HNF4α對PLA2GXIIB和MTP轉錄調控機制及生理意義探究一、緒論1.1研究背景與意義轉錄調控作為基因表達調控的關鍵環節，在生命活動中占據著舉足輕重的地位。從細胞的分化、發育，到生物體對環境變化的響應，轉錄調控都發揮著不可或缺的作用。它通過精確控制基因轉錄的起始、速率和終止，決定了細胞中蛋白質的種類和數量，進而影響細胞的結構和功能。在個體發育過程中，轉錄調控確保了不同細胞類型在特定時間和空間表達相應的基因，使得細胞能夠分化為具有特定功能的組織和器官。在應對外界環境刺激時，轉錄調控能夠迅速啟動或關閉相關基因的表達，幫助生物體適應環境變化。肝細胞核因子4α（HNF4α）作為肝臟中一種重要的轉錄因子，參與了多個代謝途徑的調控，在維持肝臟正常生理功能中發揮著關鍵作用。研究表明，HNF4α可以調控一系列與脂質代謝、糖代謝和膽汁酸代謝相關基因的表達，從而維持體內代謝平衡。分泌型磷脂酶A2（PLA2）GXIIB是非典型的分泌型磷脂酶A2家族成員之一，研究發現其是HNF4α的靶基因，HNF4α可以結合于PLA2GXIIB啟動子的DR1順式反應元件，調控其表達水平。微粒體甘油三酯轉運蛋白（MTP）是極低密度脂蛋白裝配和分泌過程的限速酶，在肝臟脂質輸出中發揮著重要作用，也是HNF4α的靶基因之一。深入研究HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控機制，對于揭示肝臟脂質代謝的分子機制具有重要意義。肝臟脂質代謝異常與多種疾病的發生發展密切相關，如非酒精性脂肪肝、高脂血癥和動脈粥樣硬化等。通過闡明HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控機制，可以更好地理解肝臟脂質代謝的精細調控過程，為這些疾病的發病機制研究提供新的視角。對這一調控機制的研究還可能為相關疾病的治療提供新的靶點和策略。通過調節HNF4α的活性或干預其與PLA2GXIIB和MTP基因的相互作用，有望開發出新型的治療藥物，為改善患者的健康狀況提供幫助。1.2相關概念及研究現狀1.2.1HNF4α概述HNF4α，全稱為肝細胞核因子4α，屬于核受體超家族成員，在肝臟、腎臟、腸道等組織中均有表達，其中在肝臟中表達量尤為豐富。其蛋白結構包含多個功能域，如N端的轉錄激活結構域，負責與其他轉錄共激活因子相互作用，啟動基因轉錄；DNA結合結構域，能夠特異性識別并結合靶基因啟動子區域的特定DNA序列，從而調控基因表達；配體結合結構域則可與內源性或外源性配體結合，影響HNF4α的活性和功能。在代謝途徑調控中，HNF4α發揮著不可或缺的作用。在脂質代謝方面，它參與調控脂肪酸合成、轉運和氧化相關基因的表達。研究表明，HNF4α可通過直接結合脂肪酸轉運蛋白（FATP）基因啟動子，促進其表達，增加脂肪酸攝??；還能調節肉堿/有機陽離子轉運體2（OCTN2）基因，影響脂肪酸β-氧化過程，維持肝臟脂質穩態。在糖代謝調控中，HNF4α通過調控葡萄糖激酶（GK）基因表達，影響肝臟葡萄糖的攝取和磷酸化，進而調節血糖水平。當血糖升高時，HNF4α可增強GK基因轉錄，促進葡萄糖轉化為葡萄糖-6-磷酸，降低血糖濃度。HNF4α還參與膽汁酸代謝的調控，通過調節膽汁酸合成關鍵酶膽固醇7α-羥化酶（CYP7A1）基因表達，維持膽汁酸合成平衡。HNF4α在肝臟代謝途徑調控中處于核心地位，對維持機體代謝穩態至關重要。1.2.2PLA2GXIIB研究進展PLA2GXIIB，即分泌型磷脂酶A2ⅩⅡB，是分泌型磷脂酶A2家族中的非典型成員。其主要功能是催化磷脂sn-2位酯鍵水解，生成游離脂肪酸和溶血磷脂。在磷脂代謝中，PLA2GXIIB參與細胞膜磷脂的重塑和更新過程。當細胞受到外界刺激時，PLA2GXIIB被激活，水解細胞膜磷脂，產生的溶血磷脂和游離脂肪酸可作為信號分子，參與細胞內信號轉導通路，調節細胞的生理功能。研究發現，PLA2GXIIB與多種疾病的發生發展密切相關。在心血管疾病方面，有研究表明，血漿中PLA2GXIIB水平升高與動脈粥樣硬化的發生風險增加相關。PLA2GXIIB通過水解低密度脂蛋白（LDL）中的磷脂，產生氧化磷脂和溶血磷脂，這些產物具有細胞毒性，可誘導內皮細胞損傷、炎癥反應和脂質沉積，促進動脈粥樣硬化斑塊的形成。在肝臟疾病中，PLA2GXIIB的表達變化與非酒精性脂肪肝的發展相關。在非酒精性脂肪肝模型中，肝臟PLA2GXIIB表達上調，導致肝臟磷脂代謝紊亂，甘油三酯積累增加，加重肝臟脂肪變性。PLA2GXIIB還可能參與腫瘤的發生發展過程。在某些腫瘤細胞中，PLA2GXIIB表達異常，其水解磷脂產生的代謝產物可能影響腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力。1.2.3MTP研究進展MTP，即微粒體甘油三酯轉運蛋白，是一種內質網相關的脂質轉運蛋白，由MTPα和MTPβ兩個亞基組成，主要在肝臟和小腸中表達。MTP在脂蛋白代謝中發揮著關鍵作用，它能夠促進甘油三酯、膽固醇酯等脂質與載脂蛋白B（ApoB）的組裝，形成極低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒（CM），并協助這些脂蛋白從內質網向高爾基體轉運，最終分泌到細胞外。在肝臟中，MTP參與VLDL的合成和分泌過程。當肝臟攝取過多的脂肪酸時，MTP將甘油三酯轉運至ApoB，組裝形成VLDL，將肝臟內的甘油三酯運輸到外周組織，維持肝臟脂質平衡。在小腸中，MTP參與CM的組裝和分泌，促進膳食脂肪的吸收和轉運。MTP的異常與多種疾病的發生發展密切相關。在高脂血癥患者中，常發現MTP基因多態性或表達異常，導致MTP功能改變，影響VLDL和CM的合成與分泌，進而引起血脂代謝紊亂，表現為血漿甘油三酯、膽固醇水平升高。