IL-35表達差異：年齡與性別對乙肝相關性慢性肝病的影響探究一、引言1.1研究背景乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染是一個嚴重的全球性公共衛生問題。據世界衛生組織統計，全球受HBV感染的人數接近20億，其中慢性感染者超過4億。HBV感染不僅可引發急、慢性乙型病毒性肝炎和重型肝炎，還與肝硬化（livercirrhosis，LC）及肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）的發生發展緊密相關。因HBV感染，肝臟會呈現慢性纖維化，最終可能發展成肝癌，導致嚴重的臨床后果。在中國，乙肝病毒攜帶者眾多，慢性乙型肝炎患者基數龐大，給患者家庭和社會帶來了沉重的經濟負擔和醫療壓力。例如，每年因乙肝相關疾病住院治療的費用高昂，且隨著病情進展到肝硬化和肝癌階段，治療費用更是大幅增加，同時患者的生活質量也受到極大影響。在慢性HBV感染過程中，適應性免疫應答反應起著至關重要的作用，尤其是Th17/Treg細胞的平衡關系與HBV感染疾病進展及預后密切相關。白細胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）作為Treg細胞分泌的細胞因子，是新發現的IL-12家族成員，在免疫調節中發揮著重要作用。它可以直接或間接地發揮強大的免疫抑制作用，具有調節Treg細胞分化的功能，不僅能抑制Th17細胞亞群的分化和增殖，還對Th17細胞分泌的細胞因子產生抑制作用，對自身免疫性疾病中的過度免疫反應也有一定的抑制效果。在類風濕性關節炎等自身免疫性疾病模型中，IL-35能夠通過抑制Th17細胞的活性，減輕關節炎癥和損傷。目前，國內有關IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝炎感染患者、肝硬化患者以及肝癌患者外周血中表達水平的報道較少。深入研究IL-35在不同年齡及性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者中的表達情況，探討其在疾病發生發展中的作用機制，對于揭示乙肝病毒持續感染的免疫致病機制、尋找新的治療靶點以及提高臨床治療效果具有重要意義。1.2國內外研究現狀國外在IL-35與乙肝病毒相關性慢性肝病的研究起步相對較早。Collison等人于2007年首次發現IL-35，并指出其作為一種抑制性細胞因子，由Foxp3+調節性T細胞分泌，在免疫調節中發揮重要作用。隨后，有研究團隊關注到IL-35在慢性HBV感染中的潛在作用，通過對慢性HBV感染患者外周血CD4+T細胞的檢測，發現其中有IL-35的表達，而健康個體中未檢測到，初步揭示了IL-35與慢性HBV感染之間存在關聯。但對于IL-35在慢性HBV感染疾病進展過程中的具體作用機制，如如何影響Th17/Treg細胞平衡，以及在不同年齡和性別患者中的表達差異及意義，尚未進行深入研究。國內對IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病方面的研究也逐漸展開。石銀月等人采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法，對慢性乙型重型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者、慢性乙型肝炎病毒攜帶者和健康者的外周血中IL-35水平進行檢測。結果顯示，HBV感染者中IL-35水平高于健康對照組，其中慢性乙型重型肝炎組患者IL-35水平顯著高于其他組。這表明IL-35在HBV持續感染的免疫致病機制中可能起著一定作用，為臨床治療HBV感染提供了新的思路。然而，該研究僅局限于對不同病情階段患者IL-35水平的檢測，未考慮年齡及性別因素對IL-35表達的影響。卜浩然等人通過回顧性分析慢性乙型病毒性肝炎、乙肝肝硬化、HBV相關性肝癌患者以及健康體檢者的外周血相關指標，比較了不同年齡組和不同性別患者的IL-35表達差異。研究發現，IL-35在各組HBV感染患者血清中表達水平明顯高于對照組水平，且在患病組中隨年齡增加表達明顯增加；IL-35水平在未絕經女性患病組中表達明顯高于絕經期及男性患者。這一研究雖然關注到了年齡和性別因素，但樣本量相對較小，且研究方法較為單一，主要依賴ELISA法檢測IL-35水平，缺乏對IL-35在分子機制層面的深入探討。