2010年版中國藥典

微生物檢驗主要增修訂內容1增修訂背景藥品微生物限度檢查、無菌檢查各論標準化的研究藥品微生物限度檢查用培養基靈敏度檢查方法的研究中國藥典與國外藥典細菌計數方法的比較離心集菌法標準化的研究貼膏劑微生物限度檢查法的研究大腸菌群檢查用培養基的比較白色念珠菌檢查法的研究防腐劑效力測定方法的研究藥品微生物檢驗替代方法驗證的方法研究2浙江所承擔的主要工作科研工作藥品微生物檢驗替代方法驗證的方法研究藥品微生物限度檢查、無菌檢查各論標準化的研究藥品微生物限度檢查用培養基靈敏度檢查方法的研究中國藥典與國外藥典細菌計數方法的比較大腸菌群檢查用培養基的比較附錄增修訂工作藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則3主要成果藥品微生物限度檢查和無菌檢查的各論標準化修訂了無菌檢查法增修訂了微生物限度檢查法修訂了一個指導原則－滅菌法新增了四個指導原則抑菌劑效力檢查法指導原則藥品微生物實驗室規范指導原則微生物限度檢查法應用指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則4各論標準化微生物限度檢查各論富馬酸酮替芬滴鼻液、聚維酮碘溶液5各論標準化無菌檢查各論亞葉酸鈣注射液注射用泮托拉唑鈉復方庚酸炔諾酮注射液甲硝唑注射液注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉

6無菌檢查法前言部分培養基靈敏度檢查稀釋液、沖洗液等方法驗證薄膜過濾法培養及觀察結果判斷表1、表2和表37前言部分規定了防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出規定了日常檢驗還需要對環境進行監控對無菌檢查的人員資質提出了要求8培養基刪除了硫乙醇酸鹽流體培養基用于培養好氧菌、厭氧菌的規定刪除了改良馬丁培養基用于培養真菌的規定9靈敏度檢查修訂了黑曲霉的孢子懸液制備方法，規定應使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋規定了稀釋后的工作用菌液的保存條件和保存期限10稀釋液、沖洗液等規定可根據供試品的特性，選用其他經驗證的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液11方法驗證標準菌種的選擇上，刪除了銅綠假單胞菌，增訂了大腸埃希菌明確規定了薄膜過濾法驗證時，應取每種培養基規定接種的供試品總量用于過濾12薄膜過濾法增訂了抗生素供試品應選擇低吸附的濾器及濾膜的規定對每片濾膜的總沖洗量進行了規定，不得過1000ml修訂了無菌氣（噴）霧劑供試品的檢驗方法，規定冰室的溫度應至少為-20℃對裝有藥物的注射器供試品的檢驗方法進行了詳細的規定13培養及觀察對于培養14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長的情況，刪除了可劃線接種于斜面培養基上的規定，同時刪除了可根據斜面是否有菌生長而判斷的規定14結果判斷增訂了陽性對照管和陰性對照管的實驗結果對于整體實驗結果判斷的作用15表1、表2和表3表1修訂了注釋項，對供試品容器裝量不夠接種兩種培養基的情況，明確規定最少檢驗數量應加倍表2修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定液體制劑的最少檢驗量修訂了注釋項，對供試品容器裝量不夠接種兩種培養基的情況，明確規定最少檢驗數量應加倍表3修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定固體制劑的最少檢驗量修訂了注釋項，對供試品容器裝量不夠接種兩種培養基的情況，明確規定最少檢驗數量應加倍16微生物限度檢查法前言及檢驗量供試液制備計數實驗的培養基適用性計數實驗的方法驗證計數實驗的操作方法控制菌檢查的培養基適用性控制菌檢查的方法驗證控制菌檢查的內容標準體系17前言及檢驗量前言中修訂了控制菌檢查的溫度，規定與細菌計數實驗溫度相同，均為30～35℃前言中增訂了對于特殊品種可以最小包裝單位報告的規定檢驗量中對要求進行沙門菌檢查的供試品，其檢驗量應增加20g或20ml的規定18供試液制備增訂了