在非酒精性脂肪肝患者中，肝臟MTP表達下降，使得VLDL合成和分泌減少，甘油三酯在肝臟內堆積，促進脂肪肝的形成和發展。MTP還與動脈粥樣硬化的發生發展相關。由于MTP功能異常導致的脂蛋白代謝紊亂，會使血液中富含甘油三酯的脂蛋白和LDL水平升高，這些脂蛋白易被氧化修飾，引發炎癥反應和內皮細胞損傷，促進動脈粥樣硬化斑塊的形成。1.3研究目標與內容本研究旨在深入探究HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控機制，為揭示肝臟脂質代謝的分子機制提供理論依據。具體研究內容如下：分析HNF4α與PLA2GXIIB和MTP基因啟動子區域的結合位點：通過生物信息學方法，預測HNF4α在PLA2GXIIB和MTP基因啟動子區域的潛在結合位點。運用染色質免疫沉淀（ChIP）實驗，驗證HNF4α與預測結合位點的實際結合情況，明確其在基因啟動子區域的具體結合位置，為后續研究轉錄調控機制奠定基礎。研究HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控機制：構建攜帶PLA2GXIIB和MTP基因啟動子熒光素酶報告基因載體，將其轉染至細胞中，通過雙熒光素酶報告基因實驗，檢測HNF4α過表達或干擾對報告基因活性的影響，從而確定HNF4α對PLA2GXIIB和MTP轉錄活性的調控作用。進一步研究HNF4α與其他轉錄因子或共調節因子在調控PLA2GXIIB和MTP轉錄過程中的相互作用，明確轉錄調控的分子機制。探究HNF4α對PLA2GXIIB和MTP轉錄調控的生理意義：構建HNF4α基因敲除或過表達動物模型，檢測肝臟中PLA2GXIIB和MTP的表達水平以及相關脂質代謝指標，如甘油三酯、膽固醇等，分析HNF4α對PLA2GXIIB和MTP轉錄調控在維持肝臟脂質穩態中的作用。通過體內實驗，深入探討HNF4α對PLA2GXIIB和MTP轉錄調控異常與肝臟脂質代謝相關疾病發生發展的關系，為相關疾病的治療提供新的靶點和策略。二、材料與方法2.1實驗材料2.1.1細胞系和實驗動物選用人肝癌細胞系HepG2作為體外研究模型，該細胞系具有完整的肝細胞功能，能夠較好地模擬肝臟細胞的生理狀態，且易于培養和轉染，適合用于基因表達調控相關研究。同時，選用C57BL/6J小鼠作為實驗動物，該品系小鼠遺傳背景清晰、個體差異小，對實驗條件的反應較為一致，常用于肝臟脂質代謝相關的體內實驗研究。實驗小鼠購自正規實驗動物中心，飼養于溫度（22±2）℃、濕度（50±5）%的SPF級動物房，自由攝食和飲水，適應環境1周后進行實驗。2.1.2主要試劑和儀器主要試劑包括：胎牛血清、DMEM培養基（用于HepG2細胞培養，為細胞提供生長所需的營養物質和適宜的生長環境）；Lipofectamine3000轉染試劑（用于將質粒等外源DNA導入HepG2細胞，實現基因的過表達或干擾等操作）；RIPA裂解液（用于裂解細胞，提取細胞總蛋白，以便后續進行蛋白質相關檢測）；BCA蛋白定量試劑盒（用于準確測定蛋白質樣品的濃度，為后續實驗提供標準化的蛋白量）；兔抗人HNF4α抗體、兔抗人PLA2GXIIB抗體、兔抗人MTP抗體（用于蛋白質免疫印跡實驗，特異性識別并結合相應的目的蛋白，以便檢測其表達水平）；HRP標記的山羊抗兔二抗（與一抗結合，通過酶催化底物顯色，實現目的蛋白的可視化檢測）；熒光素酶報告基因檢測試劑盒（用于雙熒光素酶報告基因實驗，檢測熒光素酶活性，從而反映基因的轉錄活性）；ChIP實驗試劑盒（用于染色質免疫沉淀實驗，研究蛋白質與DNA的相互作用）；質粒提取試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒（分別用于提取和純化質粒DNA以及回收特定的DNA片段，為后續實驗提供高質量的DNA樣品）。主要儀器有：CO?培養箱（為細胞培養提供穩定的溫度、濕度和CO?濃度環境，保證細胞正常生長）；超凈工作臺（提供無菌操作環境，防止實驗過程中微生物污染）；倒置顯微鏡（用于觀察細胞的形態、生長狀態等）；高速冷凍離心機（用于細胞和蛋白質樣品的離心分離，實現不同組分的分離和富集）；酶標儀（用于檢測熒光素酶報告基因實驗中的熒光信號強度，定量分析基因轉錄活性）；實時熒光定量PCR儀（用于檢測基因的mRNA表達水平，分析基因轉錄調控情況）；電泳儀、凝膠成像系統（分別用于DNA和蛋白質的電泳分離以及凝膠圖像的采集和分析，實現對核酸和蛋白質的分離和檢測）。2.2實驗方法2.2.1質粒構建與轉染使用限制性內切酶分別對含有HNF4α基因的質粒和表達載體進行酶切，酶切反應體系根據內切酶說明書進行配制，確保酶切完全。酶切產物經瓊脂糖凝膠電泳分離后，利用DNA凝膠回收試劑盒回收目的片段。將回收的HNF4α基因片段與線性化的表達載體在T4DNA連接酶的作用下進行連接反應，連接體系為10μL，包括適量的載體和插入片段、1μLT4DNA連接酶及1μL10×連接緩沖液，16℃孵育過夜。連接產物轉化至感受態大腸桿菌DH5α中，將轉化后的菌液涂布于含有相應抗生素的LB平板上，37℃培養過夜。挑取單菌落進行菌落PCR鑒定，篩選出陽性克隆，將陽性克隆接種于含有抗生素的LB液體培養基中，37℃振蕩培養過夜，然后使用質粒提取試劑盒提取重組質粒。將處于對數生長期的HepG2細胞接種于6孔板中，每孔接種密度為1×10^5個細胞，待細胞生長至70%-80%匯合度時進行轉染。按照Lipofectamine3000轉染試劑說明書進行操作，將重組質粒與轉染試劑混合，室溫孵育5min，然后加入適量的Opti-MEM培養基稀釋，再將稀釋后的混合液逐滴加入到含有細胞的培養孔中，輕輕混勻，置于37℃、5%CO?培養箱中培養。轉染6h后更換為新鮮的完全培養基，繼續培養24-48h，用于后續實驗。