本標準附錄A、附錄B為規范性附錄。本標準由河北省畜牧局提山。本標準起草單位：河北省畜牧獸醫研究所。本標準主妥起草人：秦建華、張繼東、趙月蘭、李淑芳、楊淑亞。I本標準規定了豬弓形蟲病的診斷和防治。本標準適用于生豬飼養場(戶)及動物診療單位對豬弓形蟲病的診斷和防治。2規范性引用文件修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版本均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB16548畜禽病害肉尸及其產品無害化處理規程NY/T573弓形蟲病診斷技術NY5030無公害食品生豬飼養獸藥使用準則NY5032無公害食品生豬飼養飼料使用準則NY5033無公害食品生豬飼養管理準則3術語和定義弓形蟲病又稱速殖子，呈香蕉形或半月形，一端較尖，一端鈍圓。一邊較扁平，一邊較彎曲。大小為(4~7)μm×(2~4)μm。用姬姆薩染色后可看到胞漿呈淺藍色，有顆粒，核呈深藍紫色，偏于鈍圓一端。排列，在有核細胞內(單核細胞、內皮細胞、淋巴細胞等),還可見到正在繁殖的蟲體，形狀多樣，有包囊直徑大小差別很大，小的僅50μm,大的可達100μm。緩殖子的形態與速殖子相似，僅核的位置稍偏后。包囊多見于腦、眼、骨骼肌、心肌和其它組織內，是蟲體在宿主體內的休眠階段，見于慢性病例。裂殖體較尖，大小為4.9μm×1.5μm,其數目不定，約4~29個，但以10~15個居多，呈扇形排列。2用姬姆薩染色后，核呈淡紅色而疏松，細胞質呈淡藍色。發育成熟的雄配子體可形可達15μm~20μm。染色后可見核深紅色，山現于貓腸道中，隨類便排到外界。呈卵圓形，有雙層囊壁，表面光滑，大小為(11～14)μm× (9~11)μm,平均12μm×10um。孢子化卵囊內含有兩個卵圓形的孢子囊，其大小約為8μm×6μm,每個孢子囊內含有4個長形彎曲的子孢子，大小約8μm×2μm,有殘體。4.1診斷原則4.2流行病學調查4.3臨床診斷a)急性型的潛伏期為3d～7d,體溫升高到40.5℃~42℃,呈稽留熱型；b)病豬精神沉郁，食欲廢絕或減退，呼吸困難，呈明顯的腹式呼吸，呈犬坐式姿勢，流漿液性d)仔豬感染斤，臨床上常見腹瀉，尿少，呈黃褐色，病程2d~8d,常發生死亡；e)懷孕母豬感染后，流產或新生仔豬出現先天性弓形蟲病而死4.3.2亞急性型潛伏期為10d~14d,較急性型的癥狀緩和。4.3.3慢性型4.4病理診斷35.1預防4附錄A(規范性附錄)A.1方法提要a)美藍、硼砂(10H?O)、碳酸鈉(分析純);b)生理鹽水、95%乙醇、蒸餾水(雙蒸)、弓形蟲陽性對照血清。A.4操作步驟a)稱取碳酸鈉5.3g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，即成0.53%碳酸鈉溶液。b)稱取硼砂(10H?O)3.62g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，即成1.91%硼砂c)量取0.53%碳酸鈉溶液97.3mL和1.91%硼砂溶液2.7mL放入100mL磨口錐形瓶中，搖勻，即成pl!11的緩沖液。d)稱取美監14.8g放入1000mL容放瓶中，加95%乙醇完全濟解后定容，即成美藍飽和溶液。e)t取美藍飽和溶液10mL和pll1的緩沖液90mL放入100mL磨口錐A.4.1.2抗原制備采取人工感染弓形蟲72h后的小白鼠腹水，加生理鹽水洗滌，以3000r/min離心10min,重紅操作2~3次后，用生理鹽水混懸稀釋至400~600倍，鏡檢，每個視野含蟲體30~40個，即每兒混懸液含弓形蟲約500萬個。A.4.1.3輔助因子即健康人血消。并非每個健康人的血清都含有這種輔助因子，須預先經過測試.大約6個人中有一個人可用。測試方法是取按A.4.1.2方法制備的抗原0.12mL,加待測健康人血消0.08mL,混合后子3?℃水浴中作用1h,冷卻，加入堿性美藍溶液0.1mL,混勻，靜置10min,吸出鏡檢100個游離蟲體，若90個以上業體著色時則該血清可用。A.4.1.3被檢血清5采血分離的待檢生豬血清，用前置56℃水浴中30min滅活。A.4.3置37℃溫箱中12h,取出待冷；加美藍染液2~4滴，振蕩5min~6min后，分別鏡檢計數各管內100個游離蟲體的著色與未著色的比例判定結果。A.4.4另設陽性對照和陰性對照管，前者以陽性血清A.5判定標準在陽性對照蟲體全部不著色、陰性對照90%以上蟲體著色的情況下，對被檢血清管進行判定：a)未著色蟲體在60%以上為陽性；b)未著色蟲體在40%～59%為可疑：c)未著色蟲體在39%以下為陰性。對豬弓形蟲病，當1:16～1:32稀釋時，呈陽性時為可疑，1:64稀釋時，呈陽性時判該豬為已受感染。6附錄B(規范性附錄)B.1方法提要B.2試劑a)弓形蟲間接血凝試驗凍干抗原、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、迭氮鈉(分析純):b)弓形蟲標準陽性血清(效價不低于1:1024)、弓形蟲標準陰性血清、健康兔血清、蒸餾水(雙B.3設備和儀器c)微型振蕩器；B.4操作步驟B.4.1材料準備B.4.1.1稀釋液a)稱取氯化鈉4.25g、磷酸二氫仰2.86g、磷酸氫二鈉(無水)19.34g、迭氮鈉1.00g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，過濾分裝，10磅15min高壓滅菌，即成0.1%迭氮鈉的0.15mol!L磷酸鹽緩沖液(PBS)。b)址取上述溶液98mL和健康免血清2mL放入100mL磨口錐形瓶中，混合，無菌分裝，0℃~4℃B.4.1.2診斷液將弓形蟲問接血凝試驗凍干抗原，按標定毫升數用滅菌蒸餾水稀釋搖勻，1500r/min~2000r/min離心5min~10min,棄去上清液，加等量稀釋液搖勻，置4℃左右，24h后使用，0℃~4℃左右保存10dB.4.1.3被檢血清無菌采取待檢豬血液并分離血清，檢驗前56℃滅能30min。B.4.2在96孔V型微量血凝反應板上，用移液器每孔加稀釋液0.0對照組均加8孔。B.4.3加入樣品血清、陽性對照血清和陰性對照血消，第1孔加相應血清0.025mL。B.4.4定性檢查時稀釋至第3孔，定址檢查時稀釋至第7孔。定性的第4孔、定熗的第8孔為稀釋液B.4.5將診斷液搖勻，每孔加0.025mL,加完后將微量血凝反應板置微型振蕩器上振蕩Imin~2min,7直至診斷液中的血球分布均勻。取下反應板，蓋上玻璃板，以防落入灰塵，置22℃~37℃下2h~3h后12345678定性定量陰性對照陽性對照B.5結果判定B.5.1判定標準集的紅細胞有的出現下滑現象。d)(十):25%的紅細胞在孔底凝集，其余不凝集的紅細胞在孔底中央集中成大的圓點。e)