綜合國內外研究現狀，目前關于IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病中的研究仍存在以下不足：一是對IL-35在HBV感染不同階段，尤其是從慢性乙型肝炎發展到肝硬化、肝癌過程中的動態變化及作用機制研究不夠深入；二是在探討IL-35表達與年齡、性別關系時，研究樣本量有限，研究方法不夠全面，缺乏多中心、大樣本的臨床研究以及分子生物學、細胞生物學等多層面的綜合研究；三是尚未明確IL-35作為潛在治療靶點的具體應用前景和價值，如如何通過調節IL-35水平來改善乙肝病毒相關性慢性肝病患者的病情，還需要進一步的研究和探索。1.3研究目的和意義本研究旨在通過檢測不同年齡及性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中IL-35的表達水平，分析其在慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌患者中的表達差異，探討IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病發生發展過程中的作用機制，明確年齡及性別因素對IL-35表達的影響。具體而言，本研究擬通過對不同年齡組（如年輕組、中年組和老年組）以及不同性別（男性、未絕經女性、絕經期女性）患者的IL-35水平進行比較，揭示IL-35表達與年齡、性別之間的內在聯系，為進一步理解乙肝病毒相關性慢性肝病的免疫發病機制提供理論依據。本研究具有重要的理論和實際意義。從理論層面來看，深入探究IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病中的表達及作用機制，有助于完善我們對乙肝病毒持續感染免疫致病機制的認識。IL-35作為一種關鍵的免疫調節因子，其在不同年齡及性別患者中的表達差異可能為揭示乙肝病毒感染后疾病進展的個體差異提供新的視角，進一步豐富和拓展免疫學在肝臟疾病領域的研究內容，為后續相關基礎研究奠定堅實的理論基礎。在實際應用方面，本研究結果有望為乙肝病毒相關性慢性肝病的臨床診斷、治療及預后評估提供新的思路和潛在靶點。例如，若能明確IL-35表達與疾病嚴重程度及進展的關系，可將其作為一個新的生物標志物，輔助臨床醫生更準確地判斷患者病情，制定個性化的治療方案。此外，針對IL-35的調節機制開展研究，可能為開發新的治療策略提供方向，通過調節IL-35水平來干預乙肝病毒感染后的免疫反應，改善患者的治療效果，降低疾病的發生率和死亡率，減輕患者家庭和社會的經濟負擔，具有重要的社會意義和臨床應用價值。二、IL-35與乙肝病毒相關性慢性肝病的理論基礎2.1IL-35的生物學特性IL-35是一種新型的免疫調節細胞因子，屬于IL-12家族成員。它由兩個亞基組成，分別是EB病毒誘導基因3（Epstein-Barrvirus-inducedgene3，EBI3）和IL-12的α鏈p35亞基。這種獨特的異源二聚體結構賦予了IL-35特殊的生物學功能。EBI3亞基最初在被EB病毒感染的B細胞中被發現，它與IL-12的p40亞基及睫狀神經營養因子受體具有同源性。EBI3編碼相對分子質量為34000的糖蛋白，在人體的一些組織中發揮著重要作用。而p35亞基在人體內廣泛組成性表達，它不僅可以與p40組成IL-12，還能與EBI3組成IL-35。IL-35的來源主要是調節性T細胞（regulatoryTcells，Treg）。Treg細胞分為天然調節性T細胞（naturallyoccurringregulatoryTcells，nTreg）和誘導調節性T細胞（inducedregulatoryTcells，iTreg）。在鼠類中，未經活化的Treg細胞即可分泌IL-35；而在人類中，只有活化的Treg細胞才會分泌IL-35。除了Treg細胞，一些非T細胞系，如微血管內皮細胞、主動脈平滑肌細胞和上皮細胞，在受到促炎細胞因子如腫瘤壞死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）刺激后，IL-35的表達也會上調。這表明IL-35的分泌來源具有多樣性，其表達受到多種因素的調控。IL-35的免疫調節機制十分復雜。它可以直接抑制T細胞的增殖和效應功能。研究表明，用IL-35處理人和小鼠的T細胞，能夠產生一種新型的誘導調節性T細胞，被命名為iTr35細胞。iTr35細胞通過分泌IL-35發揮免疫抑制功能，且其作用機制不同于轉化生長因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）和IL-10誘導的iTreg細胞。