第50講微生物的培養技術及應用

課標內容（1）闡明在發酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養物的前提。（2）闡明無

菌技術是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區域不被微生物污染的技術。（3）舉例說明通過

調整培養基的配方可有目的地培養某種微生物。

（4）概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的常用方法。（5）概述

稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數法是測定微生物數量的常用方法。

考點一微生物的基本培養技術

基礎?精細梳理夯實必備知識

1.培養基的配制

⑴培養基的概念、類型和用途

年、人們按照微生物對營養物質的不同需求.配制

里步出供其生長繁殖的營養基質

按物理「液體培養基:工業生產

性質分工..培養基:微生物分離、鑒定、活

匕菌計數

（@）加凝固劑：瑯脂

「選擇培養基：富集、分離出特定的微

按用生物

途分

L鑒別培養基：鑒別不同種類的微生物

用以培養、分離、鑒定、保存微生物或積累其

遮爹一代謝物

⑵培養基的配方

①主要營養物質：水、碳遮、氮源、無機鹽。

②其他條件：pH、特殊營養物質和氧氣。如下表：

微生物乳酸菌霉菌細菌厭氧微生物

特殊需添加維生pH調至酸pH調至中性

無氧

求素性或弱堿性

2.無菌技術

（D目的獲得純凈的培養物。

⑵關鍵防止雜菌污染。

⑶常用方法消毒和滅菌。

(4)無菌技術的主要方法及適用對象(連一連)

［措施;:操作對象;［主要方法)

/.培養基\1①灼燒滅菌

/n.接種環

a.消毒一/②干熱滅菌

力操作者、\<③巴氏消毒

、雙手x

玄④紫外線消毒

b.滅菌/一仁!￥.培養皿〈，

飛⑤化學藥物消毒

、V.無菌室產

7⑥濕熱滅菌

'vi.牛奶/

3.微生物的純培養

(1)概念辨析

接種于培養基內，在合適條件下形成的

［培養物］

"含特定種類微生物的群體

1純￡養物)?由單一個體繁殖所獲得的微生物群體

分散的微生物在適宜的固體培養基表面

［菌落］?或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有二

定形態結構的子細胞群體

［純/養］

?獲得純培養物的過程

(2)酵母菌純培養的操作步驟

|配制|稱取去皮的馬鈴薯200g、切塊一加水1000mL、

|培養基|加熱煮沸f紗布過濾一加20g葡萄糖一加

15~20g瓊脂f用蒸儲水定容至1000mL

貢丫a.培養基滅菌：濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)法

匐fb.培養皿滅菌：干熱滅菌法

條件：待培養基冷卻至5()七左右時，在酒精燈

火焰附近倒平板

b.操作步眺：

c.I、u、m中的滅菌方法是灼燒滅菌

d.N中的操作需要等待培養基冷卻凝固后才能進行

接

種方法：平板劃線法

和

分原理：通過接種環在固體培養基表面連續劃線

離

的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培

養基的表面。經數次劃線后培養，可以分

離得到單菌落

培方法：將接種后的平板和一個未接種的平板倒

養置,放入恒溫培養箱中培養

酵

母條件：組七左右

菌

時間：24-48h

I工情境推理

下圖是采用純化微生物培養的兩種接種方法接種后培養的效果圖，請分析并回答下列問題:

