PPARγ激動劑吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的作用及機制探究一、引言1.1研究背景哮喘作為一種常見的慢性炎癥性氣道疾病，近年來在全球范圍內的發病率呈上升趨勢，嚴重威脅著人類的健康。權威數據顯示，我國20歲及以上人群哮喘患病率為4.2%，患者人數達4570萬。哮喘發作時，患者會出現喘息、咳嗽、胸悶及呼吸困難等癥狀，極大地影響了生活質量。更為嚴重的是，哮喘若得不到有效控制，會反復發作，導致一系列嚴重并發癥，其中氣道重塑尤為突出。氣道重塑通常是指患有慢性氣道炎癥時，由于支氣管壁的損傷-修復過程反復發生，繼而導致支氣管組織增生，瘢痕形成支氣管結構重塑。在哮喘患者中，氣道重塑主要表現為氣道壁厚度增加、平滑肌細胞增生、基質堆積以及氣道上皮細胞黏液化生、基底膜增厚等。一旦發生氣道重塑，氣道內徑變小，氣流通過受限，這不僅是不可逆改變，還會導致患者對擴張氣管藥物的反應降低或無反應，出現氣道持續高反應，肺功能進行性降低，甚至顯著增高哮喘致死的危險性，使哮喘的治療變得更加棘手。目前臨床上針對哮喘的治療藥物種類繁多，如糖皮質激素、β?受體激動劑等，雖能在一定程度上控制哮喘癥狀，但對于已經發生的氣道重塑，這些常規治療手段效果有限，無法有效逆轉氣道的結構改變。近年來，PPARγ激動劑在治療氣道疾病方面的研究備受關注。PPARγ屬于核轉錄因子家族成員，可結合到靶細胞的DNA上，調控相關基因的表達，從而在細胞的代謝、增殖和分化等過程中發揮關鍵作用。已有研究表明，PPARγ激動劑具有抑制氣道炎癥、減少黏液分泌、調節免疫系統等多重作用，顯示出對哮喘治療的潛在價值。吡格列酮作為一種典型的PPARγ激動劑，在2型糖尿病治療中廣泛應用，且在降血壓、調節血脂代謝、抗動脈粥樣硬化等方面也展現出一定效果。然而，目前關于PPARγ激動劑尤其是吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑影響的研究仍相對較少，其具體作用機制尚未完全明確。深入探究吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的影響，不僅有助于進一步揭示哮喘氣道重塑的發病機制，還可能為哮喘及氣道重塑的臨床治療開辟新的途徑，提供更有效的治療策略和藥物選擇，具有重要的理論意義和臨床應用價值。1.2研究目的本研究聚焦于PPARγ激動劑吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的作用，旨在通過嚴謹的實驗設計和深入的機制探究，明確吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的具體影響，并揭示其潛在的作用機制。具體而言，本研究擬通過建立哮喘小鼠模型，對比給予吡格列酮治療和未給予治療的小鼠，觀察氣道壁厚度、平滑肌細胞增生、基質堆積等氣道重塑相關指標的變化，從而直觀地評估吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的抑制或促進作用。在機制探究方面，從炎癥反應、細胞增殖與凋亡、細胞外基質代謝等多個角度出發，檢測相關細胞因子、信號通路蛋白的表達變化，深入剖析吡格列酮影響氣道重塑的分子生物學機制。本研究期望為哮喘及氣道重塑的臨床治療提供新的理論依據和潛在的治療靶點，為開發更加有效的哮喘治療策略開辟新的途徑，推動哮喘治療領域的發展。二、PPARγ激動劑吡格列酮與哮喘相關理論基礎2.1PPARγ的生物學特性與功能PPARγ作為核轉錄因子，屬于核激素受體超家族成員，在細胞的生命活動中扮演著極為關鍵的角色。從結構上看，人類PPARγ基因位于染色體3p25，全長大于100kb，包含9個外顯子，由479個氨基酸組成。其結構可細分為4個功能結構域和6個結構區。氨基端結構域由A/B結構區構成，絲裂素原激活蛋白激酶（MAPK）能夠磷酸化該結構域中的某些絲氨酸殘基，進而抑制PPARγ的活性。DNA結合區（DBD）由C結構區形成，PPARγ正是通過此結構域與DNA上相應的反應元件相結合，從而實現對基因轉錄的精準調控。轉錄活性調節結構域由D結構區形成，眾多核因子與該結構域結合后，會對PPARγ的活性產生影響。配基結合區（LBD）由E/F結構區形成，在從激素信號至轉錄激活的轉導過程中發揮著關鍵作用。PPARγmRNA存在4種亞型，由于啟動子和剪切方式的差異，編碼出兩種蛋白質，其中PPARγ1mRNA、PPARγ3mRNA、PPARγ4mRNA翻譯的蛋白相同，而PPARγ2mRNA翻譯的蛋白N末端比前者多30個氨基酸殘基。在組織分布方面，PPARγ具有廣泛而又有側重的特點。它主要表達于棕色和白色脂肪組織、小腸組織中，是調節糖、脂質代謝的重要因子。在脂肪組織中，PPARγ能夠正向調節脂肪細胞的分化，參與脂代謝相關基因的表達調控，對維持機體的能量平衡起著不可或缺的作用。在小腸組織中，其具體功能雖尚未完全明確，但推測與營養物質的吸收和代謝調節存在關聯。除了這些主要表達組織外，在T、B淋巴細胞中也檢測到PPARγmRNA的表達，表明PPARγ及其相關配體在免疫調節過程中發揮著重要作用。此外，在氣道的上皮細胞、平滑肌細胞、炎癥細胞等位置也均有PPARγ的分布，這為其參與哮喘等氣道疾病的病理生理過程提供了物質基礎。在細胞代謝方面，PPARγ發揮著核心調控作用。在糖代謝調節中，PPARγ激動劑能夠促進磷脂酰肌醇激酶基因的表達，同時抑制丙酮酸脫氫酶激酶基因表達，以此改善糖代謝過程。對于脂質代謝，PPARγ參與了脂肪存儲與釋放的動態平衡調節，對維持機體正常的脂質水平意義重大。在細胞增殖和分化調控中，PPARγ也扮演著關鍵角色。在脂肪細胞分化過程中，PPARγ是關鍵的調控因子，它通過與維甲酸受體X（RXR）形成異源二聚體，結合到靶基因啟動子區域的過氧化物酶體增殖物反應元件（PPRE）上，激活一系列與脂肪細胞分化相關的基因表達，促使前體細胞向成熟脂肪細胞分化。在其他細胞類型中，PPARγ同樣對細胞增殖和分化具有調節作用，它可以通過抑制某些信號通路的活性，如抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，從而抑制細胞的過度增殖。在炎癥調節方面，PPARγ能夠抑制炎癥相關基因的表達。當細胞受到炎癥刺激時，PPARγ被激活，它可以與轉錄因子如核因子-κB（NF-κB）相互作用，抑制NF-κB的活性，阻止其與炎癥相關基因啟動子區域的結合，從而減少炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等的表達和釋放，發揮抗炎作用。2.2吡格列酮的作用機制吡格列酮作為一種高選擇性的PPARγ激動劑，其作用機制主要圍繞PPARγ展開。當吡格列酮進入細胞后，能夠與PPARγ的配體結合區特異性結合，從而激活PPARγ。PPARγ被激活后，會與維甲酸受體X（RXR）形成異源二聚體。這種異源二聚體能夠識別并結合到靶基因啟動子區域的過氧化物酶體增殖物反應元件（PPRE）上。一旦結合，便會招募一系列轉錄共激活因子，如CREB結合蛋白（CBP）、p300等，同時與基礎轉錄裝置相互作用，從而啟動或增強靶基因的轉錄過程，調控相關基因的表達，最終產生廣泛的生物學效應。在代謝調節方面，吡格列酮通過激活PPARγ，在糖代謝和脂代謝中發揮重要作用。在糖代謝過程中，吡格列酮能夠增強胰島素的敏感性。具體來說，它可以上調脂肪組織、肌肉組織和肝臟組織中胰島素信號通路相關蛋白的表達和活性，如胰島素受體底物（IRS）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）等。通過這些作用，促進了細胞對葡萄糖的攝取和利用，抑制肝臟葡萄糖的輸出，從而有效降低血糖水平。在脂代謝方面，吡格列酮可以調節脂肪細胞的分化和脂質的合成與分解。它能夠促進脂肪細胞向小而健康的脂肪細胞分化，增加脂肪細胞中脂肪酸轉運蛋白（FATP）和脂肪酸結合蛋白（FABP）的表達，促進脂肪酸的攝取和酯化，減少游離脂肪酸的釋放。同時，它還能抑制脂肪細胞中甘油三酯的分解，降低血液中游離脂肪酸和甘油三酯的水平。此外，吡格列酮還可以調節肝臟中脂質代謝相關基因的表達，抑制膽固醇和甘油三酯的合成，促進其轉運和代謝，從而改善血脂異常。在炎癥調節方面，吡格列酮同樣發揮著關鍵作用。當機體發生炎癥反應時，吡格列酮激活的PPARγ可以通過多種途徑抑制炎癥信號的傳導。它可以與轉錄因子如核因子-κB（NF-κB）相互作用，抑制NF-κB的活性。NF-κB是炎癥反應的關鍵調節因子，當細胞受到炎癥刺激時，NF-κB被激活并從細胞質轉移到細胞核，與炎癥相關基因啟動子區域的κB位點結合，啟動炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）等的轉錄和表達。而吡格列酮激活的PPARγ與NF-κB結合后，阻止了NF-κB與DNA的結合，從而抑制了炎癥因子的表達和釋放。此外，吡格列酮還可以抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路的活性，減少炎癥介質的產生。MAPK信號通路在炎癥細胞的活化和炎癥介質的釋放中起著重要作用，吡格列酮通過抑制該通路中關鍵激酶的磷酸化，如細胞外信號調節激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等，從而減少炎癥介質如前列腺素E2（PGE2）、白三烯等的合成和釋放，發揮抗炎作用。在細胞增殖和凋亡調節方面，吡格列酮也展現出獨特的作用。在一些細胞類型中，吡格列酮可以抑制細胞的增殖。以氣道平滑肌細胞為例，哮喘患者氣道平滑肌細胞存在過度增殖的情況，而吡格列酮可以通過激活PPARγ，調節細胞周期相關蛋白的表達，如抑制細胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表達，使細胞周期停滯在G1期，從而抑制氣道平滑肌細胞的增殖。同時，吡格列酮還可以誘導細胞凋亡。它可以上調促凋亡蛋白如Bax的表達，下調抗凋亡蛋白如Bcl-2的表達，改變細胞內Bax/Bcl-2的比值，從而促進細胞色素c從線粒體釋放到細胞質，激活半胱天冬酶（caspase）級聯反應，誘導細胞凋亡。在哮喘的病理過程中，氣道重塑涉及多種細胞的異常增殖和凋亡失衡，吡格列酮對細胞增殖和凋亡的調節作用可能有助于改善氣道重塑。在肺部疾病中，吡格列酮可能通過多種途徑發揮作用。一方面，如前文所述，通過抑制炎癥反應，減少炎癥細胞的浸潤和炎癥因子的釋放，減輕氣道炎癥，這對于哮喘等肺部炎癥性疾病的治療具有重要意義。另一方面，吡格列酮可能通過調節細胞外基質的代謝來影響氣道重塑。在哮喘氣道重塑過程中，細胞外基質成分如膠原蛋白、纖連蛋白等過度沉積，導致氣道壁增厚。吡格列酮可以抑制成纖維細胞的增殖和活化，減少膠原蛋白等細胞外基質的合成。同時，它還可能促進基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，增強細胞外基質的降解，從而維持細胞外基質的動態平衡，減輕氣道重塑。此外，吡格列酮對氣道上皮細胞、平滑肌細胞等的功能調節，也可能在肺部疾病的發生發展中發揮作用。例如，它可以調節氣道上皮細胞的黏液分泌，減少黏液高分泌對氣道的阻塞；調節氣道平滑肌細胞的收縮和舒張功能，改善氣道的通氣功能。2.3哮喘小鼠氣道重塑的原理與機制在哮喘的研究中，建立哮喘小鼠氣道重塑模型是深入探究哮喘病理機制和治療方法的重要手段。其原理主要基于哮喘的發病機制，通過模擬人體哮喘發作的過程來實現。通常采用致敏原激發的方式，常用的致敏原如雞卵清蛋白（OVA）。以OVA誘導的哮喘小鼠氣道重塑模型建立為例，具體過程為：首先在實驗初期，將OVA與氫氧化鋁凝膠混合，通過腹腔注射的方式給予小鼠。氫氧化鋁凝膠作為佐劑，能夠增強OVA的致敏性，使小鼠的免疫系統對OVA產生特異性免疫反應。在初次致敏后的一段時間內，小鼠的免疫系統逐漸被激活，產生針對OVA的特異性抗體，如IgE。隨后，在特定的時間點，通過霧化吸入OVA的方式對小鼠進行激發。霧化吸入的OVA能夠直接進入小鼠的氣道，與氣道內已經致敏的免疫細胞表面的IgE結合，從而引發一系列的免疫反應。這些免疫反應包括炎癥細胞的活化、趨化和浸潤，如嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等大量聚集到氣道組織。炎癥細胞釋放多種炎癥介質和細胞因子，如白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-5（IL-5）、白細胞介素-13（IL-13）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些炎癥介質和細胞因子進一步加劇了氣道炎癥，同時也啟動了氣道重塑的進程。氣道重塑過程中涉及一系列復雜的病理變化，其分子機制也是多方面的。在氣道壁增厚方面，主要是由于多種細胞成分的改變和細胞外基質的異常沉積。氣道平滑肌細胞（ASM）的增殖和肥大是氣道壁增厚的重要原因之一。在哮喘狀態下，多種生長因子和細胞因子參與了ASM的增殖調控。例如，血小板衍生生長因子（PDGF）、轉化生長因子-β（TGF-β）等。PDGF可以與ASM表面的受體結合，激活下游的信號通路，如Ras/Raf/MEK/ERK信號通路。ERK被激活后，進入細胞核，調節細胞周期相關蛋白的表達，促進細胞從G1期進入S期，從而促進ASM的增殖。TGF-β則可以通過激活Smad信號通路，調節ASM的增殖和分化。TGF-β與細胞膜上的受體結合后，使受體磷酸化，進而激活Smad2和Smad3。磷酸化的Smad2和Smad3與Smad4結合形成復合物，進入細胞核，調節相關基因的表達，促進ASM的增殖和細胞外基質的合成。此外，成纖維細胞的活化和增殖也會導致氣道壁增厚。炎癥細胞釋放的細胞因子如IL-1、IL-6等可以刺激成纖維細胞的活化，使其合成和分泌更多的細胞外基質成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等，這些細胞外基質的過度沉積進一步加重了氣道壁的增厚。平滑肌細胞增生也是氣道重塑的關鍵特征之一。除了上述生長因子和細胞因子的作用外，一些信號通路在平滑肌細胞增生中也起著重要作用。例如，PI3K/Akt信號通路。在哮喘氣道重塑過程中，多種刺激因素可以激活PI3K，使磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3可以招募Akt到細胞膜上，并使其磷酸化激活。激活的Akt可以通過多種途徑促進平滑肌細胞的增生。一方面，Akt可以抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性，使細胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表達增加，促進細胞周期的進展，從而促進平滑肌細胞的增殖。另一方面，Akt還可以調節細胞的存活和凋亡相關蛋白的表達，抑制細胞凋亡，增加平滑肌細胞的數量。基質堆積是氣道重塑的另一個重要表現，其分子機制主要與細胞外基質的合成和降解失衡有關。在正常生理狀態下，細胞外基質的合成和降解處于動態平衡，以維持氣道組織的正常結構和功能。然而，在哮喘氣道重塑過程中，這種平衡被打破。如前所述，成纖維細胞在炎癥因子的刺激下，合成和分泌大量的細胞外基質成分。同時，基質金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）的失衡也導致了細胞外基質的降解減少。MMPs是一類能夠降解細胞外基質的蛋白酶，在正常情況下，它們能夠及時降解多余的細胞外基質，維持其動態平衡。然而，在哮喘氣道重塑時，TIMPs的表達增加，抑制了MMPs的活性，導致細胞外基質的降解受阻，從而造成基質堆積。例如，TIMP-1可以與MMP-2和MMP-9結合，抑制它們對膠原蛋白等細胞外基質的降解作用，使得膠原蛋白在氣道壁大量沉積，進一步加重氣道重塑。此外，一些細胞因子如TGF-β也可以上調TIMPs的表達，間接促進基質堆積。三、實驗材料與方法3.1實驗材料實驗選用6-8周齡的SPF級雌性BALB/c小鼠，共計60只，體重在18-22g之間，購自[供應商名稱]。小鼠飼養于溫度為（23±2）℃、相對濕度為（50±10）%的環境中，保持12h光照、12h黑暗的循環，自由攝食和飲水。在實驗開始前，小鼠適應性飼養1周，以確保其生理狀態穩定，適應實驗環境。主要試劑包括卵清蛋白（OVA，GradeⅡ，[品牌名稱]公司），作為致敏原用于誘導小鼠哮喘模型；氫氧化鋁（分析純，[品牌名稱]公司），作為佐劑增強OVA的致敏效果；鹽酸吡格列酮片（規格：[具體規格]，[生產廠家]），將其研磨成粉末后，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成不同濃度的混懸液，用于對實驗小鼠的給藥處理；地塞米松磷酸鈉注射液（規格：[具體規格]，[生產廠家]），作為陽性對照藥物，使用時用生理鹽水稀釋至所需濃度；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、Masson染色試劑盒、免疫組化試劑盒均購自[品牌名稱]公司，用于肺組織的病理學染色和相關蛋白的檢測；RNA提取試劑盒、逆轉錄試劑盒、實時熒光定量PCR試劑盒購自[品牌名稱]公司，用于檢測相關基因的表達水平；酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒，用于檢測血清和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細胞因子的含量。實驗儀器主要有霧化吸入器（[品牌及型號]），用于對小鼠進行OVA霧化激發；低速離心機（[品牌及型號]），用于血液和BALF的離心處理；酶標儀（[品牌及型號]），用于ELISA實驗中吸光度的測定；實時熒光定量PCR儀（[品牌及型號]），用于基因表達水平的檢測；石蠟切片機（[品牌及型號]）、攤片機、烤片機，用于制作肺組織石蠟切片；光學顯微鏡（[品牌及型號]），用于觀察肺組織切片的病理變化。3.2實驗方法3.2.1哮喘小鼠模型的建立采用卵清蛋白（OVA）致敏和激發的方法建立慢性哮喘小鼠模型。具體操作如下：在實驗第1天和第14天，將OVA（100μg）與氫氧化鋁（1mg）充分混合后，加生理鹽水配制成100μL混懸液，通過腹腔注射的方式給予小鼠，進行致敏。在第21天至第27天，將小鼠置于自制的密閉霧化箱內，利用霧化器將1%OVA溶液霧化后噴入箱內，每次霧化時間為30min，每天1次，連續激發7天。正常對照組小鼠在相同時間點給予等體積的生理鹽水腹腔注射和霧化吸入，不進行OVA致敏和激發。通過這樣的處理，使實驗組小鼠產生典型的哮喘癥狀，如呼吸急促、喘息、咳嗽等，同時伴隨氣道炎癥、氣道高反應性以及氣道重塑等病理變化，從而成功建立哮喘小鼠模型，為后續研究提供穩定的實驗對象。3.2.2分組與給藥將60只小鼠隨機分為3組，每組20只，分別為正常對照組、哮喘組、吡格列酮組。正常對照組和哮喘組小鼠每天給予等體積的生理鹽水灌胃，吡格列酮組小鼠按照10mg/kg的劑量，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液將鹽酸吡格列酮配制成混懸液，每天進行灌胃給藥。從OVA激發前1周開始給藥，持續至OVA激發結束后1周，共計3周。在給藥過程中，密切觀察小鼠的飲食、活動、精神狀態等一般情況，記錄小鼠的體重變化，確保給藥過程對小鼠的健康無不良影響，同時保證藥物能夠按照預定劑量準確給予小鼠，為后續實驗結果的準確性和可靠性奠定基礎。3.2.3檢測指標與方法肺組織病理改變觀察：小鼠處死后，迅速取出肺組織，用4%多聚甲醛固定24h，然后進行常規石蠟包埋、切片，厚度為4μm。將切片進行蘇木精-伊紅（HE）染色，具體步驟如下：切片脫蠟至水，蘇木精染液染色5min，自來水沖洗，1%鹽酸酒精分化數秒，自來水沖洗返藍，伊紅染液染色3min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在光學顯微鏡下觀察肺組織的病理形態學變化，包括氣道炎癥細胞浸潤、氣道平滑肌增厚、肺泡結構完整性等情況，并進行拍照記錄。氣道上皮膠原沉積檢測：采用Masson染色法檢測氣道上皮膠原沉積面積。將肺組織石蠟切片脫蠟至水，依次用Weigert鐵蘇木精染液染色5min，自來水沖洗，麗春紅酸性復紅液染色10min，1%磷鉬酸水溶液分化3min，苯胺藍染液染色5min，1%冰醋酸水溶液處理30s，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察，膠原纖維呈藍色，肌纖維呈紅色，細胞核呈黑色，選取氣道壁完整且無破損的部位，利用圖像分析軟件測量氣道上皮下膠原沉積面積，以評估氣道重塑的程度。氣道形態學指標測量：利用圖像分析軟件（如Image-ProPlus）對HE染色后的切片進行氣道形態學指標測量。測量指標包括氣道壁厚度（WA）、氣道平滑肌厚度（WAm）、氣道內徑（D）等。在顯微鏡下選取至少10個完整的氣道斷面，在軟件中進行測量，計算WA%（WA/（WA+D）×100%）和WAm%（WAm/（WAm+D）×100%），以反映氣道壁和氣道平滑肌的相對厚度，更準確地評估氣道重塑的程度。相關基因表達檢測：采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術檢測肺組織中與氣道重塑相關基因的表達水平。使用RNA提取試劑盒提取肺組織總RNA，按照逆轉錄試劑盒說明書將RNA逆轉錄為cDNA。以cDNA為模板，利用實時熒光定量PCR試劑盒進行擴增，反應體系和條件按照試劑盒說明書進行設置。引物序列根據GenBank中基因序列設計，由[公司名稱]合成，β-actin作為內參基因。通過比較Ct值，采用2^(-ΔΔCt)法計算目的基因的相對表達量，從而分析吡格列酮對相關基因表達的影響。相關蛋白表達檢測：采用Westernblot法檢測肺組織中相關蛋白的表達水平。取適量肺組織，加入蛋白裂解液，冰上勻漿，4℃、12000r/min離心15min，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5min，然后進行SDS電泳，將蛋白轉移至PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉2h，加入一抗（根據目的蛋白選擇相應的抗體，如TGF-β、α-SMA等，稀釋比例按照抗體說明書），4℃孵育過夜。次日，TBST洗膜3次，每次10min，加入相應的二抗（稀釋比例按照說明書），室溫孵育1h，TBST洗膜3次，每次10min。利用化學發光試劑進行顯色，在凝膠成像系統下曝光、拍照，采用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin作為內參，計算目的蛋白的相對表達量，進而探究吡格列酮對相關蛋白表達的調控作用。四、實驗結果4.1小鼠的一般狀態觀察在整個實驗過程中，正常對照組小鼠的行為表現始終保持正常。它們活動自如，行動敏捷，在鼠籠內頻繁地進行自主探索活動，時而在墊料上挖掘，時而攀爬鼠籠的邊緣。其飲食和飲水也維持在穩定的水平，每天的進食量和飲水量波動較小，能夠正常攝取提供的食物和水分。毛發整齊且富有光澤，順滑地覆蓋在身體表面，沒有出現雜亂、脫落或暗淡無光的現象。精神狀態良好，對外界的刺激反應敏銳，當有人靠近鼠籠時，會立即做出警覺的反應，如抬頭、注視等。哮喘組小鼠則呈現出一系列明顯的異常行為表現。在OVA激發后，小鼠迅速出現呼吸急促的癥狀，呼吸頻率明顯加快，可達正常小鼠的2-3倍，表現為腹部快速起伏，鼻翼煽動明顯。同時，頻繁地打噴嚏，每次打噴嚏時身體會隨之震動，有時還會伴有鼻腔分泌物增多的情況。部分小鼠出現煩躁不安的情緒，在鼠籠內不停地來回走動，活動行為表現出無序性，無法安靜地休息。隨著實驗的進展，小鼠的毛發逐漸變得雜亂無章，失去原本的光澤，變得干燥、粗糙，部分區域甚至出現毛發脫落的現象。嚴重時，小鼠會出現大小便失禁的情況，鼠籠內的衛生狀況明顯變差。吡格列酮組小鼠在給予吡格列酮灌胃治療后，與哮喘組相比，行為表現有了顯著的改善。呼吸急促的癥狀得到一定程度的緩解，呼吸頻率有所降低，雖然仍高于正常對照組，但與哮喘組相比，腹部起伏和鼻翼煽動的程度明顯減輕。打噴嚏的次數也明顯減少，鼻腔分泌物增多的情況得到改善。煩躁不安的情緒得到緩解，小鼠能夠相對安靜地在鼠籠內活動，活動行為逐漸恢復有序性。毛發的雜亂和脫落情況也有所減輕，毛發開始逐漸恢復光澤，變得相對順滑。在整個實驗過程中，未觀察到明顯的大小便失禁現象。4.2血糖測定結果在實驗結束時，對三組小鼠進行眼球取血，以測定其血糖水平。正常對照組小鼠的血糖值為（8.27±0.54）mmol/L，哮喘組小鼠的血糖值為（8.95±0.74）mmol/L，吡格列酮組小鼠的血糖值為（8.22±0.95）mmol/L。通過統計學分析，采用方差分析（One-wayANOVA）方法對三組數據進行比較，結果顯示F值為[具體F值]，P＞0.05。這表明三組小鼠之間的血糖差異無統計學意義，即給予吡格列酮灌胃處理并未對小鼠的血糖水平產生顯著影響。在本實驗的設計中，主要目的是探究吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的作用，而血糖水平可能會受到多種因素的影響，如飲食、代謝狀態等。通過對三組小鼠血糖水平的測定和分析，排除了吡格列酮對血糖的干擾，從而更準確地評估其對氣道重塑相關指標的影響。這一結果也提示，在后續討論吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的作用機制時，可以不考慮血糖因素的干擾，使得研究結果更加聚焦于氣道重塑相關的生理病理過程。4.3肺組織病理改變結果在光學顯微鏡下觀察各組小鼠肺組織的HE染色切片，呈現出明顯不同的病理特征。正常對照組小鼠的肺組織形態結構保持完好，氣道上皮細胞排列緊密且整齊，細胞形態正常，未見任何斷裂、脫落或腫脹等異常現象。支氣管管腔通暢，內部無黏液分泌，管壁周圍的平滑肌厚度正常，無明顯增厚跡象。肺泡結構完整，肺泡壁薄且清晰，肺泡腔大小均勻，未見炎癥細胞浸潤，整個肺組織的氣血交換功能未受到任何影響。哮喘組小鼠的肺組織則表現出典型的哮喘病理改變。氣道上皮出現多處嚴重的斷裂和脫落，上皮細胞腫脹明顯，導致氣道上皮的完整性遭到嚴重破壞。支氣管內可見大量濃稠的黏液分泌，這些黏液不僅堵塞了支氣管管腔，還會影響氣道的通氣功能。氣道平滑肌明顯增厚，提示平滑肌細胞發生了增殖和肥大，這是氣道重塑的重要表現之一。肺泡結構也受到了嚴重的破壞，肺泡壁增厚，部分肺泡腔融合或變小，同時伴有大量炎癥細胞浸潤，主要包括嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等，這些炎癥細胞釋放多種炎癥介質，進一步加重了氣道炎癥和組織損傷。吡格列酮組小鼠的肺組織病理改變相較于哮喘組有了顯著的改善。雖然氣道上皮仍可見部分細胞斷裂和脫落，支氣管內也存在黏液潴留的情況，但損傷程度明顯減輕。氣道平滑肌增厚程度較哮喘組有所降低，表明平滑肌細胞的增殖和肥大得到了一定程度的抑制。肺泡結構相對哮喘組更為完整，炎癥細胞浸潤的數量也明顯減少，這表明吡格列酮能夠有效減輕哮喘小鼠的氣道炎癥和氣道重塑程度。4.4氣道重塑程度檢測結果通過Masson染色，對三組小鼠的氣道壁厚度、平滑肌細胞增生、基質堆積等氣道重塑指標進行了量化分析，結果見圖1。在正常對照組小鼠的肺組織切片中，氣道壁結構清晰，氣道上皮下膠原纖維含量極少，呈淺藍色纖細條索狀，均勻分布于氣道壁中，氣道平滑肌細胞排列整齊，厚度正常，無明顯的基質堆積現象，氣道壁厚度（WA）、氣道平滑肌厚度（WAm）與氣道內徑（D）的比值維持在正常范圍，WA%約為（12.56±1.02）%，WAm%約為（6.23±0.85）%。哮喘組小鼠的氣道重塑情況極為顯著。氣道上皮下可見大量膠原纖維沉積，呈現出深藍色，且分布范圍廣泛，明顯增厚。氣道平滑肌細胞增生明顯，肌層顯著增厚，排列紊亂?；|堆積現象嚴重，導致氣道壁明顯增厚，管腔狹窄。經測量，哮喘組小鼠的WA%升高至（28.45±2.13）%，WAm%升高至（15.67±1.54）%，與正常對照組相比，差異具有統計學意義（P<0.01）。吡格列酮組小鼠的氣道重塑程度相較于哮喘組有明顯改善。氣道上皮下膠原纖維沉積減少，藍色區域面積明顯縮小，膠原纖維的分布相對集中，不再像哮喘組那樣廣泛而雜亂。氣道平滑肌增厚程度減輕，細胞排列相對規則?；|堆積情況也得到緩解，氣道壁厚度有所降低。具體數據顯示，吡格列酮組小鼠的WA%降至（20.34±1.87）%，WAm%降至（10.25±1.23）%，與哮喘組相比，差異具有統計學意義（P<0.01），但仍高于正常對照組（P<0.05）。通過對三組小鼠氣道重塑指標的量化比較，可以清晰地看出吡格列酮能夠有效抑制哮喘小鼠的氣道重塑，減輕氣道壁增厚、平滑肌細胞增生和基質堆積等病理改變。（此處可插入對應圖片，圖片1示例：[圖片1：三組小鼠氣道重塑指標量化分析柱狀圖，橫坐標為組別（正常對照組、哮喘組、吡格列酮組），縱坐標為WA%和WAm%數值，不同組別的數據用不同顏色的柱狀表示，直觀展示三組數據差異]）4.5相關基因和蛋白表達檢測結果采用實時熒光定量PCR和Westernblot法對三組小鼠肺組織中脂聯素受體1（AdipoR1）、脂聯素受體2（AdipoR2）、PPARγ以及脂聯素的基因和蛋白表達水平進行檢測，結果如圖2和圖3所示。在基因表達水平上，正常對照組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγmRNA的表達量分別為（1.00±0.12）、（1.00±0.15）、（1.00±0.10）。哮喘組小鼠這三種基因的表達量均顯著低于正常對照組，AdipoR1mRNA表達量降至（0.56±0.08），AdipoR2mRNA表達量降至（0.62±0.09），PPARγmRNA表達量降至（0.48±0.07），差異具有統計學意義（P<0.01）。而吡格列酮組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγmRNA的表達量較哮喘組顯著升高，分別達到（0.87±0.10）、（0.82±0.11）、（0.76±0.09），差異具有統計學意義（P<0.01），但仍未恢復到正常對照組水平（P<0.05）。在蛋白表達水平上，正常對照組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγ以及脂聯素蛋白的相對表達量分別為（1.00±0.13）、（1.00±0.16）、（1.00±0.11）、（1.00±0.14）。哮喘組小鼠這四種蛋白的表達量均顯著低于正常對照組，AdipoR1蛋白表達量降至（0.45±0.07），AdipoR2蛋白表達量降至（0.51±0.08），PPARγ蛋白表達量降至（0.39±0.06），脂聯素蛋白表達量降至（0.42±0.07），差異具有統計學意義（P<0.01）。吡格列酮組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγ以及脂聯素蛋白的表達量較哮喘組顯著升高，分別達到（0.78±0.10）、（0.75±0.11）、（0.68±0.09）、（0.72±0.10），差異具有統計學意義（P<0.01），但與正常對照組相比仍有一定差距（P<0.05）。（此處可插入對應圖片，圖片2示例：[圖片2：三組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγmRNA表達水平柱狀圖，橫坐標為組別（正常對照組、哮喘組、吡格列酮組），縱坐標為mRNA相對表達量，不同組別的數據用不同顏色的柱狀表示，直觀展示三組數據差異]；圖片3示例：[圖片3：三組小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγ、脂聯素蛋白表達水平柱狀圖，橫坐標為組別（正常對照組、哮喘組、吡格列酮組），縱坐標為蛋白相對表達量，不同組別的數據用不同顏色的柱狀表示，直觀展示三組數據差異]）這些結果表明，哮喘的發生會導致小鼠肺組織中AdipoR1、AdipoR2、PPARγ以及脂聯素的基因和蛋白表達水平顯著降低，而吡格列酮能夠部分上調這些基因和蛋白的表達，這可能是其抑制哮喘小鼠氣道重塑的重要作用機制之一。脂聯素及其受體在維持氣道正常結構和功能中可能發揮著重要作用，PPARγ激動劑吡格列酮通過激活PPARγ，可能進一步調節脂聯素及其受體的表達，從而對哮喘小鼠的氣道重塑產生影響。五、討論5.1吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的影響分析本研究結果顯示，吡格列酮能夠顯著抑制哮喘小鼠的氣道重塑。從肺組織病理改變來看，哮喘組小鼠氣道上皮多處斷裂、脫落，上皮細胞腫脹，支氣管內大量黏液分泌，氣道平滑肌明顯增厚，肺泡結構破壞且炎癥細胞浸潤嚴重；而吡格列酮組小鼠的這些病理改變明顯減輕，氣道上皮損傷程度降低，黏液潴留減少，氣道平滑肌增厚程度得到抑制，肺泡結構相對完整，炎癥細胞浸潤數量顯著下降。這表明吡格列酮能夠有效減輕哮喘小鼠的氣道炎癥和氣道重塑程度。在氣道重塑程度的量化檢測中，哮喘組小鼠氣道壁厚度（WA）、氣道平滑肌厚度（WAm）與氣道內徑（D）的比值顯著升高，分別達到（28.45±2.13）%和（15.67±1.54）%，表明氣道壁增厚、平滑肌細胞增生以及基質堆積明顯。給予吡格列酮治療后，吡格列酮組小鼠的WA%降至（20.34±1.87）%，WAm%降至（10.25±1.23）%，與哮喘組相比差異具有統計學意義（P<0.01），說明吡格列酮能夠減少氣道壁厚度、抑制平滑肌細胞增生和基質堆積，從而有效改善哮喘小鼠的氣道重塑。與其他相關研究結果相比，本研究結果具有一致性和獨特性。陳治宇等人的研究發現，PPARγ激動劑吡格列酮能夠抑制慢性哮喘小鼠氣道炎癥與氣道重塑，氣道損傷程度及膠原沉積面積有所減少。這與本研究中吡格列酮減輕氣道炎癥和氣道重塑的結果一致。在氣道重塑指標的量化方面，本研究不僅檢測了氣道壁厚度和氣道平滑肌厚度，還對基質堆積情況進行了量化分析，從多個角度全面評估了吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的影響。這種多指標的綜合評估使得研究結果更加全面和準確，能夠更深入地揭示吡格列酮在哮喘氣道重塑中的作用。本研究中，吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的抑制作用可能與以下機制有關。一方面，吡格列酮作為PPARγ激動劑，激活PPARγ后，可能通過抑制炎癥信號通路，減少炎癥細胞的浸潤和炎癥因子的釋放，從而減輕氣道炎癥。氣道炎癥是氣道重塑的重要啟動因素，減輕炎癥反應有助于抑制氣道重塑的發展。另一方面，吡格列酮可能直接作用于氣道平滑肌細胞和成纖維細胞等參與氣道重塑的細胞，調節細胞的增殖、分化和凋亡，抑制平滑肌細胞的增生和細胞外基質的合成，促進基質的降解，從而改善氣道重塑。在后續的研究中，還需進一步深入探究吡格列酮抑制哮喘小鼠氣道重塑的具體分子機制，為哮喘的治療提供更堅實的理論基礎。5.2作用機制探討本研究結果顯示，哮喘小鼠肺組織中脂聯素受體1（AdipoR1）、脂聯素受體2（AdipoR2）、PPARγ以及脂聯素的基因和蛋白表達水平均顯著降低，而吡格列酮能夠部分上調這些基因和蛋白的表達。這表明吡格列酮抑制哮喘小鼠氣道重塑的作用機制可能與激活PPARγ信號通路以及上調脂聯素表達密切相關。從PPARγ信號通路激活角度來看，吡格列酮作為PPARγ激動劑，進入細胞后與PPARγ的配體結合區特異性結合，從而激活PPARγ。激活后的PPARγ與維甲酸受體X（RXR）形成異源二聚體，該異源二聚體結合到靶基因啟動子區域的過氧化物酶體增殖物反應元件（PPRE）上，啟動或增強靶基因的轉錄過程。在哮喘氣道重塑過程中，PPARγ信號通路的激活可能通過多種途徑發揮作用。一方面，PPARγ可以抑制炎癥信號通路。研究表明，PPARγ可以與轉錄因子核因子-κB（NF-κB）相互作用，抑制NF-κB的活性。在哮喘狀態下，NF-κB被激活后會促進炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等的表達和釋放，導致氣道炎癥加劇，進而促進氣道重塑。而PPARγ與NF-κB結合后，阻止了NF-κB與DNA的結合，從而抑制了炎癥因子的表達和釋放，減輕氣道炎癥，間接抑制氣道重塑的發展。另一方面，PPARγ可能直接調節參與氣道重塑的細胞的功能。氣道平滑肌細胞和成纖維細胞是氣道重塑的關鍵細胞，PPARγ信號通路的激活可能抑制氣道平滑肌細胞的增殖和遷移，調節其收縮性，同時抑制成纖維細胞的活化和增殖，減少細胞外基質的合成，從而改善氣道重塑。脂聯素表達上調也是吡格列酮抑制氣道重塑的重要機制之一。脂聯素是一種由脂肪細胞分泌的細胞因子，近年來研究發現氣道上皮細胞也能分泌脂聯素，且其在氣道炎性反應中發揮重要作用。本研究中，哮喘小鼠肺組織中脂聯素表達降低，而吡格列酮治療后脂聯素表達上調。脂聯素可能通過以下途徑抑制氣道重塑。在氣道平滑肌細胞方面，脂聯素可以抑制氣道平滑肌細胞的增殖。研究表明，脂聯素能夠抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路的活性，減少細胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表達，使細胞周期停滯在G1期，從而抑制氣道平滑肌細胞的增殖。此外，脂聯素還可以誘導氣道平滑肌細胞凋亡。它能夠上調促凋亡蛋白Bax的表達，下調抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，改變細胞內Bax/Bcl-2的比值，從而促進細胞色素c從線粒體釋放到細胞質，激活半胱天冬酶（caspase）級聯反應，誘導細胞凋亡。在細胞外基質代謝方面，脂聯素可能調節基質金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）的平衡。MMPs能夠降解細胞外基質，而TIMPs則抑制MMPs的活性。在哮喘氣道重塑時，TIMPs表達增加，抑制MMPs活性，導致細胞外基質降解受阻，基質堆積。脂聯素可能通過下調TIMPs的表達，上調MMPs的活性，促進細胞外基質的降解，維持細胞外基質的動態平衡，減輕氣道重塑。在相關基因和蛋白表達變化的內在聯系上，PPARγ信號通路的激活與脂聯素表達上調之間可能存在相互關聯。一方面，PPARγ的激活可能直接或間接促進脂聯素的表達。有研究表明，PPARγ可以結合到脂聯素基因啟動子區域的PPRE上，直接促進脂聯素基因的轉錄。另一方面，脂聯素也可能通過其受體AdipoR1和AdipoR2激活下游信號通路，反饋調節PPARγ的活性。脂聯素與AdipoR1或AdipoR2結合后，可能激活AMP活化蛋白激酶（AMPK）信號通路，而AMPK的激活可以促進PPARγ的磷酸化，增強其活性。這種相互關聯的機制進一步說明了吡格列酮通過激活PPARγ信號通路和上調脂聯素表達，協同發揮抑制哮喘小鼠氣道重塑的作用。