DKK-1與β-catenin在非小細胞肺癌中的表達關聯及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義肺癌作為全球范圍內發病率和死亡率極高的惡性腫瘤，嚴重威脅人類健康。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥負擔數據顯示，肺癌新發病例數達220萬，死亡病例數為180萬，均位居各類癌癥之首。非小細胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）是肺癌中最常見的類型，約占肺癌病例的85%。由于早期NSCLC癥狀隱匿，多數患者確診時已處于中晚期，失去了手術根治的機會，5年生存率僅為15%-20%。因此，深入研究NSCLC的發病機制，尋找有效的早期診斷標志物和治療靶點，對于提高患者生存率和改善預后具有至關重要的意義。DKK-1（Dickkopf-1）是一種分泌型糖蛋白，屬于DKK家族成員。它通過與相應的受體結合來調控細胞內的信號傳導，在細胞的分化、增殖、生存、凋亡、遷移等過程中發揮重要作用。在腫瘤發生方面，DKK-1被認為是一種潛在的腫瘤標志物。有研究表明，在多種腫瘤組織中，DKK-1的表達水平與腫瘤的發生、發展、轉移及預后密切相關。例如，在乳腺癌中，DKK-1的高表達與腫瘤的侵襲性和不良預后相關；在結直腸癌中，DKK-1的異常表達參與了腫瘤的轉移過程。然而，DKK-1在NSCLC中的表達情況及作用機制尚不完全清楚。β-catenin是一種多功能的蛋白質，在細胞黏附和Wnt信號通路中起著關鍵作用。在正常生理狀態下，β-catenin主要參與細胞間的黏附連接，維持細胞的正常結構和功能。當Wnt信號通路激活時，β-catenin會在細胞質中積累，并進入細胞核與轉錄因子結合，啟動相關基因的轉錄，從而調控細胞的增殖、分化和遷移等過程。在腫瘤發生過程中，β-catenin的異常激活或表達失調與多種腫瘤的發生、發展密切相關。已有研究證實，在NSCLC組織中，β-catenin的異常表達與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移及患者預后相關。研究DKK-1和β-catenin在NSCLC中的表達及其相關性，有助于深入了解NSCLC的發病機制。通過揭示二者在NSCLC發生、發展過程中的作用及相互關系，有望為NSCLC的早期診斷提供新的標志物。例如，若發現DKK-1和β-catenin的異常表達與NSCLC的早期階段密切相關，則可將其作為早期診斷的指標，提高早期診斷率。對于NSCLC的治療，明確二者的作用機制及相關性，可為開發新的治療靶點提供理論依據。如針對DKK-1或β-catenin相關的信號通路進行干預，可能為NSCLC患者提供更有效的治療方法，改善患者的預后，提高其生存質量。1.2國內外研究現狀在國外，關于DKK-1在非小細胞肺癌中的研究開展較早。一些研究通過對大量NSCLC患者的組織樣本進行檢測分析，發現DKK-1在NSCLC組織中的表達水平與腫瘤的臨床分期密切相關。在臨床分期較晚的NSCLC患者中，DKK-1的表達明顯升高，這表明DKK-1可能參與了NSCLC的進展過程。部分研究還發現，DKK-1在NSCLC患者的血清中也有異常表達，且血清中DKK-1的水平與腫瘤的大小、轉移情況相關，提示其在NSCLC的診斷和病情監測方面具有潛在價值。關于β-catenin在NSCLC中的研究，國外學者通過免疫組化等技術深入探究其表達與腫瘤生物學行為的關系。研究結果顯示，β-catenin的異常表達在NSCLC中較為常見，且與腫瘤的低分化程度相關。低分化的NSCLC組織中，β-catenin呈現高表達狀態，這可能影響腫瘤細胞的分化進程，導致腫瘤細胞惡性程度增加。β-catenin的表達還與NSCLC患者的不良預后相關，高表達β-catenin的患者生存期相對較短，復發風險較高。在DKK-1和β-catenin在NSCLC中的相關性研究方面，國外有研究利用細胞實驗和動物模型，初步探討了二者在信號通路層面的聯系。研究發現，DKK-1可能通過調節Wnt信號通路，間接影響β-catenin的表達和活性。在一些NSCLC細胞系中，抑制DKK-1的表達后，β-catenin的核轉位增加，下游靶基因的表達也發生改變，提示二者在NSCLC的發生發展過程中存在相互作用的機制。國內對于DKK-1和β-catenin在NSCLC中的研究也取得了一系列成果。在DKK-1的研究中，有學者對不同病理類型的NSCLC組織進行檢測，發現DKK-1在肺腺癌和肺鱗癌中的表達存在差異，在肺腺癌中的陽性表達率相對較高，這可能為不同病理類型NSCLC的診斷和治療提供新的思路。也有研究關注DKK-1與NSCLC患者預后的關系，通過對患者進行長期隨訪，發現DKK-1高表達的患者無病生存期較短，預后較差，進一步證實了DKK-1在NSCLC預后評估中的重要性。在β-catenin的研究方面，國內研究人員通過對大量NSCLC病例的分析，發現β-catenin的表達與NSCLC的淋巴結轉移密切相關。有淋巴結轉移的NSCLC患者，其腫瘤組織中β-catenin的陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移的患者，表明β-catenin可能在NSCLC的淋巴結轉移過程中發揮關鍵作用。一些研究還探討了β-catenin與NSCLC患者對化療藥物敏感性的關系，發現β-catenin高表達的患者對某些化療藥物的敏感性較低，這為NSCLC的個體化治療提供了參考依據。關于二者相關性的研究，國內有研究采用免疫組化和分子生物學技術，檢測NSCLC組織中DKK-1和β-catenin的表達，并分析其相關性。結果表明，在NSCLC中，DKK-1和β-catenin的表達存在顯著的相關性，二者可能通過共同參與Wnt信號通路等機制，協同促進NSCLC的發生、發展。盡管國內外在DKK-1和β-catenin在NSCLC中的表達及相關性研究方面取得了一定進展，但仍存在一些不足之處。目前對于二者在NSCLC中的具體作用機制尚未完全明確，尤其是在信號通路的上下游關系及其他相關分子的參與方面，還需要進一步深入研究。不同研究之間的結果存在一定差異，可能與研究對象、檢測方法和樣本量等因素有關，這也需要后續研究進行更大樣本量、更標準化的驗證。1.3研究目標與方法本研究旨在全面、深入地探究DKK-1和β-catenin在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中的表達水平，明確二者表達水平之間的相關性，為揭示NSCLC的發病機制提供理論依據。同時，分析DKK-1和β-catenin的表達與NSCLC患者臨床病理特征及預后的關系，期望為NSCLC的早期診斷、病情監測和預后評估提供新的潛在生物標志物和治療靶點，進而指導臨床診療工作，提高NSCLC患者的生存率和生活質量。在研究方法上，本研究將收集一定數量的NSCLC患者的腫瘤組織及癌旁正常組織標本。利用免疫組織化學染色技術，檢測DKK-1和β-catenin在NSCLC組織和癌旁組織中的表達情況，通過顯微鏡觀察染色結果，判斷二者的表達定位和表達強度，從而分析其在不同組織中的表達差異。運用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）技術，測定組織中DKK-1和β-catenin的mRNA表達水平，通過對擴增產物的定量分析，明確二者在基因轉錄水平的表達變化，為深入研究其表達調控機制提供數據支持。采用蛋白質免疫印跡法（Westernblot），檢測組織中DKK-1和β-catenin的蛋白表達量，通過對蛋白條帶的灰度分析，精確測定其蛋白表達水平，進一步驗證免疫組化和qRT-PCR的檢測結果。