶著外來的核酸序列進入宿主細胞都 能容易被辨認和分離出來。這才介于克隆操作。DNACOS2、 表達載體（包括原核表達載體和真核表達載體）1）原核表達載體：繁殖迅速、 培養簡單、 操作方便、 遺傳穩定， 基因克隆及表達系統成熟完善，全基因測序完成，被美國 FDA 批準為安全的基因工程受體生物。2歡迎下載精品文檔2)真核表達載體：基因表達調控機理比較清楚，遺

7、傳操作方便，技術成熟，成本低廉，不含特 異性病毒，不產生內毒素，安全性高。表達載體(Expression vectors)就是在克隆載體基本骨架的基礎上增加表達元件(如啟動子、RBS 終止子等)，使目的基因能夠表達的載體。3、 測序載體 測序載體包括單鏈載體、雙鏈載體，如M13 Puc 系列，PGEM 系列。測序載體一般含有一段多酶切位點區，便于外源DNA 片段的插入、重組。在插入片段的旁邊，有合適的測序引物互補序列。雙鏈 DNA 載體，可以從插入片段的兩側同時測定DNA 鏈的順序，故提高了測序效率。4、 轉化載體為了把任何一個基因或DNA 序列整合到所要的生物體基因組，把來自所要的生物體的一個基因或 DNA 序列克隆進一個環狀載體，通過同源重組整合進基因組。用同一種載體克隆外 源 DNA 序列后去轉化該生物體，通過轉化載體和整合載體之間的同源性而插入，將外源 DNA序列插入該生物體基因組。5、 穿梭載體 這類載體不僅具有細菌質粒的復制原點及選擇標記基因，還有真核生物的自主復制序列(ARS)以及選擇標記性狀，具有多克隆位點通常穿梭載體在細菌