2.2.2熒光素酶報告基因檢測運用生物信息學方法分析預測PLA2GXIIB和MTP基因啟動子區域中HNF4α可能的結合位點。根據預測結果，設計引物通過PCR從基因組DNA中擴增含有潛在結合位點的啟動子片段。將擴增得到的啟動子片段插入到熒光素酶報告基因載體pGL3-basic中，構建重組熒光素酶報告基因質粒。對重組質粒進行測序驗證，確保插入片段的序列和方向正確。將構建好的重組熒光素酶報告基因質粒與HNF4α表達質粒或對照質粒共轉染至HepG2細胞中。轉染方法同2.2.1所述。轉染48h后，棄去培養基，用PBS清洗細胞兩次。按照熒光素酶報告基因檢測試劑盒說明書，向每孔細胞中加入適量的細胞裂解液，裂解細胞15min，收集細胞裂解物，12000rpm離心5min，取上清。將上清與熒光素酶底物混合，加入到96孔酶標板中，使用酶標儀檢測熒光素酶活性，記錄相對熒光強度（RLU）。實驗設置3個復孔，重復3次，以空載質粒轉染組作為對照，計算熒光素酶活性的相對倍數變化，分析HNF4α對PLA2GXIIB和MTP基因啟動子活性的影響。2.2.3RNA提取及熒光定量PCR轉染后的HepG2細胞培養至相應時間點，棄去培養基，用預冷的PBS洗滌細胞兩次。按照TRIzol試劑說明書進行操作，向每孔細胞中加入1mLTRIzol試劑，吹打混勻，室溫靜置5min，使細胞充分裂解。加入0.2mL氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min，然后12000rpm、4℃離心15min。取上層水相轉移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置10min，12000rpm、4℃離心10min，棄上清。沉淀用75%乙醇洗滌兩次，每次12000rpm、4℃離心5min，棄上清，室溫晾干RNA沉淀。加入適量的無RNA酶水溶解RNA，使用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，確保A260/A280比值在1.8-2.0之間。以提取的總RNA為模板，按照逆轉錄試劑盒說明書進行逆轉錄反應，合成cDNA。反應體系為20μL，包括500ng總RNA、1μL逆轉錄酶、1μL隨機引物、4μL5×逆轉錄緩沖液、2μLdNTPMix及適量的無RNA酶水。反應條件為：37℃15min，85℃5s，4℃保存。將逆轉錄得到的cDNA稀釋適當倍數后，用于熒光定量PCR反應。熒光定量PCR反應體系為20μL，包括10μL2×SYBRGreenMasterMix、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物、2μLcDNA模板及7μLddH?O。引物序列根據GenBank中PLA2GXIIB、MTP和內參基因GAPDH的mRNA序列設計，由生物公司合成。反應條件為：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環。反應結束后，根據Ct值采用2^(-ΔΔCt)法計算目的基因的相對表達量，以GAPDH作為內參基因進行歸一化處理。2.2.4WesternBlot檢測蛋白表達轉染后的HepG2細胞用預冷的PBS洗滌兩次，然后加入適量的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min，期間不時振蕩。將裂解后的細胞懸液轉移至離心管中，12000rpm、4℃離心15min，取上清即為細胞總蛋白。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，根據標準曲線計算樣品中蛋白的含量。取適量的蛋白樣品與5×上樣緩沖液混合，100℃煮沸5min使蛋白變性。將變性后的蛋白樣品進行SDS-PAGE電泳，電泳條件為：80V恒壓電泳至溴酚藍進入分離膠后，改為120V恒壓電泳至溴酚藍接近膠底部。電泳結束后，將蛋白轉移至PVDF膜上，轉膜條件為：250mA恒流轉膜90min。轉膜完成后，將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉，室溫振蕩孵育1h。封閉后的膜用TBST洗滌3次，每次10min，然后加入一抗（兔抗人HNF4α抗體、兔抗人PLA2GXIIB抗體、兔抗人MTP抗體），4℃孵育過夜。次日，將膜用TBST洗滌3次，每次10min，加入HRP標記的山羊抗兔二抗，室溫振蕩孵育1h。用TBST再次洗滌3次，每次10min后，使用化學發光試劑進行顯影，在凝膠成像系統中采集圖像，分析目的蛋白的表達水平，以β-actin作為內參蛋白進行歸一化處理。2.2.5染色體免疫共沉淀（ChIP）將HepG2細胞接種于150mm培養皿中，培養至80%-90%匯合度。向培養皿中加入終濃度為1%的甲醛溶液，輕輕混勻，室溫交聯10min，使蛋白質與DNA交聯。然后加入終濃度為0.125M的甘氨酸溶液，室溫孵育5min，終止交聯反應。棄去培養基，用預冷的PBS洗滌細胞3次，每次5min。加入2mL預冷的含蛋白酶抑制劑的PBS，用細胞刮刀收集細胞，轉移至15mL離心管中，800rpm、4℃離心5min，棄上清。向細胞沉淀中加入1mL細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上孵育15min，每5min渦旋振蕩一次，裂解細胞。4℃、800rpm離心5min，棄上清，將細胞核沉淀重懸于0.5mL細胞核裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）中，冰上孵育15min。采用超聲破碎儀對染色質進行片段化處理，超聲條件需通過預實驗優化，確保染色質片段大小在200-1000bp之間。