.,1,實(shí)驗(yàn)三食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè),檢測(cè)方法：1、參照GB4789.10-2010金黃色葡萄球菌檢測(cè)2、食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)實(shí)驗(yàn)三十食品中金黃色葡萄球菌檢測(cè),.,2,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)原理；2、掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點(diǎn)和檢驗(yàn)方法,.,3,金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬的一個(gè)種，可引起皮膚組織炎癥，還能產(chǎn)生腸毒素，如果在食品中大量生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生毒素，可引起食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對(duì)人的健康是一種潛在的危險(xiǎn)，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數(shù)量具有實(shí)際意義。,.,4,金黃色葡萄球菌性質(zhì)及培養(yǎng)特征1、革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列為葡萄狀，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜。,金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片,.,5,經(jīng)1824小時(shí)培養(yǎng)后形成圓形隆起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤(rùn)、不透明的菌落，直徑為12mm，不同菌株可產(chǎn)生不同色素，出現(xiàn)金黃色、白色、檸檬色。大腸桿菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的菌落特征：中等大小、圓形、表面光滑、無(wú)色半透明、邊緣整齊,2、在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的菌落特征：,.,6,金黃色葡萄球菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的菌落,.,7,3、具有高耐鹽性，在7.5%氯化鈉肉湯中呈現(xiàn)渾濁生長(zhǎng)；4、在BP平板上菌落特征：圓形、光滑凸起，濕潤(rùn)，直徑為23mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈；5、在血平板上菌落特征：呈金黃色，有時(shí)也呈白色，大而凸起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈；,.,8,BP培養(yǎng)基上的菌落,.,9,血平板上的菌落,.,10,6、血漿凝固酶試驗(yàn),致病性菌株可以產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿發(fā)生凝固。,.,11,原理：鑒定食品中金黃色葡萄球菌：根據(jù)以上性質(zhì)逐步確定。鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝血漿酶，使血漿凝固；多數(shù)金黃色葡萄球菌致病菌株能產(chǎn)生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)溶血反應(yīng)。,.,12,實(shí)驗(yàn)材料：1、樣品：（1）含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的水樣（2）鮮奶2、培養(yǎng)基與試劑：7.5%氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、Baird-Parker氏培養(yǎng)基、無(wú)菌水、革蘭氏染色劑3、器具及其他用品：顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管、無(wú)菌平皿、載玻片、涂布器、酒精燈、接種環(huán)等,.,13,流程,.,14,1、增菌培養(yǎng)法,1.1檢樣處理：無(wú)菌操作取樣25g（mL）加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或均質(zhì)制成混懸液。1.2增菌及分離培養(yǎng)：吸取5mL上述混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內(nèi)，361培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)種血平板和BP平板，361培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時(shí)為白色）菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。,.,15,1.3兔血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取1：4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置361溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)與已知陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株及肉湯作為對(duì)照。,.,16,2.1梯度稀釋轉(zhuǎn)種BP平板吸取上述1：10混懸液，進(jìn)行10倍第次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液1mL，分別加入三塊BP平板，每個(gè)平板接種量分別為0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用滅菌涂布器涂布整個(gè)平板，如水分多不易吸收，可將平板放在3611h，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置361培養(yǎng)。,2、直接計(jì)數(shù)方法,.,17,2.2轉(zhuǎn)種血平板在三個(gè)平板上尋找周圍有渾濁帶的黑色菌落，并從中任選五個(gè)菌落，分別接種血平板，于361培養(yǎng)24h后進(jìn)行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗(yàn)，步驟同增菌培養(yǎng)方法。,.,18,2.3菌落計(jì)數(shù)將三個(gè)平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽(yáng)性數(shù)，除以5，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。,.,19,結(jié)果,1.根據(jù)形態(tài)特征、血平板情況以及血漿凝固酶試驗(yàn)，判別檢樣中是否含有金黃色葡萄球菌。2.估算檢樣中金黃色葡萄球菌的含量。,.,20,GB4789.10-2010,第一法金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn),.,21,GB4789.10-2010,第二法金黃色葡萄球菌Baird-Parker平板計(jì)數(shù),.,22,GB4789.10-2010,第三法金黃色葡萄球菌MPN計(jì)數(shù),.,23,三法特點(diǎn)及適用性：,第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗(yàn)第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的