1、酵母菌分批發(fā)酵試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)酵母菌的發(fā)酵方法及其發(fā)酵過程的優(yōu)化控制技術(shù)；2. 學(xué)習(xí)和掌握分批發(fā)酵一般過程和操作規(guī)程。二、實(shí)驗(yàn)原理釀酒酵母是一種食品級(jí)的微生物，人類從幾千年前就開始利用它了，像夏禹 吋期就有儀狄作酒的記載。干酵母蛋白質(zhì)含量高達(dá)45%,冃其蛋片氨基酸品種齊 全，維生素豐富，營養(yǎng)價(jià)值較高，是飼料工業(yè)、醫(yī)的工業(yè)、發(fā)酵工業(yè)和食品工業(yè) 的重要原料。早在1900年時(shí)，面包酵母已經(jīng)形成大生產(chǎn)的規(guī)模。作為人類食物 的酵母生產(chǎn)，則是在第一次世界大戰(zhàn)時(shí)在德國發(fā)展起來的。酵母單細(xì)胞蛋白一直 是歐美市場(chǎng)上缺乏的蛋門質(zhì)資源，國內(nèi)也很匱乏。本實(shí)驗(yàn)在發(fā)酵工程課堂教學(xué)理論基礎(chǔ)上，以分批發(fā)酵法制備釀酒

2、酵母細(xì)胞為 實(shí)踐內(nèi)容，深入理解發(fā)酵原理、方法以及過程及其優(yōu)化控制方法。通過實(shí)踐與理 論的結(jié)合，加深對(duì)發(fā)酵工程的認(rèn)識(shí)，進(jìn)一步增進(jìn)專業(yè)能力和素養(yǎng)。發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)日程表序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)間實(shí)驗(yàn)內(nèi)容安排1、固體培養(yǎng)基配制500ml/組，分裝2瓶；培養(yǎng)基制預(yù)計(jì)4學(xué)2、培養(yǎng)川1清洗及包扎15副/組；無菌水100ml/瓶；1備與滅菌吸管包扎4支/組；時(shí)3、4、液體培養(yǎng)基制備:800ml/組,分裝16瓶，滅菌0. impa, 20min.1、菌種的分離純化:超凈工作臺(tái)消毒（uv照射20min） -75%乙醇擦拭臺(tái)面；活性酵母菌粉一無菌水溶解（稀釋10"倍）一渦旋震蕩5min；倒平板（10副平酵母菌種預(yù)計(jì)皿

3、/組）一平板劃線分離一30°c倒置培養(yǎng)。2活化與種2學(xué)子制時(shí)2、接種準(zhǔn)備t作：超凈t作臺(tái)消璉（uv照射20min） -75%乙醇擦拭臺(tái)而。1、種子培養(yǎng)接種：平板單一菌落一種子培養(yǎng)基（2環(huán)/瓶）一渦旋震蕩2、3-5min；搖瓶培養(yǎng)：搖床設(shè)置及調(diào)節(jié)（30°c, 200r/m）-搖瓶固定一啟動(dòng)培養(yǎng)。發(fā)酵罐結(jié) 構(gòu)、操作規(guī)1、發(fā)酵培養(yǎng)基配制：18l。程及酵母2、發(fā)酵讎操作培訓(xùn)：發(fā)酵讎初始狀態(tài)檢查及調(diào)節(jié)一清洗（清水沖洗2-3菌分批發(fā)遍）一發(fā)酵罐運(yùn)行啟動(dòng)一發(fā)酵罐運(yùn)行參數(shù)設(shè)置一空罐滅菌酵預(yù)計(jì)（0. 15mpa, 20min）-進(jìn)料-實(shí)罐滅菌（0. 1 mpa 維持 30min）冷卻火焰封口

