1、會計學1病毒致瘤因素及其致瘤機理病毒致瘤因素及其致瘤機理 第1頁/共56頁第2頁/共56頁第3頁/共56頁雞肉瘤濾液雞肉瘤濾液 注射到小雞注射到小雞小雞得肉瘤小雞得肉瘤提取病毒，電鏡觀察提取病毒，電鏡觀察1966年得諾貝爾獎！年得諾貝爾獎！第4頁/共56頁第5頁/共56頁第6頁/共56頁 衣殼核心核心殼粒被膜第7頁/共56頁DNADNA病毒（無被膜）病毒（無被膜） 噬菌體噬菌體第8頁/共56頁病毒的形狀和病毒的形狀和大小大小第9頁/共56頁乙型病毒性肝炎病毒基因圖乙型病毒性肝炎病毒基因圖Centi meterMilliMicronano第10頁/共56頁第11頁/共56頁第12頁/共56頁病毒

2、的復制周期（病毒的復制周期（Replication CycleReplication Cycle）吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配釋放吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配釋放第13頁/共56頁吸附吸附HIV-CD4HIV-CD4EBV-CR-2 EBV-CR-2 鼻病毒鼻病毒ICAM-1ICAM-1第14頁/共56頁病毒吸附病毒吸附電鏡圖電鏡圖第15頁/共56頁穿入：三種方式穿入：三種方式 融合（融合（FusionFusion）胞飲（胞飲（ViropexisViropexis） 直接進入直接進入脫殼：脫殼：第16頁/共56頁致瘤性致瘤性DNADNA病毒感染病毒感染增殖性感染增殖性感染 非增殖性感染

3、非增殖性感染細胞病變細胞病變 細胞轉化細胞轉化病毒抗原病毒抗原腫瘤抗原腫瘤抗原病毒病毒病毒病毒DNADNA腫瘤抗原腫瘤抗原病毒繁殖病毒繁殖無病毒繁殖無病毒繁殖細胞死亡細胞死亡細胞惡性轉化細胞惡性轉化腫瘤細胞腫瘤細胞第17頁/共56頁DNADNA病毒復制的主要步驟病毒復制的主要步驟第18頁/共56頁第19頁/共56頁細胞分化細胞分化第20頁/共56頁 第21頁/共56頁第22頁/共56頁第23頁/共56頁第24頁/共56頁 puro SV GFPpSV40 polyA LMP1 pSV40 pCMV HSV SV polyA polyA PAT-GFP-LMP1結構示意圖結構示意圖Paterso

4、n Institute for Cancer Research, Christie CRC Research Center, Manchester, UK第25頁/共56頁CNE1電轉染電轉染puromycinpuromycin堿裂解法、堿裂解法、PG8000PG8000、EcoREcoR熒光顯微鏡熒光顯微鏡( (GFP)GFP)流式細胞儀流式細胞儀( (GFP)GFP)免疫組化免疫組化( (CS1-4)CS1-4)Western blot(S12)Western blot(S12)CNE1 CNE1G CNE1GLPAT-GFP-LMP1PAT-GFP第26頁/共56頁細胞增殖實驗細胞增殖實

5、驗細胞周期細胞周期體內倍增時間、生長率體內倍增時間、生長率平板克隆形成率平板克隆形成率裸鼠體內成瘤率裸鼠體內成瘤率裸鼠移植瘤潛伏裸鼠移植瘤潛伏期期角蛋白表達角蛋白表達裸鼠移植瘤轉移率裸鼠移植瘤轉移率流式細胞儀流式細胞儀PIPI、Hoechst3325Hoechst3325 雙雙熒光染色熒光染色DNADNA片斷分析片斷分析免疫組化免疫組化Western blotWestern blot平板克隆平板克隆形成形成試驗試驗轉移轉移能力能力增殖增殖能力能力惡性惡性程度程度凋亡凋亡 放射放射敏感性敏感性CNE1 CNE1G CNE1GL第27頁/共56頁原發灶侵襲正常組織轉移瘤MMPsMMP-2MMP-9

6、降解細胞外基質基底膜立題依據第28頁/共56頁臨床病理部分：技術路線慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻咽癌頸淋巴結轉移灶（24例）LMP1LMP1MMP-2MMP-2MMP-MMP-9 9免疫組化法第29頁/共56頁結果臨床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positive rate %020406080100鼻咽炎 鼻咽癌 轉 移灶 轉 移 灶臨床標本免疫組化結果第30頁/共56頁LMP1在NPC及NPC轉移灶組織中的表達情況：第31頁/共56頁MMP-2、MMP-9在NPC及NPC轉移灶中的表達第32頁/共56頁實驗病理部分：技術路線CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1