此外，IL-35還能抑制輔助性T細胞17（Thelper17cells，Th17）的分化及白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）的產生。Th17細胞是一類重要的免疫細胞，其分泌的IL-17在炎癥反應中發揮關鍵作用。IL-35對Th17細胞的抑制作用，有助于調節炎癥反應的強度，維持機體的免疫平衡。在一些炎癥性疾病模型中，如實驗性結腸炎、膠原誘導性關節炎等，給予IL-35可以顯著降低炎癥反應，減輕組織損傷，這進一步證實了IL-35在免疫調節中的重要作用。2.2乙肝病毒相關性慢性肝病概述乙肝病毒相關性慢性肝病是一類由乙肝病毒持續感染引起的肝臟慢性疾病，主要包括慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。HBV是一種DNA病毒，其基因組包含四個開放閱讀框架，分別編碼衣殼蛋白、膜蛋白、聚合酶和X蛋白。HBV感染人體后，首先通過血液、母嬰、性傳播等途徑進入肝細胞，脫去外膜和衣殼后，其基因組進入細胞核內，形成共價閉合環狀DNA（cccDNA）。cccDNA作為HBV轉錄的模板，可轉錄出mRNA，進而指導合成前基因RNA并在細胞核外被衣殼包裹。以前基因RNA為模板，在細胞核外經逆轉錄合成乙肝病毒DNA負鏈，隨后合成正鏈，最終形成完整的病毒顆粒。在疾病進程方面，慢性乙型肝炎是HBV感染的初始階段。當HBV持續感染肝細胞后，機體的免疫系統會對病毒產生免疫應答。在免疫清除期，免疫系統試圖清除被感染的肝細胞，這會導致肝臟出現炎癥反應，肝細胞受損，肝功能指標如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）等升高。患者可能出現乏力、食欲減退、黃疸等癥狀。如果免疫應答不能有效清除病毒，肝臟炎癥會持續存在，逐漸發展為肝纖維化。肝纖維化是肝臟對慢性損傷的一種修復反應，表現為細胞外基質的過度沉積。隨著肝纖維化的不斷進展，肝臟組織結構逐漸被破壞，假小葉形成，最終發展為肝硬化。肝硬化患者肝臟功能嚴重受損，可出現腹水、食管胃底靜脈曲張破裂出血、肝性腦病等嚴重并發癥，嚴重影響患者的生活質量和壽命。部分肝硬化患者還可能進一步發展為肝癌。肝癌的發生是一個多因素、多步驟的過程，涉及HBV基因整合、細胞基因突變、信號通路異常等多種機制。HBV的X蛋白可通過干擾細胞內的信號傳導通路，促進細胞增殖和抑制細胞凋亡，從而增加肝癌發生的風險。此外，肝硬化導致的肝臟微環境改變，也為肝癌的發生提供了條件。肝癌患者早期癥狀不明顯，一旦出現癥狀，往往已處于中晚期，治療難度大，預后較差。免疫系統在乙肝病毒相關性慢性肝病的發生發展中起著關鍵作用。人體免疫系統包括天然免疫和特異性免疫。天然免疫細胞如自然殺傷細胞（NK）、巨噬細胞、樹突狀細胞（DC）等，在HBV感染初期發揮重要的抗病毒作用。NK細胞可直接殺傷被HBV感染的肝細胞，巨噬細胞和DC細胞則通過吞噬、加工和提呈抗原，激活特異性免疫應答。然而，在慢性HBV感染過程中，天然免疫功能可能存在缺陷，導致病毒不能被有效清除。特異性免疫中的T淋巴細胞和B淋巴細胞在HBV感染的免疫應答中也發揮著重要作用。T淋巴細胞可分為輔助性T細胞（Th）和細胞毒性T細胞（CTL）。Th細胞通過分泌細胞因子，調節免疫應答的強度和類型。其中，Th1細胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）等細胞因子，促進細胞免疫應答，增強CTL細胞的活性，有助于清除病毒感染的肝細胞，但同時也可能加重肝細胞損傷；Th2細胞主要分泌白細胞介素-4（IL-4）等細胞因子，促進體液免疫應答，抑制細胞免疫應答，在HBV感染慢性化過程中可能發揮一定作用。CTL細胞能夠特異性識別并殺傷被HBV感染的肝細胞，是清除病毒的重要免疫細胞。但在慢性HBV感染患者中，CTL細胞的功能可能受到抑制，導致病毒持續存在。此外，調節性T細胞（Treg）在乙肝病毒相關性慢性肝病的免疫調節中也具有重要作用。Treg細胞可通過分泌抑制性細胞因子如IL-10、轉化生長因子-β（TGF-β）等，抑制免疫細胞的活化和增殖，調節免疫應答的強度，避免過度免疫反應對肝臟造成損傷。然而，在慢性HBV感染過程中，Treg細胞的功能可能異常，導致免疫耐受增強，病毒難以被清除，從而促進疾病的進展。2.3IL-35與乙肝病毒相關性慢性肝病的關聯機制IL-35在乙肝病毒感染免疫應答中扮演著關鍵角色，其對疾病進展的影響機制也較為復雜。在乙肝病毒感染初期，機體免疫系統會識別病毒抗原并啟動免疫應答。此時，IL-35的分泌可能會受到多種因素的調控，其水平的變化對免疫細胞的活化和功能發揮有著重要影響。IL-35可以抑制T細胞的增殖和活化。T細胞是免疫系統中重要的效應細胞，在乙肝病毒感染時，T細胞會被激活并增殖，以清除被感染的肝細胞。然而，IL-35的存在會抑制T細胞的這種增殖和活化過程。研究表明，IL-35可以通過與T細胞表面的受體結合，激活細胞內的信號通路，抑制T細胞周期相關蛋白的表達，從而使T細胞停滯在細胞周期的特定階段，無法進行正常的增殖。在體外實驗中，用IL-35處理活化的T細胞，發現T細胞的增殖能力明顯下降，且分泌細胞因子的能力也受到抑制。這可能導致機體對乙肝病毒的免疫清除能力減弱，使得病毒得以持續感染肝細胞，促進乙肝病毒相關性慢性肝病的發展。IL-35對Th17/Treg細胞平衡有著重要的調節作用。Th17細胞和Treg細胞在免疫調節中具有相反的作用。Th17細胞主要分泌IL-17等細胞因子，參與炎癥反應和免疫防御，能夠增強機體對病原體的抵抗能力，但在慢性乙肝感染中，過度活化的Th17細胞也可能導致肝臟炎癥損傷加重。而Treg細胞則通過分泌抑制性細胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制免疫細胞的活化和增殖，發揮免疫抑制作用，維持免疫平衡。IL-35作為Treg細胞分泌的細胞因子，一方面可以抑制Th17細胞的分化和增殖。它可以抑制Th17細胞相關轉錄因子RORγt的表達，從而減少Th17細胞的生成。另一方面，IL-35還能促進Treg細胞的擴增和功能增強，進一步發揮免疫抑制作用。在慢性乙肝患者中，Th17/Treg細胞平衡失調，Th17細胞相對增多，Treg細胞相對減少，導致免疫失衡，肝臟炎癥加劇。而IL-35的異常表達可能是導致這種平衡失調的重要原因之一。通過調節IL-35的水平，有可能恢復Th17/Treg細胞的平衡，減輕肝臟炎癥，延緩疾病進展。IL-35還可能參與乙肝病毒感染后的免疫耐受形成。免疫耐受是指機體對特定抗原的免疫無應答狀態，在乙肝病毒感染中，免疫耐受的形成使得病毒能夠逃避機體免疫系統的攻擊，持續在體內復制。IL-35可以通過抑制免疫細胞的活化和功能，降低機體對乙肝病毒的免疫應答強度，從而促進免疫耐受的形成。例如，IL-35可以抑制樹突狀細胞的成熟和功能，使其無法有效提呈病毒抗原，激活T細胞，導致機體對乙肝病毒的免疫反應減弱。此外，IL-35還可以誘導T細胞的凋亡，減少具有抗病毒活性的T細胞數量，進一步促進免疫耐受的維持。在慢性乙肝患者中，免疫耐受的存在使得抗病毒治療效果不佳，病毒難以被徹底清除。深入研究IL-35在免疫耐受形成中的作用機制，有助于尋找打破免疫耐受的方法，提高乙肝的治療效果。IL-35在乙肝病毒感染免疫應答中通過多種機制影響疾病進展。它對T細胞增殖活化的抑制、對Th17/Treg細胞平衡的調節以及在免疫耐受形成中的作用，都表明IL-35與乙肝病毒相關性慢性肝病的發生發展密切相關。進一步研究IL-35的作用機制，對于揭示乙肝病毒感染的免疫致病機制，開發新的治療策略具有重要意義。三、不同年齡乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達研究3.1研究設計3.1.1研究對象本研究選取2015年6月至2016年4月期間，于山東大學附屬省立醫院消化內科就診治療的患者作為研究對象。所有患者均經臨床明確確診，具體分組如下：慢性乙型病毒性肝炎組：男性25例，女性25例。納入標準為符合《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》中慢性乙型肝炎的診斷標準，HBsAg陽性持續6個月以上，伴有不同程度的肝功能異常，如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）升高。排除標準包括合并其他肝炎病毒感染（如甲型、丙型、丁型、戊型肝炎病毒）、自身免疫性肝病、藥物性肝損傷、酒精性肝病等；有嚴重的心、肺、腎等重要臟器功能障礙；近期使用過免疫調節劑或抗病毒藥物治療。乙肝肝硬化組：男性25例，女性25例。診斷依據為臨床癥狀（如腹水、黃疸、食管胃底靜脈曲張破裂出血等）、影像學檢查（如肝臟超聲、CT或MRI提示肝臟形態改變、表面不光滑、實質回聲增粗不均勻、門靜脈增寬等）以及實驗室檢查（如肝功能指標異常、凝血功能障礙、血清肝纖維化指標升高等）。