高通量基因測序結果評價要求_第1頁
高通量基因測序結果評價要求_第2頁
高通量基因測序結果評價要求_第3頁
高通量基因測序結果評價要求_第4頁
高通量基因測序結果評價要求_第5頁
已閱讀5頁,還剩3頁未讀 繼續免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

GB/TXXXXX—XXXX

高通量基因測序結果評價要求

1范圍

本標準規定了高通量基因測序結果評價要求涉及的術語與定義、高通量基因測序結果評價的評價指

標和判定依據。

本標準適用非單分子測序的基于DNA序列研究的連接酶法測序和聚合酶法測序的結果評價。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T30989高通量基因測序技術規程

SN/T2497.21進出口危險化學品安全試驗方法第21部分:瓊脂糖凝膠電泳試驗

3術語和定義、縮略語

GB/T30989中界定的以及下列術語和定義適用于本文件。

3.1術語和定義

3.1.1

測序平均長度averagereadlengthofsequencing

測序儀器單次測序能達到的平均讀長,通常以堿基數表示。

3.1.2

測序通量Throughputofgenesequencing

測序儀器單次測序可獲得的序列數量,通常以序列數(Reads)表示。

3.1.3

堿基測序準確率Accuracyofbasesequencing

對已知序列的參考品進行測序,經過堿基識別后比對到已知序列上,統計比對正確的堿基數占測序

獲得的總堿基數比例。

3.1.4

聚合酶法測序Sequencingbypolymerization

基于堿基互補原理,在聚合酶參與下的基因測序方法。

3.1.5

連接酶法測序Sequencingbyligation

1

GB/TXXXXX—XXXX

基于堿基互補原理,在連接酶參與下的基因測序方法。

3.2縮略語

下列縮略語適用于本文件。

DNA——脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

PCR——聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction)

4高通量基因測序結果評價指標

4.1評價指標與分類

經過高通量測序過程中參數指標統計分析,按照測序方法的不同,對高通量基因測序結果評價分為

連接酶法測序評價和聚合酶法測序評價,選擇測序通量、堿基測序準確率、測序平均長度這三個能夠反

映單次測序結果進行評價。

4.2連接酶法測序結果評價要求

連接酶法測序結果評價如表1所示。

表1連接酶法測序結果評價要求

評價指標要求

測序通量≥500MReads

堿基測序準確率≥99.0%

測序平均長度≥25bp

4.3聚合酶法測序結果評價要求

聚合酶法測序結果評價如表2所示。

表2聚合酶法測序結果評價要求

評價指標要求

測序通量≥3MReads

堿基測序準確率≥99.0%

測序平均長度≥35bp

5評價指標檢測方法

5.1測序通量

按照各測序儀器廠商提供的測序樣品制備流程和測序操作進行待測序樣品處理、質控和測序,待測

序反應完成后,測序儀使用測序信號收集器(根據標記信號的不同選用相應不同的收集器,如圖像信號

收集器中的高精度CMOS,電信號收集器中的半導體傳感器,光譜信號搜集器中的光譜成像儀等)。對測

序信號完成搜集。再通過信號分析軟件,對采集得到的信號進行分析,將信號圖轉變為核苷酸序列信息。

通常以序列數表示。

2

GB/TXXXXX—XXXX

5.2堿基測序準確率

對已知序列的參考品進行測序,經過堿基識別后比對到已知序列上,統計比對正確的堿基數占測序

獲得的總堿基數比例,通常以百分數表示。

5.3測序平均長度

根據測序通量所得到的序列數,統計所有序列數的堿基長度,計算序列數總長度。

測序平均長度等于序列數總長度與序列數總數的比值。

6結果評價程序

測序儀輸出序列信息后,統計測序通量和測序平均長度,并對測序過程中加入的測序參考品進行分

析,將測序參考品得到的原始序列比對到參考品的標準基因組序列,統計基于堿基(base)測序準確率。

測序數據處理標準流程如圖1所示,處理完成后輸出堿基測序準確率指標。測序參考品的測序過程,參

見附錄A。

測序信號識別、記錄與收集

原始測序信號轉換堿基序列信息并輸出數據文件

對數據文件進行統計分析,獲取測序通量和測序平均長度的統計結果

原始堿基序列數據與標準基因組序列比對

輸出堿基測序準確率

圖1高通量基因測序儀測序數據處理流程圖

3

GB/TXXXXX—XXXX

A

附錄A

(資料性附錄)