7、CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1-GL細胞亞克隆篩選CNE1CNE1CNE2ZCNE2ZCNE1GCNE1GL LMMP-2MMP-2MMP-9MMP-9免疫組化法Western-BlotCNE1CNE1CNE1GCNE1GL L基底膜粘附實驗細胞運動實驗重組基底膜侵襲實驗粘附能力運動能力侵襲能力第33頁/共56頁實驗病理部分：結果CNE1、CNE2Z和CNE1GL細胞

8、MMP-2、MMP-9表達情況（98.2%）（1.8%）（92.6%）（7.4%）491/5009/500463/50037/500CNE1-GL（47.6%）（52.4%）（29.6%）（70.4%）238/500262/500148/500352/500CNE2Z（30.2%）（69.8%）（15.5%）（84.5%）151/500349/50077/500423/500CNE1 陽性陽性 強陽性強陽性強陽性強陽性陽性陽性MMP-2 MMP-9細胞系細胞系MMP-2MMP-9High positive rate %020406080100CNE1 CNE2Z CNE1GL 第34頁/共56

9、頁實驗病理部分：結果MMP-2和MMP-9在三組細胞中的表達（Western-Blot結果）：第35頁/共56頁實驗病理部分：結果CNE1和CNE1-GL細胞與基底膜成分粘附實驗OD值細胞系細胞系 MeanS.D. CNE1 0.9519 0.068 CNE1-GL 1.2508 0.0711groupsCNE1CNE1-GL Mean OD value0.051.001.251.50第36頁/共56頁實驗病理部分：結果CNE1和CNE1-GL細胞運動實驗結果細胞系例數MeanMeanS.D.S.D.CNE1CNE1CNE1-GLCNE1-GL3 33 3123.667123

10、.6675.5085.50855.66755.6675.0445.044方差分析：兩組比較方差分析：兩組比較P P0.0010.001CNE1和CNE1-GL細胞侵襲實驗結果細胞系例數MeanMeanS.D.S.D.CNE1CNE1CNE1-GLCNE1-GL3 33 3339.00339.0035.837635.8376157.67157.6723.180523.1805方差分析：兩組比較方差分析：兩組比較P P0.010.01Invasion Assay Migration Assay0123cells number050100150200250300350400CNE1CNE1-GL第3

11、7頁/共56頁CNE1細胞運動實驗結果（HEHE染色染色200200）CNE1-GL細胞運動實驗結果（HEHE染色染色200200）第38頁/共56頁CNE1細胞侵襲實驗結果（HEHE染色染色200200）CNE1-GL細胞侵襲實驗結果（HEHE染色染色200200）第39頁/共56頁第40頁/共56頁第41頁/共56頁第42頁/共56頁外源性致瘤病毒的復制：外源性致瘤病毒的復制：V-RNA逆轉錄酶ss-V-cDNAds-V-DNA聚合酶V-DNAV-mRNAV-RNA+protein 第43頁/共56頁 第44頁/共56頁第45頁/共56頁第46頁/共56頁第47頁/共56頁第48頁/共56

12、頁（四）致癌機制（四）致癌機制第49頁/共56頁獲得性環境因素獲得性環境因素（化學、物理、病毒）體細胞體細胞基因組基因組突變突變遺傳性突變遺傳性突變激活促進生長的激活促進生長的癌基因癌基因滅活腫瘤抑制滅活腫瘤抑制基因基因癌基因產物的表達癌基因產物的表達抑癌基因產物的喪失抑癌基因產物的喪失惡性腫瘤惡性腫瘤第50頁/共56頁轉化蛋白致瘤性致瘤性DNADNA病毒轉化細胞的機理病毒轉化細胞的機理轉化性V-mRNA病毒核漿第51頁/共56頁第52頁/共56頁U3 R U5U3 R U5R U5R U5細胞細胞DNA LTR gag-DNA LTR gag-polpol-env env LTR LTR 細胞原癌基因細胞原癌基因 正常病毒DNA含有病毒的癌基因產物LTR: LTR: 前病毒末端重復順序前病毒末端重復順序U5-: