專題整合 提取DNA利用的是DNA RNA 蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的理化性質(zhì)的差異 具體地說 DNA與其他物質(zhì)在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 再通過冷酒精進(jìn)一步去除其他雜質(zhì) 另外DNA對高溫和洗滌劑的耐受性較高 不易被破壞 鑒定時可采用二苯胺試劑沸水浴加熱呈藍(lán)色來判斷DNA的存在 DNA與蛋白質(zhì)的提取 提取與分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)的分子形狀和大小 所帶電荷的性質(zhì)和多少 溶解度 吸附性質(zhì)以及對其他分子的親和力等理化性質(zhì) 將不同種類的蛋白質(zhì)分離開 凝膠色譜法可以將相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)有效分離 DNA與蛋白質(zhì)的提取技術(shù)比較電泳法可將帶有不同電荷的蛋白質(zhì)分離 PCR技術(shù)與凝膠色譜法的比較 DNA粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較 典例1 下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料 操作及其作用的表述 正確的是 解析在DNA的粗提取與鑒定實驗中 檸檬酸鈉可以防止血液凝固 雞血中加入蒸餾水可以使細(xì)胞膜和核膜破裂 DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 在質(zhì)量濃度為0 14mol LNaCl溶液中溶解度最低 有利于DNA析出 DNA不溶于酒精 可以獲得較純的DNA DNA遇二苯胺 水浴加熱 產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng) 答案C 1 為避免外源DNA等因素的污染 PCR實驗中使用的微量離心管 槍頭 緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌 2 在微量離心管中添加反應(yīng)成分時 每吸取一種試劑后 移液器上的槍頭必須更換 3 所有的成分都加入后 蓋嚴(yán)離心管的蓋子 用手指輕輕彈擊管的側(cè)壁 混勻后離心處理 使反應(yīng)液集中在離心管底部 PCR技術(shù)操作注意事項 4 PCR實驗中應(yīng)注意各種反應(yīng)成分的用量 用量不當(dāng) 漏加成分 PCR程序設(shè)置不當(dāng)?shù)?均有可能導(dǎo)致DNA片段擴(kuò)增的失敗 5 PCR擴(kuò)增的是位于兩種引物之間的DNA片段 合理設(shè)計引物是PCR成功的關(guān)鍵 典例2 PCR實驗中使用的微量離心管 緩沖溶液以及蒸餾水使用前必須進(jìn)行的關(guān)鍵步驟是 A 反復(fù)洗滌B 用酒精擦洗C 高壓滅菌D 在 20 儲存解析為了避免外源DNA等因素的污染 PCR實驗中使用的微量離心管 槍頭 緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌 PCR所用的緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份 并在 20 儲存 使用前 將所需的試劑從冰箱內(nèi)拿出 放在冰塊上緩慢融化 答案C 例1 2011 廣東理綜 5 下列關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述 不正確的是 A 洗滌紅細(xì)胞時 使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂B 豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核 提純時雜蛋白較少C 血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測D 在凝膠色譜法分離過程中 血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動慢 解析豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核 提純時雜蛋白較少 是提純血紅蛋白的理想材料 提純血紅蛋白分四步 紅細(xì)胞的洗滌 血紅蛋白的釋放 分離血紅蛋白溶液 透析 其中洗滌紅細(xì)胞時 要用生理鹽水反復(fù)洗滌 既要將紅細(xì)胞洗滌干凈 又要不破壞紅細(xì)胞 然后再用蒸餾水和甲苯使紅細(xì)胞破裂 釋放出血紅蛋白 分離提純血紅蛋白時用凝膠色譜法 是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì) 相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)移動速度較快 血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區(qū)帶的移動情況 并據(jù)此判斷分離效果 故D不正確 答案D 例2 江蘇高考 下列敘述中錯誤的是 A 改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出B 在沸水浴中 DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色C 用電泳法可分離帶電性質(zhì) 分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)D 用透析法可去除蛋白質(zhì)樣品中的小分子物質(zhì)解析提取DNA的原理 是DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同 DNA在質(zhì)量濃度為0 14mol L的NaCl溶液中溶解度最小 因此如果將NaCl濃度調(diào)至質(zhì)量濃度為0 14mol L會使DNA溶解度變小而呈析出狀態(tài) 答案A 考情分析 本專題內(nèi)容包括DNA粗提取與鑒定 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA 血紅蛋白的