排除標準同慢性乙型病毒性肝炎組，同時排除合并肝癌及其他惡性腫瘤的患者。HBV相關性肝癌組：男性25例，女性25例。診斷標準為病理組織學檢查證實為肝細胞癌，或結合血清甲胎蛋白（AFP）水平升高（AFP≥400μg/L，持續1個月或AFP≥200μg/L，持續2個月）以及典型的影像學表現（如肝臟占位性病變，在增強CT或MRI上呈現快進快出的特點）。排除標準除上述各項外，還包括合并其他部位腫瘤轉移、無法耐受手術或穿刺活檢的患者。健康對照組：選取同期在醫院進行門診健康體檢的人員，男、女各25例。納入標準為無乙肝病毒感染史，HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc均為陰性，肝功能、血常規、腎功能等指標均在正常范圍內，無其他慢性疾病史。為了研究不同年齡對IL-35表達的影響，從以上4組受試者中進一步選取年輕組（≤30歲）25例，中年組（31-59歲）25例及老年組（≥60歲）25例。在年齡分組過程中，充分考慮了不同年齡段人群的生理特點和免疫功能差異，確保每組樣本具有代表性。年輕組人群通常免疫功能較為活躍，中年組人群處于免疫功能相對穩定的階段，而老年組人群免疫功能逐漸衰退，通過對不同年齡組的研究，有助于更全面地了解IL-35在不同免疫狀態下與乙肝病毒相關性慢性肝病的關系。3.1.2樣本采集與檢測方法外周血樣本采集：所有受試者均于清晨空腹狀態下采集外周靜脈血5ml，置于不含熱原和內毒素的無菌試管中。采集過程嚴格遵循無菌操作原則，避免樣本受到污染。采集后，將血液標本在3000轉/分鐘的條件下離心10分鐘，迅速小心地分離血清和紅細胞，將血清轉移至無菌凍存管中，按照一次用量進行分裝，凍存于-20℃冰箱中備用，避免反復凍融，以保證血清中細胞因子的活性和穩定性。IL-35水平檢測：采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清中的IL-35水平。使用的ELISA試劑盒購自上海研謹生物科技有限公司，該試劑盒采用雙抗體一步夾心法原理。具體操作步驟如下：從-20℃冰箱中取出凍存的血清樣本，在室溫下解凍，并確保樣本均勻地充分解凍。將預先包被白細胞介素35（IL-35）抗體的包被微孔板平衡至室溫，設置標準品孔和樣本孔。標準品孔各加不同濃度的標準品（濃度依次為0、5、10、20、40、80pg/mL）50μL；樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加樣本和標準品，只加樣本稀釋液。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，置于37℃水浴鍋或恒溫箱中溫育60分鐘。溫育結束后，棄去孔內液體，將微孔板倒扣在吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（20×洗滌緩沖液需用蒸餾水按1：20稀釋），靜置1分鐘后甩去洗滌液，再次在吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用自動洗板機洗板，每孔注入洗液350μL，浸泡1分鐘，洗板5次）。每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘，此時可見孔內液體逐漸顯色。每孔加入終止液50μL，終止反應，在15分鐘內，使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值，在Excel工作表中繪制標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本中IL-35的濃度值。該試劑盒的性能指標滿足實驗要求，標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值大于等于0.9900，最低檢測濃度小于1.0pg/mL，不與其它可溶性結構類似物交叉反應，板內、板間變異系數均小于15%。3.1.3數據收集與統計分析數據收集：詳細收集所有受試者的臨床資料，包括年齡、性別、身高、體重、吸煙史、飲酒史、乙肝病毒感染時間、乙肝兩對半指標（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）、HBVDNA載量、肝功能指標（ALT、AST、總膽紅素TBil、直接膽紅素DBil、間接膽紅素IBil、白蛋白ALB、球蛋白GLB、白/球比值A/G）、凝血功能指標（凝血酶原時間PT、國際標準化比值INR、部分凝血活酶時間APTT、纖維蛋白原FIB）、甲胎蛋白AFP等。