1、精品文檔你我共享硒加抗癌藥對人肝癌細(xì)胞生長的影響劉耳吳燕張寶初（江蘇省啟東肝癌防治研究所啟東226200）摘要： 研究亞硒酸鈉（Na2SeO3）和絲裂霉素（ MMC ）、鹽酸阿霉素（ ADM ）對 QGY 7703人肝癌細(xì)胞生長的影響結(jié)果表明：終濃度為 1g/ml 的 Na2SeO3 可明顯抑制肝癌細(xì)胞的生長增殖、減少細(xì)胞對甲胎蛋白（ AFP ）的分泌； 1g/ml 的 Na2SeO3 與 1.5g/ml 的 MMC 或15g/ml 的 ADM 聯(lián)合應(yīng)用對肝癌細(xì)胞生長增殖的抑制作用，不論是細(xì)胞生長的抑制率、還是肝癌細(xì)胞分泌 AFP 的抑制率，均明顯高于各自的單獨(dú)應(yīng)用效果，差異有顯著性意義（P&

2、lt;0.05 ）并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，抑制程度持續(xù)增強(qiáng)。提示 Na2SeO3 與抗癌藥聯(lián)合應(yīng)用，具有良好的協(xié)同或相加抑癌、抗癌效應(yīng)對臨床應(yīng)用有一定的實(shí)際意義關(guān)鍵詞 亞硒酸鈉 絲裂霉素 鹽酸阿霉素 人肝癌細(xì)胞效應(yīng)硒是一種非金屬物質(zhì)，是人類不可缺少而又不可過量的必需微量元素，有關(guān)硒與腫瘤的研究報(bào)道頗多，多數(shù)認(rèn)為機(jī)體內(nèi)硒水平與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)、硒有預(yù)防腫瘤的作用1-4 。本文則研究亞硒酸鈉（簡稱Se）加抗癌藥物絲裂霉素（MMC ）、鹽酸阿霉素（ ADM ）對 QGY7703 人肝癌細(xì)胞株生長的影響，結(jié)果證實(shí)，Se 加抗癌藥對抑制肝癌細(xì)胞的生長具有協(xié)同或相加效應(yīng)。材料和方法1 材料人肝癌細(xì)胞株 QG

3、Y 77O3 由王氏等建株。 RPMI 一 1640 培養(yǎng)基為美國GIBCO 產(chǎn)品。新生牛血清為杭州市四季青生物工程材料研究所生產(chǎn)。亞硒酸鈉為上海試劑一廠生產(chǎn)。 MMC為日本協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品。ADM為日本明治制藥株式會(huì)社與汕頭魚它濱制藥廠生產(chǎn)。2 方法2.1QGY 一 7703 人肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)：取對數(shù)生長期的QGY 一 7703 人肝癌細(xì)胞， 以含 20新生牛血清的RPMI 一 1640 培養(yǎng)液配制成20000 ml 的單細(xì)胞懸液，按lml 孔量接種于24 孔培養(yǎng)板置5 CO。孵箱中 37 恒溫培養(yǎng)。2 2 分組：本實(shí)驗(yàn)分為加計(jì) 6 組。實(shí)驗(yàn)組中g(shù) ml 從見附表。Se 組、MMC

4、組、SeMMC 組、 DM 組、Se ADM 組和對照組 共 Se 的最終濃度為 g ml ，MMC 含量為 1.5g ml ， ADM 含量為 15腹有詩書氣自華精品文檔你我共享附表實(shí)驗(yàn)分組藥物組別Na2SeO3MMCADM g ml g ml g ml加 Se 組MMC 組1.5Se+MMC 組1.5ADM 組15Se+MMC 組15對照組3 觀在指際3 l 細(xì)胞生長抑制率（IR）：各組細(xì)胞均培養(yǎng)天， 每天每組分別取孔細(xì)胞， 以血球計(jì)數(shù)板計(jì)算出細(xì)胞總數(shù)， 以臺盼染色計(jì)數(shù)拒染細(xì)胞并以 3 孔的平均數(shù)值繪制出實(shí)驗(yàn)刎胞生長抑制率曲線。抑制率對照組活細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組活細(xì)胞數(shù)×100%對照組活

5、細(xì)胞數(shù)3.2 甲種胎兒蛋白（）檢測將各組細(xì)胞培養(yǎng)天，每天每組分別收集孔細(xì)胞培養(yǎng)上清液，凍存于 20冰箱；應(yīng)用北京原子能研究所生產(chǎn)的放射免疫試劑盒統(tǒng)一測定培養(yǎng)上清液中的含量，并以孔的平均值計(jì)算出細(xì)胞分泌的抑制率（與對照組比較）。結(jié)果 各單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)組對QGY 7703 肝癌細(xì)胞生長的影響在培養(yǎng)液中分別加入終濃度g ml 的 Se、 1.5gml 的 MMC或 15g ml 的ADM ，結(jié)果表明各實(shí)驗(yàn)組均顯著抑制人肝癌細(xì)胞的生長，活細(xì)胞數(shù)顯著低于空白對照組，并且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長， 對癌細(xì)胞生長的抑制程度持續(xù)增強(qiáng)。與對照組相比， 各組抑制率（第 3 天時(shí)加硒組為59， MMC 組為 82， ADM 組

