謝沐風上海市食品藥品檢驗所xiemufeng 原料藥注冊與生產現場檢查培訓班 請大家將手機調至 振動 檔 謝謝您的配合 工作簡歷 1998年 至今在本所化學室工作 經歷了 1998年 2002年的強仿期 和 2003 2006仿制藥瘋狂期 2003年8月 2004年2月赴日本國立醫(yī)藥品食品衛(wèi)生研究所藥品部 相當于我國中檢所化藥室 進修 發(fā)表了多篇方法類 思路類文章 引起業(yè)內矚目與同仁共鳴 1 如何建立HPLC TLC 法測定有關物質方法 2 如何建立HPLC法測定含量方法 與企業(yè)和研發(fā)公司交流經歷走訪 核查過全國上百家制藥企業(yè) 時常與同仁們相互交流 切磋 深諳目前國內制藥企業(yè)技術現狀與薄弱環(huán)節(jié) 2009年伊始 在國內知名藥學網站 丁香園 藥物制劑版 上創(chuàng)立 溶出度研究 子版 引起業(yè)內矚目 我們已經走得太遠 以至于忘記了為什么而出發(fā) 黎巴嫩著名詩人紀伯倫 1883 1931 工作感悟 本人體會 工作中一定要注重思考 帶著問題去學習 有的放矢地去攻讀 多觀察 多領會 日積月累 潛移默化之中就會水到渠成 思維要開放 活躍 不要固步自封 按部就班 因循守舊 一定要不斷思考 注意查詢文獻 收集各方面信息 培養(yǎng)自身的專業(yè)素養(yǎng)與專業(yè)敏感度 不要怕遇到問題 越是遇到問題 將其解決 就越能不斷提高與進步 注重培養(yǎng)個人的專業(yè)素養(yǎng)與敏感度 維普數據庫丁香園專業(yè)網站 切忌 閉門造車 悶頭蠻干 很榮幸此次來到京城與各位同仁相互交流 學習 感謝國家藥監(jiān)局培訓中心搭建平臺 寄望大家多思考 多提問 寄望能學以致用 為大家工作獻計獻策 呈上綿薄之力 溶解度 會因結晶溶劑的不同導致結果的差異性 一般不做硬性規(guī)定 酌情處理 只是操作時樣品一定要研細后進行 晶型 如研究表明 各晶型具有相同表觀溶解度 或者各晶型皆易溶于水 此時各晶型一般不會影響藥物的體內生物利用度 便無需擬定 如各晶型具有不同表觀溶解度 即有屬于低溶解性的晶型 此時則應在質量標準中擬定晶型檢測 一般采用X 射線衍射法 有時亦能采用紅外予以明辨 列舉質量標準中已有擬訂的 阿德福韋酯 和 那格列奈 實例 儀器校正 紅外鑒別 觀測2500cm 1 400cm 1波數段間8大主峰波數 峰間高低可以不一 個別小峰允許存在 是雜質存在的體現 熒光分析法 響應值不穩(wěn)定 有時會波動較大 不建議使用 熔點測定法 試驗結束后切勿立即切斷電源 設置為室溫 使其自然降溫 之后再關閉電源 熔距越短或終熔點越接近高限 純度越高 紫外 可見分光光度法 比色法測定時 一定要平行操作 測定時迅即完成 切忌等待吸收度值穩(wěn)定后再行記錄 旋光度測定法 溫控尤為重要 先將溶劑置于該溫度水浴中 隨后采用該溶劑快速配制溶液 定容后立即測定 氧瓶燃燒法 樣品一定要燃燒完全 若氧氣充滿 尚無法燃盡 可將樣品量減半 在其后的測定中再將濃度增加一倍 即可 溶液的澄清度與顏色 氯化物 硫酸鹽 重金屬檢查等 建議配制梯度對照液 這樣可對樣品進行一個全面 綜合分析 熾灼殘渣檢查法 