1、3 判讀手冊(cè) Petrifilm TMEnvironmental Listeria Plate該手冊(cè)能指導(dǎo)你掌握 3M TM Petrifilm TM 環(huán)境李斯特菌檢驗(yàn)測(cè)試片的使用。 如需更多信息，請(qǐng)與 3M 微生物產(chǎn)品代理聯(lián)系。3M TM Petrifilm TM Environmental Listeria (EL) 測(cè)試片是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基，含有選擇性試劑，營(yíng)養(yǎng) 成分，冷水可溶性的凝膠和有助于菌落檢測(cè)的顯色指示劑。 Petrifilm EL 測(cè)試片可用于檢測(cè)或計(jì)數(shù)環(huán)境樣 本中的李斯特菌數(shù)。 Petrifilm EL 測(cè)試片檢測(cè)的李斯特菌包括單核增生李斯特菌(L.monocytoge

2、nes ) 英諾克李斯特菌 (L.innocua )，格氏 / 墨氏李斯特菌 (L.grayi/murrayi )，威爾李斯特菌 (L.welshimeri ) ，但不能區(qū)分各 種菌。環(huán)境條件和消毒劑可能會(huì)抑制或損傷微生物。緩沖蛋白胨緩沖液(Buffered Peptone Water, BPW) 能用作修復(fù)肉湯和 Petrifilm EL 測(cè)試片結(jié)合使用。但李斯特菌在緩存蛋白胨緩沖液中的修復(fù)過(guò)程 不是 增菌步驟。Petrifilm EL 測(cè)試片可用于定性，半定量，定量檢測(cè)。 需要進(jìn)一步的指導(dǎo)，請(qǐng)參考使用部分的提示。1. 圖 1 為長(zhǎng)有李斯特菌的典型 Petrifilm EL 測(cè)試 片。判讀或

3、計(jì)數(shù)所有的紫紅色菌落為李斯特 菌。如果在 26-29 小時(shí)，有灰色或淡粉紅色菌落 存在，需繼續(xù)培養(yǎng)。在培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)，由灰色或 淡粉紅色加深為紫紅色的菌落應(yīng)判定為李斯特 菌。在最大培養(yǎng)時(shí)間 (30小時(shí) )仍保持灰色或淡粉 紅色的菌落不應(yīng)判讀為李斯特菌。不考慮或計(jì) 數(shù)圓形輪廓上的菌落，因?yàn)樗鼈儾皇苓x擇性培 養(yǎng)基的作用。定性判讀： 測(cè)試片檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 ( 如低，中， 高，或可接受和不可接受 )。定量判讀： 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)： 11。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀”部分來(lái) 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。TM TM2.

4、 該 Petrifilm EL 測(cè)試片在培養(yǎng) 30 小時(shí)后沒(méi)有菌 落生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。定性判讀： 測(cè)試片上未檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 (如低，中，3M Petrifilm Environmental Listeria Plate1 部分來(lái)區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 高，或可接受和不可接受 )。 定量判讀： 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)： 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀” 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。3. Petrifilm EL 測(cè)試片對(duì)李斯特菌具有選擇性，其 菌落顯示為紫紅色。定性判讀： 測(cè)試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)

5、域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 ( 如低，中， 高，或可接受和不可接受 )。定量判讀： 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)： 84 。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀”部分來(lái) 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。3MTM PetrifilmTMEnvironmental Listeria PlateEnvironm4. 由于 Petrifilm EL 測(cè)試片的判讀方式有三種，所 以沒(méi)有建議的計(jì)數(shù)范圍。當(dāng)菌落密集時(shí)，按以 下方式判讀定性或半定量的結(jié)果，或估算定量 的結(jié)果。定性判讀： 測(cè)試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 （ 如低，中， 高，或可接受和不

