1、植物組織中可溶性糖含量的測(cè)定一蕙酮比色法一、原理糖類在濃硫酸作用下經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糖醛，生成的糠醛或羥甲基糖醛 與蕙酮（C14H10O）脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色。該物質(zhì)在630 nm處有最大吸收，在150 g/mL范圍內(nèi)，其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。該方法的特點(diǎn)是幾乎可以測(cè)定所有的糖類（包括單糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、 淀粉、纖維素），所以用該方法測(cè)出的糖類含量是溶液中全部可溶性糖類含量。二、儀器、試劑和材料1.儀器：電子天平，電熱包溫水浴鍋，分光光度計(jì)，容量瓶，刻度吸管等2.試劑：（1）蕙酮濃硫酸試劑：1.0 g蕙酮溶丁100 mL濃H2SO4中，貯藏丁棕色瓶中

2、（當(dāng)日配置）（2）濃硫酸3.材料：草莓新鮮果實(shí)三、實(shí)驗(yàn)步驟1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1、1 1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：將分析純蔗糖在80 C下烘干至包重，精確稱取1.000g。加 蒸僻水溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用蒸僻水定容至刻度。1、2 100ug/mL蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：精確吸取1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1mL至100mL容量瓶中， 加水至刻度。取10mL刻度試管11支，從010分別編號(hào)，按下表一次加入蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 和蒸僻水。管號(hào)01、23、45、67、89、10100ug/mL庶糖標(biāo)準(zhǔn)液（mL）00.20.40.60.81.0蒸僻水（mL）1.00.80.60.40.20庶糖濃度（啟/mL）0204060801001、3按

3、順序依次向試管中加入5mL B酮濃硫酸試劑，充分振蕩，立即將試管放入96C沸水浴中，每管均保溫3min,取出后流水冷卻后取出至室溫下放置15min,以空白 作參比，在630 nm處測(cè)其吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，以糖濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。2、 可溶性糖提取 稱取具有代表性樣品的可食部分100 g,放人組織搗碎機(jī)中，迅 速搗成勻漿（或研磨），稱取0.50 g漿狀樣品，共三份。分另U放入3支試管中，加入10 mL蒸僻水，塑料薄膜封口，丁沸水中提取30min（提取2次），提取液過濾到50 mL容量瓶中，用蒸僻水反復(fù)洗滌試管及殘?jiān)⒍ㄈ葜量潭取Ｎ∩鲜?.0mL提取液至10m

4、L容量瓶中，用蒸僻水定容。3、顯色測(cè)定吸取稀釋后的樣品提取液1.0mL至10mL刻度試管中，重復(fù)三次，按 順序依次向試管中加入5mL蕙酮濃硫酸試劑，充分振蕩，立即將試管放入96 C沸水浴中，每管均保溫3min,取出后流水冷卻后在室溫下放置15min,在630 nm處測(cè)其吸光 度。四、結(jié)果計(jì)算C XV總X D樣品含糖量（%） = -% x 100W X V測(cè)x 106其中：C在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的糖含量（四），V總提取液總體積（mL）,V測(cè) 測(cè)定時(shí)取用體積（mL）,D稀釋倍數(shù)，W樣品重量（g）,106樣品重量單位由g換算成 四的倍數(shù)參照李合生 植物生理生化試驗(yàn)原理和技術(shù)植物組織中可溶性糖測(cè)定流程取蕙

5、酮1g,溶丁50mL乙酸乙酯中，貯藏丁棕色瓶中（蕙酮乙酸乙酯試劑）取1.000g蔗糖加蒸僻水溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，加0.5mL濃硫酸，定容（1 %蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液）取上述1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1mL至100mL容量瓶中，定容（100ug/mL蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液）取10mL刻度試管11支，從010分別編號(hào)，按下表一次加入蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液和蒸僻水管號(hào)01、23、45、67、89、10100ug/mL庶糖標(biāo)準(zhǔn)液（mL）00.20.40.60.81.0蒸僻水（mL）2.01.81.61.41.21.0庶糖含量（啟）020406080100按順序依次向試管中加入0.5mL蕙酮乙酸乙酯試劑和5mL濃硫酸，充分振蕩，立即 將試管放入沸水浴中，每管均保溫1 min,取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630 nm處測(cè)其吸光度，以糖含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn) 線性方程。稱草莓果實(shí)100 g,制成勻漿，稱取0.100.30 g漿狀樣品，共三份。分別放入3支 試管中，加入510 mL蒸僻水，塑料薄膜封口，丁沸水中提取30min（提取2次），提取 液過濾到25mL容量瓶中，用蒸僻水反復(fù)洗滌試管及殘?jiān)⒍ㄈ葜量潭取Ｎ悠诽崛∫?.5mL至10mL刻度試管中，重復(fù)三次，加蒸僻水1