熾灼后放置于干燥器內的時間不得少于1小時 否則稱重不穩(wěn) 崩解時限 膠囊劑有時會出現膠囊殼存留于網底的情況 可將囊殼取出 若其中無內容物 亦可判斷為合格 干燥失重和水分 1 一些緩慢降解的物質 不易采用恒重 規(guī)定時間 一般105 3小時肯定已可以 典型案例 鹽酸西布曲明 見下 2 帶有結晶水的藥物 盡量采用卡氏法測定 其中的環(huán)丁基較為 脆弱 不斷緩慢分解 應采用卡氏法測定 殘留溶劑研究思路 研究原則 合成過程中使用到的有機溶劑均需建立測定方法 并予以研究測定 觀測樣品測定結果 申報3批樣品測定結果說明工藝穩(wěn)定性 質量標準擬定原則 除第一類溶劑外 未檢出的溶劑 可以不擬定 僅擬定最后一步重結晶溶劑 測定方法 根據研究檢測結果 質量標準方法完全可以與研究時方法不同 殘留溶劑研究思路 質量標準擬定原則 如僅殘留有重結晶溶劑 且為低沸點 如乙醇 丙酮等 完全可采用105 干燥失重方法予以替代 從而省略掉氣相測定 且干燥失重限度可酌情放寬 質量標準是一個不斷完善的過程 列舉 自套枷鎖 事倍功半 實例 列舉阿法骨化醇無需研究測定實例 氣相色譜法測定時應注意事項 1 強烈建議男同志從事此項工作 將對照品溶液濃度配制為限度點 對于二氯甲烷 三氯甲烷采用氫火焰檢測器 FID 勉為其難 應采用電子捕獲檢測器 ECD 如要強行檢測 可采用的辦法有 直接進樣 加大流速 使峰形便尖銳 從而提高峰面積積分精密度 供試品溶液一定要全部溶解 對于一些高沸點和低沸點的殘留溶劑 不推薦采用頂空法進樣 盡可能建立內標法 而非外標法 氣相色譜法測定時應注意事項 2 對照品溶液配制法 引申至對照品為油狀時 直接進樣法與頂空法的優(yōu)缺點比較 定性時 多根色譜柱使用的意義 色譜柱選擇的一定要遵循 極性相似 原理 直接法進樣樣品溶液后 進樣針極易堵塞 自動進樣器時設定幾針溶劑 沖洗時多洗幾次 試驗結束后用乙醇浸泡進樣針 容量分析法測定含量 1 滴定液的標化與貯藏 氫氧化鈉滴定液標化后一定要分成小塑料瓶 密閉包裝 使用時 酌情 針對放置時間和樣品之類 再標化一份即可 因其極易吸收空氣中的二氧化碳 使校正因子降低 消耗過多滴定液 從而使結果偏高 有時會出現高于101 0 情況 高氯酸滴定液應臨用現標 使用當天標化三份 取均值即可 不常用滴定液建議購買 如甲醇鈉滴定液等 容量分析法測定含量 2 滴定液的消耗體積 針對不同消耗體積采用不同規(guī)格滴定管 10 26 50ml 對于消耗量小于誤差要求的最小體積時 可采用稀釋滴定液 增加消耗體積的辦法 或采用電位滴定儀 3 指示劑使用注意點部分指示液配制后 如放置時間過久 其變色會遲鈍 導致消耗體積過大 結果偏高 故配制后酌情放入冰箱中 容量分析法測定含量 4 操作中的注意事項對于采用指示劑法測定的操作 只要有空白試驗 樣品變色后的色澤一定要與空白色澤一致 以消除系統(tǒng)誤差 5 容量分析法與HPLC法介紹 引申至對照品質量標準 容量分析法 專屬性差 人為因素較強 但省時省力 HPLC法 專屬性強 但定量結果會因波長不同存在較大偏差 因雜質與主成分的響應因子不同 電位滴定法測定含量 對于指示劑變色難以辨明時 樣品溶液變色存在干擾 