還將對收集的患者臨床病理資料進行詳細分析，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移情況等，運用統計學方法，分析DKK-1和β-catenin的表達與這些臨床病理特征之間的相關性，從而明確二者在NSCLC發生、發展過程中的作用。二、非小細胞肺癌概述2.1定義與分類非小細胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）是肺癌中最為常見的類型，約占肺癌病例總數的85%。從定義上看，它是相對于小細胞肺癌而言，是除小細胞肺癌之外的一大類肺癌的統稱。這一分類主要基于腫瘤細胞的形態學、生物學特性以及臨床治療反應等多方面因素。在顯微鏡下觀察，NSCLC的癌細胞體積相對較大，形態較為多樣，不像小細胞肺癌的癌細胞那樣呈現出明顯的小而規則的形態。在生物學行為上，NSCLC的生長速度相對較為緩慢，轉移發生的時間相對較晚；而小細胞肺癌生長迅速，早期就容易發生廣泛轉移。在臨床治療方面，NSCLC和小細胞肺癌的治療策略存在顯著差異，NSCLC對手術、化療、放療以及靶向治療、免疫治療等多種治療手段均有不同程度的響應，而小細胞肺癌主要以化療和放療為主，手術治療的機會相對較少。NSCLC主要包括以下幾種病理類型：腺癌：是NSCLC中最常見的類型，在全球范圍內，尤其是在不吸煙的人群中，腺癌的發病率呈上升趨勢。在我國，腺癌也已成為NSCLC中占比最高的病理類型。腺癌主要起源于支氣管黏液腺，可發生于細小支氣管或中央氣道。其癌細胞常具有腺樣結構或分泌黏液的特性。根據國際肺癌研究協會（IASLC）、美國胸科學會（ATS）和歐洲呼吸學會（ERS）聯合發布的肺腺癌分類標準，腺癌可進一步分為原位腺癌、微浸潤性腺癌、浸潤性腺癌、浸潤性腺癌變異型等亞型。原位腺癌是指癌細胞局限于上皮內，未突破基底膜，屬于早期病變，預后良好；微浸潤性腺癌則是癌細胞突破基底膜，但浸潤范圍較小，一般直徑不超過5mm，這類患者通過手術切除往往也能獲得較好的治療效果；浸潤性腺癌是最為常見的亞型，癌細胞已發生明顯的浸潤生長，可侵犯周圍組織和血管，其預后相對較差；浸潤性腺癌變異型包括貼壁為主型、腺泡為主型、乳頭為主型、微乳頭為主型和實體伴黏液形成型等，不同變異型的生物學行為和預后也有所不同，例如微乳頭為主型的腺癌惡性程度較高，容易發生轉移，預后相對較差。在影像學上，腺癌常表現為肺部的磨玻璃結節或實性結節，尤其是磨玻璃結節在早期腺癌中較為常見，這對于早期診斷具有重要提示意義。鱗狀細胞癌：曾是NSCLC中較為常見的類型，尤其是在吸煙人群中。近年來，隨著吸煙率的下降以及環境因素的變化，其發病率有所降低。鱗狀細胞癌常好發于老年吸煙男性，多起源于較大的支氣管，腫瘤生長相對緩慢，轉移較晚，手術切除機會相對較多，5年生存率相對較高，但對化療和放療的敏感性不如小細胞肺癌。鱗狀細胞癌可分為角化型鱗狀上皮細胞癌、非角化型鱗狀上皮細胞癌、基底細胞樣型鱗狀上皮細胞癌等亞型。角化型鱗狀細胞癌在顯微鏡下可見癌細胞有角化珠形成，細胞間橋明顯；非角化型鱗狀細胞癌則無明顯的角化現象；基底細胞樣型鱗狀上皮細胞癌的癌細胞較小，呈基底細胞樣，常伴有壞死。在影像學上，鱗狀細胞癌多表現為中央型肺癌，可伴有肺門淋巴結腫大，腫瘤常與支氣管關系密切，可導致支氣管狹窄、阻塞，引起阻塞性肺炎、肺不張等并發癥。大細胞癌：是一種未分化的非小細胞癌，較為少見，占肺癌的10％以下。大細胞癌的癌細胞體積大，細胞核大且不規則，核仁明顯，胞質豐富，在細胞學和組織結構及免疫表型等方面缺乏小細胞癌、腺癌或鱗癌的特征。大細胞癌生長迅速，早期易出現淋巴和血行轉移，因此治療關鍵在于早發現、早診斷、早治療。大細胞癌可發生于肺的任何部位，但以肺周邊區域較為多見。在臨床治療上，由于其對化療和放療的敏感性相對較低，手術切除是主要的治療手段，但總體預后較差。在影像學上，大細胞癌常表現為較大的實性腫塊，邊界相對清楚，但可伴有分葉、毛刺等惡性腫瘤的特征。其他類型：除了上述三種主要類型外，NSCLC還包括腺鱗癌、肉瘤樣癌、淋巴上皮瘤樣癌、NUT癌、唾液腺型癌等較為少見的類型。腺鱗癌是指腫瘤組織中同時含有腺癌和鱗癌兩種成分，其生物學行為和預后與兩種成分的比例、分化程度等因素有關；肉瘤樣癌具有肉瘤樣的形態學特征，惡性程度高，預后差；淋巴上皮瘤樣癌與EB病毒感染密切相關，在東南亞地區相對較為多見，其對放療較為敏感；NUT癌是一種罕見的高度惡性腫瘤，常伴有NUT基因的重排；唾液腺型癌包括黏液表皮樣癌、腺樣囊性癌等，這些類型在肺癌中極為少見，其生物學行為和治療方法與唾液腺來源的腫瘤有一定相似性。2.2發病現狀與趨勢從全球范圍來看，肺癌的發病率和死亡率一直居高不下，嚴重威脅著人類的生命健康。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥數據，肺癌新發病例達220萬，占所有癌癥新發病例的11.4%，位居各類癌癥發病率的第二位；死亡病例為180萬，占所有癌癥死亡病例的18%，在癌癥死亡率排行榜上位列第一。其中，非小細胞肺癌（NSCLC）作為肺癌中最主要的類型，約占肺癌病例總數的85%。在過去的幾十年里，全球NSCLC的發病率呈現出一定的變化趨勢。在一些發達國家，由于控煙措施的有效實施以及對環境因素的積極治理，肺癌的總體發病率逐漸趨于穩定或略有下降。以美國為例，自20世紀90年代以來，男性肺癌發病率每年以約2%的速度下降，女性肺癌發病率在2005年左右達到峰值后也開始逐漸下降。然而，在發展中國家，隨著工業化進程的加速、城市化規模的擴大以及人口老齡化的加劇，NSCLC的發病率卻呈現出快速上升的態勢。例如，在印度、巴西等國家，NSCLC的發病率正以每年3%-5%的速度增長。在我國，肺癌同樣是發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。2022年，中國癌癥新發病例數為482.47萬，其中肺癌新發病例達106.06萬，發病率位居首位；同年癌癥死亡總人數為257.42萬，肺癌死亡人數高達73.33萬，亦居首位。在肺癌患者中，NSCLC的占比高達90.34%。從發病趨勢來看，我國NSCLC的發病率總體上仍處于上升階段。根據國家癌癥中心發布的數據，2010-2019年期間，我國NSCLC的發病率以每年2.3%的速度增長。其中，城市地區的發病率略高于農村地區，男性的發病率顯著高于女性。從年齡分布來看，NSCLC的發病率隨著年齡的增長而逐漸升高，尤其是在50歲以上的人群中，發病率呈現出明顯的上升趨勢。在40歲以下的人群中，NSCLC的發病率相對較低，但近年來也有逐漸上升的趨勢，這可能與環境污染、不良生活方式以及遺傳因素等有關。在死亡率方面，全球NSCLC的死亡率也一直處于較高水平。由于NSCLC早期癥狀不明顯，多數患者確診時已處于中晚期，失去了手術根治的最佳時機，導致5年生存率較低，僅為15%-20%。在我國，NSCLC的死亡率同樣不容樂觀，約70%的患者在確診后1年內死亡。盡管近年來隨著醫療技術的不斷進步，如手術方式的改進、化療藥物的更新、靶向治療和免疫治療等新型治療手段的出現，NSCLC患者的生存率有了一定程度的提高，但總體死亡率仍然較高，對我國居民的健康構成了巨大威脅。未來，隨著全球人口老齡化的加劇、吸煙率的變化以及環境因素的影響，NSCLC的發病趨勢仍存在一定的不確定性。在發達國家，雖然控煙措施取得了一定成效，但吸煙人數仍然較多，且二手煙、環境污染等因素仍然存在，NSCLC的發病率可能會在一定程度上繼續下降，但下降速度可能會逐漸放緩。在發展中國家，由于經濟的快速發展、工業化進程的加速以及人口老齡化的加劇，NSCLC的發病率預計仍將持續上升，尤其是在一些環境污染嚴重、醫療資源相對匱乏的地區，發病率可能會上升得更為明顯。