1、.countstar rigel全自動(dòng)細(xì)胞熒光分析儀對pbmc細(xì)胞精確計(jì)數(shù)及活力分析一、pbmc細(xì)胞濃度與活力分析的重要性外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,pbmc) 即外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和其他少量細(xì)胞類型，是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞組成。pbmc 是免疫學(xué)、抗體藥物研發(fā)、傳染病、惡性血液腫瘤疾病、干細(xì)胞移植、疫苗開發(fā)以及移植免疫等領(lǐng)域?qū)W者經(jīng)常需要的研究原材料。pbmc的濃度、活力、免疫細(xì)胞亞型分布及細(xì)胞因子等都是監(jiān)測機(jī)體免疫狀態(tài)及其他領(lǐng)域研究的重要指標(biāo)。所以如何精確計(jì)數(shù)pbmc細(xì)胞在

2、科研和臨床上都有重要的意義。二、目前pbmc細(xì)胞分離、計(jì)數(shù)的方法與痛點(diǎn)1、根據(jù)外周血各種血細(xì)胞的密度不相同，pbmc細(xì)胞分離方法主要密度梯度離心法，然后根據(jù)實(shí)際情況添加紅細(xì)胞裂解液除去部分殘留紅細(xì)胞。2、由于個(gè)體及分離效果差異，導(dǎo)致分離后的pbmc樣本中紅細(xì)胞和血小板的殘留程度不同。用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)是最常見的一種計(jì)數(shù)方法，由于顯微鏡下觀察紅細(xì)胞與pbmc細(xì)胞大小差異不大，肉眼很難辨別，經(jīng)驗(yàn)豐富的操作者需通過不停調(diào)節(jié)焦距觀察紅細(xì)胞的雙凹狀的形態(tài)來區(qū)分。這個(gè)過程無疑造成了非常大的工作量及誤差。3、目前常用的計(jì)數(shù)方法包括血球計(jì)數(shù)板臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法、庫爾特法及熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)法。其中臺(tái)盼藍(lán)染色法

3、與庫爾特法均無法很好的區(qū)分紅細(xì)胞與白細(xì)胞。三、countstar rigel細(xì)胞熒光分析儀對pbmc細(xì)胞精確計(jì)數(shù)及活力分析 原理：利用ao/pi雙熒光染色法進(jìn)行pbmc死活細(xì)胞精確計(jì)數(shù)。吖啶橙（acridine orange,ao）和碘化丙啶（propidiumiodide,pi）都可以對死、活細(xì)胞核中的dna進(jìn)行染色。所以該方法可以排除無核的細(xì)胞碎片、成熟的血小板及紅細(xì)胞干擾，從而更準(zhǔn)確計(jì)數(shù)pbmc細(xì)胞。（1） countstar rigel 對pbmc的計(jì)數(shù)結(jié)果精品.figure 1分離后pbmc細(xì)胞計(jì)數(shù)圖片figure 2分離后pbmc細(xì)胞梯度稀釋后線性結(jié)果精品.（2） countsta

4、r rigel對全血樣本中pbmc細(xì)胞濃度及活率進(jìn)行分析table 1全血樣本濃度及活率重復(fù)性檢測結(jié)果全血a樣本活率總pbmc細(xì)胞濃度活pbmc細(xì)胞濃度199.871.24e+061.24e+06299.741.23e+061.23e+06399.751.18e+061.18e+06499.11.18e+061.17e+06599.741.19e+061.19e+06cv%0.28%2.14%2.32%figure 3全血pbmc細(xì)胞計(jì)數(shù)圖片四、總結(jié)countstar rigel：1、快速、精確計(jì)數(shù)和活率檢測；2、 高重復(fù)性；精品.3、ccd的相機(jī)，可以有效排除背景雜信號干擾；4、同時(shí)拍攝明場和熒光場的圖片，相結(jié)合起來驗(yàn)證熒光結(jié)果；5、