1、實驗室生物安全工作及危險防范措施生物安全工作的核心是危險度評估。可以借助許多方法來對某一個特定的操作程序或實驗進行危險度評估,其中最重要的是專業判斷。危險度評估應當由那些對所涉及的微生物特性、設備和規程、動物模型以及防護設備和設施最為熟悉的人員來進行。實驗室主任或項目負責人應當負責確保進行充分和及時的危險度評估，同時也有責任與所在機構的安全委員會和生物安全工作人員密切合作，以確保有適當的設備和設施來進行相關的研究工作。危險度評估一旦進行,還應當考慮收集與危險程度相關的新資料以及來自科學文獻的其他相關的新信息，以便必要時對危險度評估結果進行定期檢查和修訂.進行微生物危險度評估最有用的工具之一就是

2、列出微生物的危險度等級。然而對于一個特定的微生物來講,在進行危險度評估時僅僅參考其危險度等級是遠遠不夠的，適當時還應考慮其他一些因素，包括：1、微生物的致病性和感染數量2、暴露的潛在后果3、自然感染途徑4、實驗室操作所致的其他感染途徑(非消化道途徑、空氣傳播、食入）5、微生物在環境中的穩定性6、所操作微生物的濃度和濃縮標本的容量7、適宜宿主(人或動物)的存在8、從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息9、計劃進行的實驗室操作(如超聲處理、氣溶膠化、離心等)10、可能會擴大微生物的宿主范圍或改變微生物對于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術11、當地是否能進行有效的預防或治療干預。根據危

3、險度評估過程中所明確的上述信息，可以確定所計劃開展的研究工作的生物安全水平級別,選擇合適的個體防護裝備，并結合其他安全措施制訂標準操作規范（standard operatingprocedure，SOP)，以確保在最安全的水平下來開展工作。每個實驗室都應該采用“安全手冊”或“操作手冊”，其中定義了已知的和潛在的危害,并規定了特殊的操作程序來避免或盡量減小這種危害.規范的微生物學操作技術是實驗室安全的基礎,而專門的實驗設備僅僅是一種補充，絕不能替代正確的操作規范。下面列出了一些最重要的概念。一、進入規定1、在處理危險度2 級或更高危險度級別的微生物時,在實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志

4、.2、只有經批準的人員方可進入實驗室工作區域。3、實驗室的門應保持關閉.4、兒童不應被批準或允許進入實驗室工作區域。5、進入動物房應當經過特別批準。6、與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。二、人員防護1、在實驗室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服.2、在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。3、在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區域前,都必須洗手。4、為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備.5

5、、嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室，（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛生間）。6、不得在實驗室內穿露腳趾的鞋子.7、禁止在實驗室工作區域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡.8、禁止在實驗室工作區域儲存食品和飲料.9、在實驗室內用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內。三、操作規范1、嚴禁用口吸移液管.2、嚴禁將實驗材料置于口內。嚴禁舔標簽。3、所有的技術操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。4、應限制使用皮下注射針頭和注射器.除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液,皮下注射針頭和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途.5、出現溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質時

6、,必須向實驗室主管報告。實驗室應保存這些事件或事故的書面報告.6、必須制訂關于如何處理溢出物的書面操作程序，并予以遵守執行。7、污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學或物理學方法）.根據所處理的微生物因子的危險度評估結果，可能需要準備污水處理系統.8、需要帶出實驗室的手寫文件必須保證在實驗室內沒有受到污染.四、實驗室工作區1、實驗室應保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關的物品。2、發生具有潛在危害性的材料溢出以及在每天工作結束之后，都必須清除工作臺面的污染。3、所有受到污染的材料、標本和培養物在廢棄或清潔再利用之前，必須清除污染。4、在進行包裝和運輸時必須遵循國家和或國際的相關規

7、定。5、如果窗戶可以打開，則應安裝防止節肢動物進入的紗窗。五、生物安全管理1、實驗室主任（對實驗室直接負責的人員）負責制訂和采用生物安全管理計劃以及安全或操作手冊.2、實驗室主管(向實驗室主任匯報)應當保證提供常規的實驗室安全培訓。3、要將生物安全實驗室的特殊危害告知實驗室人員，同時要求他們閱讀生物安全或操作手冊，并遵循標準的操作和規程。實驗室主管應當確保所有實驗室人員都了解這些要求。實驗室內應備有可供取閱的安全或操作手冊.4、應當制訂節肢動物和嚙齒動物的控制方案。5、如有必要,應為所有實驗室人員提供適宜的醫學評估、監測和治療,并應妥善保存相應的醫學記錄。六、實驗室的設計和設施在設計實驗室和安