6、可接受 ）。定量判讀： 測(cè)試片上估算的李斯特菌數(shù)：約 460。當(dāng)大量李斯特菌存在時(shí)，通過(guò)計(jì)數(shù)兩個(gè)或 兩個(gè)以上的具有代表性方格的菌落數(shù)來(lái)估算。 計(jì)算每個(gè)方格的平均菌落數(shù)數(shù)后乘以 42。2 Petrifilm EL 測(cè)試片的接種面積近似 42 cm 將未開(kāi)封的測(cè)試片貯藏在 8 C （46 F） 的環(huán)境 下，并在包裝上標(biāo)示的有 效期內(nèi)使用。在高濕度的 地方，最好在使用前將測(cè) 試片回復(fù)到室溫。5. 當(dāng)菌落數(shù)很多時(shí)，測(cè)試片上可能有許多小的， 不清楚的菌落，和 （或 ） 呈現(xiàn)全部的粉紅色至棕 色。定性判讀： 測(cè)試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式

7、 （ 如低，中， 高，或可接受和不可接受 ）。定量判讀： 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)為多不可計(jì)（Too Numerous To Count, TNTC） 。該圖中的菌落 數(shù)近似 104。6. 背景顏色可能會(huì)因?yàn)榄h(huán)境樣本中的灰塵、泥 土、砂子、或其它沉淀物而發(fā)生變化，也可能 是因?yàn)椴蓸釉O(shè)備和 （或 ） 緩沖蛋白胨水 （修復(fù)液 ）的 品牌不同而引起。紫紅色菌落判讀為李斯特 菌。定性判讀： 測(cè)試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 （ 如低，中， 高，或可接受和不可接受 ）。定量判讀： 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)： 11。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判

8、讀”部分來(lái) 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。ntal Listeria Plates 操作說(shuō)明責(zé)任限定、儲(chǔ)存與后處理信息，和使用說(shuō)明請(qǐng)參見(jiàn)產(chǎn)品的貯藏3. 為防止暴露于潮濕的環(huán)境中， 請(qǐng)不要冷藏已開(kāi)封的測(cè)試片。 將膠帶封好的測(cè)試片貯藏在低 溫干燥的地方，保持時(shí)間不超 過(guò) 1 個(gè)月。請(qǐng)勿將測(cè)試片放在 溫度 25 C （77 F）和 （或 ）相對(duì)濕度 50%的環(huán)境2. 已開(kāi)封的測(cè)試片，將開(kāi) 口反折，用膠帶封好。樣品制備接種6. 用涂抹棒、海棉或其它采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。濕10 mL片前接種并用5. 在無(wú)菌環(huán)境下在收集的樣 品中添加 5 mL ， 20-30 壓板壓好C每，張滅測(cè)過(guò)試菌片的。緩沖蛋白胨

9、 水 (BPW) 溶液。濕潤(rùn)劑可以是無(wú)菌水、緩沖蛋白胨水 (Buffered PeptoneWater, BPW) ，或中和緩沖 液，如 Letheen 肉湯或Dey/Engley (DE) 中和肉湯不要將 Petrifilm EL 測(cè)試片與 Vermont 培養(yǎng)基 (UVM) 、 Fraser 肉湯、李斯特菌增菌培 養(yǎng)基 (LEB) 或緩沖李斯特菌增 菌培養(yǎng)基 (BLEB) 共用。4. 混合，蠕動(dòng)或旋轉(zhuǎn)樣品與 BPW 的混合液將近一分 鐘。將樣品置于 室溫 (2030 C) 1h ，最久不超過(guò) 1.5 h ，以修復(fù)損傷的李斯 特菌。9. 將測(cè)試片放在平坦處， 掀起上層膜。7. 將上層膜緩慢蓋

10、下，以 免產(chǎn)生氣泡判。讀8. 用 3M TM 電子移液槍或 其它移液器垂培直養(yǎng)滴加 3 mL 樣品到下層膜的中Petrifilm EL 測(cè)試片法可用于定性、半定量及定量檢測(cè) 將測(cè)試片透明面朝上， 10. Petrifilm EL 測(cè)試片能夠 可疊放至 10 片，在 35 對(duì)于C 半定 1量檢C測(cè)或，3根7 據(jù)出現(xiàn) 紫C 紅色 1菌落C的下培相養(yǎng)對(duì)量28來(lái)h記錄 結(jié)果 212. 輕輕地 將塑料壓板放在 位于接種區(qū)上層膜上。13. 不對(duì)要于壓定性，檢扭測(cè)轉(zhuǎn)或，滑根動(dòng)據(jù)壓紫 紅板色。菌提落起的壓板存。在等與否至，少 1將0結(jié)分果鐘計(jì)，為以 出固。11.14.上如果是 / 否的 能夠滿足報(bào)告挑取菌落。