⑴獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？。

⑵某同學在純化土壤中的細菌時，發現培養基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？

應當怎樣操作才可避免此種現象？

⑶接種操作為什么一定要在火焰附近進行？

提示（1）獲得圖A效果的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得圖B效果的接種方法為平板劃線

法

⑵最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區域前未將接種環灼燒滅菌；采取的措施

是增大稀釋倍數或每次劃新區域前先將接種環灼燒滅菌

⑶火焰附近存在著無菌區域

-重點透析

1.倒平板的操作步驟

名師解讀

①培養基要冷卻到50c左右時開始倒平板。溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固。②要使

錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。③倒平板時，

要用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培

養基。④平板冷凝后，要將平板倒置。因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，平板倒置后，既

可避免培養基表面的水分過快地揮發，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。

2.平板劃線法操作步驟

①將接種⑧將平板倒置,

環放在火放入培養箱中

焰上灼燒”培養

直到接種

環的金屬⑦灼燒接種環,

絲燒紅待其冷卻后，從

第一次劃線的

末端開始作第

二次劃線。重

復以上操作，作

第三、四、五次

劃線。注意不要

將最后一次的

劃線與第一次

的劃線相連

⑥在火焰附

近將皿蓋打

開一條縫隙,

，用接種環在

培養基表面

迅速劃三至

五條平行線,

蓋上皿蓋

④在火焰

附近用接⑤將試管口

種環蘸取、通過火焰，

一環菌液并塞上棉塞

(1)實驗成功關鍵點

第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接

種環滅菌，劃線操作結束仍需灼燒接

種環

灼燒接種環之后，要等其冷卻后才能伸

入菌液，以免溫度太高殺死菌種

在作第二次以及其后的劃線操作時，總

是從上一次劃線的末端開始劃線,這樣才

能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而

逐步減少，最終得到由單個細菌繁殖而

II來的菌落

t劃線時最后一區域不要與第一區域相連

劃線用力大小要適當，防止用力過大將

培養基劃破

（2）平板劃線法操作中幾次灼燒接種環的目的

----①----——②—

第一次劃線每次劃線前最后一次劃

前灼燒一灼燒一線結束灼燒

殺死上次劃線殺死接種環上

避免接種環上結束后接種環殘留的菌種，

可能存在的微上殘留的菌種,避免微生物污

生物污染培養使下次劃線的染環境和感染

物菌種均來自上操作者

次劃線的末端

I典例?精心深研提升學科素養

考向1結合培養基的配制和無菌技術，考查科學思維

1.（2024.廣東深圳聯考）某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的固體培養基上輕輕按一

下，然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個手指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按

