ICS65.020.20CCSB614413CodeofpracticeontissuecultureofHabenariarhodocheilaIDB4413/T64—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由惠州市林業局提出并歸口。本文件起草單位：惠州市林業科學研究所（惠州植物園管理服務中心）、惠州市林學會。本文件主要起草人：劉德浩、鐘小華、何沁園、吳穎、鄭洲翔、黃麗純、陳智濤、孟蕊、舒夏竺、巫添輝、江惠蘭、盧永輝、李運龍、王少東、周小峰、劉健、張展鵬。DB4413/T64—20251橙黃玉鳳花組織培養育苗技術規程本文件規定了橙黃玉鳳花（Habenariarhodocheila）組織培養育苗過程中外植體采集、外植體處理、瓶苗培育、瓶苗移植、病蟲害防治、檔案管理等技術要求。本文件適用于橙黃玉鳳花組培苗培育。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6001育苗技術規程LY/T1882林木組織培養育苗技術規程LY/T2752林木輕基質無紡布容器育苗技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1橙黃玉鳳花Habenariarhodocheila橙黃玉鳳花(Habenariarhodocheila)是蘭科玉鳳花屬多年生草本植物，塊莖長圓形，莖具葉；葉線狀披針形或近長圓形，花莖無毛；花苞片卵狀披針形，萼片和花瓣綠色，唇瓣紅、橙紅或橙黃色，花瓣直立，匙狀線形；蒴果紡錘形，有喙；花期7月～8月，果期10月～11月。4外植體4.1采集需在連續3d晴天后采集成熟且未開裂的蒴果。4.2消毒處理用細毛刷清潔蒴果表面雜質，在超凈工作臺上用75%乙醇表面消毒20s～30s，無菌水沖洗1次～2次；然后用添加1滴～2滴吐溫80的0.1%HgCl2溶液浸泡并不斷搖動12min，用無菌水沖洗4次～6次，用滅菌過的濾紙吸干表面水分備用。5瓶苗培育DB4413/T64—202525.1培養基5.1.1配制種子萌發培養基為1/2MS＋NAA0.5mg/L＋AC0.2%，增殖培養基為1/2MS＋NAA0.4mg/L＋ZT3.0mg/L＋AC0.2%，生根培養基為1/2MS＋NAA0.2mg/L＋6-BA2.0mg/L＋AC0.2%，添加卡拉膠均為6g/L，蔗糖均為30g/L，pH值調至5.8～6.0。培養基配方參見附錄A。5.1.2滅菌與存放采用高壓滅菌鍋121℃持續20min滅菌后存放至超凈工作臺備用，按LY/T1882的規定執行。5.2培養條件應定期清潔培養室，及時清除污染材料。培養室溫度26℃±2℃,相對濕度65%～70%，光照強度1000lx～2000lx，日光照時長10h～12h。5.3種子萌發培養用無菌解剖刀將消毒處理好的蒴果縱向切開,將其內部的細粉狀種子均勻地撒播于培養基上；待培養20d～25d，種子開始出現膨大，形成白色的原球莖。5.4增殖分化培養將未分化的原球莖轉接至增殖培養基上，培養20d～25d，原球莖分化出葉原基后長出葉片，形成小苗；培養約35d，小苗基部生成叢生原球莖，進一步分化出叢生苗3株～10株。5.5生根培養選取2片以上舒展葉片、高1cm～1.5cm的芽苗，接種在生根培養基中誘導生根，每株苗長出1條~3條新根和1個～2個橢圓形或長圓形塊莖。單株苗繼續增殖成叢生苗，部分用于繼代增殖，部分用于煉苗種植。培養周期為30d～35d。6煉苗移植6.1基質與育苗袋采用輕型基質（基質成分參照LY/T2752相關條款執行）或腐殖土作基質，以塑料薄膜袋或無紡布袋等為育苗袋，規格為8cm×10cm。移植前2d對基質與育苗袋用50%的多菌靈可濕性粉劑1000倍液淋透殺菌。6.2煉苗選取長出新根、球莖達0.2cm～0.5cm、葉片2片～3片的瓶苗移至煉苗棚內。煉苗10d～15d后將瓶蓋擰開，繼續煉苗3d～5d。6.3洗苗將經過煉苗的瓶苗和培養基一起倒入清水中洗凈，注意避免損傷根系。6.4移植DB4413/T64—20253在基質中捅個小孔，小心將芽苗植入，用基質完全覆蓋芽苗根部，不可大力按壓基質以防傷苗；避開夏季高溫天氣移植。6.5苗期管理6.5.1遮蔭移植后用透光度25%的遮陰網遮蔭，45d后用透光度50%的遮陰網遮蔭。6.5.2水分移植后即淋透水；后期做到見干見濕，保持基質濕潤。6.5.3養分小苗移植10d后施薄肥，采用1g/L的復合肥（N2-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，每7d～10d一次；移植30d后，采用3g/L的復合肥（N2-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，每10d～15d一次。6.5.4除草及時清除雜草。7病蟲害防治7.1病害苗期偶有根腐病危害，應及時清除病株，集中焚燒。用50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液噴灑基質，防止病原傳播。7.2蟲害苗期偶有卷夜蛾或金龜子危害嫩葉和球莖，少量危害時人工捕殺，并用黑光燈或糖醋液誘殺成蟲。生長正常、無損傷、無病蟲害、苗高≥10cm的幼苗可以出圃。9檔案管理按GB/T6001相關條款執行。DB4413/T64—20254（資料性）橙黃玉鳳花組織培養的培養基配方橙黃玉鳳花組織培養的培養基配方見表A.1。表A.1橙黃玉鳳花組織培養培養基配方培養基成份種子萌發培養基（mg/L）增殖培養基（mg/L）生根培養基（mg/L）950950950NHNO825825825858585O220220220OO13.913.913.918.6518.6518.65O11.1511.1511.15O4.34.34.3HBO3.13.13.10.4150.4150.415NaMoOO0.1250.1250.125O0.01250