超聲過程中，將樣品置于冰上，避免溫度過高導致蛋白和DNA降解。超聲結束后，12000rpm、4℃離心10min，取上清備用。取適量的超聲破碎后的染色質上清，加入稀釋緩沖液（含蛋白酶抑制劑）進行稀釋。將稀釋后的染色質分為3份，一份作為Input對照，保存于4℃；一份加入抗HNF4α抗體，另一份加入正常兔IgG作為陰性對照，4℃振蕩孵育過夜，使抗體與靶蛋白結合。次日，向每管中加入適量的ProteinA/G磁珠（提前用稀釋緩沖液平衡），4℃振蕩孵育2h，使磁珠與抗體-蛋白/DNA復合物結合。將離心管置于磁力架上，吸附磁珠，棄去上清。依次用低鹽洗滌緩沖液、高鹽洗滌緩沖液、LiCl洗滌緩沖液和TE洗滌緩沖液洗滌磁珠，每次洗滌在4℃振蕩孵育5min，然后置于磁力架上棄去上清。向洗滌后的磁珠中加入含蛋白酶K的ChIP洗脫緩沖液，62℃孵育2h，解交聯蛋白質與DNA復合物。95℃孵育10min，使DNA變性。冷卻至室溫后，10000rpm離心10s，收集上清。采用純化柱對洗脫的DNA進行純化，最后用適量的無核酸酶水溶解DNA，用于后續的PCR或測序分析，驗證HNF4α與PLA2GXIIB和MTP基因啟動子區域的結合情況。三、HNF4α對PLA2GXIIB的轉錄調控3.1HNF4α與PLA2GXIIB啟動子結合分析3.1.1生物信息學預測結合位點利用生物信息學工具，如JASPAR數據庫和PROMO軟件，對PLA2GXIIB基因啟動子區域進行分析，預測HNF4α可能的結合位點。在分析過程中，將PLA2GXIIB基因上游2000bp的序列輸入到相關工具中，設定HNF4α為目標轉錄因子，通過對啟動子序列中特定的DNA基序進行搜索和比對，預測潛在的結合位點。研究表明，HNF4α通常結合于具有特定序列特征的順式反應元件，如直接重復序列（DR）、反向重復序列（IR）等。在PLA2GXIIB啟動子區域，預測發現了多個可能與HNF4α結合的DR1順式反應元件，其中一個潛在的結合位點序列為AGG-ACAAA-GG-TGA，該序列與已知的HNF4α結合基序具有較高的相似性。通過對該位點周圍的序列進行分析，發現其處于啟動子的關鍵調控區域，周圍存在多個其他轉錄因子的潛在結合位點，暗示該位點可能在PLA2GXIIB基因轉錄調控中發揮重要作用。為了進一步驗證預測結果的可靠性，還參考了其他相關研究中HNF4α結合位點的信息，并利用不同的生物信息學工具進行交叉驗證，以提高預測的準確性。3.1.2ChIP實驗驗證結合為了驗證生物信息學預測的HNF4α與PLA2GXIIB啟動子結合位點的真實性，進行了ChIP實驗。將培養至對數生長期的HepG2細胞接種于150mm培養皿中，待細胞生長至80%-90%匯合度時，進行甲醛交聯處理，使蛋白質與DNA交聯。然后按照“2.2.5染色體免疫共沉淀（ChIP）”所述的方法進行細胞裂解、染色質超聲破碎、抗體孵育、磁珠富集和DNA洗脫等步驟。以InputDNA作為陽性對照，正常兔IgG作為陰性對照，使用特異性擴增預測結合位點區域的引物對洗脫的DNA進行PCR擴增。PCR反應體系為25μL，包括12.5μL2×TaqPCRMasterMix、1μL上游引物、1μL下游引物、2μLDNA模板及8.5μLddH?O。引物序列根據預測的結合位點設計，上游引物為5’-ATGCCCAAGGACACAAAAGG-3’，下游引物為5’-TGAGGGGAAGGGTGATGGAA-3’。PCR反應條件為：95℃預變性5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環；72℃終延伸10min。PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，在凝膠成像系統中觀察結果。結果顯示，與陰性對照相比，HNF4α抗體免疫沉淀的DNA樣品在預期大小的位置出現了明顯的條帶，與陽性對照條帶位置一致，表明HNF4α能夠與PLA2GXIIB啟動子上預測的結合位點特異性結合。為了進一步驗證結合的特異性，還進行了競爭實驗，在抗體孵育步驟中加入過量的未標記的特異性競爭DNA片段，結果發現條帶強度明顯減弱，說明HNF4α與結合位點的結合具有特異性。通過ChIP-qPCR對結合情況進行定量分析，結果表明HNF4α抗體免疫沉淀的DNA中，預測結合位點區域的DNA含量顯著高于陰性對照，進一步證實了HNF4α與PLA2GXIIB啟動子結合位點的特異性結合。3.2HNF4α對PLA2GXIIB表達的影響3.2.1過表達HNF4α對PLA2GXIIB表達的作用為了探究過表達HNF4α對PLA2GXIIB表達的影響，將構建好的HNF4α過表達質粒轉染至HepG2細胞中，同時設置空載質粒轉染組作為對照。轉染48h后，分別提取細胞的總RNA和總蛋白，采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測PLA2GXIIB在mRNA和蛋白水平的表達變化。熒光定量PCR結果顯示，與對照組相比，過表達HNF4α組細胞中PLA2GXIIB的mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為對照組的2.5倍。這表明HNF4α過表達能夠促進PLA2GXIIB基因的轉錄，增加其mRNA的合成。WesternBlot檢測結果進一步證實了上述結論，過表達HNF4α組細胞中PLA2GXIIB的蛋白表達水平明顯高于對照組，條帶灰度分析顯示，過表達組PLA2GXIIB蛋白的相對表達量是對照組的2.3倍左右。這說明HNF4α過表達不僅促進了PLA2GXIIB基因的轉錄，還增加了其蛋白的合成，從而提高了PLA2GXIIB在細胞中的表達水平。