一下。將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養

24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。下列相關敘述錯誤的是（）

A.這個實驗中需要進行滅菌處理的材料用具有培養皿和培養基等

B."將手指尖在培養基上輕輕按一下”相當于微生物培養中的接種

C.從實驗結果來看，洗手后的操作不會污染培養基

D.培養基中的氮元素是微生物合成蛋白質、核酸等物質所必需的

答案C

解析從實驗結果看，貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少，并不能說明洗手后的操作不

會污染培養基，C錯誤。

2.（2024.西安高新一中模擬）在實驗室培養微生物，需要人為地為微生物提供適宜的營養和環境

條件。下列關于培養基配制的說法正確的是（）

A.培養基中需要碳源、氮源、水和無機鹽齊全

B.培養基中必須添加瓊脂

C.培養基制備中均需調節pH至酸性

D.無論哪種培養基均需要滅菌

答案D

解析培養固氮微生物時，培養基中可以不添加氮源，A錯誤；只有配制固體（或半固體）培養

基時才需要添加瓊脂，B錯誤；適宜的pH是微生物生長的必需條件，因此配制過程中需要調

節pH,培養霉菌時一般需要將pH調至酸性，培養細菌時，一般需要將培養基調至中性或弱

堿性，C錯誤；培養基均需要滅菌，D正確。

考向2結合微生物的純培養，考查科學探究能力

3.（2024.東北育才中學模擬）下列關于“酵母菌的純培養”實驗的敘述，錯誤的是（）

A.馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養成分

B.接種環滅菌時，頂端的環和環后的部分柄均需通過火焰灼燒

C.平板劃線時，接種環應在固體培養基表面輕輕地連續劃線

D.完成平板劃線后，應將平板立刻倒置培養以免污染培養基

答案D

解析馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養成分，如碳源、氮源和無機鹽等,

A正確；接種環滅菌時，頂端的環和環后的部分柄均需通過火焰灼燒，防止雜菌的污染，B正

確；平板劃線時，接種環應在固體培養基表面輕輕地連續劃線，防止劃破培養基表面，影響實

驗結果的觀察，C正確；完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，再將平板倒置培養，D錯誤。

4.（2024.廣州聯考）為純化菌種，在鑒別培養基上劃線接種分解尿素的細菌，培養結果如圖所示。

下列敘述錯誤的是（）

A.為保證無菌操作，接種針、接種環使用前都必須滅菌

B.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整

C.圖中I、II區的細菌數量均太多，應從HI區挑取單菌落

D.該實驗結果出現了單菌落，能達到菌種純化的目的

答案B

解析倒平板后無需晃動，B錯誤。

考點二微生物的選擇培養和計數

I基礎?精細梳理夯實必備知識

1.選擇培養基

在微生物學中，允許特定種類的微生物生長，

?同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基

篩選土壤中分解尿素的細菌的選擇培養基是以

尿素為唯一的氮源的

舉

例,將培養基放在直溫環境中培養，可分離出耐高

溫的微生物

名師解讀

常見選擇培養基舉例

①缺少氮源的培養基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。

②含青霉素的培養基可淘汰細菌，篩選出真菌。

③無有機碳源的培養基可篩選出自養微生物。

2.稀釋涂布平板法

(1)系列稀釋操作

取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。

稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液

(2)涂布平板操作

取().1mL菌液，滴加到