11、 未檢出體和凝未檢檢出已經(jīng)要求，那TMilmEnvir。 h。記錄為并，可erial Plate用標(biāo)準(zhǔn)的菌落計(jì)數(shù)器或 1其5它. 光對(duì)學(xué)于放定大量器檢計(jì)測(cè)數(shù)或，計(jì)數(shù) 所 判讀。有不紫要紅計(jì)色數(shù)菌圓落形。輪 廓上的菌落，因?yàn)樗鼈?作數(shù)來(lái)：采 定以 采用樣定與量判檢讀測(cè)”。部分來(lái) 算每個(gè)環(huán)境樣本中的不受用量計(jì)李斯特菌數(shù)16定量采樣與判讀如果你以定量方式使用 3M Petrifilm EL 測(cè)試片，請(qǐng)參考產(chǎn)品的包裝插件，然后按下述方式計(jì)算單位面積 的菌落數(shù) (Colony Forming Units, CFU) 。同時(shí)，你也要注意以下幾點(diǎn)：穩(wěn)定性是在環(huán)境監(jiān)控過(guò)程中獲得有用信息的關(guān)鍵點(diǎn)，所以在采樣過(guò)程

12、中應(yīng)使用相同的步驟。理 想情況下，應(yīng)使用相同類型的取樣設(shè)備，模板面積，技術(shù)員和采樣技術(shù)。采樣面積的大小可根據(jù)法規(guī)，內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，和(或 )監(jiān)控地點(diǎn)的不同來(lái)設(shè)定，例如考慮到較低的細(xì)菌數(shù)，對(duì)成品線應(yīng)采用較大的采樣面積。3M Petrifilm 測(cè)試片環(huán)境監(jiān)控手冊(cè)更多關(guān)于環(huán)境采樣的信息，請(qǐng)見(jiàn)如下的參考文獻(xiàn)，或參考為了測(cè)定單位采樣面積的李斯特菌數(shù)，你需要記錄以下數(shù)據(jù)：1. 采樣面積2. 濕潤(rùn)采樣設(shè)備的液體量3. 可選添加緩沖蛋白胨水的體積4. 接種體積5. 測(cè)試片上的李斯特菌數(shù)運(yùn)用如下的等式和表格來(lái)計(jì)算單位采樣面積的菌落數(shù) (CFU/area sampled) 。實(shí)例請(qǐng)見(jiàn)下頁(yè)。方法的詳細(xì) 內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)包裝插件

13、和操作說(shuō)明。你也可以測(cè)定單位樣本的結(jié)果，如CFU/ 每份排放水。或CFU/面積 (菌落數(shù) mL 濕潤(rùn)液 + mL BPW 3 mL) 采樣面積 環(huán)A境.定濕量潤(rùn)采液樣和符合B以PW下文的獻(xiàn)總：體積 (mL)B. 接種S量tand(marLd) M e t h o d s f o r t h e E x a m i n a t i o n o f D a ir y P r o d u c3t s, Section 3.7D, American Public Health C. A 除As以socBia tion, Washington D. C., 1992.D. 測(cè)試C片om上p的en菌diu

14、落m數(shù) of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Section 3.512 and 3.521,E.3FM. 采樣面 積PetrifilG. E 除以 FrDic an Public Health Association, Washington D. C., 2001TM Environmental Listeria PlateG 橫線等于 CFU/ 面積定量判讀3. 將海綿放回?zé)o菌容2. 修復(fù)完成后，吸取14. 用 10 mL 液體濕潤(rùn)海綿，涂抹采樣總培養(yǎng)后，進(jìn)行菌落 計(jì)數(shù) ( 在本例中，假A. 濕潤(rùn)液和3 m L 混 合 液 接 種 5 到+ 10 = 15菌落數(shù)為 90)。例面：，涂如抹面棒積采為樣方英尺 (1 ft 2)4. 用 1 mL 液體濕潤(rùn)涂 1. 將涂抹棒放回?zé)o菌容 3. 修復(fù)完成后，吸取 抹頭，涂抹采樣A. 濕潤(rùn)液和 B器PW中，的