有輔料或沉淀存在等 消耗體積很少 無法采用滴定管定量 雜質和主成分對照品的標化方法 設定的滴定參數應使滴定曲線呈現平滑 以避免滴定終點的誤判 即如何確定合適的 閾值 先全程滴定 根據突躍變化情況 確定閾值后再次滴定 尤其是進行兩個突躍點的滴定時 引申至新版藥典 高效液相色譜法應用時經常出現的問題 柱溫箱一定要配制 試驗溫度建議在30 50 清洗溫度可高于試驗溫度5 色譜柱清洗 對于正相 實驗結束用流動相再沖洗半小時即可 對于反相 除非流動相采用單純的甲醇 乙腈 水 其他所有流動相皆建議先用純水沖洗半小時 流速1 0ml min 再改用20 甲醇沖洗半小時 隨后取下 兩頭密閉即可 絕不推薦 液相色譜儀 絕不建議為節(jié)約乙腈 甲醇 而采用兩個泵 將水相與有機相分別注入混合的方式 即便配置了脫氣機 一定要將兩相按比例混合后脫氣過濾 采用一個泵注入 且清洗時一定就清洗使用泵 不建議采用另一個泵將清洗液注入 重點講述 過濾膜一定要采用混相膜 正相流動相無需過濾 混合均勻后超聲即可 高效液相色譜法應用時經常出現的問題 梯度洗脫時 最理想方式 A相位高比例的水相兌低比例的有機相 B相為低比例的水相兌高比例的有機相 其次 A相位高比例的水相兌低比例的有機相 B相皆為有機相 絕不建議A相位純水相 B相位純有機相 即便質量標準如此擬定 采用一元一次函數 將其轉換成第二種情況 否則極易出現基線飄動 無法準確積分的現象 高效液相色譜法應用時經常出現的問題 梯度洗脫時 必須先行測定空白溶劑峰 應基線平穩(wěn) 溶劑峰出峰在前 確認色譜柱內清洗干凈后再測定樣品 以確保有關物質檢測時 雜質的準確測定 高效液相色譜法應用時經常出現的問題 高效液相色譜法測定含量 1 對照品溶液配制2份 2份粉末 分別進樣3針 計算校正因子f C A 隨后計算f的RSD 小于2 0 即認為2份對照品溶液配制均無誤 且儀器已穩(wěn)定 取f均值測定樣品 2 樣品溶液亦配制2份 每份進樣一針 兩份百分含量差值在 2 0 以內即可 高效液相色譜法測定含量 3 待全部樣品檢測結束后 無所謂n針 即便運轉了一天 亦無須擔憂 任取一份對照溶液回進一針 計算含量 濃度 應在理論濃度偏差的 2 0 以內 便可確保檢測過程中儀器性能的穩(wěn)定 4 如原方法為內標法 秉承藥審中心提出的 仿產品不是仿標準 理念 一定要改為外標法 除非前處理極為繁瑣 較易損失時 含量測定濃度和色譜條件如何建立濃度不要與有關物質濃度一致 一般為1 10 1 50 便于過濾 對于制劑 雜質干擾減少 積分準確 色譜條件可與有關物質不一致 如有關物質為梯度洗脫或保留時間很長 更加科學化 人性化 波長不是最大吸收波長亦可 選用末端吸收 要注意樣品粉末占有一定體積時引起的誤差 薄層色譜法測定有關物質 1 盡可能使用商品化薄層板 不建議自行鋪制 2 設置梯度對照 1 0 0 5 0 2 和0 1 通過點樣量來實現 方便快捷 事半功倍 實現 半定量 3 0 1 斑點如顯現不出 加大點樣量 4 主斑點如超載 斷腰 可適當減小點樣量 5 顯色劑盡可能新鮮配制 6 觀測時 建議增加翻轉觀測 即透過玻璃面觀測 高效液相色譜法測定有關物質 1 每批樣品配制1份 即可 2 多批樣品同時檢測時 