貼劑供試品的制備方法修訂了離心沉淀法，刪除了高速離心的規定，并對該方法的使用范圍進行了限定19計數實驗的培養基適用性該部分內容均為新增規定了該內容的應用范圍采用標準菌種計數，回收率以及形態比較的判定方法標準菌種為：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；規定了稀釋后的工作菌液的保存條件和保存期限引入了對照培養基的概念判定的依據：回收率大于70％，且形態一致20計數實驗的方法驗證增訂了常見干擾物的中和劑或滅活方法的參考表格對采用多種方法仍無法得到滿意驗證結果的情況，提供了兩種辦法允許使用更高稀釋級的供試液進行方法驗證實驗，并以該稀釋級供試液作為最低稀釋級供試液進行供試品檢驗允許選擇回收情況最接近要求的方法和試驗條件進行供試品的檢驗21計數實驗的操作方法平皿法刪除了應取2～3個連續適宜稀釋級供試液進行檢驗的規定細菌培養時間延長為3天，霉菌、酵母菌培養時間延長為5天；規定必要時均可延長至7天菌數報告規則進行了修訂：計數不再設置下限；以最高的平均菌落數乘以稀釋倍數的值報告供試品中所含的菌數薄膜過濾法濾膜直徑調整為約50mm，并規定若采用其它直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整總沖洗量規定不得超過1000ml22控制菌檢查的培養基適用性該部分內容均為新增規定了該部分內容的應用范圍以及檢查的項目采用標準菌種比較的判定方法根據培養基的用途不同，分為增菌培養基的促生長能力、固體培養基的促生長能力、培養基的抑制能力、固體培養基的指示能力、液體培養基的指示能力等5種檢查方法在檢查中引入了涂布接種的概念23控制菌檢查的方法驗證刪除了陰性菌對照組的概念24控制菌檢查的內容所有的生化試驗均修訂為鑒定試驗大腸菌群的培養基進行了修訂，現改用乳糖膽鹽發酵培養基梭菌的增菌培養基修訂為梭菌增菌培養基，刪除了庖肉培養基增訂了白色念珠菌檢查法，并增訂了與之相關的培養基25標準體系菌落計數單位從“個”修訂為“cfu”陰道、尿道給藥制劑增訂了白色念珠菌控制要求直腸給藥制劑刪除了大腸埃希菌的控制要求26滅菌法前言濕熱滅菌法過濾除菌法生物指示劑的制備27前言修訂了滅菌法的定義，強調滅菌法的作用是使被滅菌物品中殘存微生物的概率下降至某一預期水平，從而突出了滅菌不是絕對的這一理念。修訂了無菌保證水平的表述方式，強調其含義在于物品中活微生物的概率降低至某個可接受的水平。明確了對于最終滅菌物品而言，其微生物存活概率，即無菌保證水平不得高于百萬分之一。在選擇確定滅菌工藝時，增訂了應考慮滅菌后物品的穩定性的規定。28濕熱滅菌法增訂了選擇濕熱滅菌條件時應綜合考慮的因素，如滅菌物品的熱穩定性、熱穿透力以及微生物污染程度等修訂了F0值的概念，突出了等效121℃標準滅菌時間的含義規定當選用F0值概念進行滅菌程序控制時，除了對滅菌程序進行驗證外，還必須在生產過程中對微生物進行監控，證明其數量低于設定的限度對熱不穩定物品，強調應在生產全過程對產品中污染的微生物進行連續監控，并防止耐熱菌的污染。規定這一類產品的F0值一般不低于8min，刪除了“如產品的熱穩定性很差時，可允許濕熱滅菌的F0低于8”的規定。29過濾除菌法對過濾器孔徑的定義進行了說明，強調孔徑與微生物的截留性能有關，而不是平均孔徑的分布系數根據濾器孔徑的定義，規定用于最終除菌的過濾器，必須選擇除菌級過濾器，并應提供截留實驗證明對過濾器的穩定性以及與被過濾液體的相容性進行了規定，明確過濾器使用者具有了解并評估這些性能的責任增訂了濾膜完整性測試的標準，指出該測試標準應來自于相關細菌截留實驗的數據規定了過濾操作的生產環境－無菌環境，將原標準中的“建議”修訂為“應”30生物指示劑的制備規定生物指示劑在制備完成后，應測定D值和孢子總數。31藥品微生物實驗室規范指導原則前言人員培養基菌種實驗室的布局和運行設備文件實驗記錄結果的判斷32前言規定了該指導原則用于指導質量控制指出制訂實驗室規范的必要性人員人員的專業背景人員培訓應覆蓋儀器設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等應通過內部質量控制、能力驗證或使用標準菌株等方法評估檢驗人員的能力33培養基培養基的制備應按處方配制培養基，也可使用市售的脫水培養基配制培養基的水應該是純化水培養基滅菌一般采用濕熱滅菌技術，特殊培養基可采用薄膜過濾除菌培養基應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。