1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案文件編碼：項(xiàng) 目姓 名簽 名日 期起 草審 核審 核批 準(zhǔn)生效日期年 份 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案目錄1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證計(jì)劃2、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組名單3、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案4、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證培訓(xùn)記錄5、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證附屬記錄6、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證報(bào)告7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證合格證書(shū)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證計(jì)劃根據(jù)我公司認(rèn)證領(lǐng)導(dǎo)小組的要求及驗(yàn)證委員會(huì)的安排，對(duì)硫乙醇酸

2、鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法進(jìn)行驗(yàn)證，具體安排如下：一、年月日年月日，制定驗(yàn)證方案，由硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組組長(zhǎng)負(fù)責(zé)起草。二、年月日年月日，驗(yàn)證方案討論、修改、審批和培訓(xùn)。三、年月日年月日，驗(yàn)證工作實(shí)施。 四、年月日年月日，根據(jù)驗(yàn)證情況與記錄，書(shū)寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告。五、年月日年月日，驗(yàn)證報(bào)告審核批準(zhǔn)，合格證發(fā)放。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組名單組 長(zhǎng)： 成 員： 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案 頁(yè)碼：< 4 / 5>1、 目的通過(guò)驗(yàn)證驗(yàn)證所采用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法，適合于我公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的制備，為質(zhì)量控制試驗(yàn)提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)

3、基。并培養(yǎng)基配制和滅菌的操作方法，為培養(yǎng)基配制和滅菌人員提供正確的操作方法，使培養(yǎng)基配制和滅菌標(biāo)準(zhǔn)化、程序化。2、 適用范圍本方案適用于本公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法的驗(yàn)證。3、 內(nèi)容1. 概述 培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照培養(yǎng)基廠商提供的使用說(shuō)明配制，如質(zhì)量/體積、PH、制備條件、滅菌條件和操作步驟等。培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、PH的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通

4、過(guò)適用性檢查試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定的裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過(guò)熱，過(guò)度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)的質(zhì)量。滅菌器中的培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。根據(jù)培養(yǎng)基的特性，按制定的方法進(jìn)行配制和滅菌，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。若符合，按驗(yàn)證的方法和條件進(jìn)行培養(yǎng)基的配制和滅菌，若不符合，重新制定方案，再進(jìn)行驗(yàn)證，直至驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)立的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。2. 驗(yàn)證項(xiàng)目及認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)配制滅菌前的pH7.2-7.4滅菌

5、滅菌溫度121滅菌時(shí)間15分鐘滅菌效果（F0值）12滅菌后pH值6.9-7.3滅菌后外觀性狀符合規(guī)定適用性檢查靈敏度檢查符合規(guī)定無(wú)菌性檢查符合規(guī)定有效期驗(yàn)證保存三周外觀性狀符合規(guī)定靈敏度檢查符合規(guī)定無(wú)菌性檢查符合規(guī)定連續(xù)驗(yàn)證3次配制的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。3. 驗(yàn)證依據(jù)3.1. SN/T1538.1-2005培養(yǎng)基制定指南3.2. 藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（2003版）（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局）3.3. 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（2010版）3.4. 中華人民共和國(guó)藥典（2010年版二部）3.5. 中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（2010年版）4. 驗(yàn)證方法與內(nèi)容4.1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備4.1.1. 器具：電磁爐（最

6、大功率2000W）、大燒杯（2000ml）、不銹鋼鍋、玻璃棒、25×250ml試管、硅膠塞、細(xì)繩、牛皮紙、分析天平、藥匙、量筒（100ml、1000ml）等。名稱(chēng)生產(chǎn)廠家型號(hào)校驗(yàn)情況生化培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱自動(dòng)臺(tái)式滅菌器電子天平數(shù)字酸度計(jì)生物安全柜超凈工作臺(tái)4.1.2. 設(shè)備4.1.3. 培養(yǎng)基及試劑名稱(chēng)生產(chǎn)廠家批號(hào)純化水硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基氫氧化鈉稀鹽酸嗜熱脂肪芽胞菌（F012）4.1.4. 驗(yàn)證用菌株 來(lái)源于貴州省藥品檢驗(yàn)所驗(yàn)證菌株菌株代數(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌4.2. 驗(yàn)證內(nèi)容4.2.1.