選用粉末量最少的樣品稀釋制成自身對照溶液即可 絕對無需每一樣品均稀釋成自身對照溶液 3 對照溶液連續(xù)進樣3針 計算主峰峰面積的RSD 小于2 0 即認為儀器穩(wěn)定 積分無誤 取峰面積均值用于樣品雜質峰比較 高效液相色譜法測定有關物質 4 測定空白溶劑 梯度洗脫時一定要先行測定 5 每一樣品進樣一針 對雜質峰進行積分 積分時注意事項 最小峰面積 設定為對照溶液主峰面積的1 10 1 50 講述原理 斜率與峰寬 與對照溶液積分參數相同 技巧 對照溶液稀釋后 若主峰面積呈線性 一般均呈線性 歸一化法計算結果與自身對照法測定結果基本一致 相差在0 02 以內 可用歸一化直接觀測 方法學驗證中各項指標的深度剖析 一 線性試驗 主成分含量測定以測定濃度為100 50 120 之間選取5個點即可 溶出 釋放 度測定以釋放量的10 120 間選取5個點即可 雜質含量用雜質對照品準確測定以雜質限度為100 50 120 之間選取5個點即可 測定結果 1 闡述如何看待截距和斜率 如何應用 2 誤差在哪里 應用時的注意事項 3 為什么沒有不成線性的 通常C H O N結構 紫外監(jiān)測器決定 個別化學鍵所致 梯度洗脫時 有時會出現不成線性 4 都成線性 為何還要做 最小二乘法的原理知曉 何種情況不呈線性 唑來磷酸結構式 不呈線性情況 1 分子結構式怪異 如唑來膦酸 2 梯度洗脫 所以此時規(guī)定柱效無意義 3 主成分在色譜柱上幾乎無保留 保留時間為 死時間 如氫溴酸右美沙芬的測定 4 濃度過高時 檢測器或色譜柱超載 引申使用 1 有關物質測定歸一化法和自身對照法的相互妙用 2 緩釋制劑溶出度測定 對照品濃度設定為中間濃度 舉例說明 3 回收率試驗為何做80 120 即可 亦及樣品濃度與對照品濃度接近到何等程度的理解 4 國內只注重相關系數 不注重截距 二 精密度試驗 重復性試驗 連續(xù)進樣6次 中間精密度試驗和重現性試驗通過 耐用性試驗中的溶液穩(wěn)定性試驗 來體現 濃度極低時才會不理想 加大進樣量 色譜峰形極為重要 對稱性 柱效等參數 加大柱溫 增加流動相中有機相比例 使被測物質峰盡快出峰 三 準確度試驗用回收率來衡量 作法 在80 120 間選擇3點或5點 原因是由外標一點法決定的 已知雜質 且有雜質對照品的 可采用加入法 即加樣回收率來評價 一般情況下 只要空白輔料無干擾 回收率均是良好的 四 專屬性 有關物質為主 其他檢測項目 含量 基本上均參照有關物質 有關物質的驗證 采用中間體和降解產物 確認結構后人工合成 來驗證與主成分的分離 詳述強破壞試驗的宗旨與內涵 系統(tǒng)適用性試驗用溶液配制法在100 濃度的主成分溶液中加入1 濃度的雜質對照品 以模擬樣品中有可能存在的狀態(tài) 介紹配制方法 先配制雜質貯備液 再用供試品溶液 或濃的對照品溶液 來稀釋 簡便 易行 存在問題 配制相同濃度 測定樣品時 主成分峰驟然加大 將雜質峰覆蓋 專屬性試驗驗證圖譜 強破壞試驗的目的驗證藥品在遭遇了極端的氣候環(huán)境條件下產生的雜質 在所建立的色譜條件下是否能夠分離 測定 破壞追求的目標 可產生降解產物的條件下 主成分保留70 80 量 同時采用DAD檢測主峰純度 