4、接種一發(fā)酵參數(shù)穩(wěn)定狀態(tài)調(diào)節(jié)與維持。38學(xué)時(shí)3、發(fā)酵取樣：取樣管滅菌一取樣再滅菌；4、發(fā)酵中間過程分析（0 hour） : ph測(cè)定（ph計(jì)or精密試紙）；酸度（中和法）；殘?zhí)菧y(cè)定（折光法）；菌體濃度測(cè)定（a迦光密度法）5、中間取樣：每間隔4h,取樣管滅菌一取樣一再滅菌.共計(jì)4-6次；酵母菌的 形態(tài)觀察；預(yù)計(jì)1、水浸片制作及觀察4酵母細(xì)胞6學(xué)2、酵母菌分離條件試驗(yàn)的分離提時(shí)取3、發(fā)酵結(jié)束工作：器川l、設(shè)備還原，壞境清潔實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基制備與滅菌1、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是提供微生物生長繁殖和生物合成各種代謝產(chǎn)物所需要的按一定比 例配制的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。一個(gè)完整的培養(yǎng)基配方組成包括組成成分、各 組成成分

5、的濃度和合適的ph。培養(yǎng)基的組成成分主耍冇碳源、氮源、無機(jī)鹽和 微量元素、水、生長因了以及特殊用途的前體和誘導(dǎo)物。實(shí)驗(yàn)利用葡萄糖、蛋白 月東、酵母抽提物組成的培養(yǎng)基分批發(fā)酵培養(yǎng)酵母菌。滅菌是指從培養(yǎng)基中殺滅有生活能力的細(xì)菌營養(yǎng)體及其他了，或從中將其除 去。絕大多數(shù)工業(yè)發(fā)酵是需氧的純種發(fā)酵，因此所使用的培養(yǎng)基須徹底滅菌。本 實(shí)驗(yàn)采用121°c, 30min的濕熱滅菌法來對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。2、儀器、材料和試劑(1) 儀器電了天平；高壓滅菌鍋(2) 材料蛋白瓶 酵母抽提物；葡萄糖；去離子水；ph試紙；naoh； hc1； looml三 角瓶；250ml三角瓶；瓶塞；玻璃棒；稱量紙；lo

6、oml量筒；500ml燒杯；培 養(yǎng)血(3) 試劑固體平板培養(yǎng)基：葡萄糖2%,蛋白腺2%,酵母抽提物1%,瓊脂2%。液體培養(yǎng)基：葡萄糖2%,蛋白膿2%,酵母抽提物1%3、實(shí)驗(yàn)步驟(1) 計(jì)算 按固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的配方，計(jì)算500汕固體培養(yǎng)基和 800ml液體培養(yǎng)基各物質(zhì)的用量。(2) 稱藥品 用祛碼天平準(zhǔn)確稱量各物質(zhì)。(3) 溶解 將培養(yǎng)基的組分放加在500ml燒杯的水中，玻璃棒攪拌溶解。 (固體培養(yǎng)基瓊脂在室溫下不能溶解，需加熱煮化)。(4) 分裝 液體培養(yǎng)基每組按50l培養(yǎng)基/250ml三角瓶規(guī)格分裝16瓶； 固體培養(yǎng)基分裝250汕培養(yǎng)基/250ml三角瓶。(5) 包扎 三角瓶口塞上瓶

7、塞后用牛皮紙和線繩包扎，以防滅菌吋冷凝水沾 濕棉塞。在紙上寫上培養(yǎng)基名稱、組別、日期。(6) 滅菌 放置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121°c濕熱滅菌30mino(7) 倒平板 待高壓蒸汽滅菌鍋降溫至60°c時(shí)，取岀培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基 室溫放置，固體培養(yǎng)基在已紫外滅菌的超凈工作臺(tái)里倒制5-10只平板。【實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)】(1) 準(zhǔn)確稱量各物質(zhì)，稱完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋。(2) 調(diào)ph值時(shí)要小心操作，避免回調(diào)。(3) 不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn)，要注意具體操作。(4) 滅菌操作中務(wù)必待壓力下降到零后，才可打開鍋蓋。實(shí)驗(yàn)二酵母菌種活化與種子制備1、實(shí)驗(yàn)原理菌種活化是指將保存在砂土管、冷凍干燥管、