測序參考品測序過程

A.1測序參考品的選擇

宜采用來源穩定、溯源信息完備和參考序列信息已知的核酸樣本,樣例如表A.1所示。

表A.1國家藥品標準物質參考品樣例

品種編號品種名稱成分序號成分名稱來源

360007測序儀性1人全基因組DNA正常男性外周血白細胞構建永

能評價用生細胞系

脫氧核糖2大腸桿菌基因組DNADH5α感受態培養細胞

核酸國家3高GC含量細菌基因組DNA人腸道中分離篩選鑒定后培養

參考品厭氧菌

411型HPV基因組DNA11型HPV病毒重組質粒

A.2參考品測序流程

按照各測序儀器廠商提供的測序樣品制備流程和測序操作進行測序參考品樣品處理、質控和測序。

基本的流程如下:

測序樣品處理待測序基因文庫質控測序

圖A.1高通量基因測序基本流程圖

A.2.1測序樣品處理

A.2.1.1核酸提取

對待測序的生物樣本進行核酸提取,并對提取的核酸進行質控檢測。

A.2.1.2DNA樣品打斷

對預處理好的DNA樣品,采用物理或者酶切的方法將待測序的核酸DNA打斷到1kb以內的DNA片段大小。

A.2.1.3接頭連接

將打斷成1kb以內的DNA片段制備成兩端連有接頭(含有與擴增及測序引物互補的序列),中間有短

序列標簽結構的文庫或者標簽文庫。

A.2.1.4文庫擴增

4

GB/TXXXXX—XXXX

將接頭連接后的文庫進行擴增放大得到待測序文庫或者標簽文庫。

A.2.2待測序基因文庫質量控制

將待測序文庫或者標簽文庫進行質量控制檢測。宜按照SN/T2497.21方法或者Q-PCR方法進行文庫

質控,建庫過程中宜設置陰性對照與陽性對照。

A.2.3測序

按照測序儀廠商提供的標準測序流程進行測序操作。

_________________________________

5

ICS07.080

A40

中華人民共和國國家標準

GB/TXXXXX—XXXX

高通量基因測序結果評價要求

Requirementsofthehigh-throughputgenesequencingresultevaluation

點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識

(報批稿)

(本稿完成日期:2017年3月)

-XX-XX發布XXXX-XX-XX實施

GB/TXXXXX—XXXX

高通量基因測序結果評價要求

1范圍

本標準規定了高通量基因測序結果評價要求涉及的術語與定義、高通量基因測序結果評價的評價指

標和判定依據。

本標準適用非單分子測序的基于DNA序列研究的連接酶法測序和聚合酶法測序的結果評價。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T30989高通量基因測序技術規程

SN/T2497.21進出口危險化學品安全試驗方法第21部分:瓊脂糖凝膠電泳試驗

3術語和定義、縮略語

GB/T30989中界定的以及下列術語和定義適用于本文件。

3.1術語和定義

3.1.1

測序平均長度averagereadlengthofsequencing

測序儀器單次測序能達到的平均讀長,通常以堿基數表示。

3.1.2

測序通量Throughputofgenesequencing

測序儀器單次測序可獲得的序列數量,通常以序列數(Reads)表示。

3.1.3

堿基測序準確率Accuracyofbasesequencing

對已知序列的參考品進行測序,經過堿基識別后比對到已知序列上,統計比對正確的堿基數占測序

獲得的總堿基數比例。

3.1.4

聚合酶法測序Sequencingbypolymerization

基于堿基互補原理,在聚合酶參與下的基因測序方法。

3.1.5

連接酶法測序Sequencingbyligation

1

GB/TXXXXX—XXXX

基于堿基互補原理,在連接酶參與下的基因測序方法。

3.2縮略語

下列縮略語適用于本文件。

DNA——脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

PCR——聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction)

4高通量基因測序結果評價指標

4.1評價指標與分類

經過高通量測序過程中參數指標統計分析,按照測序方法的不同,對高通量基因測序結果評價分為

連接酶法測序評價和聚合酶法測序評價,選擇測序通量、堿基測序準確率、測序平均長度這三個能夠反

映單次測序結果進行評價。

4.2連接酶法測序結果評價要求

連接酶法測序結果評價如表1所示。

表1連接酶法測序結果評價要求

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論