8、排某些類型的實驗工作時，對于那些可能造成安全問題的情況要加以特別關注，這些情況包括：1、氣溶膠的形成2、處理大容量和或高濃度微生物3、儀器設備過度擁擠和過多4、嚙齒動物和節肢動物的侵擾5、未經允許人員進入實驗室6、工作流程：一些特殊標本和試劑的使用。七、設計特征1、必須為實驗室安全運行、清潔和維護提供足夠的空間.2、實驗室墻壁、天花板和地板應當光滑、易清潔、防滲漏并耐化學品和消毒劑的腐蝕.地板應當防滑。3、實驗臺面應是防水的，并可耐消毒劑、酸、堿、有機溶劑和中等熱度的作用。4、應保證實驗室內所有活動的照明,避免不必要的反光和閃光。5、實驗室器具應當堅固耐用,在實驗臺、生物安全柜和其他設備之間及

9、其下面要保證有足夠的空間以便進行清潔.6、應當有足夠的儲存空間來擺放隨時使用的物品，以免實驗臺和走廊內混亂。在實驗室的工作區外還應當提供另外的可長期使用的儲存間.7、應當為安全操作及儲存溶劑、放射性物質、壓縮氣體和液化氣提供足夠的空間和設施。8、在實驗室的工作區外應當有存放外衣和私人物品的設施。9、在實驗室的工作區外應當有進食、飲水和休息的場所.10、每個實驗室都應有洗手池，并最好安裝在出口處，盡可能用自來水.11、實驗室的門應有可視窗,并達到適當的防火等級，最好能自動關閉。12、二級生物安全水平時，應在靠近實驗室的位置配備高壓滅菌器或其他清除污染的工具。13、安全系統應當包括消防、應急供電、

10、應急淋浴以及洗眼設施。14、應當配備具有適當裝備并易于進入的急救區或急救室。15、在設計新的設施時,應當考慮設置機械通風系統，以使空氣向內單向流動。如果沒有機械通風系統，那么實驗室窗戶應當能夠打開，同時應安裝防蟲紗窗。16、必須為實驗室提供可靠和高質量的水.要保證實驗室水源和飲用水源的供應管道之間沒有交叉連接.應當安裝防止逆流裝置來保護公共飲水系統。17、要有可靠和充足的電力供應和應急照明,以保證人員安全離開實驗室。備用發電機對于保證重要設備的正常運轉（如培養箱、生物安全柜、冰柜等）以及動物籠具的通風都是必要的。18、要有可靠和充足的燃氣供應.供氣設施必須得到良好維護。19、實驗室和動物房偶爾

11、會成為某些人惡意破壞的目標.必須考慮物理和防火安全措施。必須使用堅固的門、紗窗以及門禁系統.適當時還應使用其他措施來加強安全保障.八、實驗室設備處理生物安全危害時，使用安全設施并結合規范的操作將有助于降低危險。本節闡述了適用于所有生物安全實驗室的相關設備的基本原則。實驗室主任應咨詢生物安全官員和安全委員會（如果有）,確保配備足量的設備,并能正確使用.選擇設備時應符合一些基本原則，即：1、在設計上應能阻止或限制操作人員與感染性物質間的接觸2、建筑材料應防水、耐腐蝕并符合結構要求3、設備裝配后應無毛刺、銳角以及易松動的部件4、設備的設計、建造與安裝應便于操作、易于維護、清潔、清除污染和進行質量檢驗

12、.應盡量避免使用玻璃及其他易碎的物品。需要詳細咨詢設備的性能和結構規格,以確保設施具備必要的安全特性。九、基本生物安全設備1、移液輔助器避免用口吸的方式移液。有不同設計的多種產品可供使用.2、生物安全柜，在以下情況使用：- 處理感染性物質；如果使用密封的安全離心杯，并在生物安全柜內裝樣、取樣，則這類材料可在開放實驗室離心- 空氣傳播感染的危險增大時 進行極有可能產生氣溶膠的操作時（包括離心、研磨、混勻、劇烈搖動、超聲破碎、打開內部壓力和周圍環境壓力不同的盛放有感染性物質的容器、動物鼻腔接種以及從動物或卵胚采集感染性組織)。3、一次性塑料接種環，也可在生物安全柜內使用電加熱接種環,以減少生成氣溶

13、膠。4、螺口蓋試管及瓶子.5、用于清除感染性材料污染的高壓滅菌器或其他適當工具.6、一次性巴斯德塑料移液管,盡量避免使用玻璃制品。7、在投入使用前,像高壓滅菌器和生物安全柜等設備必須用正確方法進行驗收.應參照生產商的說明書定期檢測。十、健康和醫學監測主管機構有責任通過實驗室主任來確保實驗室全體工作人員接受適當的健康監測.監測的目的是監控職業獲得性疾病。為達到這些目的,應進行如下工作:1、根據需要提供主動或被動免疫2、促進實驗室感染的早期檢測3、應禁止高度易感人群（如孕婦或免疫損傷人員）在高危險實驗室中工作4、提供有效的個體防護裝備和方法。十一、在一級生物安全水平操作微生物的實驗室工作人員的監測