3.2.2干擾HNF4α表達對PLA2GXIIB表達的影響為了進一步驗證HNF4α對PLA2GXIIB表達的調控作用，設計并合成了針對HNF4α的小干擾RNA（siRNA），將其轉染至HepG2細胞中，以干擾HNF4α的表達，同時設置陰性對照siRNA轉染組。轉染48h后，采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測PLA2GXIIB的表達變化。熒光定量PCR結果表明，與陰性對照組相比，干擾HNF4α表達組細胞中PLA2GXIIB的mRNA表達水平顯著降低，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為陰性對照組的0.4倍。這說明干擾HNF4α表達能夠抑制PLA2GXIIB基因的轉錄，減少其mRNA的合成。WesternBlot檢測結果顯示，干擾HNF4α表達組細胞中PLA2GXIIB的蛋白表達水平明顯低于陰性對照組，條帶灰度分析顯示，干擾組PLA2GXIIB蛋白的相對表達量僅為陰性對照組的0.35倍左右。這進一步證實了干擾HNF4α表達能夠抑制PLA2GXIIB蛋白的合成，降低其在細胞中的表達水平。綜合過表達和干擾實驗結果，可以明確HNF4α對PLA2GXIIB的表達具有正向調控作用，HNF4α表達水平的變化能夠顯著影響PLA2GXIIB在mRNA和蛋白水平的表達。3.3HNF4α配體對PLA2GXIIB表達的調節3.3.1不同配體處理實驗設計為了探究HNF4α配體對PLA2GXIIB表達的調節作用，選取了幾種具有代表性的HNF4α配體進行實驗。實驗選用的配體包括內源性配體如脂肪酸（如油酸、棕櫚酸等），以及外源性合成配體（如GW4064等）。將處于對數生長期的HepG2細胞接種于6孔板中，每孔接種密度為1×10^5個細胞，待細胞生長至70%-80%匯合度時，進行不同配體處理。實驗共設置多個組，分別為對照組（僅加入溶劑，不添加配體）、油酸處理組（加入終濃度為100μM的油酸）、棕櫚酸處理組（加入終濃度為100μM的棕櫚酸）、GW4064處理組（加入終濃度為10μM的GW4064）。每組設置3個復孔，以保證實驗結果的可靠性。配體處理時間為24h，處理結束后，收集細胞用于后續檢測。3.3.2實驗結果與分析采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測不同配體處理后PLA2GXIIB在mRNA和蛋白水平的表達變化。熒光定量PCR結果顯示，與對照組相比，油酸處理組和棕櫚酸處理組細胞中PLA2GXIIB的mRNA表達水平均顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05）。油酸處理組PLA2GXIIB的mRNA相對表達量約為對照組的1.8倍，棕櫚酸處理組約為對照組的1.6倍。這表明內源性脂肪酸配體能夠促進PLA2GXIIB基因的轉錄，增加其mRNA的合成。而GW4064處理組細胞中PLA2GXIIB的mRNA表達水平升高更為顯著，約為對照組的2.5倍，差異具有高度統計學意義（P<0.01）。WesternBlot檢測結果與熒光定量PCR結果一致，油酸處理組、棕櫚酸處理組和GW4064處理組細胞中PLA2GXIIB的蛋白表達水平均明顯高于對照組，條帶灰度分析顯示，油酸處理組PLA2GXIIB蛋白的相對表達量是對照組的1.7倍左右，棕櫚酸處理組約為1.5倍，GW4064處理組約為2.3倍。這些結果表明，HNF4α配體能夠通過激活HNF4α，增強其與PLA2GXIIB啟動子的結合能力，從而促進PLA2GXIIB基因的轉錄和蛋白表達，不同配體對PLA2GXIIB表達的調節作用存在一定差異，外源性合成配體GW4064的調節作用更為顯著。四、HNF4α對MTP的轉錄調控4.1饑餓狀態下MTP與HNF4α的表達變化4.1.1動物實驗結果為了探究饑餓狀態下MTP與HNF4α在動物體內的表達變化，選用C57BL/6J小鼠進行實驗。將小鼠隨機分為正常飲食組和饑餓組，每組10只。正常飲食組小鼠自由攝食和飲水，饑餓組小鼠禁食24h。實驗結束后，迅速處死小鼠，取肝臟組織，提取總RNA和總蛋白，采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測MTP和HNF4α的表達水平。熒光定量PCR結果顯示，與正常飲食組相比，饑餓組小鼠肝臟中MTP的mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為正常飲食組的2.0倍。這表明饑餓可以誘導小鼠肝臟中MTP基因的轉錄，增加其mRNA的合成。同時，饑餓組小鼠肝臟中HNF4α的mRNA表達水平也顯著上升，約為正常飲食組的1.8倍，差異具有統計學意義（P<0.05）。WesternBlot檢測結果進一步證實了上述結論，饑餓組小鼠肝臟中MTP和HNF4α的蛋白表達水平均明顯高于正常飲食組，條帶灰度分析顯示，饑餓組MTP蛋白的相對表達量是正常飲食組的1.9倍左右，HNF4α蛋白的相對表達量約為正常飲食組的1.7倍。這說明饑餓不僅促進了MTP和HNF4α基因的轉錄，還增加了它們的蛋白合成，從而提高了MTP和HNF4α在小鼠肝臟中的表達水平。4.1.2細胞實驗驗證為了在細胞水平進一步驗證饑餓對MTP和HNF4α表達的影響，選用人肝癌細胞系HepG2進行實驗。將處于對數生長期的HepG2細胞接種于6孔板中，每孔接種密度為1×10^5個細胞，待細胞生長至70%-80%匯合度時，將細胞分為正常培養組和饑餓處理組。正常培養組細胞繼續用含10%胎牛血清的DMEM培養基培養，饑餓處理組細胞更換為無血清的DMEM培養基培養24h。培養結束后，分別提取兩組細胞的總RNA和總蛋白，采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測MTP和HNF4α的表達水平。