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文檔簡介

實驗二沉淀試驗 1 目的要求1 掌握炭疽桿菌環狀沉淀試驗的操作技術和結果觀察 2 掌握炭疽桿菌瓊脂擴散試驗的基本操作技術和結果觀察 2 沉淀試驗 可溶性抗原 如細菌的外毒素 內毒素 菌體裂解液 病毒 組織浸出液等 與相應的抗體結合后 在適量電解質存在下 形成肉眼可見的白色沉淀 稱為沉淀試驗抗原 沉淀原抗體 沉淀素 3 沉淀試驗的類型 液相沉淀試驗環狀沉淀試驗絮狀沉淀試驗固相沉淀試驗瓊脂凝膠擴散試驗免疫電泳技術 4 實驗材料1 炭疽沉淀血清由獸醫生物藥品廠生產供應 該血清是由免疫的馬血清分離 首免用炭疽芽孢苗 再以炭疽強毒的死菌按3 4d的間隔 進行3 4次加強免疫 抗體效價達到要求時 采血分離血清 2 炭疽沉淀抗原由獸醫生物藥品廠生產供應 5 3 待檢抗原冷浸法用于待檢皮張 檢樣置37C溫箱烘干 高壓滅菌后 剪成小塊稱重 然后加入5 10倍的石炭酸生理鹽水 放室溫浸泡18 24h 用濾紙過濾2 3次 使之呈清朗的液體 即為待檢抗原 熱浸法用于待檢的組織臟器 取懷疑死于炭疽病畜的臟器 脾 肝 腎 血液或肌肉等 放入乳缽內研磨碎 加5 10倍生理鹽水 裝入試管或小三角瓶中 煮沸30 40min 冷卻后用濾紙過濾數次 直到濾液透明 即為待檢抗原 4 生理鹽水 6 一 炭疽環狀沉淀試驗 7 方法與步驟 取3支口徑0 4cm的小試管 在其底部各加約0 1ml的炭疽沉淀血清 取其1支 用毛細管將待檢抗原沿著管壁重疊在炭疽沉淀血清之上 上下兩液間有整齊的界面 注意勿產生氣泡 另2支小試管 一支加炭疽陽性抗原 另一支加生理鹽水 作為對照 如圖 8 2020 1 9 9 炭疽環狀沉淀試驗加樣式意圖 10 結果判定5 10min內判定結果 上下重疊兩液界面上出現乳白色環者 為炭疽陽性 對照組中 加炭疽陽性抗原者應出現白環 而加生理鹽水者應不出現白環 11 二 炭疽瓊脂擴散試驗 12 方法與步驟 瓊脂板制備稱取1g瓊脂粉 加至100ml0 5 石炭酸生理鹽水中 煮沸使之溶解 待溫度降至55 左右時澆玻板 厚約2 3mm左右 打孔在瓊脂凝膠上打梅花孔 孔徑為2mm 中間孔和周圍孔間的距離大約為3mm 加樣中間孔加炭疽沉淀血清 周圍孔中分別加炭疽沉淀抗原 待檢抗原及鹽水 如圖 13 炭疽瓊脂擴散試驗加樣式意圖 14 作用將瓊脂凝膠板放置濕盒中 于37 擴散24 72h 每天觀察結果 觀察三天 結果觀察抗原抗體擴散時 在兩孔間比例最合適的位置出現白色沉淀線 出現

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