7、 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)a. 配制容器及配套器具的清洗嚴(yán)格按照玻璃器皿清洗操作規(guī)程執(zhí)行。b. 培養(yǎng)基的配制嚴(yán)格按照培養(yǎng)基管理規(guī)程執(zhí)行。c. 自動(dòng)臺(tái)式滅菌器嚴(yán)格按照TMQ.R-3870型臺(tái)式滅菌器使用維護(hù)保養(yǎng)操作規(guī)程執(zhí)行.d. 取同一批硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基配制三批進(jìn)行以下驗(yàn)證。4.2.2. 配制滅菌過(guò)程a. 稱(chēng)量 取硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基29.25克,加純化水1000ml,加熱煮沸使其完全溶解。每次按照此處方量配制8547ml。b. 滅菌前的pH值測(cè)定 取已配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml，放冷至25調(diào)節(jié)PH值至7.2-7.4范圍內(nèi)。以此比例來(lái)調(diào)節(jié)剩下的培養(yǎng)基的pH值。c. 分裝 將已調(diào)節(jié)好PH值

8、的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分裝至25×250ml試管中，分裝的管數(shù)為190200管范圍，用牛皮紙按40管/捆的方式包扎結(jié)實(shí)。其中一管只裝約20ml，以備滅菌后最終pH值測(cè)定。d. 滅菌器中的培養(yǎng)基的數(shù)量及裝載方式（滿載） l 將分裝好的5捆（40管/捆）培養(yǎng)基試管置于滅菌器中，按下圖A、B、C、D、E 5點(diǎn)放置。 A B C 滅菌器柜門(mén) D E l 指示菌的放置：將指示劑嗜熱脂肪芽孢菌（菌濃度：1.69×106cfu/支）5支各放入5捆培養(yǎng)基中間的其中一支試管，同時(shí)將已編號(hào)的5支校正好的留點(diǎn)溫度計(jì)插入6支待滅菌培養(yǎng)基試管內(nèi)，開(kāi)始滅菌。l 將已裝載好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在121

9、條件下滅菌15分鐘。滅菌結(jié)束后記錄各留點(diǎn)溫度計(jì)點(diǎn)溫度。同時(shí)取出5支已滅菌嗜熱脂肪芽孢菌，直接置5660培養(yǎng)2448小時(shí)，另取一支未經(jīng)滅菌的嗜熱脂肪芽孢菌指示劑一起培養(yǎng)，作為陽(yáng)性對(duì)照。l 根據(jù)顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色為不合格。對(duì)照管應(yīng)由紫色變?yōu)辄S色為該指示劑有效。e. 滅菌后的pH值的測(cè)定 取20ml管已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，放冷至25測(cè)定pH值，應(yīng)在6.9-7.3范圍內(nèi)。f. 外觀性狀 l 滅菌后培養(yǎng)基應(yīng)對(duì)其外觀性狀仔細(xì)檢查，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。l 貯存中培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化、渾濁；固體培養(yǎng)基表面產(chǎn)生裂縫或

10、漣漪等異常現(xiàn)象，不符合使用規(guī)定時(shí)，應(yīng)停止使用，重新進(jìn)行配制和滅菌程序驗(yàn)證。4.2.3. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的適用性檢查無(wú)菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。a. 無(wú)菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取5支（瓶），培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。b. 靈敏度檢查l 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824 小時(shí)；上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)小于100cf

11、u（菌落形成單位） 的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28，可在24 小時(shí)內(nèi)使用。l 培養(yǎng)基接種 取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)三天，逐日觀察結(jié)果。l 結(jié)果判斷 空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。5. 組織實(shí)施5.1. 驗(yàn)證機(jī)構(gòu)的組成5.2. 公司驗(yàn)證委員會(huì)，負(fù)責(zé)所有驗(yàn)證工作的領(lǐng)導(dǎo)和組織、審批驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告、發(fā)放驗(yàn)證證書(shū)。5.3. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證工作小組，負(fù)