8、冷凍斜而屮處于休眠狀態(tài)的生 產(chǎn)菌種接入試管斜面或平板培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇處理。活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及 種子罐逐級(jí)放人培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種。這些純種培養(yǎng)物稱為發(fā)酵的 種了。 種了的一般制備過程可用下圖表示：a «i沖子礦大堵為詼瓏円1 -砂土鬼子；9 一拎旅于蚩氷子：3 料血他予"民敲體用勲“熨體怎& 一 88*址養(yǎng)抵覽界；匚5片予jus薦；?i»ar22、儀器、材料和試劑(1) 儀器恒溫培養(yǎng)箱；超凈工作臺(tái)；恒溫?fù)u床(2) 材料釀酒酵母菌種；接種環(huán)(3) 試劑固體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基3、實(shí)驗(yàn)步驟(1) 超凈工作臺(tái)滅菌 打開紫外燈，照射30min,完畢后

9、打開風(fēng)機(jī)吹5mino(2) 準(zhǔn)備工作 將酵母菌種和培養(yǎng)基平板放在超凈工作臺(tái)中，點(diǎn)燃酒精燈， 用75%的灑精棉球擦拭雙手。(3) 灼燒接種環(huán) 將接種環(huán)在酒精燈外焰上來回移動(dòng)著灼燒，其屮螺旋接頭 部分多燒一會(huì)兒，接種環(huán)燒至紅熱狀態(tài)后，移離火焰冷卻。(4) 劃線法分離接種環(huán)挑取少量酵母菌，左手拿培養(yǎng)基平板在酒精燈火焰 旁打開，接種環(huán)在平板表面分三次作“之”字形劃線。每次劃線后要燒接種環(huán)， 再從上一次劃痕的尾部拉出后劃下一區(qū)，依次劃成4個(gè)區(qū)。(5) 菌落培養(yǎng) 將劃線接種的平板倒置于30°c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。觀察菌落 的大小、顏色、形狀。(6) 單菌落接種 在超凈工作臺(tái)中(注意無菌操作)，將

10、50ml培養(yǎng)基/250ml 三角瓶的瓶口連同瓶塞在酒精燈火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒片刻后取下棉塞，用灼燒過 的接種環(huán)挑取一個(gè)酵母單菌落，伸入液體培養(yǎng)基中振蕩兒下，取出在火焰上 灼燒，再將瓶塞塞好。再依次完成另外三瓶50ml培養(yǎng)基/250ml三角瓶的接 種操作。(7) 標(biāo)記 在接種的三解瓶壁上貼上標(biāo)簽，注明菌種名稱、操作人、日期。(8) 種子培養(yǎng) 將接種后的培養(yǎng)基置于30°c搖床中，200rpm,振蕩培養(yǎng)約 12h。【實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)】(1) 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程要嚴(yán)格無菌操作。(2) 標(biāo)記時(shí)請(qǐng)寫明操作者的姓名，方便查找和整理，提高效率。(3) 劃線及接種完后要將接種環(huán)在火焰上灼燒，以殺死殘留的酵母菌。實(shí)驗(yàn)三

11、發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)及使用操作規(guī)程1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜ぐl(fā)酵罐基本結(jié)構(gòu)，了解發(fā)酵罐工作原理，學(xué)會(huì)發(fā)酵罐使用方法。2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（1）發(fā)f罐基本結(jié)構(gòu)組成:1）罐體系統(tǒng)：罐體、夾套、攪拌器、扌半板、進(jìn)料口、接種口、放料口、 排氣管、進(jìn)氣管、取樣管、照明燈等。2）滅菌系統(tǒng)：蒸汽發(fā)生器、蒸汽分配管、夾套加熱裝置、放料口滅菌裝置、 通氣管取樣管滅菌裝置、空氣過濾系統(tǒng)滅菌裝置。3）溫度控制系統(tǒng)：罐內(nèi)溫度傳感器（電極）、水箱溫度傳感器（電極）、 恒溫水箱、恒溫水循環(huán)管路。4）無菌空氣制備系統(tǒng)：空氣壓縮機(jī)、氣液分離器、氣休流量計(jì)、氣流調(diào)節(jié) 器、空氣過濾器（2級(jí)）。5）控制系統(tǒng)：電源開關(guān)、操作顯示屏、控制器觸摸開關(guān)、參數(shù)設(shè)置轉(zhuǎn)換