培養基表面。

用涂布器將菌液均勻地涂將涂布器放在火焰上灼

布在培養基表面。涂布時可燒，待酒精燃盡、涂布

轉動培養皿，使涂布均勻。器冷卻后，再進行涂布,

3.微生物的數量測定

(1)利用稀釋涂布平板法計數

①為了保證結果準確，一般選擇菌落數為30?300的平板進行計數，并且在同一稀釋度下，應

至少對、個平板進行重復計數，并求平均值。

②統計結果往往比實際值少。

(2)利用顯微鏡直接計數

①需用特定的細菌計數板或血細胞計數板。

②統計結果一般是活菌數和死菌數的總和。

4.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數的實驗操作

(1)實驗原理

①土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它

分離們能合成麻酶

原理②配制以尿素為唯一氮源的培養基，能夠在該

培養基中生長的細菌就是能分解尿素的細菌

(2)操作步驟

從酸堿度接近中性且潮濕的土壤中取樣。

土壤

-先鏟去表層土，在距地表3~8cm的土壤

取樣

層取樣

選用一定稀釋范圍的稀釋液進行培養，

樣品段保證獲得菌落數在3的平板進行

稀釋

計數

不同種類的微生物，往往需要不同的

培養溫度和培養時間

每隔24h統計一次菌落數目,選取菌落

數目穩定時的記錄作為結果

(3)實驗結果分析與評價

5.分解纖維素的微生物的分離

(1)分離方法與原理

③g)-利用富含纖維素的選擇培養基進行選擇培養

!因為培養基中含有豐富的纖維素，所以能夠

(S)-分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而

大量繁殖

(2)纖維素分解菌的培養基成分及鑒定原理

以纖維素為唯一碳源;加入剛果紅染料

?y的成5分*?■——

1

剛果紅紅色復合物k紅色消失，出現

鑒定一《纖維1素透明圈

原理,

纖維素酶一纖維素分解菌

■考點速覽

(1)血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測定。(2023?江蘇卷,7D)(X)

提示血細胞計數板不適用于微小的細菌計數。

⑵某同學欲分離產月尿酶菌，可在選擇培養基中添加尿素作為唯一氮源。(2022.江蘇卷，3B)(V)

(3)稀釋涂布平板法和平板劃線法均能得到單菌落，都可用于細菌計數。(2021.浙江6月選考，

17C)(X)

提示平板劃線法只能用于細菌分離，不能用于細菌計數。

(4)利用尿素固體培養基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物。(2020.浙江7月選

考，19A)(X)

提示尿素固體培養基屬于選擇培養基，以尿素為唯一氮源，不能利用尿素的微生物因缺乏可

利用的氮源而不能在此培養基上生存，故尿素固體培養基的作用并不是迅速殺死這些微生物。

■情境推理

1.為什么只有能分解尿素的微生物才能在尿素固體培養基上生長？

提示分解尿素的微生物能合成腺酶，而腺酶可將尿素分解成氨，從而為微生物提供氮源

2.在富含纖維素的環境中尋找纖維素分解菌的原因是

提示生物與環境具有相互依存關系，在富含纖維素的環境中，纖維素分解菌的含量相對較高,

從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環境

3.在含有纖維素的培養基中加入剛果紅對纖維素分解菌進行選擇形成透明圈的原因是

提示剛果紅與纖維素形成紅色復合物，而當纖維素被纖維素分解菌分解后，復合物就無法形

成，培養基中會出現以這些菌為中心的透明圈

典例?精心深研提升學科素養

考向1結合微生物的選擇培養，考查科學思維

1.（2024.廣東佛山模擬）野生型大腸桿菌菌株能在基本培養基上生長，氨基酸營養缺陷型突變株

無法合成某種氨基酸，只能在完全培養基上生長，下圖為純化某氨基酸營養缺陷型突變株的部

分流程圖，①②③④代表培養基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述錯誤的是

()