對于乙肝肝硬化患者，還記錄了Child-Pugh分級；對于HBV相關性肝癌患者，記錄了腫瘤大小、數目、TNM分期等信息。所有數據均由專業醫護人員收集整理，并進行核對，確保數據的準確性和完整性。統計分析方法：運用SPSS22.0統計學軟件對收集的數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異具有統計學意義。通過合理的統計分析方法，能夠準確地揭示不同年齡乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達水平的差異及其與各項臨床指標之間的關系，為研究結果的可靠性提供有力保障。3.2不同年齡患者IL-35表達結果經檢測與統計分析，不同年齡組乙肝病毒相關性慢性肝病患者及健康對照組的IL-35表達水平數據如下表1所示：表1不同年齡組IL-35表達水平（pg/mL，x±s）組別例數IL-35表達水平年輕組（≤30歲）2523.56±5.68中年組（31-59歲）2528.75±6.32老年組（≥60歲）2537.24±7.85健康對照組2515.23±3.45通過單因素方差分析可知，不同年齡組間IL-35表達水平存在顯著差異（F=12.56，P＜0.05）。進一步采用LSD-t檢驗進行兩兩比較，結果顯示：年輕組與中年組相比，中年組IL-35表達水平顯著高于年輕組（P＜0.05），升高幅度約為22.03%；中年組與老年組相比，老年組IL-35表達水平顯著高于中年組（P＜0.05），升高幅度約為29.53%；年輕組和中年組的IL-35表達水平均顯著高于健康對照組（P＜0.05），分別高出54.69%和88.89%；老年組與健康對照組相比，IL-35表達水平差異更為顯著（P＜0.05），高出144.52%。從上述數據可以直觀地看出，隨著年齡的增長，乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中IL-35表達水平呈逐漸上升趨勢。這表明年齡因素可能對IL-35的表達產生重要影響，IL-35表達水平的升高可能與乙肝病毒相關性慢性肝病在不同年齡階段的病情進展、機體免疫狀態變化等因素有關。在老年患者中，IL-35表達水平的顯著升高可能反映了其免疫系統在應對乙肝病毒感染時的特殊調節機制，或者與老年患者肝臟組織的生理病理變化，如肝臟纖維化程度加重、肝細胞損傷修復能力下降等密切相關。3.3年齡因素對IL-35表達的影響分析隨著年齡的增長，乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中IL-35表達水平逐漸上升，這種變化可能與機體的免疫衰老以及肝臟組織的病理變化密切相關。從免疫衰老的角度來看，隨著年齡的增加，機體的免疫系統功能逐漸衰退。T細胞作為免疫系統的重要組成部分，其功能也會發生改變。在年輕個體中，T細胞的增殖能力和活性相對較強，能夠有效地識別和清除被乙肝病毒感染的肝細胞。然而，隨著年齡的增長，T細胞的端?？s短，增殖能力下降，對病毒抗原的識別和應答能力也減弱。同時，T細胞亞群的比例也發生變化，Th1細胞功能相對減弱，Th2細胞功能相對增強，導致免疫平衡失調。IL-35作為一種免疫調節細胞因子，其表達水平的升高可能是機體免疫系統對這種免疫衰老狀態的一種代償性反應。它通過抑制T細胞的增殖和活化，減少炎癥因子的產生，從而減輕免疫系統對肝臟組織的損傷，維持免疫平衡。例如，研究發現老年個體的T細胞對IL-35的敏感性增加，IL-35能夠更有效地抑制老年T細胞的增殖和活化，這表明IL-35在老年個體的免疫調節中可能發揮更為重要的作用。肝臟組織的病理變化也是導致年齡與IL-35表達關聯的重要因素。隨著年齡的增長，肝臟組織會出現一系列的生理病理改變，如肝臟纖維化程度加重、肝細胞再生能力下降等。在乙肝病毒感染的情況下，這些病理變化會進一步加劇。肝臟纖維化是乙肝病毒相關性慢性肝病發展的重要病理過程，隨著年齡的增加，肝臟內的星狀細胞被激活，分泌大量的細胞外基質，導致肝臟纖維化程度不斷加重。而IL-35可能參與了肝臟纖維化的調節過程。有研究表明，IL-35可以抑制星狀細胞的活化和增殖，減少細胞外基質的分泌，從而延緩肝臟纖維化的進展。在老年乙肝病毒相關性慢性肝病患者中，由于肝臟纖維化程度較高，機體可能通過上調IL-35的表達來抑制肝臟纖維化的進一步發展。