為了有效控制NSCLC的發病率和死亡率，全球各國需要加強控煙措施，改善環境質量，提高公眾的健康意識，加強早期篩查和診斷技術的研發與應用，以及推動新型治療手段的創新和普及。2.3治療手段與挑戰手術是早期非小細胞肺癌（NSCLC）的主要治療手段，旨在通過切除腫瘤組織來達到根治的目的。對于I期和部分II期NSCLC患者，手術切除是首選的治療方法，包括肺葉切除術、楔形切除術、肺段切除術以及全肺切除術等。肺葉切除術是最常用的手術方式，它能夠完整地切除包含腫瘤的肺葉，同時清掃周圍的淋巴結，對于腫瘤較大或侵犯范圍較廣的患者較為適用。楔形切除術則適用于腫瘤較小、位于肺周邊的患者，它通過切除腫瘤及其周圍的部分正常肺組織來保留更多的肺功能。肺段切除術是將腫瘤所在的肺段切除，相較于肺葉切除術，它能更好地保留肺功能，尤其適用于一些心肺功能較差的患者。全肺切除術一般用于腫瘤位于肺門附近，侵犯范圍廣泛，無法進行局部切除的患者，但該手術對患者的身體創傷較大，術后并發癥較多，會嚴重影響患者的生活質量。盡管手術治療能夠使部分早期NSCLC患者獲得長期生存，但仍有部分患者會出現術后復發和轉移。據統計，I期NSCLC患者術后5年生存率約為70%-90%，II期患者的5年生存率則降至40%-60%。術后復發的原因主要包括手術切緣殘留癌細胞、微轉移灶未被徹底清除以及腫瘤的異質性等。放射治療利用高能射線，如X射線、γ射線等，來破壞癌細胞的DNA，從而抑制癌細胞的生長和分裂，達到治療腫瘤的目的。對于無法手術切除的局部晚期NSCLC患者，放療是重要的治療手段之一，可以單獨使用，也可以與化療聯合應用。立體定向放射治療（SBRT）是一種高精度的放療技術，它能夠將高劑量的射線集中照射在腫瘤部位，同時最大限度地減少對周圍正常組織的損傷。SBRT適用于早期NSCLC患者，尤其是那些因心肺功能差等原因無法接受手術治療的患者，其治療效果與手術相當，5年生存率可達50%-70%。對于晚期NSCLC患者，放療主要用于緩解癥狀，如減輕骨轉移引起的疼痛、腦轉移導致的神經系統癥狀等，提高患者的生活質量。然而，放療也存在一定的局限性，它可能會引起放射性肺炎、食管炎、骨髓抑制等不良反應，影響患者的治療耐受性和生活質量。此外，部分腫瘤細胞對放療不敏感，導致放療效果不佳，且放療后腫瘤復發的情況也較為常見。化療通過使用化學藥物來抑制腫瘤細胞的生長、分裂和增殖，從而達到治療腫瘤的目的。對于NSCLC患者，化療是一種重要的全身治療手段，適用于晚期無法手術切除的患者、術后輔助治療以及新輔助治療。在晚期NSCLC的治療中，化療可以延長患者的生存期，緩解癥狀，提高生活質量。常用的化療藥物包括鉑類（順鉑、卡鉑）、紫杉醇、多西他賽、吉西他濱、培美曲塞等。這些藥物通過不同的作用機制來干擾腫瘤細胞的代謝和增殖過程，如鉑類藥物可以與腫瘤細胞的DNA結合，破壞其結構和功能；紫杉醇則可以抑制微管的解聚，影響細胞的有絲分裂。然而，化療藥物在殺死腫瘤細胞的同時，也會對正常細胞造成損害，導致一系列不良反應，如惡心、嘔吐、脫發、骨髓抑制、肝腎功能損害等。長期化療還可能導致腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性，使得化療效果逐漸降低，這也是化療面臨的主要挑戰之一。據統計，晚期NSCLC患者單純化療的中位生存期一般為8-12個月，5年生存率僅為5%-15%。靶向治療是針對腫瘤細胞中特定的分子靶點進行干預的治療方法，具有高度的特異性和有效性。在NSCLC中，常見的靶向治療靶點包括表皮生長因子受體（EGFR）、間變性淋巴瘤激酶（ALK）、ROS1融合基因、BRAF突變、KRAS突變、MET14外顯子跳躍突變、RET融合等。針對這些靶點，已經研發出了一系列的靶向藥物。以EGFR突變為例，亞洲NSCLC患者中EGFR突變率較高，可達30%-50%。第一代EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKI）如吉非替尼、厄洛替尼等，能夠與EGFR的ATP結合位點競爭性結合，抑制EGFR的磷酸化，從而阻斷下游信號通路的激活，抑制腫瘤細胞的生長和增殖。臨床研究表明，對于EGFR突變陽性的NSCLC患者，使用第一代EGFR-TKI治療的客觀緩解率可達70%-80%，中位無進展生存期為9-12個月。然而，大多數患者在使用第一代EGFR-TKI治療1年左右會出現耐藥，主要原因是EGFR的二次突變，如T790M突變，約占耐藥患者的50%-60%。針對T790M突變，第二代和第三代EGFR-TKI應運而生。第二代EGFR-TKI如阿法替尼、達可替尼等，與EGFR的結合更為緊密，且不可逆，對部分第一代EGFR-TKI耐藥的患者仍有一定療效。第三代EGFR-TKI如奧希替尼，不僅對T790M突變具有高度活性，而且對腦轉移患者也有較好的療效，其客觀緩解率可達70%-80%，中位無進展生存期超過18個月。對于ALK融合陽性的NSCLC患者，ALK抑制劑如克唑替尼、塞瑞替尼、阿來替尼、恩沙替尼、布格替尼、洛拉替尼等也取得了顯著的治療效果。克唑替尼是第一代ALK抑制劑，能夠抑制ALK及其下游信號通路的激活，使ALK融合陽性NSCLC患者的客觀緩解率達到60%-70%，中位無進展生存期為10-12個月。但克唑替尼也會出現耐藥，主要機制包括ALK激酶區的二次突變、旁路激活等。第二代和第三代ALK抑制劑對克唑替尼耐藥的患者顯示出更好的療效，如阿來替尼的中位無進展生存期超過30個月，且對腦轉移的控制效果優于克唑替尼。盡管靶向治療為NSCLC患者帶來了顯著的生存獲益，但耐藥問題仍然是制約其療效的關鍵因素。除了上述提到的靶點突變導致的耐藥外，還可能存在腫瘤細胞的異質性、腫瘤微環境的改變等因素導致的耐藥。例如，在部分患者中，腫瘤細胞可能通過激活其他信號通路來繞過靶向藥物的作用，從而導致耐藥的發生。此外，靶向治療的費用相對較高，也限制了其在一些患者中的應用。三、DKK-1與β-catenin的生物學特性3.1DKK-1的結構與功能DKK-1由DKK1基因編碼，該基因位于人類染色體10q11.2，長度約為3.5kb。其編碼產物是一種分泌型糖蛋白，由約266個氨基酸組成，分子量約為28.7KDa。從結構上看，DKK-1包含一個N端的信號序列，這一序列由20-30個氨基酸組成，主要負責引導DKK-1肽鏈穿越粗面內質網膜，并介導其分泌至細胞外，使其能夠在細胞間發揮作用。DKK-1含有兩個保守的富半胱氨酸區域，即Dkk_N和輔脂肪酶折疊區域。其中，輔脂肪酶折疊區域是由多個短的β折疊和二硫鍵構成的類指結構，它在DKK-1發揮功能的過程中起著關鍵作用。這一區域可與Wnt受體LRP5/6及另一類穿膜蛋白Kremen1/2結合形成三聚體，隨后誘導LRP5/6的內吞，從而抑制Wnt信號通路，因此是DKK-1蛋白發揮功能的重要平臺。Dkk_N區域則是一個包含保守半胱氨酸序列的富半胱氨酸區域，它在Dickkopf蛋白中位置的變化不僅是Dickkopf家族不同成員相互區別的標志，而且是調節Dickkopf家族蛋白對Wnt信號通路正向或負向調控的關鍵結構。在DKK-1靠近蛋白質C端的位置，還存在一個N-糖基化位點，糖基化修飾可能會影響DKK-1的穩定性、活性以及與其他分子的相互作用。DKK-1的主要功能是作為Wnt信號通路的拮抗劑，通過抑制Wnt信號通路來調節細胞的多種活動。在正常生理狀態下，Wnt信號通路在細胞的增殖、分化、遷移、凋亡以及組織穩態維持等過程中發揮著重要作用。當Wnt信號通路激活時，細胞外的Wnt蛋白會與細胞膜上的受體Frizzled以及共受體LRP5/6結合，進而激活下游的一系列信號分子，導致β-catenin在細胞質中積累，并進入細胞核與轉錄因子TCF/LEF結合，啟動相關基因的轉錄，促進細胞的增殖和分化。DKK-1能夠與Wnt蛋白競爭性結合LRP5/6受體，阻止Wnt信號的傳遞，從而抑制β-catenin的核轉位和活化，激活GSK-3β依賴的無活性的β-catenin的降解過程，使得β-catenin無法進入細胞核啟動基因轉錄，進而抑制細胞的增殖和分化。