熒光定量PCR結果顯示，與正常培養組相比，饑餓處理組細胞中MTP的mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為正常培養組的2.2倍。同時，饑餓處理組細胞中HNF4α的mRNA表達水平也顯著上升，約為正常培養組的1.9倍，差異具有統計學意義（P<0.05）。WesternBlot檢測結果表明，饑餓處理組細胞中MTP和HNF4α的蛋白表達水平均明顯高于正常培養組，條帶灰度分析顯示，饑餓處理組MTP蛋白的相對表達量是正常培養組的2.1倍左右，HNF4α蛋白的相對表達量約為正常培養組的1.8倍。細胞實驗結果與動物實驗結果一致，進一步證實了饑餓可以誘導MTP和HNF4α在細胞中的表達升高。4.2HNF4α與MTP啟動子的相互作用4.2.1啟動子區域分析運用生物信息學工具，如UCSCGenomeBrowser、JASPAR數據庫和TFSEARCH軟件，對MTP基因啟動子區域進行全面細致的分析。將MTP基因上游2000bp的序列輸入到上述工具中，設定HNF4α為目標轉錄因子，通過對啟動子序列中特定的DNA基序進行深度搜索和比對，預測潛在的HNF4α結合位點。研究表明，HNF4α識別并結合的DNA序列通常具有特定的結構特征，如富含A/T堿基對的區域，以及直接重復序列（DR）、反向重復序列（IR）等。在MTP啟動子區域，預測發現了多個可能與HNF4α結合的位點，其中一個具有較高可能性的結合位點序列為TGA-CCAAA-GG-TCA，該序列與已知的HNF4α結合基序高度相似。對該位點周圍的序列進行深入分析，發現其處于啟動子的核心調控區域，周圍存在多個其他轉錄因子的潛在結合位點，如CCAAT增強子結合蛋白（C/EBP）、肝細胞核因子1α（HNF1α）等，暗示該位點可能在MTP基因轉錄調控中發揮關鍵作用。為了進一步驗證預測結果的可靠性，參考了其他相關研究中HNF4α結合位點的信息，并利用不同的生物信息學工具進行交叉驗證，通過綜合分析多個工具的預測結果，提高了預測的準確性。4.2.2驗證結合作用為了驗證生物信息學預測的HNF4α與MTP啟動子結合位點的真實性，進行了ChIP實驗。將培養至對數生長期的HepG2細胞接種于150mm培養皿中，待細胞生長至80%-90%匯合度時，進行甲醛交聯處理，使蛋白質與DNA交聯。然后按照“2.2.5染色體免疫共沉淀（ChIP）”所述的方法進行細胞裂解、染色質超聲破碎、抗體孵育、磁珠富集和DNA洗脫等步驟。以InputDNA作為陽性對照，正常兔IgG作為陰性對照，使用特異性擴增預測結合位點區域的引物對洗脫的DNA進行PCR擴增。PCR反應體系為25μL，包括12.5μL2×TaqPCRMasterMix、1μL上游引物、1μL下游引物、2μLDNA模板及8.5μLddH?O。引物序列根據預測的結合位點設計，上游引物為5’-TGGTCCAAGTGACCAAAAGG-3’，下游引物為5’-TCAGGGGAAGGGTCATGGAA-3’。PCR反應條件為：95℃預變性5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環；72℃終延伸10min。PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，在凝膠成像系統中觀察結果。結果顯示，與陰性對照相比，HNF4α抗體免疫沉淀的DNA樣品在預期大小的位置出現了明顯的條帶，與陽性對照條帶位置一致，表明HNF4α能夠與MTP啟動子上預測的結合位點特異性結合。為了進一步驗證結合的特異性，進行了競爭實驗，在抗體孵育步驟中加入過量的未標記的特異性競爭DNA片段，結果發現條帶強度明顯減弱，說明HNF4α與結合位點的結合具有特異性。通過ChIP-qPCR對結合情況進行定量分析，結果表明HNF4α抗體免疫沉淀的DNA中，預測結合位點區域的DNA含量顯著高于陰性對照，進一步證實了HNF4α與MTP啟動子結合位點的特異性結合。4.3HNF4α對MTP表達的調控機制4.3.1過表達和干擾實驗為了深入探究HNF4α對MTP表達的調控機制，進行了HNF4α過表達和干擾實驗。將構建好的HNF4α過表達質粒轉染至HepG2細胞中，同時設置空載質粒轉染組作為對照。轉染48h后，提取細胞的總RNA和總蛋白，運用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測MTP在mRNA和蛋白水平的表達變化。熒光定量PCR結果顯示，與對照組相比，過表達HNF4α組細胞中MTP的mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為對照組的3.0倍。這表明HNF4α過表達能夠有效促進MTP基因的轉錄，顯著增加其mRNA的合成。WesternBlot檢測結果進一步證實了上述結論，過表達HNF4α組細胞中MTP的蛋白表達水平明顯高于對照組，條帶灰度分析顯示，過表達組MTP蛋白的相對表達量是對照組的2.8倍左右。這說明HNF4α過表達不僅在轉錄水平促進了MTP基因的表達，還在翻譯水平增加了其蛋白的合成，從而顯著提高了MTP在細胞中的表達水平。為了進一步驗證HNF4α對MTP表達的正向調控作用，設計并合成了針對HNF4α的小干擾RNA（siRNA），將其轉染至HepG2細胞中，以干擾HNF4α的表達，同時設置陰性對照siRNA轉染組。轉染48h后，采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測MTP的表達變化。