驗證其中不含雜質峰 保留時間的設定經過上述方法學認證后 確定供試品溶液的保留時間 通常以洗脫出全部雜質和經強力破壞試驗出的雜質 規(guī)定至主成分保留時間的幾倍為止 強力破壞試驗 世界衛(wèi)生組織公布的最新方法 熱破壞取原料 加溶劑配成1 1溶液后 在60 放置1 10天 高濕破壞取原料固體適量 放置在75 濕度下1 10天 強酸破壞取原料適量 用0 1mol L鹽酸溶液配制成2 1溶液后 放置1 10天 強堿破壞取原料適量 用0 1mol L氫氧化鈉溶液配制成2 1溶液后 放置1 10天 氧化破壞取原料適量 用3 過氧化氫溶液配制成1 1溶液后 放置1 3天 光解破壞取原料適量 置紫外燈下放置1 10天 金屬離子破壞加入0 05mol LFe2 或Cu2 四 檢測限 信噪比的三倍 純屬 紙上談兵 實際測定中根本用不上 是相對值 不是絕對值 是相對于供試品溶液濃度的多少分之一而言 一般至少要在5000倍以上 1 最大進樣量 2 有關物質測定供試品溶液濃度 3 含量測定濃度 4 有關物質測定自身稀釋對照溶液濃度 5 最低檢出限五者間的比例關系 檢測波長的確定與雜質校正因子的引入 原理 通常選取主成分最大吸收波長 該波長下 由于各物質結構式不同 當用峰面積表達含量或濃度時會有偏差 故必須驗證各雜質的響應校正因子 驗證法 取已知純度系數的雜質對照品 無需很純 與主成分對照品 均配制成1 0 濃度的混合對照溶液 連續(xù)進樣6針 取平均峰面積計算校正因子 質量標準中擬定法 該雜質的定位強烈建議采用固定型號與規(guī)格的色譜柱 即研究用色譜柱 進行 雜質含量引入校正因子即可 列舉實例 方法學認證中的耐受性試驗 是指更換試驗因素 如不同人員 不同儀器 不同色譜柱型號 廠家 不同試劑等因素 這一點才是真正至關重要的 認證時不可能面面俱到 通過質量標準中系統(tǒng)適用性來完成 申報資料中以溶液穩(wěn)定性來作為該項驗證的主要內容即可 溶液穩(wěn)定性的全面判定不能單從主成分入手 還要注意所有組分的百分比變化 絕對值變化 對照品的使用與管理 稱量 固體 采用的稱量紙一定要小 一般為購買來的硫酸紙1 4即可 如稱過量 可取回 液體 采用倒稱法 將吸管或藥勺同對照品一并稱量 對于價格昂貴或量極少的對照品 可考慮將配制好的對照品溶液貯藏于冰箱內放置 在一定時間內使用 但該時間段必須經過驗證 對照品溶液貯藏時間驗證方法 0天配制時 取濃度高的溶液 最好不低于有關物質測定時的供試品溶液濃度 進樣測定 觀測雜質與主成分情況 用歸一化法 每隔一段時間再取濃度高的溶液測定 依法觀察 在三或六個月節(jié)點 另配制一份對照品溶液 測定前兩份對照品含量 如在 2 0 以內 則證明對照品溶液濃度沒有改變 可在該時間段內使用 質量標準中制訂有關物質的原則 原料藥必須擬定 即便14號資料穩(wěn)定性考核結果極其良好 雜質沒有任何變化 固體制劑酌情擬定 重點關注降解雜質 如果原料制成制劑和制劑有效期內雜質沒有增加 即可不制訂 注射劑迫于目前形勢 一定要擬定 即便14號資料中雜質沒有任何變化 也要擬定 否則極易被 發(fā)補 質量標準中的系統(tǒng)適用性試驗如何擬定 柱效2500即可 