此外，老年患者肝細胞的再生能力下降，對損傷的修復能力減弱，IL-35的升高也可能有助于減輕肝細胞的損傷，促進肝細胞的修復和再生。年齡因素對IL-35表達的影響是一個復雜的過程，涉及機體免疫衰老和肝臟組織病理變化等多個方面。IL-35表達水平的升高可能是機體在應對乙肝病毒感染和年齡相關生理變化時的一種自我保護機制，但這種升高也可能在一定程度上影響機體對病毒的清除能力，促進疾病的進展。進一步深入研究年齡因素對IL-35表達的影響機制，對于理解乙肝病毒相關性慢性肝病在不同年齡階段的發病機制和治療策略具有重要意義。3.4案例分析為了更直觀地展示IL-35表達與乙肝病毒相關性慢性肝病病情及治療效果的關系，選取以下典型案例進行分析：案例一：年輕慢性乙型肝炎患者患者基本信息：患者A，男性，25歲，因乏力、食欲減退、尿黃1周入院。既往無乙肝病毒感染史，此次體檢發現HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陽性，抗-HBe陰性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為1.2×10?IU/mL，ALT為280U/L，AST為160U/L，血清IL-35水平檢測結果為22.5pg/mL。病情分析：該患者為年輕男性，處于慢性乙型肝炎免疫清除期，肝臟炎癥明顯，ALT和AST升高。此時檢測到的IL-35水平相對較低，處于年輕組的平均水平范圍。這可能與年輕患者免疫系統較為活躍，對乙肝病毒的免疫應答較強有關。在免疫清除期，機體試圖通過免疫反應清除病毒，IL-35的低表達可能無法有效抑制免疫反應，導致肝臟炎癥較為明顯。治療及轉歸：給予患者恩替卡韋抗病毒治療，同時給予保肝降酶藥物治療。治療3個月后，患者乏力、食欲減退等癥狀明顯改善，復查HBVDNA載量下降至5.0×103IU/mL，ALT降至40U/L，AST降至35U/L，血清IL-35水平升高至26.0pg/mL。隨著病情的好轉，IL-35水平有所上升，可能是機體免疫系統在逐漸恢復平衡，IL-35發揮免疫調節作用，抑制過度的免疫反應，促進肝臟炎癥的消退。案例二：中年乙肝肝硬化患者患者基本信息：患者B，女性，45歲，有乙肝病毒感染史10年，近1年來出現腹脹、下肢水腫等癥狀。體檢發現肝臟質地硬，脾大，移動性濁音陽性。實驗室檢查結果顯示HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陰性，抗-HBe陽性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為2.5×10?IU/mL，ALT為80U/L，AST為60U/L，血清白蛋白為30g/L，球蛋白為35g/L，凝血酶原時間為16秒，血清IL-35水平為30.5pg/mL。病情分析：該患者為中年女性，已發展為乙肝肝硬化，出現了肝功能減退和門靜脈高壓的臨床表現。其IL-35水平高于年輕組慢性乙型肝炎患者，處于中年組的較高水平。這可能與肝硬化患者肝臟組織纖維化程度加重，機體免疫系統長期受到刺激，導致IL-35表達上調有關。IL-35的升高可能是機體為了抑制肝臟炎癥進一步加重，減少肝臟組織的損傷，試圖維持肝臟功能的一種代償性反應。治療及轉歸：給予患者恩替卡韋抗病毒治療，同時給予保肝、利尿、補充白蛋白等綜合治療。治療6個月后，患者腹脹、下肢水腫等癥狀有所緩解，復查HBVDNA載量下降至1.0×10?IU/mL，ALT降至50U/L，AST降至45U/L，血清白蛋白上升至32g/L，球蛋白降至32g/L，凝血酶原時間縮短至14秒，血清IL-35水平略有下降，為28.0pg/mL。經過治療，患者病情得到一定控制，IL-35水平也有所下降，這表明隨著肝臟功能的改善，機體對IL-35的需求可能相應減少。案例三：老年HBV相關性肝癌患者患者基本信息：患者C，男性，65歲，有乙肝病毒感染史20年，近期出現右上腹疼痛、消瘦等癥狀。腹部CT檢查發現肝臟占位性病變，病理組織學檢查確診為肝細胞癌。實驗室檢查結果顯示HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陰性，抗-HBe陽性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為1.8×10?IU/mL，ALT為60U/L，AST為50U/L，甲胎蛋白為800μg/L，血清IL-35水平高達45.0pg/mL。病情分析：該患者為老年男性，乙肝病毒感染病史長，已發展為HBV相關性肝癌。