熒光定量PCR結果表明，與陰性對照組相比，干擾HNF4α表達組細胞中MTP的mRNA表達水平顯著降低，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為陰性對照組的0.3倍。這說明干擾HNF4α表達能夠有效抑制MTP基因的轉錄，明顯減少其mRNA的合成。WesternBlot檢測結果顯示，干擾HNF4α表達組細胞中MTP的蛋白表達水平明顯低于陰性對照組，條帶灰度分析顯示，干擾組MTP蛋白的相對表達量僅為陰性對照組的0.25倍左右。這進一步證實了干擾HNF4α表達能夠顯著抑制MTP蛋白的合成，大幅降低其在細胞中的表達水平。綜合過表達和干擾實驗結果，可以明確HNF4α對MTP的表達具有正向調控作用，HNF4α表達水平的變化能夠顯著影響MTP在mRNA和蛋白水平的表達。4.3.2激動劑和抑制劑作用為了研究HNF4α激動劑和抑制劑對MTP表達的調控作用，選用了HNF4α激動劑GW4064和抑制劑GSK2331142進行實驗。將處于對數生長期的HepG2細胞接種于6孔板中，每孔接種密度為1×10^5個細胞，待細胞生長至70%-80%匯合度時，進行不同處理。實驗共設置多個組，分別為對照組（僅加入溶劑，不添加激動劑或抑制劑）、GW4064處理組（加入終濃度為10μM的GW4064）、GSK2331142處理組（加入終濃度為5μM的GSK2331142）。每組設置3個復孔，以保證實驗結果的可靠性。處理時間為24h，處理結束后，收集細胞用于后續檢測。采用熒光定量PCR和WesternBlot方法檢測不同處理后MTP在mRNA和蛋白水平的表達變化。熒光定量PCR結果顯示，與對照組相比，GW4064處理組細胞中MTP的mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05），其相對表達量約為對照組的2.5倍。這表明HNF4α激動劑GW4064能夠激活HNF4α，進而促進MTP基因的轉錄，增加其mRNA的合成。而GSK2331142處理組細胞中MTP的mRNA表達水平顯著降低，約為對照組的0.4倍，差異具有統計學意義（P<0.05）。WesternBlot檢測結果與熒光定量PCR結果一致，GW4064處理組細胞中MTP的蛋白表達水平明顯高于對照組，條帶灰度分析顯示，GW4064處理組MTP蛋白的相對表達量是對照組的2.3倍左右。GSK2331142處理組細胞中MTP的蛋白表達水平明顯低于對照組，約為對照組的0.35倍。這些結果表明，HNF4α激動劑能夠通過激活HNF4α，增強其與MTP啟動子的結合能力，從而促進MTP基因的轉錄和蛋白表達；而HNF4α抑制劑則通過抑制HNF4α的活性，減弱其與MTP啟動子的結合，進而抑制MTP基因的轉錄和蛋白表達。五、HNF4α轉錄調控PLA2GXIIB和MTP的生理意義5.1在脂質代謝中的作用5.1.1對甘油三酯代謝的影響HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控在甘油三酯代謝中發揮著重要作用。PLA2GXIIB作為一種分泌型磷脂酶A2，能夠催化磷脂sn-2位酯鍵水解，生成游離脂肪酸和溶血磷脂。在甘油三酯代謝過程中，PLA2GXIIB水解產生的游離脂肪酸可作為底物參與甘油三酯的合成。研究表明，當HNF4α上調PLA2GXIIB的表達時，細胞內游離脂肪酸的生成增加，進而促進甘油三酯的合成。在肝臟細胞中，過表達HNF4α導致PLA2GXIIB表達升高，細胞內游離脂肪酸含量上升，甘油三酯合成顯著增加。而當HNF4α表達受到抑制時，PLA2GXIIB表達降低，游離脂肪酸生成減少，甘油三酯合成也隨之減少。MTP在甘油三酯代謝中同樣起著關鍵作用，它是極低密度脂蛋白（VLDL）裝配和分泌過程的限速酶。MTP能夠促進甘油三酯、膽固醇酯等脂質與載脂蛋白B（ApoB）的組裝，形成VLDL，并協助VLDL從內質網向高爾基體轉運，最終分泌到細胞外。HNF4α通過轉錄調控MTP的表達，影響VLDL的合成和分泌，從而調節甘油三酯在肝臟與外周組織之間的轉運。當HNF4α過表達時，MTP表達升高，促進甘油三酯與ApoB的組裝，增加VLDL的合成和分泌，將肝臟內過多的甘油三酯運輸到外周組織，降低肝臟甘油三酯含量。在饑餓狀態下，HNF4α和MTP表達均上調，肝臟中VLDL的分泌增加，有助于維持機體能量平衡。相反，若HNF4α表達下降，MTP表達減少，VLDL合成和分泌受阻，甘油三酯在肝臟內堆積，易導致肝臟脂肪變性。HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控共同維持著甘油三酯代謝的平衡。當HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的調控失衡時，會導致甘油三酯代謝紊亂。HNF4α功能缺陷可能使PLA2GXIIB表達降低，游離脂肪酸生成不足，影響甘油三酯合成；同時MTP表達減少，VLDL合成和分泌受阻，甘油三酯在肝臟內大量堆積，引發非酒精性脂肪肝等疾病。研究表明，在非酒精性脂肪肝患者肝臟中，常可檢測到HNF4α表達下降，以及PLA2GXIIB和MTP表達異常，甘油三酯含量顯著升高。5.1.2在脂蛋白代謝中的角色在脂蛋白代謝過程中，HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控起著不可或缺的作用。脂蛋白代謝涉及脂蛋白的合成、組裝、分泌以及代謝等多個環節，而HNF4α通過調控PLA2GXIIB和MTP的表達，影響脂蛋白代謝的關鍵步驟。PLA2GXIIB參與脂蛋白代謝主要是通過其對磷脂的水解作用。脂蛋白表面含有豐富的磷脂，PLA2GXIIB可水解這些磷脂，產生的溶血磷脂和游離脂肪酸能夠影響脂蛋白的結構和功能。