沒必要更高 否則作繭自縛 采用雜質對照品驗證分離度 如該雜質僅用于定位 則無需純度很高 該雜質的選擇一者可為目標降解物 分離度要求根據研究時的具體情況擬定 二者選用與主成分峰最難分離雜質 采用強破壞試驗驗證 通過對比破壞前產生的雜質峰與主成分峰的分離情況 質量標準中的系統(tǒng)適用性試驗如何擬定 如 國家藥品標準WS1 X 350 2004Z 注射用奧美拉唑鈉的質量標準中規(guī)定 取供試品溶液 加3 過氧化氫溶液3ml 放置10分鐘后 再加流動相稀釋至刻度 搖勻 作為系統(tǒng)適用性驗證用溶液 色譜圖中與主成分峰相鄰的氧化降解產物峰與主成分峰的分離度應符合規(guī)定 典型圖譜分析 復方制劑雜質制訂原則與技巧 切勿采用自身對照法 用對照溶液主成分峰面積和與供試品溶液中雜質峰面積和進行比較 因無法進行雜質準確歸屬 導致誤判 通過查詢各組分單方制劑質量標準 知曉目標降解雜質 如氫氯噻嗪 重點關注降解雜質 通過14號穩(wěn)定性考核資料得以知曉 質量標準中最好采用雜質對照品法予以定量測定 或針對主成分歸屬 采用自身對照法 有時需加入校正因子 14號穩(wěn)定性考核資料中未有變化的雜質或雜質譜通過各時間段圖譜的比較說明 以及與參比制劑圖譜的比較說明 質量標準可不擬定 制劑檢測時如有輔料峰存在如何處理 輔料峰保留時間均較短 如在溶劑峰前 可在質量標準中規(guī)定 扣除溶劑峰與溶劑峰前的輔料峰 如輔料峰在溶劑峰后 但也較為靠前 在第一個雜質峰前 可通過設定 扣除主峰保留時間X倍前的輔料峰 X倍 的確定一者建議至少測試市場上3個主流品牌 二者在質量標準中指定色譜柱具體型號與規(guī)格 推薦后者 如輔料峰夾雜在各峰間 探明為何輔料后 質量標準中如下擬定 取X輔料適量 用溶劑配制成一定濃度后進樣測定 供試品溶液中扣除該峰 分析人員工作的最高境界 分析人員的最高境界不是做得越多越好 而是采用最少的人力 物力和財力獲得的數據在工作要求的誤差范圍內即可 即 事半功倍 之效 新藥申報資料中的注意事項 1 首要時清晰 明了 代表了一個企業(yè)技術水準與形象 2 為他人著想 是給評審老師看的 不是給自己看的 現在藥檢所和審評中心將有時間和精力來看了 3 10號資料中關鍵圖譜一定要附上 含量測定 有關物質 溶出度紫外掃描圖譜等 參考文獻等 4 11號資料中的參考文獻 起草說明 一定要詳細闡述 文字撰寫一定要清楚 不要怕寫得多 要清楚詳細 讓他人一幕了然 清晰明了 5 12號資料中的具體數值 6 14號資料中 需檢測的項目不要遺漏調 不同的劑型一定要深入研究 作為企業(yè)的思考 如何從全國眾多的仿制藥企業(yè)中脫穎而出 市場銷售的切入點 是以價格取勝 還是以技術取勝 與其他各廠家產品的比較 介紹以色列和印度的作法 扎扎實實地做好仿制藥 做好 普藥 國內有廠家在進行中 對于企業(yè)界寄語 如何脫穎而出 第一步 每一產品 劑型皆有其核心與靈魂性評價指標 企業(yè)可通過對比現行國內質量標準中這些指標與國外同品種質量標準找到差距 且必須購買來原研產品 針對以上各關鍵性評價指標進行對比研究 發(fā)現自身產品內在品質上存在的不足 隨后有的放矢地進行 二次開發(fā) 重新