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文檔簡介

1、實驗七微生物的紫外誘變,一、目的要求,掌握紫外線誘發(fā)微生物突變的基本原理。 掌握選育高產(chǎn)突變型菌株的方法。,二、基本原理,紫外線是一種最常用的物理誘變因素。它的主要作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上兩個相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復制和堿基的正常配對，從而引起突變。 紫外線照射引起的DNA損傷，可由光復活酶的作用進行修復，使胸腺嘧啶二聚體解開恢復原狀。 為了避免光復活，用紫外線照射處理時以及處理后的操作應在紅光下進行，并將照射處理后的微生物放在暗處培養(yǎng)。,三、實驗器材,菌株 枯草芽孢桿菌 培養(yǎng)基 淀粉培養(yǎng)基 溶液或試劑 碘液，無菌生理鹽水，盛4.5ml無菌水試管 儀器或其他用具

2、1ml無菌吸管，玻璃涂布棒，血細胞計數(shù)板，顯微鏡，紫外燈（15W），磁力攪拌器，臺式離心機，振蕩混合器等。,四、操作步驟,制備菌懸液 取枯草芽孢桿菌48h斜面培養(yǎng)物4-5支用10ml無菌生理鹽水洗下菌苔倒入無菌大試管振蕩30s，打散菌塊3000r/min離心10min棄上清液用無菌生理鹽水洗滌菌體2-3次制成菌懸液用顯微鏡直接計數(shù)法調整細胞濃度108個/ml。（老師完成） 制作淀粉瓊脂培養(yǎng)基平板,紫外線處理 打開紫外燈預熱20min。 各取3ml菌懸液，分別加入2套6cm無菌平皿中，并放入一根無菌磁力棒。 將平皿置于磁力攪拌器上，打開皿蓋，在距離30cm，15W的紫外燈下分別攪拌照射1min和

3、3min。蓋上皿蓋，關閉紫外燈。 稀釋：把照射過的菌懸液用無菌水稀釋成10-1-10-6； 涂平板：取 10-4、10-5、10-6稀釋液和未經(jīng)照射的稀釋液（對照）各0.1ml涂平板，重復三個平板； 培養(yǎng)：用黑布或紙包好，37培養(yǎng)48h。,分別計算紫外線處理1min和3min后的存活率和致死率 存活率（%）= 致死率（%）=,觀察誘變效應 選取cfu數(shù)在5-6個左右的處理后涂布的平板觀察誘變效應。 分別向平板內加碘液數(shù)滴，在菌落周圍出現(xiàn)透明圈。 分別測量透明圈直徑與菌落直徑并計算其比值（HC比值）。 選取HC比值大的菌落轉接到試管斜面上培養(yǎng)，可用于復篩。,五、注意事項,紫外線照射計時從開蓋起，加蓋止； 先開磁力攪拌器，再開蓋照射，使菌懸液中的細胞接受均等照射； 從紫外線照射處理開始，直到涂布完平板的所有操作步驟都需在紅光下進行。,六、實驗結果,觀察誘變效應，計算存活率、致死率、HC比值。結果填入1.(1)(2)。,六、實驗結果,七、思考題,.(2)、(3) 用紫外線進行誘變時，為什么要打開皿蓋？為什么要在紅光下操作，暗環(huán)境下培養(yǎng)？ 分析你的實驗結果：

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