1、土壤中含淀粉酶細(xì)菌的分離摘要：本實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)基的配制，常用器皿的準(zhǔn)備及無(wú)菌水的配制為從土壤 中分離出產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌做了準(zhǔn)備。又通過加熱和不加熱分組來(lái)觀察兩組相同 的分密度梯次的細(xì)菌的生長(zhǎng)情況和菌落數(shù)。還利用含淀粉酶細(xì)菌能夠分泌淀 粉酶，淀粉酶能夠分解淀粉，淀粉能與碘試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，含淀粉酶細(xì)菌 菌落生長(zhǎng)的地方不能放生顯色反應(yīng)而呈現(xiàn)透明圈，通過統(tǒng)計(jì)透明圈數(shù)來(lái)分析 培養(yǎng)基濃度和溫度對(duì)土壤中細(xì)菌菌落的形成的影響及土壤中有淀粉酶活性細(xì) 菌占總細(xì)菌的比例。關(guān)鍵詞：培養(yǎng)基 土壤微生物 菌種分離 含淀粉酶細(xì)菌1、 前 言土壤中生活著許許多多的不同種類的、數(shù)量龐大的微生物，是微生物多 樣性的重要場(chǎng)所，它們對(duì)自

2、然界物質(zhì)的轉(zhuǎn)化和循環(huán)起著極為重要的作用，對(duì) 農(nóng)業(yè)和環(huán)境保護(hù)有著不可忽視的影響。早在十九世紀(jì)中期，農(nóng)業(yè)化學(xué)和細(xì)菌學(xué)的形成和發(fā)展為研究土壤中物質(zhì) 轉(zhuǎn)化的微生物學(xué)過程開辟了道路。二十世紀(jì)五十年代，人們對(duì)土壤只能夠諸 營(yíng)養(yǎng)元素循環(huán)的各個(gè)環(huán)節(jié)的微生物學(xué)過程進(jìn)行了深入的研究，論證了土壤微 生物對(duì)增強(qiáng)土壤肥力的作用。新中國(guó)成立后，國(guó)家開展了對(duì)土壤微生物的教 學(xué)和科學(xué)研究，文革后國(guó)家給予力支持，二十年來(lái)的奮力研究取得驕人的成 績(jī)。現(xiàn)如今，生物技術(shù)迅猛發(fā)展，一些僅在實(shí)驗(yàn)室里制備用于研究的細(xì)菌已 經(jīng)可以工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，可以利用該生物的有機(jī)體或其產(chǎn)物，將物料轉(zhuǎn)化 為商業(yè)性產(chǎn)品，在食品、輕工、醫(yī)藥及農(nóng)林等方面廣泛應(yīng)

3、用。本實(shí)驗(yàn)是從土壤中篩選可以生產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌為目的，利用物理和化學(xué)方 法探究稀釋度對(duì)細(xì)菌菌落形成的影響，以及用不同的處理方式反映出高溫加 熱對(duì)含有高活性淀粉酶細(xì)菌的比例產(chǎn)生影響。2、 材 料 與 方 法2.1 材 料2.1.1 培 養(yǎng) 基 配 制 的 材 料 與 試 劑材 料 ： 土 豆 200g ， 葡 萄 糖 20g ， 瓊 脂 粉 2% 6g ， 淀 粉 1% 3g ， 廢 報(bào) 紙，棉花，紗布，棉繩試劑：無(wú)菌水2.1.2 玻 璃 器 皿無(wú) 菌 培 養(yǎng) 皿 ， 無(wú) 菌 吸 管 ， 試 管 十 支 ， 移 液 管 兩 支 2ml ， 圓 底 培 養(yǎng) 皿 十 個(gè) ，玻 璃 珠 20 顆 ， 三

4、角 瓶 50ml ， 具 塞 三 角 瓶2.1.3 樣 品新鮮土壤2.2 方法2.2.1 PDA溶粉的培養(yǎng)基制備把 土 豆 削 皮 ， 切 成邊 長(zhǎng) 1-2cm ，稱 取60g倒 入大三角 瓶中，加600ml水并在 電 爐 上 煮 沸 20min， 邊 加 熱 邊 振蕩 以免 燒糊 ，趁熱在 紗布上過濾 ， 在濾液中添加6g葡萄糖，再加入3g1%的淀粉和6g2%的瓊脂粉，加熱熔化，定容至 250ml ，然 后 用 制 作 好 的 棉 塞 塞 住 瓶 口 ，再 用 舊 報(bào) 紙 包 一 層 包 扎 好 ，在 滅 菌 后 把 培 養(yǎng) 基 放 入 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng) 24 小 時(shí) 。2.2.2 細(xì) 菌

5、 分 離 的 方 法 在 具 塞 三 角 瓶 中 加 入 90ml的 水 ， 再 加 入 20 顆玻 璃 珠 ，并用報(bào)紙和棉繩 包 扎 好 ， 滅 菌 。 取 十 支 試 管 ， 每支 試 管 中 用 移 液 管加 入 9ml的水，塞上棉塞，把試管用棉繩一起綁起來(lái)，再用報(bào)紙包起來(lái)包扎好，滅菌。然后將試管 分為兩組，并標(biāo)注適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽，把圓底培養(yǎng)皿滅菌后也分成相應(yīng)的兩組。 稱 取 10g 土 樣 ，加 入 到 含 有 90ml 無(wú) 菌 水 的 三 角 瓶 中 ，振 蕩 10min ，后靜置5min， 用吸管 吸上 層懸液1ml ，加入到其中一組中的試管，反復(fù)吸放三次后取該試管中溶液1ml加入 到另

6、 一試管中，依次進(jìn)行五次，配制五支濃度分別為10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。用另一移液管取1ml土壤上層懸液加入到另一組試管中，按上述同樣方法分別配置五種濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液，并根據(jù) 稀釋度在兩組試管編號(hào)， 將其 中一 組5支試管標(biāo)記放在瓷缸中，用沸騰的水浴 中 加 熱 5min 。 另 一 組 不 處 理 。2.2.3培養(yǎng)方法用對(duì)應(yīng)的移液管按照濃度順序從低到高分別各取1ml菌液加入到相應(yīng)的 圓底培養(yǎng)皿中，然后將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，邊到邊晃勻，精置冷卻凝固。 另一組用同樣方法處理。待均凝固后，倒置平板于300C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)一到 兩天后觀察結(jié)果。2.2 . 4 含淀粉酶細(xì)菌的鑒別

7、方法將培養(yǎng)好的細(xì)菌按組分放置，向一培養(yǎng)基中倒入適量的碘液，待反應(yīng)一 段時(shí)間后，吧該培養(yǎng)基中的碘液倒入到改組的下一個(gè)培養(yǎng)基中，以此類推， 如碘液不夠，可適量加入。均反映后，觀察培養(yǎng)皿中有沒有透明圈，有的即 是含淀粉酶細(xì)菌的菌落。3、結(jié)果與討論3.1 稀釋度對(duì)土壤細(xì)菌菌落形成的影響用PDA培養(yǎng)基分別培養(yǎng)不同稀釋度的土壤的菌懸液，結(jié)果表明如下圖， 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6稀釋度中形成的菌落分別為（未加熱組）283、116、 27、42、18,（加熱組）102、53、16、9.其相差的倍數(shù)分別為（未加熱組） 2.04、1.70、1.55、1.38 ,（力口熱組）1.92、3.3

8、1、0.70、2、56.即不同菌懸 液稀釋度之間沒有嚴(yán)格的比例關(guān)系，其原因可能是隨著菌懸液稀釋度逐漸增 大，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗，代謝產(chǎn)物的積累，土壤細(xì)菌群體出現(xiàn)競(jìng)爭(zhēng)抑制，細(xì)菌的 死亡率和生長(zhǎng)率不規(guī)律。稀釋度（X 10-6）3.2 土壤中用淀粉酶活性細(xì)菌的比例為了 了解土壤中含淀粉酶菌株的比例，選擇了 PDA培養(yǎng)基由于淀粉培養(yǎng) 基中只有淀粉為唯一的碳源，因此，在該培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)良好的細(xì)菌一般均 為具有淀粉酶活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖所示，按照10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 稀釋度中菌落數(shù)計(jì)算，所采集土壤樣品中具有淀粉酶活性的細(xì)菌比例在25%表1土壤中具有淀粉酶活性的細(xì)菌-10-2c1610

9、-3c10/ c-4c10510-5c710-6c03.3 菌懸液加熱處理對(duì)淀粉酶活性細(xì)菌比例的影響將菌懸液進(jìn)行加熱100 0c處理，然后按常規(guī)方法作稀釋和培養(yǎng)，結(jié)果表明 如下圖，加熱可以顯著降低菌懸液中的細(xì)菌數(shù)量，但具有淀粉酶活性的細(xì)菌 比例由 提高到 ，加熱處理可以顯著提高菌懸液中淀粉酶活性細(xì)菌的 比例，說(shuō)明淀粉酶活性細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度比其他細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度高， 過高的溫度抑制了其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。處理方式例比菌細(xì)酶粉淀含圖2菌懸液加熱處理對(duì)含淀粉酶細(xì)菌比例的 影響3.4 淀粉酶酶活性細(xì)菌的獲得與初步篩選將在淀粉培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落分別進(jìn)行下一步的劃線分離，挑取單 個(gè) 生 長(zhǎng) 的 菌 落

10、接 種到 試 管 中 保 持 ，然 后 在 含 淀粉 培 養(yǎng) 基 的 培 養(yǎng) 皿 中加 入 碘 液 ， 觀察透明圈的大小，初步選定透明圈較大的細(xì)菌菌落為淀粉酶活性較高的菌 株。4、 結(jié) 論土壤中存在產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌，然而，土壤中存在的產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌在整 個(gè)土壤細(xì)菌中所占的比例是較小的，土壤中絕大多數(shù)的細(xì)菌是不能產(chǎn)生淀粉 酶的。高溫對(duì)于土壤中的不耐熱的細(xì)菌具好的消滅效果，卻對(duì)產(chǎn)淀粉酶的細(xì) 菌沒有影響。所以，可以通過高溫處理來(lái)提高分離出來(lái)的產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌的純 度。由于受實(shí)驗(yàn)設(shè)備及實(shí)驗(yàn)操作等方面的影響，經(jīng)初步篩選出的含淀粉酶細(xì) 菌中仍混有其它雜菌。所以，我們應(yīng)該對(duì)初步篩選出的細(xì)菌再次進(jìn)行篩選， 篩選出純度較高的含淀粉內(nèi)細(xì)菌，并用顯微鏡觀察其菌落的特征，對(duì)照辨別 其 所 屬 菌 種 。針 對(duì) 該 菌 種 的 特 性 ，對(duì) 其 淀 粉 酶 的 活 性 、生 長(zhǎng) 周 期 、最 適 溫 度 、 最 適 PH 、耐 酸 性 、耐 堿 性 、發(fā) 酵 條 件 等 一 系 列 問 題 進(jìn) 行 深 入 的 研 究 ，探 究 其 在工業(yè)生產(chǎn)以及其他領(lǐng)域的中的應(yīng)用。參考文獻(xiàn)1. 沈 萍微 生 物 學(xué) （ 第 二 版 ） 高 等 教 育 出 版 社 .20062. 陳 云 中 淀 粉 酶 的 性 質(zhì) 和