無菌落

A.圖中①②④為基本培養基，③為完全培養基

B.A操作的目的是提高突變頻率，增加突變株的數量

C.B的正確操作是用涂布器把菌液均勻地涂布在②表面

D.經C過程原位影印及培養后，可從④中挑取D進行純化培養

答案A

解析野生型大腸桿菌菌株能在基本培養基上生長，氨基酸營養缺陷型突變株無法合成某種氨

基酸，只能在完全培養基上生長，根據題圖可知，圖中①②④為完全培養基，③為基本培養基,

A錯誤；紫外線可以提高突變的頻率，從而增加突變株的數量，B正確；B的正確操作是將菌

液滴加到培養基表面，再用涂布器將菌液均勻地涂布在②表面，C正確；從圖中可知，D在基

本培養基中無法生長，在完全培養基中可生長，說明D是氨基酸營養缺陷型突變株菌落，故

經C過程原位影印及培養后，可從④中挑取D菌落進行純化培養，D正確。

2.（2024.江西新余調研）耐高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。嗜熱菌可以在高溫

環境中生存，其產生的淀粉酶最適溫度較高。篩選能產生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌過程如圖1

所示，其中I號培養基用碘液處理的結果如圖2所示。下列敘述正確的是（）

嗜熱菌樣品甲乙培養基培養基丙

圖1

周圍顯藍色

的菌落

(°。、松鼠周圍不顯藍

色的菌落

圖2

A.圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種

B.倒平板后對培養皿進行高壓蒸汽滅菌

C.淀粉是圖2所示固體培養基的唯一碳源

D.甲、乙試管中均為選擇培養基

答案A

解析淀粉與碘液反應呈現藍色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養基上生長時可釋放淀粉酶，分解

培養基中的淀粉，故周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種，A正確；倒平板前培養皿和培養基都

已滅菌處理，因此倒平板后不需要對培養皿再進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；據圖2可知，培養