在胚胎發育過程中，DKK-1對體軸形成和器官發生起著關鍵的調節作用。例如，在神經管形成過程中，DKK-1的表達模式會影響神經板的折疊和神經管的閉合。它通過與Wnt信號通路相互拮抗，精確地控制細胞的分化和組織的形態發生，確保胚胎各器官的正常發育。在造血干細胞分化過程中，DKK-1的表達水平變化可以調節造血干細胞向不同血細胞系的分化方向，引導細胞向特定的細胞類型分化，維持造血系統的正常功能。在骨代謝方面，DKK-1是骨形成的重要負調節因子。它可以抑制成骨細胞的分化和功能，減少骨基質的合成和礦化，從而影響骨骼的生長和發育。在骨質疏松癥患者中，DKK-1的表達通常會升高，這會進一步抑制骨形成，加速骨質流失，導致骨密度降低和骨骼結構的異常。3.2β-catenin的結構與功能β-catenin基因位于人類染色體3p21.3，編碼的β-catenin蛋白由781個氨基酸組成，分子量約為88kDa。從結構上看，β-catenin蛋白包含多個功能結構域。其N端含有多個絲氨酸和蘇氨酸殘基，這些位點是磷酸化修飾的主要區域，對β-catenin的穩定性和功能起著重要的調節作用。當β-catenin在細胞質中處于非激活狀態時，其N端的絲氨酸和蘇氨酸殘基會被糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）磷酸化，磷酸化后的β-catenin會被泛素化修飾，進而被蛋白酶體降解。中間區域是由12個armadillo重復序列組成的armadillo結構域，該結構域呈螺旋狀，是β-catenin與其他蛋白相互作用的關鍵區域，它可以與E-cadherin、α-catenin等結合，參與細胞間的黏附連接，維持細胞的正常結構和功能；還能與轉錄因子TCF/LEF家族成員結合，在Wnt信號通路激活時，介導β-catenin進入細胞核，啟動下游靶基因的轉錄。β-catenin的C端包含一個轉錄激活結構域，該結構域含有多個保守的氨基酸序列，在β-catenin進入細胞核后，與轉錄共激活因子如CBP/p300等相互作用，增強下游靶基因的轉錄活性。β-catenin具有雙重功能，一方面，在細胞黏附中發揮重要作用。在正常上皮細胞中，β-catenin主要定位于細胞膜，它與E-cadherin的胞質結構域結合，形成E-cadherin/β-catenin/α-catenin復合體，該復合體通過與肌動蛋白細胞骨架相連，介導細胞間的黏附作用，維持上皮細胞的極性和組織結構的完整性。當β-catenin的表達或功能異常時，會破壞細胞間的黏附連接，導致細胞的遷移和侵襲能力增強，這在腫瘤的轉移過程中具有重要意義。例如，在乳腺癌細胞中，β-catenin的異常表達會導致E-cadherin/β-catenin復合體的穩定性下降，使癌細胞之間的黏附力減弱，從而容易發生轉移。另一方面，β-catenin是Wnt信號通路的關鍵效應分子。在沒有Wnt信號刺激時，細胞內的β-catenin與Axin、腺瘤性結腸息肉病蛋白（APC）、GSK-3β等形成降解復合體。在這個復合體中，GSK-3β能夠磷酸化β-catenin的N端，使其被泛素化修飾，進而被蛋白酶體降解，維持細胞內β-catenin的低水平。當Wnt信號通路激活時，細胞外的Wnt蛋白與細胞膜上的受體Frizzled以及共受體LRP5/6結合，激活下游的Dishevelled蛋白，Dishevelled蛋白抑制GSK-3β的活性，從而阻止β-catenin的磷酸化和降解。β-catenin在細胞質中逐漸積累，并進入細胞核，與轉錄因子TCF/LEF結合，招募轉錄共激活因子CBP/p300等，啟動下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進細胞的增殖和代謝；CyclinD1參與細胞周期的調控，促進細胞從G1期進入S期；MMP-7是一種基質金屬蛋白酶，能夠降解細胞外基質，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。因此，Wnt/β-catenin信號通路的異常激活與腫瘤的發生、發展密切相關。在結直腸癌中，約80%的患者存在Wnt/β-catenin信號通路的異常激活，主要表現為β-catenin的基因突變或APC基因的缺失，導致β-catenin在細胞核內積累，下游靶基因過度表達，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。3.3DKK-1與β-catenin在腫瘤中的作用機制在腫瘤的發生發展過程中，DKK-1的表達缺失或異常往往會產生顯著影響。大量研究表明，在多種腫瘤細胞系和組織樣本中，DKK-1的低表達或表達缺失與腫瘤的增殖、侵襲和轉移能力增強密切相關。在乳腺癌細胞系中，通過RNA干擾技術降低DKK-1的表達后，細胞的增殖速度明顯加快，侵襲和遷移能力也顯著增強。在動物實驗中，將低表達DKK-1的乳腺癌細胞接種到裸鼠體內，腫瘤的生長速度明顯加快，且更容易發生遠處轉移。這表明DKK-1的表達缺失可能打破了細胞內正常的信號平衡，促使腫瘤細胞獲得更強的惡性生物學行為。DKK-1對β-catenin的調控主要是通過經典的Wnt信號通路實現的。正常情況下，DKK-1作為Wnt信號通路的拮抗劑，能夠與Wnt蛋白競爭性結合低密度脂蛋白受體相關蛋白5/6（LRP5/6），形成DKK-1-LRP5/6-Kremen1/2三聚體復合物。這種復合物的形成會誘導LRP5/6的內吞，從而阻斷Wnt信號的傳遞。當Wnt信號被抑制時，細胞內的β-catenin會與Axin、腺瘤性結腸息肉病蛋白（APC）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）等形成降解復合體。在該復合體中，GSK-3β能夠磷酸化β-catenin的N端，使其被泛素化修飾，進而被蛋白酶體降解，維持細胞內β-catenin的低水平。當DKK-1表達缺失時，Wnt信號通路失去抑制，Wnt蛋白與LRP5/6和Frizzled受體結合，激活下游的Dishevelled蛋白，抑制GSK-3β的活性，從而阻止β-catenin的磷酸化和降解。β-catenin在細胞質中逐漸積累，并進入細胞核，與轉錄因子TCF/LEF結合，招募轉錄共激活因子CBP/p300等，啟動下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進細胞的增殖和代謝；CyclinD1參與細胞周期的調控，促進細胞從G1期進入S期；MMP-7是一種基質金屬蛋白酶，能夠降解細胞外基質，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。因此，DKK-1通過對β-catenin的調控，在腫瘤的發生、發展和轉移過程中發揮著重要作用。在非小細胞肺癌（NSCLC）中，DKK-1和β-catenin的異常表達同樣與腫瘤的惡性進展密切相關。研究發現，在NSCLC組織中，DKK-1的低表達或表達缺失較為常見，且與腫瘤的低分化程度、臨床分期較晚以及淋巴結轉移等不良預后因素相關。β-catenin的異常激活或核轉位也在NSCLC中頻繁出現，其異常表達與腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移能力增強相關。二者可能通過共同參與Wnt信號通路，協同促進NSCLC的發生發展。例如，在一些NSCLC細胞系中，過表達DKK-1可以抑制β-catenin的核轉位和下游靶基因的表達，從而抑制細胞的增殖和侵襲能力；而抑制DKK-1的表達則會導致β-catenin的核轉位增加，下游靶基因表達上調，細胞的增殖和侵襲能力增強。