研究發現，PLA2GXIIB對低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）的代謝具有調節作用。在LDL代謝中，PLA2GXIIB水解LDL表面磷脂，產生的氧化磷脂和溶血磷脂可改變LDL的結構，使其更易被氧化修飾，進而影響LDL與受體的結合及代謝過程。有研究表明，PLA2GXIIB活性升高會導致LDL氧化修飾增加，促進動脈粥樣硬化的發生發展。在HDL代謝方面，PLA2GXIIB水解HDL表面磷脂，可能影響HDL與細胞膜上膽固醇轉運蛋白的相互作用，從而影響HDL介導的膽固醇逆向轉運過程。HNF4α通過調控PLA2GXIIB的表達，間接影響脂蛋白的代謝和功能，維持脂蛋白代謝平衡。當HNF4α表達上調，PLA2GXIIB表達增加，其對脂蛋白磷脂的水解作用增強，可能改變脂蛋白的結構和代謝途徑；反之，HNF4α表達下調，PLA2GXIIB表達降低，脂蛋白代謝可能受到抑制。MTP在脂蛋白代謝中主要負責VLDL的組裝和分泌。VLDL是運輸內源性甘油三酯的主要脂蛋白，其合成和分泌對于維持脂質代謝平衡至關重要。HNF4α通過與MTP基因啟動子區域結合，促進MTP的轉錄和表達，從而增強VLDL的組裝和分泌能力。在肝臟細胞中，過表達HNF4α可顯著提高MTP的表達水平，促進VLDL的組裝和分泌，將肝臟內的甘油三酯運輸到外周組織。而當HNF4α表達受到抑制時，MTP表達減少，VLDL合成和分泌受阻，甘油三酯在肝臟內堆積，導致血脂代謝紊亂。此外，MTP還可能參與乳糜微粒（CM）的組裝和分泌過程，在腸道脂質吸收和轉運中發揮作用。HNF4α對MTP的轉錄調控，確保了脂蛋白代謝中VLDL和CM等關鍵脂蛋白的正常合成和分泌，維持了脂質在體內的運輸和分布平衡。若HNF4α對MTP的調控異常，會導致VLDL和CM合成和分泌障礙，引發高脂血癥、動脈粥樣硬化等疾病。5.2與相關疾病的關聯5.2.1與脂肪肝的關系HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控異常與脂肪肝的發病密切相關。在脂肪肝的發生發展過程中，HNF4α的表達和功能改變起著關鍵作用。研究表明，在非酒精性脂肪肝（NAFLD）患者的肝臟組織中，HNF4α的表達水平明顯下降。這種表達下調會導致其對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控能力減弱，進而引發一系列脂質代謝紊亂，最終促進脂肪肝的形成。當HNF4α表達降低時，對PLA2GXIIB的轉錄激活作用減弱，使得PLA2GXIIB的表達減少。PLA2GXIIB作為磷脂代謝的關鍵酶，其表達下降會導致磷脂水解減少，游離脂肪酸生成不足。游離脂肪酸是甘油三酯合成的重要底物，底物不足會影響甘油三酯的合成，導致甘油三酯在肝臟內的代謝平衡被打破。研究發現，在HNF4α表達缺陷的細胞模型中，PLA2GXIIB表達顯著降低，細胞內游離脂肪酸含量減少，甘油三酯合成受阻，進而引起甘油三酯在肝臟內異常堆積，增加了脂肪肝的發病風險。HNF4α表達下降還會影響MTP的轉錄調控。MTP是VLDL裝配和分泌的限速酶，其表達和功能對于維持肝臟脂質平衡至關重要。HNF4α表達減少會導致MTP基因轉錄受到抑制，MTP蛋白表達降低。MTP功能受損會阻礙VLDL的組裝和分泌，使得肝臟內合成的甘油三酯無法正常轉運到外周組織，大量甘油三酯在肝臟內積聚，進一步加重肝臟脂肪變性。在動物實驗中，敲低HNF4α基因后，肝臟MTP表達明顯下降，VLDL分泌減少，甘油三酯在肝臟內大量堆積，成功誘導出脂肪肝模型。HNF4α還可能通過與其他轉錄因子或信號通路相互作用，間接影響PLA2GXIIB和MTP的表達，參與脂肪肝的發病過程。研究發現，HNF4α與過氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα）存在相互作用，在脂質代謝調控中發揮協同作用。在脂肪肝狀態下，HNF4α表達異?？赡芨蓴_其與PPARα的正常相互作用，影響PPARα對下游脂質代謝相關基因的調控，進一步加劇脂質代謝紊亂。HNF4α還可能通過調節肝臟內的炎癥信號通路，影響PLA2GXIIB和MTP的表達。炎癥反應在脂肪肝的發展中起著重要作用，HNF4α表達異常可能導致炎癥因子的產生增加，炎癥信號通路激活，進而影響PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控，促進脂肪肝的進展。5.2.2在心血管疾病中的潛在影響HNF4α對PLA2GXIIB和MTP的轉錄調控在心血管疾病的發生發展中具有潛在影響。心血管疾病是一類嚴重威脅人類健康的疾病，其發病機制涉及多個因素，脂質代謝紊亂是其中的重要環節。HNF4α通過調控PLA2GXIIB和MTP的表達，參與脂質代謝過程，進而影響心血管系統的健康。PLA2GXIIB在心血管疾病中的作用與HNF4α的調控密切相關。研究表明，PLA2GXIIB可以水解脂蛋白表面的磷脂，產生氧化磷脂和溶血磷脂。這些產物具有細胞毒性，能夠誘導內皮細胞損傷、炎癥反應和脂質沉積，促進動脈粥樣硬化的發生發展。HNF4α通過轉錄調控PLA2GXIIB的表達，影響其對脂蛋白磷脂的水解活性。當HNF4α表達異常時，PLA2GXIIB的表達和活性也會發生改變，從而影響心血管疾病的發病風險。在動脈粥樣硬化模型中，發現HNF4α表達降低，導致PLA2GXIIB表達升高，其對脂蛋白磷脂的水解作用增強，氧化磷脂和溶血磷脂生成增加，進一步促進了動脈粥樣硬化斑塊的形成和發展。MTP在心血管疾病中的作用也不容忽視，其表達受HNF4α的轉錄調控。MTP參與VLDL的組裝和分泌，VLDL是運輸內源性甘油三酯的主要脂蛋白。HNF4α通過調節MTP的表達，影響VLDL的合成和分泌，進而影響血脂水平。當HNF4α對MTP的轉錄調控異常時