6、為 91）均有顯著性差異（P<0.05）2Se 和抗癌藥合作對QGY 7703 人肝癌細(xì)胞生長的影響結(jié)果表明，用Se 或 MMC 、 ADM 的地處理的人肝癌細(xì)胞生長都受到明顯抑制，但在Se和抗癌藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，對物細(xì)胞生長的抑制程度均顯著高于同等劑量的相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組，SeADM 組抑制率為 89， Se ADM 組達(dá) 100，差異有顯著性意義（ P<0.05）。顯示了 Se 和抗癌藥物的協(xié)同抗癌效應(yīng)。3 不同實(shí)驗(yàn)組對 QGY 一 7703 人肝癌細(xì)胞分泌 AFP 的影響我們測定了ADM 實(shí)驗(yàn)組與加硒組、對照組連續(xù)3 天的 AFP 分泌量，可見各實(shí)驗(yàn)組AFP分泌量均有所抑制，并隨著培養(yǎng)時(shí)

7、間的延長肝癌細(xì)胞分泌AFP 的能力隨之減弱，第3 天時(shí)加 Se 組對肝癌細(xì)胞分泌 AFP 的抑制率為 31， ADM 組為 42， Se ADM 組的抑制作用最強(qiáng)，抑制率達(dá) 71。論討近年來，硒防癌、抗癌作用及其機(jī)制這一領(lǐng)域的研究十分活躍有報(bào)道Se 可作為藥物用于治療腫瘤，但實(shí)驗(yàn)證據(jù)尚欠缺乏。本實(shí)驗(yàn)表明，終濃度為g ml 的 Se 劑量單獨(dú)腹有詩書氣自華精品文檔你我共享使用不僅可明顯抑制體外培養(yǎng)的QGY 一 7703人肝癌細(xì)胞的生長增殖，而且可抑制肝癌細(xì)胞分泌 AFP（抑制率達(dá) 31）。AFP 是公認(rèn)的細(xì)胞去分化的招標(biāo)，AFP 減少，反映 Na2SeO3能誘導(dǎo) QGY 7703 人肝癌細(xì)胞重新

8、分化，使其向著正常方向逆轉(zhuǎn)，這些都使Se 的抗癌作用又一次得到證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)還表明，1.5g ml 劑量的 MMC與 15g ml 劑量的 ADM均為人體血漿高峰值所達(dá)到的濃度，此濃度對 QGY 7703 人肝臟細(xì)胞均有強(qiáng)烈的殺滅作用，而 Se 與 MMC 或與聯(lián)合應(yīng)用對QGY 一 7703 人肝癌細(xì)胞的抑制作用則不論是細(xì)胞生長抑制學(xué)、還是 AFP 分泌量的減少，均明顯高于它們單獨(dú)使用的效果，且Se ADM組對肝癌細(xì)胞分泌 AFP 的仰制率第 3 天達(dá) 71，相當(dāng)于 Se 與 ADM兩者單獨(dú)使用抑制作用的加和顯示了 Se 加抗癌藥物具有良好的協(xié)同抑癌、抗癌效應(yīng)， 也提示相同劑量的抗癌藥物，加用

9、Se制劑可增強(qiáng)整體抑癌、抗癌效果，有助于患者的治療。文獻(xiàn)報(bào)道， Se 抑癌抗癌的機(jī)理為：通過抑制環(huán)磷腺苷（CAMP ）磷酸二酯酶活性的方法，減少與抑制癌細(xì)胞 DNA 、 RNA 和蛋白質(zhì)的合成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖；阻斷癌細(xì)胞的能量供應(yīng)途徑。 達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用；或抑制與減少致癌物的誘變作用，并通過谷胱甘肽過氧化酶（ GSH PX ）的抗氧化作用，保護(hù)細(xì)胞完整性消除自由基加快脂質(zhì)過氧化物分解，從而防癌、抗癌 。MMC 與 ADM 均為抗腫瘤抗生素類藥物，MMC 的藥理作用為： 可使細(xì)胞的 DNA 解聚，并能與癌細(xì)胞DNA 結(jié)合使其分解， 同時(shí)阻礙 DNA 復(fù)制，從而抑制腫瘤細(xì)胞分裂，