這表明在NSCLC中，DKK-1對β-catenin的調控機制同樣存在，且在腫瘤的發生發展過程中起著關鍵作用。四、實驗設計與方法4.1實驗材料4.1.1樣本來源本研究收集了[X]例非小細胞肺癌（NSCLC）患者的腫瘤組織標本，這些標本均取自[具體醫院名稱]胸外科20[具體年份1]-20[具體年份2]期間行手術切除的患者。所有患者在手術前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，且術后經病理檢查確診為NSCLC。同時，選取了相應患者的癌旁正常肺組織作為對照，癌旁組織距離腫瘤邊緣至少[X]cm以上，經病理檢查證實為正常肺組織。患者的年齡范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡為（[平均年齡]±[標準差]）歲，其中男性[男性患者數量]例，女性[女性患者數量]例。患者的臨床病理資料包括腫瘤的大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移情況等，均詳細記錄在案，用于后續的相關性分析。4.1.2主要實驗試劑免疫組化相關試劑：兔抗人DKK-1多克隆抗體購自[試劑公司1]，該抗體經過多次驗證，具有高特異性和靈敏度，能夠準確識別DKK-1蛋白；兔抗人β-catenin多克隆抗體購自[試劑公司2]，其質量可靠，可有效檢測β-catenin蛋白；即用型免疫組化超敏SP試劑盒（鼠/兔）購自[試劑公司3]，該試劑盒包含了免疫組化實驗所需的各種試劑，如二抗、顯色劑等，操作簡便，能夠保證實驗結果的準確性和穩定性；DAB顯色試劑盒購自[試劑公司4]，DAB作為常用的顯色劑，能夠與辣根過氧化物酶結合，產生棕色沉淀，從而使陽性信號清晰可見；蘇木精染液購自[試劑公司5]，用于細胞核的復染，使細胞結構更加清晰，便于觀察和分析。實時熒光定量PCR相關試劑：RNA提取試劑盒（如TRIzol試劑）購自[試劑公司6]，該試劑能夠高效、快速地提取組織中的總RNA，保證RNA的完整性和純度；反轉錄試劑盒購自[試劑公司7]，可將提取的RNA反轉錄為cDNA，為后續的PCR擴增提供模板；實時熒光定量PCR試劑盒（如SYBRGreenPCRMasterMix）購自[試劑公司8]，SYBRGreen染料能夠特異性地結合雙鏈DNA，在PCR擴增過程中，通過檢測熒光信號的強度來實時監測DNA的擴增情況，具有靈敏度高、特異性強等優點；引物由[引物合成公司]合成，根據GenBank中DKK-1和β-catenin的基因序列，利用專業的引物設計軟件設計特異性引物，引物序列如下：DKK-1上游引物：5'-[具體序列1]-3'，下游引物：5'-[具體序列2]-3'；β-catenin上游引物：5'-[具體序列3]-3'，下游引物：5'-[具體序列4]-3'。同時，設計了內參基因GAPDH的引物，用于校正目的基因的表達水平，GAPDH上游引物：5'-[具體序列5]-3'，下游引物：5'-[具體序列6]-3'。蛋白質免疫印跡相關試劑：RIPA裂解液購自[試劑公司9]，用于裂解組織細胞，提取總蛋白；BCA蛋白定量試劑盒購自[試劑公司10]，通過BCA法可以準確測定蛋白質的濃度，為后續的實驗提供準確的蛋白上樣量；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒購自[試劑公司11]，用于制備聚丙烯酰胺凝膠，實現蛋白質的分離；兔抗人DKK-1單克隆抗體、兔抗人β-catenin單克隆抗體（與免疫組化所用抗體不同公司，用于驗證結果的可靠性）購自[試劑公司12]；HRP標記的羊抗兔IgG二抗購自[試劑公司13]，能夠與一抗特異性結合，通過HRP催化底物顯色，使蛋白條帶清晰可見；ECL化學發光試劑盒購自[試劑公司14]，在HRP的作用下，ECL試劑能夠產生化學發光信號，通過曝光顯影，即可檢測到蛋白質條帶的位置和強度。4.1.3主要實驗儀器免疫組化實驗儀器：石蠟切片機（型號：[具體型號1]，購自[儀器公司1]），能夠將石蠟包埋的組織切成厚度均勻的切片，一般切片厚度為4-5μm，滿足免疫組化實驗的要求；攤片機（型號：[具體型號2]，購自[儀器公司2]），用于將切好的組織切片展平，使其平整地貼附在載玻片上；烤片機（型號：[具體型號3]，購自[儀器公司3]），通過加熱使切片牢固地黏附在載玻片上，防止在后續實驗過程中切片脫落；顯微鏡（型號：[具體型號4]，購自[儀器公司4]），用于觀察免疫組化染色結果，配備有高清攝像頭和圖像采集軟件，能夠拍攝清晰的照片，便于結果分析和記錄；圖像分析軟件（如Image-ProPlus），用于對免疫組化染色結果進行定量分析，通過測量陽性信號的面積、灰度值等參數，評估DKK-1和β-catenin的表達水平。實時熒光定量PCR實驗儀器：高速冷凍離心機（型號：[具體型號5]，購自[儀器公司5]），能夠在低溫條件下高速離心，用于分離組織勻漿中的細胞碎片和細胞器，提取純凈的RNA；移液器（量程：[具體量程1]、[具體量程2]等，購自[儀器公司6]），用于準確移取各種試劑和樣本，保證實驗操作的準確性；PCR儀（型號：[具體型號6]，購自[儀器公司7]），用于進行反轉錄和PCR擴增反應，能夠精確控制反應溫度和時間，確保實驗結果的可靠性；實時熒光定量PCR儀（型號：[具體型號7]，購自[儀器公司8]），可實時監測PCR擴增過程中的熒光信號變化，通過軟件分析，得出目的基因的相對表達量。蛋白質免疫印跡實驗儀器：超聲細胞破碎儀（型號：[具體型號8]，購自[儀器公司9]），利用超聲波的能量將組織細胞破碎，釋放出細胞內的蛋白質；電泳儀（型號：[具體型號9]，購自[儀器公司10]），用于進行SDS-PAGE電泳，使蛋白質在電場的作用下按照分子量大小進行分離；轉膜儀（型號：[具體型號10]，購自[儀器公司11]），將電泳分離后的蛋白質轉移到固相膜上，如PVDF膜或NC膜；恒溫搖床（型號：[具體型號11]，購自[儀器公司12]），用于免疫印跡過程中的封閉、抗體孵育等步驟，能夠使試劑與膜充分接觸，提高實驗效率；化學發光成像系統（型號：[具體型號12]，購自[儀器公司13]），用于檢測ECL化學發光信號，拍攝蛋白質條帶的照片，并進行定量分析。4.2實驗方法4.2.1免疫組化檢測DKK-1和β-catenin表達切片準備：將收集的NSCLC腫瘤組織和癌旁正常組織標本進行常規石蠟包埋，然后用石蠟切片機切成厚度為4μm的連續切片，將切片分別裱貼于經多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤片機烤片2h，使切片牢固黏附在載玻片上，備用。脫蠟與水化：將烤好的切片依次放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡15min，以脫去石蠟；隨后依次放入無水乙醇I、無水乙醇II中各浸泡5min，進行脫水；再將切片依次放入95%、85%、75%乙醇中各浸泡3min，進行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3min。抗原修復：將水化后的切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復盒中，置于微波爐中進行抗原修復。先用高火加熱至沸騰，然后轉用中火維持沸騰狀態10-15min，自然冷卻至室溫后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。阻斷內源性過氧化物酶：將切片浸泡在3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10-15min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，防止其對后續顯色反應產生干擾。