14、指南歷史證據表明，在一級生物安全水平操作的微生物不太可能引起人類疾病或獸醫學意義的動物疾病。但理想的做法是，所有實驗室工作人員應進行上崗前的體檢,并記錄其病史.疾病和實驗室意外事故應迅速報告，所有工作人員都應意識到應用規范的實驗室操作技術的重要性。十二、在二級生物安全水平操作微生物的實驗室工作人員的監測指南1、必須有錄用前或上崗前的體檢。記錄個人病史,并進行一次有目的的職業健康評估.2、實驗室管理人員要保存工作人員的疾病和缺勤記錄.3、育齡期婦女應知道某些微生物(如風疹病毒）的職業暴露對未出生孩子的危害.保護胎兒的正確措施因婦女可能接觸的微生物而異。十三、培訓人為的失誤和不規范的操作會極大地影

15、響所采取的安全措施對實驗室人員的防護效果.因此，熟悉如何識別與控制實驗室危害的、有安全意識的工作人員,是預防實驗室感染、差錯和事故的關鍵。基于這一原因，不斷地進行安全措施方面的在職培訓是非常必要的。一個有效的安全規程首先始于實驗室管理者，管理者應確保將安全的實驗室操作及程序融合到工作人員的基本培訓中。安全措施方面的培訓是新工作人員崗前培訓的有機組成部分,應向工作人員介紹生物安全操作規范和實驗室操作指南，包括安全手冊或操作手冊。應采用諸如簽名傳閱的方法，來確保工作人員閱讀并理解了這些規程.實驗室主管在對屬下工作人員進行規范性實驗室操作技術培訓時起關鍵作用,生物安全官員可以幫助進行人員培訓并研制教

16、具和教案。人員培訓的內容應始終包括如何采用安全的方法來進行下列所有實驗室工作人員都會經常遇到的高危操作，包括:1、吸入危險（氣溶膠產物）,如使用接種環、劃線接種瓊脂平板、移液、制作涂片、打開培養物、采集血液血清標本、離心等2、食入危險，如處理標本、涂片以及培養物3、在使用注射器和針頭時刺傷皮膚的危險4、處理動物時被咬傷、抓傷5、處理血液以及其他有潛在病理學危害的材料6、感染性材料的清除污染和處理。十四、廢棄物處理廢棄物是指將要丟棄的所有物品。在實驗室內，廢棄物最終的處理方式與其污染被清除的情況是緊密相關的.對于日常用品而言，很少有污染材料需要真正清除出實驗室或銷毀.大多數的玻璃器皿、儀器以及實

17、驗服都可以重復或再使用。廢棄物處理的首要原則是所有感染性材料必須在實驗室內清除污染、高壓滅菌或焚燒.用以處理潛在感染性微生物或動物組織的所有的實驗室物品，在被丟棄前應考慮的主要問題有：1、是否已采取規定程序對這些物品進行了有效的清除污染或消毒？2、如果沒有，他們是否以規定的方式包裹，以便就地焚燒或運送到其他有焚燒設施的地方進行處理？3、丟棄已清除污染的物品時，是否會對直接參與丟棄的人員，或在設施外可能接觸到丟棄物的人員造成任何潛在的生物學或其他方面的危害？十五、清除污染高壓蒸汽滅菌是清除污染時的首選方法.需要清除污染并丟棄的物品應裝在容器中(如根據內容物是否需要進行高壓滅菌和或焚燒而采用不同顏

18、色標記的可以高壓滅菌的塑料袋）。也可采用其他可以除去和或殺滅微生物的替代方法.十六、污染性材料和廢棄物的處理和丟棄程序要對感染性物質及其包裝物進行鑒別并分別進行處理，相關工作要遵守國家和國際規定。廢棄物可以分成以下幾類:1、可重復或再使用，或按普通“家庭”廢棄物丟棄的非污染（非感染性）廢棄物2、污染（感染性）銳器皮下注射用針頭、手術刀、刀子及破碎玻璃；這些廢棄物應收集在帶蓋的不易刺破的容器內,并按感染性物質處理3、通過高壓滅菌和清洗來清除污染后重復或再使用的污染材料4、高壓滅菌后丟棄的污染材料5、直接焚燒的污染材料。銳器皮下注射針頭用過后不應再重復使用，包括不能從注射器上取下、回套針頭護套、截斷等，應將其完整地置于盛放銳器的一次性容器中。單獨使用或帶針頭使用的一次性注射器應放在盛放銳器的一次性容器內焚燒，如需要可先高壓滅菌。盛放銳器的一次性容器必須是不易刺破的，而且不能將容器裝得過滿.當達到容量的四分之三時，應將其放入“感染性廢棄物"的容器中進行焚燒,如果實驗室規程需要，可以先進行高壓滅菌處理。盛