Sp-A基因SNP與河南漢族人群肺結(jié)核相關(guān)性分析一、研究背景肺結(jié)核（Tuberculosis，TB）是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染病。盡管在全球范圍內(nèi)防控工作取得了一定進(jìn)展，但在發(fā)展中國(guó)家，如中國(guó)，肺結(jié)核仍然是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。河南作為中國(guó)的人口大省，肺結(jié)核的防治任務(wù)艱巨。宿主遺傳因素在肺結(jié)核的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。眾多研究表明，遺傳易感性差異影響個(gè)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌的易感性以及感染后的臨床轉(zhuǎn)歸。表面活性蛋白A（SurfactantProtein-A，Sp-A）作為肺內(nèi)重要的免疫調(diào)節(jié)蛋白，參與機(jī)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌的免疫防御過(guò)程。Sp-A基因存在單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP），這些遺傳變異可能影響Sp-A的表達(dá)和功能，進(jìn)而影響個(gè)體對(duì)肺結(jié)核的易感性。對(duì)河南漢族人群中Sp-A基因SNP與肺結(jié)核相關(guān)性的研究，有助于深入了解該地區(qū)人群肺結(jié)核發(fā)病的遺傳機(jī)制，為肺結(jié)核的精準(zhǔn)防治提供理論依據(jù)。二、研究目的本研究旨在探討Sp-A基因單核苷酸多態(tài)性與河南漢族人群肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，分析不同SNP位點(diǎn)及其基因型在肺結(jié)核患者和健康對(duì)照人群中的分布差異，明確可能與河南漢族人群肺結(jié)核易感性相關(guān)的Sp-A基因SNP位點(diǎn)及基因型。三、研究方法研究對(duì)象病例組：選取[具體時(shí)間段]在河南省內(nèi)各級(jí)醫(yī)院確診的河南漢族肺結(jié)核患者[X]例。納入標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)痰涂片抗酸桿菌檢查、痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及胸部影像學(xué)檢查等綜合確診為肺結(jié)核；年齡在18-65歲之間；河南漢族人群且能提供詳細(xì)的家族史信息。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他嚴(yán)重肺部疾?。ㄈ绶伟?、慢性阻塞性肺疾病等）、其他慢性傳染?。ㄈ绨滩〉龋?、自身免疫性疾病、惡性腫瘤以及近期使用過(guò)免疫抑制劑等影響免疫功能藥物的患者。對(duì)照組：選取同期在醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的河南漢族健康人群[X]例作為對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)肺結(jié)核病史及密切接觸史；胸部X線或CT檢查未見(jiàn)異常；年齡在18-65歲之間；河南漢族人群且能提供詳細(xì)的家族史信息。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有其他慢性疾?。ㄈ绺哐獕?、糖尿病等控制不佳者）、近期有感染性疾病史以及長(zhǎng)期使用藥物者。樣本采集采集所有研究對(duì)象外周靜脈血5ml，置于EDTA抗凝管中。采用常規(guī)酚-氯仿法提取基因組DNA，并用核酸蛋白測(cè)定儀檢測(cè)DNA的濃度和純度，將合格的DNA樣本保存于-20℃冰箱備用。Sp-A基因SNP位點(diǎn)選擇及基因分型通過(guò)檢索相關(guān)文獻(xiàn)及數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇Sp-A基因上可能與免疫調(diào)節(jié)和疾病易感性相關(guān)的SNP位點(diǎn)，如rs[具體位點(diǎn)編號(hào)1]、rs[具體位點(diǎn)編號(hào)2]等。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)對(duì)所選SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。具體步驟如下：設(shè)計(jì)針對(duì)各SNP位點(diǎn)的特異性引物，以提取的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離酶切片段，根據(jù)片段大小判斷基因型。為保證基因分型結(jié)果的準(zhǔn)確性，隨機(jī)選取10%的樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，并與首次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行一致性分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）和百分比（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸模型分析Sp-A基因SNP位點(diǎn)及基因型與肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，計(jì)算比值比（OddsRatio，OR）及其95%可信區(qū)間（ConfidenceInterval，CI）。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、研究結(jié)果研究對(duì)象基本特征病例組和對(duì)照組在年齡、性別構(gòu)成方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。具體數(shù)據(jù)如下：病例組男性[X1]例，女性[X2]例，平均年齡（X±s）歲；對(duì)照組男性[X3]例，女性[X4]例，平均年齡（Y±s）歲。Sp-A基因SNP位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布在rs[具體位點(diǎn)編號(hào)1]位點(diǎn)，病例組和對(duì)照組基因型分布頻率分別為：野生純合型AA[X]%、雜合型AG[X]%、突變純合型GG[X]%和AA[X]%、AG[X]%、GG[X]%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩組基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步分析等位基因頻率，病例組A等位基因頻率為[X]%，G等位基因頻率為[X]%；對(duì)照組A等位基因頻率為[X]%，G等位基因頻率為[X]%，兩組等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在rs[具體位點(diǎn)編號(hào)2]位點(diǎn)，病例組和對(duì)照組基因型分布頻率分別為：CC[X]%、CT[X]%、TT[X]%和CC[X]%、CT[X]%、TT[X]%。兩組基因型分布及等位基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Sp-A基因SNP與肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性分析以攜帶rs[具體位點(diǎn)編號(hào)1]位點(diǎn)AA基因型者為參照，經(jīng)Logistic回歸分析，攜帶AG基因型者患肺結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn)是AA基因型者的[OR值1]倍（95%CI：[下限1]-[上限1]，P<0.05）；攜帶GG基因型者患肺結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn)是AA基因型者的[OR值2]倍（95%CI：[下限2]-[上限2]，P<0.05）。在共顯性模型（AAvsAG、AAvsGG）、顯性模型（AAvsAG+GG）和隱性模型（AA+AGvsGG）下，rs[具體位點(diǎn)編號(hào)1]位點(diǎn)與肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均顯著相關(guān)（P<0.05）。對(duì)于rs[具體位點(diǎn)編號(hào)2]位點(diǎn)，不同基因型與肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性（P>0.05）。五、研究結(jié)論本研究表明，在河南漢族人群中，Sp-A基因rs[具體位點(diǎn)編號(hào)1]位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，攜帶G等位基因（AG和GG基因型）可能增加個(gè)體患肺結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn)，而rs[具體位點(diǎn)編號(hào)2]位點(diǎn)與該地區(qū)人群肺結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。這些發(fā)現(xiàn)有助于進(jìn)一