孵育結束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。血清封閉：在切片上滴加適量的正常山羊血清，室溫孵育20-30min，以封閉非特異性結合位點，減少背景染色。孵育結束后，傾去血清，不洗。一抗孵育：根據抗體說明書，將兔抗人DKK-1多克隆抗體和兔抗人β-catenin多克隆抗體用抗體稀釋液稀釋至適當濃度。在切片上分別滴加稀釋好的一抗，4℃冰箱孵育過夜。陰性對照則滴加PBS緩沖液代替一抗。孵育結束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。二抗孵育：滴加即用型免疫組化超敏SP試劑盒中的二抗，室溫孵育30-45min，使二抗與一抗特異性結合。孵育結束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。DAB顯色：按照DAB顯色試劑盒說明書，將適量的DAB顯色劑A、B、C液混合均勻，滴加在切片上，室溫顯色3-10min，在顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應。蘇木精復染：將顯色后的切片放入蘇木精染液中復染細胞核，時間為3-5min，然后用自來水沖洗返藍，再依次用1%鹽酸乙醇分化3-5s，自來水沖洗5-10min，使細胞核顏色清晰。脫水、透明與封片：將復染后的切片依次放入75%、85%、95%乙醇中各浸泡3min，進行脫水；再放入無水乙醇I、無水乙醇II中各浸泡5min，進一步脫水；最后放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡5min，進行透明。透明結束后，用中性樹膠封片，待封片膠干燥后，即可在顯微鏡下觀察。結果判定：采用雙盲法，由兩位經驗豐富的病理醫師分別對免疫組化染色結果進行觀察和評估。DKK-1和β-catenin陽性產物均為棕黃色，主要定位于細胞核和（或）細胞質。根據陽性細胞所占比例和染色強度進行評分。陽性細胞所占比例評分標準為：陽性細胞數＜10%為0分；10%-25%為1分；26%-50%為2分；51%-75%為3分；＞75%為4分。染色強度評分標準為：無顯色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將陽性細胞所占比例得分與染色強度得分相乘，得到最終的免疫組化評分：0分為陰性（-）；1-4分為弱陽性（+）；5-8分為陽性（++）；9-12分為強陽性（+++）。4.3數據統計分析采用SPSS26.0統計學軟件對實驗數據進行分析。計數資料以例數或率表示，組間比較采用χ2檢驗，當理論頻數小于5時，采用Fisher確切概率法。計量資料若符合正態分布，以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），組間兩兩比較采用LSD法；若數據不服從正態分布，則采用非參數檢驗，如Kruskal-Wallis秩和檢驗。相關性分析采用Spearman秩相關分析，計算相關系數r，判斷DKK-1和β-catenin表達之間的相關性。以P＜0.05為差異具有統計學意義。五、實驗結果與分析5.1DKK-1在非小細胞肺癌組織中的表達情況免疫組化結果顯示，在[X]例非小細胞肺癌（NSCLC）組織中，DKK-1陽性表達例數為[陽性例數]，陽性表達率為[陽性率]%；在相應的[X]例癌旁正常肺組織中，DKK-1陽性表達例數為[癌旁陽性例數]，陽性表達率為[癌旁陽性率]%。NSCLC組織中DKK-1的陽性表達率顯著低于癌旁正常肺組織，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。通過顯微鏡觀察發現，DKK-1陽性產物主要定位于細胞質，呈棕黃色顆粒狀分布（圖1）。組織類型例數DKK-1陽性例數陽性表達率（%）NSCLC組織[X][陽性例數][陽性率]癌旁正常肺組織[X][癌旁陽性例數][癌旁陽性率]進一步分析DKK-1的表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系，結果如表2所示。在不同分化程度的NSCLC組織中，高分化組DKK-1陽性表達率為[高分化陽性率]%，中分化組為[中分化陽性率]%，低分化組為[低分化陽性率]%。隨著腫瘤分化程度的降低，DKK-1陽性表達率逐漸降低，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。在臨床分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者DKK-1陽性表達率為[Ⅰ-Ⅱ期陽性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者為[Ⅲ-Ⅳ期陽性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者的DKK-1陽性表達率顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。有淋巴結轉移的患者DKK-1陽性表達率為[有轉移陽性率]%，無淋巴結轉移的患者為[無轉移陽性率]%，有淋巴結轉移患者的DKK-1陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移患者，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。而在不同性別、年齡、病理類型的患者中，DKK-1陽性表達率差異均無統計學意義（P>0.05）。臨床病理特征例數DKK-1陽性例數陽性表達率（%）χ2值P值性別男[男性例數][男性陽性例數][男性陽性率][性別卡方值][性別P值]女[女性例數][女性陽性例數][女性陽性率]年齡（歲）<60[小于60歲例數][小于60歲陽性例數][小于60歲陽性率][年齡卡方值][年齡P值]≥60[大于等于60歲例數][大于等于60歲陽性例數][大于等于60歲陽性率]病理類型腺癌[腺癌例數][腺癌陽性例數][腺癌陽性率][病理類型卡方值][病理類型P值]鱗癌[鱗癌例數][鱗癌陽性例數][鱗癌陽性率]分化程度高分化[高分化例數][高分化陽性例數][高分化陽性率][分化程度卡方值][分化程度P值]中分化[中分化例數][中分化陽性例數][中分化陽性率]低分化[低分化例數][低分化陽性例數][低分化陽性率]臨床分期Ⅰ-Ⅱ期[Ⅰ-Ⅱ期例數][Ⅰ-Ⅱ期陽性例數][Ⅰ-Ⅱ期陽性率][臨床分期卡方值][臨床分期P值]Ⅲ-Ⅳ期[Ⅲ-Ⅳ期例數][Ⅲ-Ⅳ期陽性例數][Ⅲ-Ⅳ期陽性率]淋巴結轉移有[有轉移例數][有轉移陽性例數][有轉移陽性率][淋巴結轉移卡方值][淋巴結轉移P值]無[無轉移例數][無轉移陽性例數][無轉移陽性率]上述結果表明，DKK-1在NSCLC組織中的表達明顯低于癌旁正常肺組織，且其表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關。低表達的DKK-1可能在NSCLC的發生、發展和轉移過程中發揮重要作用，提示DKK-1有可能作為評估NSCLC病情和預后的潛在生物標志物。5.2β-catenin在非小細胞肺癌組織中的表達情況免疫組化結果顯示，在[X]例非小細胞肺癌（NSCLC）組織中，β-catenin陽性表達例數為[陽性例數]，陽性表達率為[陽性率]%；在相應的[X]例癌旁正常肺組織中，β-catenin陽性表達例數為[癌旁陽性例數]，陽性表達率為[癌旁陽性率]%。NSCLC組織中β-catenin的陽性表達率顯著高于癌旁正常肺組織，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。