12、調(diào) 節(jié)屏。標(biāo)&包叫1dx x.t?rs"百向窮堀錢/電歩窮堀找/電歩發(fā)酵罐外形圖+0 2»it kt<1譽(yù)代<1譽(yù)代0 s十nunxxffmar-油埠jailmis4744約口口淖污口淖污口iul迪用丸發(fā)聲經(jīng)各部兮骨適示意因（2）發(fā)酵罐操作規(guī)程1）發(fā)酵罐工藝操作條件溫度：2540°c。壓力：00. 3mpa（表壓）。滅菌條件;溫度100140°c, 壓力 00. 3mpa （表壓）.ph： 211。需氧量：0. 050. 3 kmol/m3 ho 通 氣量:0.32 v/v/mo功率消耗：0.54kw/m發(fā)酵熱量：5, 00020,

13、000 kcal / m3- ho2）清洗工作清洗前應(yīng)取出ph、do電極。清洗罐內(nèi)可配合進(jìn)水、進(jìn)氣、電機(jī)攪拌、加溫 一起進(jìn)行。清洗后安裝要注意罐內(nèi)密封圈、硅膠墊就位情況。注意罐與罐座 間隙均衡。3）試車將電極、電機(jī)、電纜、進(jìn)出氣軟管、冷凝器進(jìn)出水接頭安裝就位；安裝 完畢后要對(duì)罐體內(nèi)通氣（0. 2mpa）作密封性試驗(yàn)。方法如下：關(guān)閉閥門；旋 緊罐體上毎一個(gè)接口、堵頭、電極緊固帽；打開空壓機(jī)，調(diào)節(jié)氣閥，使罐壓 保持0. 2mpa左右；對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行23小時(shí)試運(yùn)行，如冇問題作相應(yīng)處理后， 方可正式使用。4）發(fā)酵罐使用操作規(guī)程如果短期內(nèi)需再次培養(yǎng)發(fā)酵，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行2-3次清水清洗待用。如準(zhǔn)備 長期停用，則應(yīng)

14、對(duì)其進(jìn)行滅菌，然后放去水箱與罐內(nèi)存水，放松罐蓋緊同螺 絲，取出電極保養(yǎng)儲(chǔ)存好，將罐、齊管道余水放凈，關(guān)閉所有閥門，電源， 蓋上防塵罩。發(fā)酵罐操作開始前，先關(guān)閉所有出料口、取樣口、進(jìn)氣口，打 開出氣閥；加入發(fā)酵培養(yǎng)基，裝注完成后旋緊進(jìn)料口螺蓋。滅菌：啟動(dòng)蒸汽發(fā)生器，待氣壓達(dá)到0. 2mpa以上吋: a開啟發(fā)酵罐出氣閥，開啟高壓蒸汽閥將高壓蒸汽通過進(jìn)氣閥引入夾套，打開夾套排水閥，排一一除蒸汽 冷凝水，控制閥門開量，保持微弱出汽；b. 同吋通過蒸汽分配管將蒸汽引入空氣過濾系統(tǒng)（注意：蒸汽引入前關(guān)閉通 向電器控制柜的空氣閥門），使蒸汽通過一級(jí)和二級(jí)空氣過濾器并順利進(jìn)入取樣 口出口，保持取樣放出口微弱出

15、汽；c. 另一路蒸汽通過蒸汽閥發(fā)酵罐放料口，并保持放料口微弱岀汽；d. 等到罐內(nèi)培養(yǎng)基溫度達(dá)到80°c時(shí)，開啟與罐直接相連的通氣閥，將高壓 蒸汽直接接入罐內(nèi)加熱培養(yǎng)基，并對(duì)與罐相連的管道滅菌。e. 直到罐內(nèi)培養(yǎng)基開始沸騰后，關(guān)閉排氣閥，使罐內(nèi)升壓至0. impa （或滅 菌溫度121°c）,維持溫度0. 5-1. 0小時(shí)。關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥，開啟冷卻水管路系統(tǒng)，通過夾套冷卻發(fā)酵培養(yǎng)基，當(dāng)罐內(nèi) 壓力接近常壓前向罐內(nèi)通入無菌空氣，保持罐內(nèi)空氣壓力0. 03mpa ±下，至 發(fā)酵溫度關(guān)閉冷卻水系統(tǒng)。啟動(dòng)空氣壓縮機(jī)，開啟進(jìn)氣閥、使壓縮空氣通過旋風(fēng)分離器及空氣過濾器， 從進(jìn)氣閥