12、責(zé)該驗(yàn)證項(xiàng)目的驗(yàn)證方案起草、實(shí)施、組織與協(xié)調(diào)實(shí)施，負(fù)責(zé)驗(yàn)證樣品檢測(cè)，完成各項(xiàng)記錄，根據(jù)檢驗(yàn)和驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評(píng)定、完成驗(yàn)證報(bào)告。部門(mén)部門(mén)職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書(shū)寫(xiě)報(bào)告操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出報(bào)告操作實(shí)施驗(yàn)證委員會(huì)方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、發(fā)放驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)4、 附件及相關(guān)表格文件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證報(bào)告文件編碼：項(xiàng) 目姓 名簽 名日 期起 草審 核審 核批 準(zhǔn)生效日期年 份硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證報(bào)告 頁(yè)碼：5/61、 驗(yàn)證概述 培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)

13、基的保證。 中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部規(guī)定：在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配置和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過(guò)程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行一次。本公司采用的培養(yǎng)基均是北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)的市售脫水培養(yǎng)基。為規(guī)范生測(cè)實(shí)驗(yàn)人員在配制培養(yǎng)基時(shí)標(biāo)準(zhǔn)化、程序化并符合中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部規(guī)定，特對(duì)培養(yǎng)基的配制程序進(jìn)行驗(yàn)證。1. 驗(yàn)證組織與實(shí)施1.1. 驗(yàn)證小組成員及職責(zé)分工部門(mén)部門(mén)職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書(shū)寫(xiě)報(bào)告操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出報(bào)告操作實(shí)施驗(yàn)證委員會(huì)方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、發(fā)放驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)1.2. 本驗(yàn)證由質(zhì)量部負(fù)責(zé)并由相關(guān)人員

14、根據(jù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案所規(guī)定的方法與步驟實(shí)施。2. 實(shí)施時(shí)間為：年月日年月日。2、 各項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)論1. 滅菌前后pH值 日期： 年 月 日配制批號(hào)滅菌前pH值滅菌后pH值結(jié)果判定2. 外觀性狀日期年 月 日年 月 日結(jié)果判定配制批號(hào)滅菌后保存三周后3. 留點(diǎn)溫度計(jì)溫度記錄 日期： 年 月 日配制批號(hào)滅菌后溫度結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE4. 指示劑培養(yǎng)結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)滅菌后指示劑顏色結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE陽(yáng)性對(duì)照5. 滅菌后培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查 5.1. 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7

15、天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定5.2. 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定5.3. 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定6. 滅菌后培養(yǎng)基靈敏度檢查6.1. 菌液計(jì)數(shù)結(jié)果 日期： 年 月 日指示菌名稱(chēng)菌液濃度（cfu/ml）標(biāo)準(zhǔn)濃度平板1平板2平均菌落數(shù)金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 C

16、MCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 5016.2. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管6.3. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管6.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管7. 保存三周后培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查 7.1. 培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查結(jié)果

17、 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定7.2. 培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查結(jié)果 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定7.3. 培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查結(jié)果 配制批號(hào)： 日期： 年 月 日天數(shù)編號(hào)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定8. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查8.1. 菌液計(jì)數(shù)結(jié)果 日期： 年 月 日指示菌名稱(chēng)菌液濃度（cfu/ml）標(biāo)準(zhǔn)濃

18、度平板1平板2平均菌落數(shù)金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 5018.2. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.3. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.4. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果 日期： 年 月 日配制批號(hào)檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定陰性對(duì)照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管3、 建議、結(jié)果分析和驗(yàn)證總結(jié)1. 建議 1.1. 加強(qiáng)生測(cè)室檢驗(yàn)人員的操作技能培訓(xùn)，使培養(yǎng)基配制和滅菌過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化，