10、 。ADM 的藥理作用為： ADM 分子嵌入細(xì)胞核酸， 抑制 DNA和 RNA 的合成 Se 和 MMC 、A M 仰制止細(xì)胞生長增值強(qiáng)了它們的抑癌、抗癌功效，使抑制癌細(xì)胞生長增殖的能力起到了協(xié)同或加和作用。以往研究表明，Se 與 MMC聯(lián)合應(yīng)用因增強(qiáng)了抗癌能力， 進(jìn)而達(dá)到減少抗癌藥物劑量、降低藥物毒副作用對人體的損害等良好作用 。文獻(xiàn)又報(bào)道， e 還能拮抗或降低抗癌藥的毒性，并可作為免疫系統(tǒng)的非特異刺激功能， 有助于機(jī)體自身的抗癌能力 。上述均提示適量硒制劑與抗癌藥物同時(shí)應(yīng)用，具有提高機(jī)體免疫力、 減少藥物劑量、 降低藥物毒副作用、抑癌效果好等優(yōu)點(diǎn)，適于患者長期治療，對臨床應(yīng)用有一定的實(shí)際意

11、義。參考文獻(xiàn)1 俞魯誼，吳德鉅，硒與化學(xué)預(yù)防，實(shí)用癌癥雜志，癌癥雜志，1990， 5（）： 2112 秦鎖富，查錫良，陳惠黎，亞硒酸鈉對人肝癌細(xì)胞株甲胎蛋白，纖維連接蛋白用細(xì)胞膜糖鏈的影響 .腫瘤。 1991， 11（ 3）：1333 任金榮，王淑琴，劉巍。硒制劑對化療患者免疫功能的影響。河北醫(yī)藥，1991； 13（ 4）：1564安 捷，陳泉光，高福正，等。亞硒酸鈉對MNNG 誘導(dǎo)小兒包皮成纖維細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷的影響。中華腫瘤雜志，1988 10（3）： 1805徐庚達(dá)周順泉，高 敏，等。人體腫瘤體外藥物敏感性預(yù)測及其應(yīng)用。腫瘤，1992,12(4):1756 Szbalsk W et Pr

12、oc Natl Acad Sci USA, 1963 50： 3557 周自水，王世祥主編。新編常用藥物手冊。第2 版。北京：金盾出版社， 1992 3118劉 耳，朱忠斌，吳 燕。亞硒酸鈉和絲裂霉素抑制人肝癌細(xì)胞生長的協(xié)同效應(yīng)。天津送藥， 199321（ l ）： 6789 王 強(qiáng)，徐輝碧，周井炎。微量元素硒拮抗順鉑毒性機(jī)理的研究。微量元素與健康研究，1994,11(4):11出師表腹有詩書氣自華精品文檔你我共享兩漢：諸葛亮先帝創(chuàng)業(yè)未半而中道崩殂， 今天下三分， 益州疲弊， 此誠危急存亡之秋也。然侍衛(wèi)之臣不懈于內(nèi)，忠志之士忘身于外者，蓋追先帝之殊遇，欲報(bào)之于陛下也。誠宜開張圣聽，以光先帝遺德

13、，恢弘志士之氣，不宜妄自菲薄，引喻失義，以塞忠諫之路也。宮中府中，俱為一體；陟罰臧否，不宜異同。若有作奸犯科及為忠善者，宜付有司論其刑賞，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使內(nèi)外異法也。侍中、侍郎郭攸之、費(fèi)祎、董允等，此皆良實(shí)，志慮忠純，是以先帝簡拔以遺陛下：愚以為宮中之事，事無大小，悉以咨之，然后施行，必能裨補(bǔ)闕漏，有所廣益。將軍向?qū)櫍孕惺缇瑫詴耻娛拢囉糜谖羧眨鹊鄯Q之曰“能 ”，是以眾議舉寵為督：愚以為營中之事，悉以咨之，必能使行陣和睦，優(yōu)劣得所。親賢臣， 遠(yuǎn)小人， 此先漢所以興隆也； 親小人， 遠(yuǎn)賢臣， 此后漢所以傾頹也。 先帝在時(shí)，每與臣論此事， 未嘗不嘆息痛恨于桓、 靈也。 侍中、尚書、 長史、 參軍，此悉貞良死節(jié)之臣，愿陛下親之、信之，則漢室之隆，可計(jì)日而待也。臣本布衣，躬耕于南陽，茍全性命于亂世，不求聞達(dá)于諸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顧臣于草廬之中，咨臣以當(dāng)世之事，由是感激，遂許先帝以驅(qū)馳。后值傾覆，受任于敗軍之際，奉命于危難之間，爾來二十有一年矣。先帝知臣謹(jǐn)慎，故臨崩寄臣以大事也。受命以來，夙夜憂嘆