16、進(jìn)入發(fā)酵罐，使溶解氧濃度達(dá)到發(fā)酵初始水平。接種：接種方法可采用火焰接種法或茅壓接種法。比火焰接種法：在接種口用酒精火圈消毒，然后打開接種口蓋，迅速將接種 液倒入罐內(nèi)，在把蓋擰緊。b.差壓法：在滅菌前放入墊片，接種時(shí)把接種口蓋打開，先倒入一定量的酒 精消毒。待片刻后把種液瓶的針頭插入接種口的梨片。利用罐內(nèi)壓力和種液瓶內(nèi) 的壓力差，將種液引入罐內(nèi)，擰緊蓋子。發(fā)酵狀態(tài)調(diào)節(jié)乩罐壓：發(fā)酵過程屮須手動(dòng)控制罐壓，即用出口閥控制罐內(nèi)壓力。調(diào)節(jié)空氣 流量的，須同時(shí)調(diào)節(jié)出口閥，應(yīng)保持罐內(nèi)壓力恒定大于0. 03mpaob溶解氧（do）的測(cè)量和控制溶解氧的標(biāo)定：在接種前，在恒定的發(fā)酵溫度卜，將轉(zhuǎn)速及空氣量開到最 人值

17、時(shí)的溶解氧do值作為100%。發(fā)酵過程的溶解氧do測(cè)量和控制：do的控制可采用調(diào)節(jié)空氣流量和調(diào)節(jié) 轉(zhuǎn)速來達(dá)到。最簡單是轉(zhuǎn)速和溶氧的關(guān)聯(lián)控制。其次則必須同時(shí)調(diào)節(jié)進(jìn)氣量（手 動(dòng)）控制。有時(shí)需要通入純氧（如在某些基因工程菌的高密度培養(yǎng)中）才能達(dá)到 要求的d0值。c.ph的測(cè)量與控制ph值的校正：在滅菌前應(yīng)對(duì)ph電極進(jìn)行ph值的校正。在發(fā)酵過程屮ph值的控制使用嫦動(dòng)泵的加酸加堿來達(dá)到的，酸瓶或堿瓶須 先在滅菌鍋中滅菌。旋松進(jìn)料口螺旋蓋，在進(jìn)料口環(huán)槽中加入適量酒精棉，點(diǎn)燃 酒精，打開進(jìn)料口螺旋蓋，將種子三角瓶菌液接入發(fā)酵罐。攪拌均勻后，開始發(fā) 酵控制。d間隔8 h,開啟取樣閥取樣300500ml發(fā)酵液分

18、別測(cè)定殘?zhí)恰⒕鷿狻⑺岫?等數(shù)值。發(fā)酵參數(shù)到達(dá)放罐指標(biāo)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束。打開放料閥，將發(fā)酵液全部排出；放罐后用水清洗發(fā)酵罐2-3次，洗凈后通蒸汽消毒15mino培養(yǎng)后用干凈抹 布要清除電器箱、電纜等接頭和其他罐休部件上的物休。實(shí)驗(yàn)四酵母菌分批發(fā)酵1、實(shí)驗(yàn)原理發(fā)酵過程即細(xì)胞的生物反應(yīng)過程，是指由生長繁殖的細(xì)胞所引起的生物反應(yīng) 過程。微生物發(fā)酵的生產(chǎn)水平不僅取決于生產(chǎn)菌種木身的性能，而且耍賦以合適的 環(huán)境條件才能使它的生產(chǎn)能力充分表達(dá)出來。為此我們必須通過各種研究方法了 解有關(guān)生產(chǎn)菌種對(duì)環(huán)境條件的要求，如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、ph、氧的需求等，并 深入地了解生產(chǎn)菌在合成產(chǎn)物過程中的代謝調(diào)控機(jī)制以及可能的代謝