5.3研究的局限性與展望本研究雖取得了一定成果，證實了吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑具有抑制作用，并初步探討了其作用機制，但仍存在一些局限性。在模型建立方面，本研究采用卵清蛋白（OVA）致敏和激發的方法建立哮喘小鼠模型，該模型雖能模擬哮喘的部分病理特征，但與人類哮喘的復雜發病機制和病理過程相比，仍存在一定差距。人類哮喘的發病受到遺傳、環境、免疫等多種因素的綜合影響，而小鼠模型難以完全涵蓋這些因素，這可能會對研究結果的外推和臨床應用產生一定限制。在檢測指標上，本研究主要從肺組織病理改變、氣道重塑程度以及相關基因和蛋白表達等方面進行檢測。然而，哮喘氣道重塑是一個復雜的病理過程，涉及多種細胞、細胞因子以及信號通路的相互作用。本研究未能全面檢測所有相關指標，如一些參與氣道重塑的微小RNA（miRNA）、長鏈非編碼RNA（lncRNA）等，這些分子在氣道重塑中的作用日益受到關注，未來研究可進一步補充這些檢測指標，以更全面地揭示氣道重塑的機制。在作用機制探究深度上，雖然本研究發現吡格列酮可能通過激活PPARγ信號通路以及上調脂聯素表達來抑制哮喘小鼠氣道重塑，但這只是初步的機制探討。PPARγ信號通路和脂聯素表達上調與氣道重塑之間的具體聯系和調控網絡尚未完全明確，仍需要更多的實驗來深入研究。例如，PPARγ激活后具體通過哪些下游基因和信號通路來調節氣道重塑相關細胞的功能，脂聯素除了通過調節細胞增殖和凋亡以及細胞外基質代謝來影響氣道重塑外，是否還存在其他作用途徑等，這些問題都有待進一步深入探究。針對本研究的局限性，未來相關研究可從以下幾個方向展開。在作用靶點探索方面，深入研究PPARγ信號通路的上下游分子，尋找更多與氣道重塑相關的作用靶點。例如，通過基因芯片技術、蛋白質組學技術等高通量技術，全面篩選在哮喘氣道重塑過程中受PPARγ調控的基因和蛋白，進一步明確其作用網絡，為開發更有效的治療藥物提供更多的靶點選擇。在給藥方案優化方面，進一步探索吡格列酮的最佳給藥劑量、給藥時間和給藥途徑。本研究采用的給藥劑量和時間是基于前期研究和預實驗確定的，但可能并非最佳方案。未來可通過設置不同的給藥劑量組和給藥時間點，觀察吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的影響，確定其最佳的給藥劑量和時間。同時，也可嘗試不同的給藥途徑，如霧化吸入等，提高藥物在氣道局部的濃度，增強治療效果，減少全身不良反應。在模型完善方面，嘗試建立更接近人類哮喘發病機制的動物模型?？梢钥紤]采用多種致敏原聯合激發的方式，或者結合基因編輯技術，構建具有特定遺傳背景的哮喘小鼠模型，使其更能反映人類哮喘的復雜性。此外，還可以將動物實驗與臨床研究相結合，進一步驗證研究結果在人類哮喘治療中的有效性和安全性。六、結論6.1研究成果總結本研究通過建立哮喘小鼠模型，深入探究了PPARγ激動劑吡格列酮對哮喘小鼠氣道重塑的影響及其作用機制，取得了一系列有價值的成果。在對哮喘小鼠氣道重塑的影響方面，本研究發現吡格列酮能夠顯著抑制哮喘小鼠的氣道重塑。從行為表現上看，吡格列酮組小鼠的呼吸急促、打噴嚏等哮喘癥狀得到明顯緩解，活動狀態和精神狀態較哮喘組有顯著改善。肺組織病理檢查結果顯示，吡格列酮組小鼠氣道上皮的斷裂和脫落情況明顯減輕，支氣管內黏液潴留減少，氣道平滑肌增厚程度得到抑制，肺泡結構相對完整，炎癥細胞浸潤數量顯著下降。氣道重塑程度的量化檢測結果表明，吡格列酮組小鼠的氣道壁厚度（WA）、氣道平滑肌厚度（WAm）與氣道內徑（D）的比值較哮喘組顯著降低，分別降至（20.34±1.87）%和（10.25±1.23）%，說明吡格列酮能夠有效減少氣道壁厚度、抑制平滑肌細胞增生和基質堆積，改善哮喘小鼠的氣道重塑。在作用機制方面，本研究揭示了吡格列酮抑制哮喘小鼠氣道重塑可能與激活PPARγ信號通路以及上調脂聯素表達密切相關。實驗結果表明，哮喘小鼠肺組織中脂聯素受體1（AdipoR1）、脂聯素受體2（AdipoR2）、PPARγ以及脂聯素的基因和蛋白表達水平均顯著降低，而吡格列酮能夠部分上調這些基因和蛋白的表達。PPARγ信號通路激活后，一方面可以抑制炎癥信號通路，減少炎癥因子的釋放，減輕氣道炎癥，間接抑制氣道重塑的發展；另一方面，可能直接調節參與氣道重塑的細胞的功能，抑制氣道平滑肌細胞的增殖和遷移，調節其收縮性，同時抑制成纖維細胞的活化和增殖，減少細胞外基質的合成，從而改善氣道重塑。脂聯素表達上調后，通過抑制氣道平滑肌細胞的增殖和誘導其凋亡，調節細胞外基質代謝，維持細胞外基質的動態平衡，進而減輕氣道重塑。此外，PPARγ信號通路的激活與脂聯素表達上調之間可能存在相互關聯，協同發揮抑制哮喘小鼠氣道重塑的作用。本研究成果具有重要的理論意義和潛在的臨床應用價值。在理論方面，進一步明確了PPARγ激動劑吡格列酮在哮喘氣道重塑中的作用及機制，豐富了哮喘發病機制和治療靶點的研究。在臨床應用方面，為哮喘及氣道重塑的治療提供了新的潛在治療策略和藥物選擇，為開發更加有效的哮喘治療藥物奠定了基礎。6.2對臨床治療的啟示本研究結果為哮喘及氣道重塑的臨床治療提供了多方面的重要啟示，有望推動臨床治療策略的創新與優化。從藥物研發角度來看，PPARγ激動劑吡格列酮展現出的抑制哮喘小鼠氣道重塑的作用，為新型哮喘治療藥物的開發指明了新方向。目前臨床上用于治療哮喘的藥物主要側重于控制炎癥和緩解癥狀，對于氣道重塑的治療效果有限。而本研究證實了吡格列酮通過激活PPARγ信號通路以及上調脂聯素表達，能夠有效減輕氣道炎癥、抑制平滑肌細胞增生和基質堆積，從而改善氣道重塑。這提示在未來的藥物研發中，可以進一步探索以PPARγ