應對高壓滅菌器的蒸汽循環系統進行驗證，確保在一定裝載方式下的正常熱分布應確定每批培養基滅菌后的pH值（25℃下測定）應對分裝后的培養基進行質量檢查，并記錄批數量、有效期及無菌情況等信息34培養基的貯藏自配培養基應標記名稱、批號、配制日期等信息，商品化的成品培養基應標記名稱、批號、生產日期和失效期等信息。滅菌后的培養基應盡快從滅菌器內取出，瓊脂培養基應防止冷凍，容器應密閉，防止水分流失；瓊脂平板宜臨用新配，如置冰箱保存，一般不超過一周，如需延長，則應對保存期進行驗證。固體培養基滅菌后只允許再融化一次，一般采用水浴加熱或流通蒸汽的方式，如使用微波爐，應避免過度加熱和水分流失。融化后的培養基應置45～50℃的水浴中保溫，時間不得超過8小時。35培養基的質量控制試驗實驗室應制訂培養基質量控制程序所有配制好的培養基均應進行質量控制試驗培養基質量控制的項目有：pH值、適用性檢查和定期的穩定性檢查當培養基的配制和滅菌程序等均已驗證，則同一批次的脫水培養基的適用性檢查試驗可只進行一次用于環境監控的培養基須特別防護，用于關鍵區域監控的培養基宜雙層包裝和終端滅菌，以防出現假陽性36菌種菌種的來源：已認可的國內或國外菌種保藏機構的標準菌株，或與標準菌株所有相關特性等效的商業派生菌株由標準菌株復活得到的為標準儲備菌株；應對標準儲備菌株進行純度和特性確認；建議采用凍干、液氮或超低溫保存的方法使用標準儲備菌株制備工作菌株冷凍菌株解凍后，不得重新冷凍和再次使用工作菌株的傳代次數不得超過5代代的定義：活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次實驗室應建立文件化的程序管理菌種（從標準菌株到工作菌株）37實驗室的布局和運行實驗室布局的原則：最大程度防止微生物的污染，防止檢驗過程對環境和人員造成危害實驗室應具備：滿足無菌檢查、微生物限度檢查和無菌采樣等活動的獨立設置的潔凈室（區）或隔離系統；配套的細菌（真菌）實驗室、培養室、準備區、樣品接受和貯藏區、標準菌株貯藏區、污染物處理區和文檔處理區等輔助實驗室；上述區域應明確標識應建立潔凈區的使用、維護、驗證等活動的標準操作規程實驗室的操作應避免交叉污染應建立實驗室生物安全的應急控制預案應建立微生物實驗廢棄物的處理規程38設備微生物實驗室所用的儀器設備應定期校準，并記錄培養箱、冰箱等重要設備應確保狀態正常，并有措施保證其工作的連續性培養箱、冰箱、滅菌器等應對關鍵參數進行連續觀測和記錄，應評估發生的偏差對實驗結果的影響水浴鍋、培養箱、冰箱和生物安全柜等應定期清潔和消毒無菌器具應有明顯的標識39文件一般包括以下內容人員培訓與資格確認設備驗收、檢定（校準、期間核查）和維修設備關鍵參數和使用記錄（如24小時或7天記錄圖）培養基制備、貯藏和質量控制檢驗過程中的關鍵步驟數據記錄與結果計算數據偏離的調查40實驗記錄原始記錄至少包括以下內容實驗日期檢品名稱實驗人員姓名實驗方法實驗結果偏差（存在時）實驗參數（設備、菌種、培養條件、培養基信息等）簽名41結果的判斷主要是對不符合標準的結果進行判斷導致不符合的原因實驗過程中的污染樣品污染了超過限度標準的微生物對前一種原因，應充分考慮實驗室環境、抽樣條件、樣品檢驗過程等環節如確定為第一種原因，則應判結果無效，重新進行實驗對重試應加以監控42微生物限度檢查法應用指導原則制訂該指導原則的目的在于指導對微生物限度檢查法的應用，是對該檢查法某些未盡事宜的說明主要對以下內容進行了說明應采用產品中可能污染的微生物進行表面活性劑、滅活劑、中和劑等的毒性試驗應選擇操作簡便、快速的檢驗方法，避免對微生物的損傷；去除抑菌作用首選薄膜過濾法對離心法限制使用的原因作出了解釋43對培養基適用性實驗中提到的對照培養基作出了說明，并指出由中檢所提供。對方法驗證中允許使用更高稀釋級供試液進行驗證作出了解釋，指出應根據產品的微生物限度確定更高稀釋級的上限對供試品中檢出疑似菌的情況，指出應采用被認可的菌種鑒定方法明確了附錄收載的“藥品微生物限度標準”的法律地位44對制劑通則中沒有規定必須進行微生物限度檢