19、途徑，為設(shè) 計(jì)合理的生產(chǎn)工藝捉供理論基礎(chǔ)。同時(shí)，為了掌握菌種在發(fā)酵過程屮的代謝變化 規(guī)律，可以通過各種監(jiān)測(cè)手段如取樣測(cè)定隨時(shí)間變化的菌體濃度，糖、氮消耗及 產(chǎn)物濃度，以及采用傳感器測(cè)定發(fā)酵罐中的培養(yǎng)溫度ph、溶解氧等參數(shù)的情況, 并予以有效地控制，使生產(chǎn)菌種處于產(chǎn)物合成的優(yōu)化環(huán)境之中。2、儀器、材料和試劑(1) 儀器30l機(jī)械攪拌通氣式發(fā)酵罐；恒溫?fù)u床；顯微鏡；分光光度計(jì)(2) 材料釀酒酵母種子；移液管；載玻片和蓋玻片(3) 培養(yǎng)基酵母分批發(fā)酵培養(yǎng)基:蔗糖5%,蛋白月東1%,硫酸鞍0.4% , kh2hp04 0. 5%, mgs04. 7h20 0. 2%,消泡劑 0. 2ml/l, ph5

20、 5。酵母菌發(fā)酵過程（操作規(guī)程見實(shí)驗(yàn)三）30升發(fā)酵罐裝入20升發(fā)酵培養(yǎng)基,12pc滅菌30-40min,冷卻至30°c,將 培養(yǎng)好的搖瓶種子接入發(fā)酵罐（接種量1-5%）進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵條件為：溫度30°c, 攪拌轉(zhuǎn)速 250300rpm,通風(fēng)量 1： 0. 5/v/v/m。過程檢測(cè)與監(jiān)控：0小時(shí)：取樣測(cè)定ph、酸度、光密度od和還原糖；4-24 小時(shí)：每隔4h取樣測(cè)定ph、酸度、光密度0d和述原糖。4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容和數(shù)據(jù)處理根據(jù)發(fā)酵過程酵母濃度、ph、酸度和還原糖的變化規(guī)律，作出相關(guān)參數(shù)指標(biāo) 隨吋間變化的曲線圖。（形態(tài)觀察見實(shí)驗(yàn)五；生物量測(cè)定：利用分光光度計(jì)測(cè) 600nni處

21、酵母細(xì)胞的吸光值，可間接地反映細(xì)胞的多少，測(cè)0d值時(shí)，要迅速， 盡量避免細(xì)胞沉降所引起的誤差）實(shí)驗(yàn)五酵母菌的形態(tài)觀察1、實(shí)驗(yàn)原理酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見細(xì)菌大幾倍或幾十 倍。大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通過接合 產(chǎn)生子囊砲子。本試驗(yàn)通過美藍(lán)染液水浸片合水一碘液水浸片來觀察酵母的形態(tài) 和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。 用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng) 的述原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的述原型。因此，具有述原能力 的酵母活細(xì)胞是無色的，而死細(xì)胞或代謝作用微弱

22、的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán) 色，借此即可對(duì)酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。子囊泡子是子囊菌類真菌有性生殖產(chǎn)生的有性泡子。在酵母菌屮，能否形成 子囊他子及其形態(tài)是酵母菌分類鑒定的重要依據(jù)之一。酵母菌形成子囊他子需要 一定的條件，所以對(duì)不同種數(shù)的酵母耍選擇適合形成子囊砲子的培養(yǎng)基。麥?zhǔn)?(mcclary)培養(yǎng)基(葡萄糖一醋酸鈉培養(yǎng)基)有利丁釀酒酵母了囊孑包了的形成。2、儀器、材料和試劑(1) 儀器顯微鏡；超凈工作臺(tái)(2) 材料吸耳球；50ml小燒杯；玻璃棒；載玻片；蓋玻片；擦鏡紙；接種壞；酒精 燈(3) 試劑0.05%和0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液哥盧氏碘液3、實(shí)驗(yàn)步驟美藍(lán)浸片觀察(死活細(xì)胞的觀察)(1) 在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液，然后按無菌操作用接種 環(huán)挑取少量酵母菌放在染液屮，混合均勻。(2) 用鑲子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使 其蓋在菌液上。(3) 將制片放置3n)in后鏡檢，先用低背景然后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和 出芽情況，并根據(jù)顏色來區(qū)別死活細(xì)胞。(4) 染色后約05h后再次進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞數(shù)量是否增加。(5) 用0. 05%呂氏堿性美藍(lán)染液重復(fù)上述操作。(6) 對(duì)丁發(fā)酵液中的酵母細(xì)胞，可以用無菌玻璃棒醮取后直接制片觀察。比 較固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)的酵