基上出現周圍顯藍色的菌落和周圍不顯藍色的菌落，因此淀粉可能不是圖2所示固體培養基的

唯一碳源，C錯誤；圖1中①過程是梯度稀釋，②過程是用稀釋涂布平板法進行接種，因此甲、

乙試管主要是對嗜熱菌樣品進行稀釋，不具備選擇作用，不屬于選擇培養基，D錯誤。

考向2結合微生物的分離與計數，考查科學思維

3.(2024?河北石家莊調研)北京冬奧會食堂讓各國運動健兒愛上中國味道，其餐余垃圾在垃圾集

中點采用生化+霧化+膜過濾技術處理后，可以達到無二次污染的標準。為篩選對抗生素有抗

性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”處理的效率，研究人員將餐余垃圾機械化處理后加

入裝有無菌水的錐形瓶中制備餐余垃圾浸出液，然后進行如圖所示操作，下列說法錯誤的是

培養出

冗處理后一^大量高

效降解

---)XJA淀粉的

餐余垃圾養最

微生物

浸出液

A.餐余垃圾浸出液在接種前通常需要進行高壓蒸汽滅菌處理

B.可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X培養基上

C.X培養基含有淀粉和抗生素，Y培養基是不含瓊脂的液體培養基

D.圖中高效降解淀粉的微生物是⑤，可根據菌落特征初步判斷微生物類型

答案A

解析若對餐余垃圾浸出液進行高壓蒸汽滅菌會殺死菌種，導致實驗失敗，A錯誤；微生物的

接種方法包括稀釋涂布平板法和平板劃線法，可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X

培養基上，B正確；結合題意可知，本實驗的目的是篩選對抗生素有抗性、高效降解淀粉的微

生物，故圖中X培養基以淀粉為唯一碳源，且應添加抗生素起選擇作用；Y培養基是液體培

養基，進行擴大培養，其中不含凝固劑瓊脂，C正確；淀粉遇碘變藍色，加入碘液后，能夠分

解淀粉的菌落周圍出現透明圈，圖中能高效降解淀粉的微生物是⑤（透明圈最大），不同微生物

形成的菌落特征不同，可根據菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。

4.（2024.廣東湛江模擬）自生固氮菌是土壤中能獨立進行固氮的細菌?？蒲腥藛T進行了土壤中自

生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖。已知步驟④獲得的3個平板的菌

落數分別為90、95、100,對照組平板為0。下列相關敘述正確的是（）

擴大

培養

固氮

鬻能力

鑒定

log無菌水懸浮液無菌水化培養

A.步驟②振蕩20min的目的是擴大菌種數量，屬于選擇培養

B.步驟④一⑤使用接種環劃線接種，使用前需要灼燒滅菌

C.lg土壤中平均自生固氮菌數約為9.5X106個

D.所用培養基應加入碳源、氮源、無機鹽、水和瓊脂

答案C

解析步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中，A錯誤；由題

圖可知，步驟⑤平板中的菌落分布均勻，故步驟④一⑤所用的接種工具是涂布器，接種方法是

稀釋涂布平板法，B錯誤；1g土壤中平均自生固氮菌數約為（90+95+100）/3+0.1X1（）4=

9.5X106（個），C正確；本實驗需要分離的自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，故所

用培養基中不能加入氮源，D錯誤。

跳出題海

兩種純化細菌的方法的比較

項目平板劃線法稀釋涂布平板法

將菌液進行一系列的梯度稀釋，

通過接種環在瓊脂固體培養基表然后將不同稀釋度的菌液分別涂

面連續劃線的操作，將聚集的菌布到瓊脂固體培養基的表面，進

純化原理種逐步稀釋分散到培養基表面。行培養。稀釋度足夠高時，聚集

經數次劃線后培養，可以分離得在一起的微生物將被分散成單個

到單菌落細胞，從而能在培養基表面形成

單菌落

主要步3聚平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作

接種工具接種環涂布器

平板示意圖

■關鍵?真題必刷

1.（2023?江蘇卷，7）下列關于細菌和酵母菌實驗的敘述正確的是（）

A.通常酵母菌培養基比細菌培養基有更高的碳氮比

B.通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌菌落大

C.通常細菌培養基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養基用過濾除菌法除菌

D.血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測定

答案A

解析微生物種類不同，所需營養物的碳氮比也不同，具有高碳氮比的生物需要高碳氮比的營

養物，反之則低；酵母菌的碳氮比高于細菌，所以培養酵母菌的培養基需要更高的碳氮比，A

正確；通常細菌的生長速度比酵母菌快，但形成的菌落不一定大于酵母菌菌落，這與細菌種類

有關，B錯誤；微生物培養基通常都采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯誤；血細胞計數板適用于

酵母菌的計數，不適用于微小的細菌計數，D錯誤。

2.（2023?湖南卷，5）食品保存有干制、腌制、低溫保存和高溫處理等多種方法。下列敘述錯誤

的是（）

A.干制降低食品的含水量，使微生物不易生長和繁殖，食品保存時間延長

B.腌制通過添加食鹽、糖等制造高滲環境，從而抑制微生物的生長和繁殖

C.低溫保存可抑制微生物的生命活動，溫度越低對食品保存越有利

D.高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，并可破壞食品中的酶類

答案C

解析干制能降低食品中的含水量，使微生物不易生長和繁殖，進而延長食品保存時間，A正

確；腌制通過添加食鹽、糖等制造高滲環境，從而抑制微生物的生長和繁殖，B正確；低溫保

存可以抑制微生物的生命活動，但不是溫度越低越好，一般食品保存溫度為零上低溫，C錯誤;

高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，并通過破壞食品中的酶類，降低酶類對食品有機物的

分解，有利于食品保存，D正確。

3.（2022.湖北卷，5）滅菌、消毒、無菌操作是生物學實驗中常見的操作。下列敘述正確的是（）

A.動、植物細胞DNA的提取必須在無菌條件下進行

B.微生物、動物細胞培養基中需添加一定量的抗生素以防止污染

C.為防止蛋白質變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白腺培養基進行滅菌

D.可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養瓶等進行滅菌

答案D

解析動、植物細胞DNA的提取不需要在無菌條件下進行，A錯誤；動物細胞培養基中需添

加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環境，而微生物的培養一般不能加入抗生素，B錯誤;