通過顯微鏡觀察，β-catenin陽性產物主要定位于細胞核和（或）細胞質，呈棕黃色顆粒狀（圖2）。組織類型例數β-catenin陽性例數陽性表達率（%）NSCLC組織[X][陽性例數][陽性率]癌旁正常肺組織[X][癌旁陽性例數][癌旁陽性率]進一步分析β-catenin的表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系，結果如表3所示。在不同分化程度的NSCLC組織中，高分化組β-catenin陽性表達率為[高分化陽性率]%，中分化組為[中分化陽性率]%，低分化組為[低分化陽性率]%。隨著腫瘤分化程度的降低，β-catenin陽性表達率逐漸升高，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。在臨床分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者β-catenin陽性表達率為[Ⅰ-Ⅱ期陽性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者為[Ⅲ-Ⅳ期陽性率]%，Ⅲ-Ⅳ期患者的β-catenin陽性表達率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。有淋巴結轉移的患者β-catenin陽性表達率為[有轉移陽性率]%，無淋巴結轉移的患者為[無轉移陽性率]%，有淋巴結轉移患者的β-catenin陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者，差異具有統計學意義（χ2=[卡方值]，P=[P值]<0.05）。而在不同性別、年齡、病理類型的患者中，β-catenin陽性表達率差異均無統計學意義（P>0.05）。臨床病理特征例數β-catenin陽性例數陽性表達率（%）χ2值P值性別男[男性例數][男性陽性例數][男性陽性率][性別卡方值][性別P值]女[女性例數][女性陽性例數][女性陽性率]年齡（歲）<60[小于60歲例數][小于60歲陽性例數][小于60歲陽性率][年齡卡方值][年齡P值]≥60[大于等于60歲例數][大于等于60歲陽性例數][大于等于60歲陽性率]病理類型腺癌[腺癌例數][腺癌陽性例數][腺癌陽性率][病理類型卡方值][病理類型P值]鱗癌[鱗癌例數][鱗癌陽性例數][鱗癌陽性率]分化程度高分化[高分化例數][高分化陽性例數][高分化陽性率][分化程度卡方值][分化程度P值]中分化[中分化例數][中分化陽性例數][中分化陽性率]低分化[低分化例數][低分化陽性例數][低分化陽性率]臨床分期Ⅰ-Ⅱ期[Ⅰ-Ⅱ期例數][Ⅰ-Ⅱ期陽性例數][Ⅰ-Ⅱ期陽性率][臨床分期卡方值][臨床分期P值]Ⅲ-Ⅳ期[Ⅲ-Ⅳ期例數][Ⅲ-Ⅳ期陽性例數][Ⅲ-Ⅳ期陽性率]淋巴結轉移有[有轉移例數][有轉移陽性例數][有轉移陽性率][淋巴結轉移卡方值][淋巴結轉移P值]無[無轉移例數][無轉移陽性例數][無轉移陽性率]上述結果表明，β-catenin在NSCLC組織中的表達明顯高于癌旁正常肺組織，且其表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關。高表達的β-catenin可能在NSCLC的發生、發展和轉移過程中發揮重要作用，提示β-catenin有可能作為評估NSCLC病情和預后的潛在生物標志物。5.3DKK-1與β-catenin表達的相關性分析采用Spearman秩相關分析對[X]例非小細胞肺癌（NSCLC）組織中DKK-1和β-catenin的表達進行相關性分析，結果顯示，二者表達呈顯著負相關（r=-[相關系數]，P=[P值]<0.05）。具體數據如表4所示，在DKK-1陽性表達的[陽性例數]例NSCLC組織中，β-catenin陽性表達例數為[DKK1陽性中βcatenin陽性例數]，陽性表達率為[DKK1陽性中βcatenin陽性率]%；在DKK-1陰性表達的[陰性例數]例NSCLC組織中，β-catenin陽性表達例數為[DKK1陰性中βcatenin陽性例數]，陽性表達率為[DKK1陰性中βcatenin陽性率]%。可以明顯看出，DKK-1陰性表達組中β-catenin的陽性表達率顯著高于DKK-1陽性表達組，進一步驗證了二者表達的負相關關系（圖3）。DKK-1表達例數β-catenin陽性例數β-catenin陽性表達率（%）陽性[陽性例數][DKK1陽性中βcatenin陽性例數][DKK1陽性中βcatenin陽性率]陰性[陰性例數][DKK1陰性中βcatenin陽性例數][DKK1陰性中βcatenin陽性率]這種負相關關系表明，在NSCLC的發生發展過程中，DKK-1和β-catenin可能通過共同參與Wnt信號通路，發揮相反的作用。當DKK-1表達缺失時，Wnt信號通路失去抑制，導致β-catenin在細胞質中積累并進入細胞核，激活下游靶基因的轉錄，促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移；而當DKK-1表達正常時，它能夠抑制Wnt信號通路，減少β-catenin的核轉位和活化，從而抑制腫瘤細胞的惡性生物學行為。二者表達的相關性提示，它們可能作為一個潛在的分子靶點組合，為NSCLC的診斷、治療和預后評估提供新的思路和方法。例如，在臨床治療中，可以通過調節DKK-1和β-catenin的表達水平，干預Wnt信號通路，從而達到抑制腫瘤生長和轉移的目的。六、討論6.1DKK-1表達與非小細胞肺癌的關系本研究結果顯示，在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中，DKK-1的陽性表達率顯著低于癌旁正常肺組織，這表明DKK-1在NSCLC的發生發展過程中可能發揮著重要作用。DKK-1作為Wnt信號通路的拮抗劑，其低表達可能導致Wnt信號通路的異常激活，進而影響細胞的正常生物學行為，促進腫瘤的發生發展。有研究表明，在多種腫瘤中，如乳腺癌、結直腸癌等，DKK-1的表達缺失或降低與腫瘤的增殖、侵襲和轉移能力增強密切相關。在NSCLC中，同樣可能存在類似的機制。當DKK-1表達不足時，無法有效抑制Wnt信號通路，使得β-catenin在細胞質中積累并進入細胞核，激活下游靶基因的轉錄，從而促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。進一步分析DKK-1的表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系發現，DKK-1的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關。隨著腫瘤分化程度的降低，DKK-1陽性表達率逐漸降低，這說明在低分化的NSCLC中，DKK-1的表達缺失更為明顯，腫瘤細胞的惡性程度更高，分化異常可能與DKK-1的低表達有關。在臨床分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的DKK-1陽性表達率顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者，提示DKK-1的低表達與腫瘤的進展相關，隨著腫瘤的發展，DKK-1的表達進一步降低，可能促進了腫瘤的轉移和惡化。有淋巴結轉移的患者DKK-1陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移患者，表明DKK-1的低表達可能是NSCLC發生淋巴結轉移的一個重要因素，其表達缺失可能使腫瘤細胞更容易突破基底膜，侵入淋巴管，從而發生淋巴結轉移。從分子機制角度來看，DKK-1的低表達可能通過多種途徑影響腫瘤細胞的生物學行為。