一般用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白陳培養基進行滅菌，以防止雜菌污染，C錯誤；可用濕熱滅菌

法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養瓶等進行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。

4.（2023?廣東卷，10）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的

嗜熱菌。根據堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標

菌的條件組合是（）

0()123456

堆肥時間/天

A.A點時取樣、尿素氮源培養基

B.3點時取樣、角蛋白氮源培養基

C.3點時取樣、蛋白腺氮源培養基

DC點時取樣、角蛋白氮源培養基

答案D

解析研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標菌具有既

要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白的功能，所以在C點時取樣，并且用角蛋白氮源培養基

進行選擇培養，D正確。

5.（2022.江蘇卷，3）下列是某同學分離產月尿酶菌的實驗設計，不合理的是（）

A.選擇農田或公園土壤作為樣品分離目的菌株

B.在選擇培養基中需添加尿素作為唯一氮源

C.適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落

D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產胭酶菌株

答案D

解析農田或公園土壤中含有較多的含腺酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細菌，

配制的培養基應選擇尿素作為唯一氮源，產腺酶的微生物在該培養基上能生長，B正確；當樣

品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；

在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的腺酶將尿素分解成氨，氨會使培養基的pH升高，

酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做

進一步鑒定，D錯誤。

6.（2023?山東卷，15）平板接種常用在微生物培養中。下列說法正確的是（）

A.不含氮源的平板不能用于微生物培養

B.平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒

C.接種后未長出菌落的培養基可以直接丟棄

D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成服酶的微生物

答案D

解析不含氮源的平板可用于固氮菌的培養，A錯誤；平板涂布時涂布器使用前必須滅菌，B

錯誤；使用后的培養基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染

環境，C錯誤；腺酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成腺酶的微生物

可以分解尿素獲得氮源而進行生長繁殖，不能合成腺酶的微生物因缺乏氮源而無法生長，因此

以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成腺酶的微生物，D正確。

7.（2023?全國乙卷，37改編）某研究小組設計了一個利用作物秸稈生產燃料乙醇的小型實驗。其

主要步驟是：先將粉碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤中，噴水浸潤、接種菌T,培養一

段時間后，再用清水淋洗秸稈堆（清水淋洗時菌T不會流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌,

進行乙醇發酵（酒精發酵）。實驗流程如圖所示。

種菌T清水淋洗

回答下列問題：

（1）在粉碎的秸稈中接種菌T,培養一段時間后發現菌T能夠將秸稈中的纖維素大量分解，其

原因是O

⑵采用液體培養基培養酵母菌，可以用淋洗液為原料制備培養基，培養基中還需要加入氮源

等營養成分，氮源的主要作用是（答出1點即可）。

⑶將酵母菌接種到滅菌后的培養基中，擰緊瓶蓋，置于適宜溫度下培養、發酵。擰緊瓶蓋的

主要目的是。但是在酵母菌發酵過程中，還需適時擰松瓶蓋，原因是

發酵液中的乙醇可用溶液檢測。

⑷本實驗收集的淋洗液中的可以作為酵母菌生產乙醇的原料。與以糧食為原料發酵

生產乙醇相比，本實驗中乙醇生產方式的優點是

答案（1）菌T能夠產生纖維素酶，纖維素酶可將纖維素分解

（2）為酵母菌蛋白質合成提供原料

（3）為酵母菌進行無氧呼吸產生乙醇創造無氧條件乙醇發酵有CO2產生，擰松瓶蓋可以放出

CO2,避免因瓶內氣壓過大引起危險酸性重銘酸鉀

（4）葡萄糖節約糧食，實現了廢物利用

解析（1）菌T能夠將纖維素變成酵母菌發酵所需的葡萄糖，利用的是其能夠產生分解纖維素

的酶，能夠高效催化纖維素分解。（2）N元素是構成體內一些物質的必需元素，如氨基酸、核

甘酸等。（3）擰緊瓶蓋的主要目的是營造無氧條件。酵母菌無氧呼吸產生乙醇的同時還會產生

二氧化碳，擰松瓶蓋可以釋放二氧化碳，防止容器壓力過大引起危險。酸性條件下重鋁酸鉀溶

液可以用來鑒定乙醇。（4）纖維素分解產生的葡萄糖可以用來作為發酵原材料，從社會責任感

角度和實際生產角度出發分析即可，如節約糧食，生產成本低，實現了廢物利用，保護環境等。

限時強化練

（時間：40分鐘）

【對點強化】

考點一微生物的基本培養技術

1.（2024.東北育才中學）地衣芽抱桿菌具有調節動物腸道微生態平衡，增加動物機體抗病能力的

功能。仔兔飼喂地衣芽抱桿菌20?40天后，其免疫器官生長發育迅速，血漿中T淋巴細胞值

較對照組高。下列敘述錯誤的是（）

A.培養地衣芽抱桿菌時，需要將培養基調至酸性

B.可用液體培養基對地衣芽抱桿菌擴大培養

C.使用后的培養基在丟棄前要經過滅菌處理

D.地衣芽抱桿菌改變了仔兔腸道菌群的結構

答案A

解析地衣芽抱桿菌屬于細菌，其培養基一般呈中性或弱堿性，A錯誤；液體培養基可使菌種

與培養液更好地接觸，有利于菌種的擴大培養，B正確；使用后的培養基在丟棄前要經過滅菌

處理，防止對環境造成污染，C正確；地衣芽抱桿菌能調節動物腸道微生態平衡，改變了仔兔

腸道菌群的結構，D正確。

2.（2024.山東濰坊模擬）金黃色葡萄球菌是一種常見的病原菌，在血平板（完全培養基中添加適量

血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。某研究小組通過稀釋涂布平板法測定

了某處土壤中金黃色葡萄球菌數量，相關說法錯誤的是（）

A.從功能上分類，血平板屬于選擇培養基

B.在制作血平板時需要在平板冷卻后加入血液，防止高溫破壞血細胞

C.待涂布的菌液被培養基吸收后應倒置培養，防止水分過度蒸發

D.實驗統計的菌落數往往比活菌的實際數目低

答案A

解析根據題干信息可知，血平板屬于鑒別培養基，A錯誤。

3.（2024.成都七中診斷）下圖為微生物的實驗室培養的有關操作，下列相關敘述錯誤的是（）

①把接種工②將接種工具③接種

具灼燒至在火焰附近

變紅冷卻

A.步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌

B.步驟②中，將接種工具冷卻時不宜距酒精燈火焰太遠

C.圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經培養后獲得單個菌落

D.接種后應將培養皿倒置培養，培養后可以根據結果進行微生物計數

答案D

解析步驟①中，接種前灼燒接種環至變紅，目的是殺滅接種環上可能引起污染的微生物，A

正確；步驟②中，將接種工具冷卻時不宜距酒精燈火焰太遠，防止受到雜菌污染，B正確；圖

中所示的接種方法是平板劃線法，目的是使接種的菌種逐漸稀釋，經培養后獲得由單個菌體繁

殖而來的菌落，C正確；圖示的平板劃線法不能用于微生物的計數，D錯誤。

4.（2024.深河高中質檢）下圖為實驗室培養和純化酵母菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤

的是（）

A.①步驟使用的培養基是已經滅菌的培養基

B.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行

C.③到④的過程中，接種環共灼燒了5次

D.④步驟操作時，不能將第1區和第5區的劃線相連

答案C

解析接種環在每次劃線前和接種結束后都要通過灼燒來滅菌，所以③到④的過程中5次劃線

操作前都要灼燒滅菌，接種結束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污染，由此可見，③到④的過

程中共需灼燒接種環6次，C錯誤。

考點二微生物的選擇培養和計數

5.（2024.安徽淮北調研）平板劃線法和稀釋涂布平板法是分離并純化微生物的常用方法。下列相

關敘述正確的是（）

A.平板劃線法分離微生物前一般需要將菌液進行梯度等比稀釋

B.細菌的純化培養通常比霉菌需要更高的溫度和更少的培養時間

C.使用稀釋涂布平板法統計的微生物數量是活菌和死菌的總和

D.接種后的平板放置在搖床上倒置培養，防止雜菌的污染

答案B

解析平板劃線法分離微生物前一般不需要將菌液進行梯度等比稀釋，A錯誤；細菌的培養溫

度一般為30?37℃,霉菌的培養溫度一般為25?28℃,B正確；使用稀釋涂布平板法統計的

微生物數量是活菌的數量，不包括死菌的數量，C錯誤；接種后的平板放置在恒溫培養箱中培

養，防止雜菌的污染，倒置培養的目的是防止皿蓋上的冷凝水滴落到平板表面，同時也能防止

培養基中水分過快揮發，D錯誤。

6.（2024.江蘇南京、鹽城模擬）為了解病原微生物對四種抗生素的敏感程度，某研究小組進行了

相關藥敏實驗，圖1為部分實驗器材。將含有相同濃度的抗生素I?IV四個大小相同的紙片分

別貼在長滿測試菌的平板上，實驗結果如圖2。下列相關敘述正確的是（）

4\^/v”含做抗中生素

①②③o1④'近女/7的菌落

圖1圖2

A.為獲得長滿測試菌的平板，需要使用圖1中器材①②③

B.圖2中II形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對藥物較敏感

C.圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素IV作用下產生了突變株

D.不同抗生素在平板上的擴散速度不同會影響實驗結果

答案D

解析為獲得長滿測試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使用圖1中①酒

精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進行，酒精燈對涂布器進行灼燒滅菌）、④涂布器和③培養基，

②為接種環（接種工具），是平板劃線法接種時需要使用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長

滿測試菌的平板，A錯誤；圖2中n處透明圈最小，說明此處微生物對該藥物敏感度最低，B

錯誤；突變株的出現不是在抗生素的作用下產生的，抗生素只能起選擇作用，C錯誤。

7.（2024.山東煙臺模擬）養殖業中常用的土霉素（一種抗生素）在畜禽類糞便和污水中的殘留量較

iWjo科研人員欲篩選一種能身效降解土霉素的菌株，以解決養殖業廢棄物中土霉素含量超標問

題。下列敘述錯誤的是（）

A.制備培養基時應先滅菌后定容再倒平板

B.篩選時隨轉接次數的增加，土霉素的用量也應逐步增加

C.利用稀釋涂布平板法測得的高效降解土霉素菌株的密度較實際值低

D.若計數時平板上菌落過于密集，則應該進一步提高稀釋的倍數

答案A

解析制備培養基時應先定容再滅菌，滅菌后定容容易導致培養基污染，A錯誤。

8.（2024?河北邢臺調研）屠宰場廢棄血污不經過處理直接排放，會對環境造成污染。傳統的處理

方法有填埋法和焚燒法等。填埋法易造成地表環境、地下水資源污染。焚燒法處理會造成大氣

污染，且廢棄物中所含的蛋白質資源不能得到有效利用。研究人員以屠宰場血污堆積土壤為分

離基質，利用血平板培養基（添加了動物血液），分離出了高效降解血紅蛋白的菌株，并初步用

于降解廢棄血液，生產氨基酸液態肥料。下列相關敘述錯誤的是（）

樣品

A.題述菌株分離純化過程中用到了稀釋涂布平板法和平板劃線法

B.菌株培養后進行計數，只能采用稀釋涂布平板法

C.血平板培養基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往較高

D.利用該菌株降解廢棄血液可在保護環境的同時實現資源的可持續利用

答案B

解析菌株培養后進行計數，除了采用稀釋涂布平板法外，還可以用顯微鏡直接計數法，B錯

誤。

【綜合提升】

9.（2024.山東棗莊模擬）如圖所示，自來水經濾膜過濾后，轉移到牛肉膏蛋白陳培養基上，適宜

條件下培養48h,染色后統計變色菌落數目為165。下列說法正確的是（）

（過濾5L自來水

-----

百

宜了培養皿

膜漏斗

A.若培養基含伊紅一亞甲基藍，大腸桿菌菌落呈藍綠色

B.自來水中大腸桿菌濃度是33(個］-I比真實值大

C.為了提高準確度，需設重復實驗，但不用空白對照

D.若培養基菌落數目大于300,可適當減少自來水量

答案D

解析若培養基含伊紅一亞甲基藍，大腸桿菌菌落呈深紫色，有金屬光澤，A錯誤；自來水中

大腸桿菌濃度是165+5=33(個1一),由于兩個或多個大腸桿菌可能長成一個菌落，因此比真

實值小，B錯誤；為了提高準確度，需設重復實驗，同時需要設置空白對照，C錯誤；若培養

基菌落數目大于300,說明細菌數目較多，可適當減少