DKK-1可以與LRP5/6及Kremen1/2結合形成三聚體，抑制Wnt信號通路，當DKK-1表達降低時，這種抑制作用減弱，導致Wnt信號通路激活，β-catenin入核增加，啟動下游靶基因如c-Myc、CyclinD1等的轉錄，促進腫瘤細胞的增殖。DKK-1還可能通過影響細胞外基質的降解和重塑來影響腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。研究表明，DKK-1可以調節基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，MMPs能夠降解細胞外基質，促進腫瘤細胞的遷移和侵襲。當DKK-1低表達時，MMPs的表達可能上調，導致細胞外基質降解增加，腫瘤細胞更容易突破周圍組織的限制，發生轉移。綜上所述，DKK-1在NSCLC組織中的低表達與腫瘤的發生、發展、轉移密切相關，提示DKK-1有可能作為評估NSCLC病情和預后的潛在生物標志物。通過檢測DKK-1的表達水平，可能有助于早期診斷NSCLC，判斷腫瘤的惡性程度和轉移風險，為臨床治療方案的選擇提供參考依據。在臨床實踐中，對于DKK-1低表達的患者，可能需要更加密切的隨訪和更積極的治療策略，以提高患者的生存率和生活質量。6.2β-catenin表達與非小細胞肺癌的關系本研究結果顯示，β-catenin在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中的陽性表達率顯著高于癌旁正常肺組織，表明β-catenin的異常表達在NSCLC的發生發展中可能扮演著關鍵角色。β-catenin作為Wnt信號通路的關鍵效應分子，其異常激活或高表達會導致Wnt信號通路的過度活化。在正常生理狀態下，β-catenin主要參與細胞間的黏附連接，維持細胞的正常結構和功能。而在腫瘤發生過程中，β-catenin的異常表達會使其從細胞膜轉移至細胞質和細胞核，激活下游一系列與細胞增殖、分化、遷移和凋亡相關的靶基因。在NSCLC中，β-catenin的異常高表達可能促使腫瘤細胞獲得更強的增殖和侵襲能力，從而促進腫瘤的發生和發展。進一步分析β-catenin的表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系，發現其表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關。隨著腫瘤分化程度的降低，β-catenin陽性表達率逐漸升高，這說明在低分化的NSCLC中，β-catenin的異常激活更為明顯，腫瘤細胞的惡性程度更高，分化異常可能與β-catenin的高表達密切相關。在臨床分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的β-catenin陽性表達率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，表明β-catenin的高表達與腫瘤的進展密切相關，隨著腫瘤的發展，β-catenin的表達進一步升高，可能促進了腫瘤的轉移和惡化。有淋巴結轉移的患者β-catenin陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者，提示β-catenin的高表達可能是NSCLC發生淋巴結轉移的重要因素之一，其異常表達可能使腫瘤細胞更容易突破基底膜，侵入淋巴管，從而發生淋巴結轉移。從分子機制角度來看，β-catenin的異常表達可能通過多種途徑影響腫瘤細胞的生物學行為。在Wnt信號通路激活時，β-catenin進入細胞核與轉錄因子TCF/LEF結合，招募轉錄共激活因子CBP/p300等，啟動下游靶基因如c-Myc、CyclinD1、MMP-7等的轉錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進細胞的增殖和代謝，使腫瘤細胞能夠快速生長和分裂。CyclinD1參與細胞周期的調控，促進細胞從G1期進入S期，加速細胞的增殖進程。MMP-7是一種基質金屬蛋白酶，能夠降解細胞外基質，為腫瘤細胞的遷移和侵襲創造條件，使腫瘤細胞更容易突破周圍組織的限制，發生轉移。β-catenin還可能通過影響細胞間的黏附連接來促進腫瘤細胞的轉移。當β-catenin異常表達時，會破壞E-cadherin/β-catenin/α-catenin復合體的穩定性，使細胞間的黏附力減弱，腫瘤細胞更容易脫離原發灶，發生轉移。綜上所述，β-catenin在NSCLC組織中的高表達與腫瘤的發生、發展、轉移密切相關，提示β-catenin有可能作為評估NSCLC病情和預后的潛在生物標志物。通過檢測β-catenin的表達水平，可能有助于早期診斷NSCLC，判斷腫瘤的惡性程度和轉移風險，為臨床治療方案的選擇提供重要參考依據。在臨床實踐中，對于β-catenin高表達的患者，可能需要更加密切的隨訪和更積極的治療策略，以提高患者的生存率和生活質量。6.3DKK-1與β-catenin相關性對非小細胞肺癌的影響本研究通過Spearman秩相關分析，明確了在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中DKK-1和β-catenin的表達呈顯著負相關。這一相關性在腫瘤的發生發展過程中具有重要意義。從腫瘤細胞增殖的角度來看，DKK-1作為Wnt信號通路的拮抗劑，其表達缺失會導致Wnt信號通路的異常激活，進而使β-catenin在細胞質中積累并進入細胞核。在細胞核內，β-catenin與轉錄因子TCF/LEF結合，啟動下游靶基因如c-Myc、CyclinD1等的轉錄。c-Myc是一種原癌基因，它可以促進細胞的增殖和代謝，上調多種與細胞周期調控相關的基因表達，使腫瘤細胞能夠快速生長和分裂。CyclinD1參與細胞周期的調控，促進細胞從G1期進入S期，加速細胞的增殖進程。當DKK-1表達正常時，它能夠抑制Wnt信號通路，減少β-catenin的核轉位和活化，從而抑制腫瘤細胞的增殖。因此，DKK-1與β-catenin表達的負相關關系表明，二者在腫瘤細胞增殖過程中發揮著相反的調節作用，它們之間的平衡對于維持細胞的正常增殖狀態至關重要。一旦這種平衡被打破，如DKK-1表達缺失，β-catenin的異常激活就會導致腫瘤細胞的過度增殖，促進NSCLC的發展。在腫瘤細胞侵襲和轉移方面，DKK-1與β-catenin的負相關關系同樣起著關鍵作用。β-catenin的異常表達會破壞E-cadherin/β-catenin/α-catenin復合體的穩定性，使細胞間的黏附力減弱，腫瘤細胞更容易脫離原發灶，發生轉移。β-catenin還能通過激活下游的MMP-7等基因，促進細胞外基質的降解，為腫瘤細胞的遷移和侵襲創造條件。當DKK-1表達降低時，對Wnt信號通路的抑制作用減弱，β-catenin的活性增強，腫瘤細胞的侵襲和轉移能力也隨之增強。而DKK-1的正常表達可以抑制β-catenin的活性，維持細胞間的黏附連接，減少細胞外基質的降解，從而抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移。因此，DKK-1與β-catenin表達的負相關關系在NSCLC的侵襲和轉移過程中起到了重要的調控作用，二者的失衡可能導致腫瘤細胞的惡性程度增加，更容易發生遠處轉移。基于DKK-1與β-catenin在NSCLC中的這種相關性及其對腫瘤細胞生物學行為的影響，它們有望成為NSCLC潛在的治療靶點。在臨床治療中，可以通過調節DKK-1和β-catenin的表達水平或活性，干預Wnt信號通路，從而達到抑制腫瘤生長和轉移的目的。可以開發針對DKK-1的藥物，促進其表達或