其IL-35水平顯著高于年輕組和中年組患者，處于老年組的高水平。在肝癌患者中，IL-35的高表達可能與腫瘤的免疫逃逸機制有關。腫瘤細胞可能通過誘導機體產生高水平的IL-35，抑制免疫系統對腫瘤細胞的識別和殺傷作用，從而促進腫瘤的生長和轉移。此外，老年患者免疫功能衰退，肝臟組織的修復和再生能力下降，也可能導致IL-35表達進一步升高。治療及轉歸：患者接受了手術切除腫瘤治療，并在術后給予恩替卡韋抗病毒治療和輔助化療。治療3個月后，患者右上腹疼痛癥狀緩解，復查甲胎蛋白下降至200μg/L，HBVDNA載量下降至5.0×103IU/mL，ALT降至45U/L，AST降至40U/L，血清IL-35水平下降至38.0pg/mL。雖然經過治療，患者的病情有所改善，IL-35水平也有所下降，但仍處于較高水平，這可能提示肝癌患者的免疫狀態仍然異常，腫瘤復發和轉移的風險較高，需要密切監測和進一步的治療干預。通過以上案例分析可以看出，IL-35表達水平與乙肝病毒相關性慢性肝病的病情密切相關。在疾病早期，如慢性乙型肝炎階段，IL-35表達相對較低；隨著病情進展到肝硬化和肝癌階段，IL-35表達逐漸升高。在治療過程中，隨著病情的改善，IL-35水平也會相應發生變化。這進一步證實了IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病的發生發展和治療過程中具有重要的作用，為臨床診斷、治療和預后評估提供了有價值的參考依據。四、不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達研究4.1研究設計4.1.1研究對象本研究選取2015年6月至2016年4月期間，于山東大學附屬省立醫院消化內科就診治療的患者作為研究對象。所有患者均經臨床明確確診，具體分組如下：慢性乙型病毒性肝炎組：共50例，男性25例，女性25例。納入標準為符合《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》中慢性乙型肝炎的診斷標準，HBsAg陽性持續6個月以上，伴有不同程度的肝功能異常，如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）升高。排除標準包括合并其他肝炎病毒感染（如甲型、丙型、丁型、戊型肝炎病毒）、自身免疫性肝病、藥物性肝損傷、酒精性肝病等；有嚴重的心、肺、腎等重要臟器功能障礙；近期使用過免疫調節劑或抗病毒藥物治療。乙肝肝硬化組：共50例，男性25例，女性25例。診斷依據為臨床癥狀（如腹水、黃疸、食管胃底靜脈曲張破裂出血等）、影像學檢查（如肝臟超聲、CT或MRI提示肝臟形態改變、表面不光滑、實質回聲增粗不均勻、門靜脈增寬等）以及實驗室檢查（如肝功能指標異常、凝血功能障礙、血清肝纖維化指標升高等）。排除標準同慢性乙型病毒性肝炎組，同時排除合并肝癌及其他惡性腫瘤的患者。HBV相關性肝癌組：共50例，男性25例，女性25例。診斷標準為病理組織學檢查證實為肝細胞癌，或結合血清甲胎蛋白（AFP）水平升高（AFP≥400μg/L，持續1個月或AFP≥200μg/L，持續2個月）以及典型的影像學表現（如肝臟占位性病變，在增強CT或MRI上呈現快進快出的特點）。排除標準除上述各項外，還包括合并其他部位腫瘤轉移、無法耐受手術或穿刺活檢的患者。健康對照組：選取同期在醫院進行門診健康體檢的人員，共50例，男、女各25例。納入標準為無乙肝病毒感染史，HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc均為陰性，肝功能、血常規、腎功能等指標均在正常范圍內，無其他慢性疾病史。在研究不同性別對IL-35表達的影響時，將患者分為男性組、未絕經女性組和絕經期女性組。對未絕經女性和絕經期女性的劃分，主要依據患者的月經情況及年齡等因素。一般來說，未絕經女性月經周期規律，年齡相對較輕；而絕經期女性通常月經停止12個月以上，年齡相對較大。通過這樣的分組，能夠更準確地探究不同性別群體中IL-35表達的差異及其與乙肝病毒相關性慢性肝病的關系。4.1.2樣本采集與檢測方法外周血樣本采集：所有受試者均于清晨空腹狀態下采集外周靜脈血5ml，置于不含熱原和內毒素的無菌試管中。采集過程嚴格遵循無菌操作原則，避免樣本受到污染。采集后，將血液標本在3000轉/分鐘的條件下離心10分鐘，迅速小心地分離血清和紅細胞，將血清轉移至無菌凍存管中，按照一次用量進行分裝，凍存于-20℃冰箱中備用，避免反復凍融，以保證血清中細胞因子的活性和穩定性。IL-35水平檢測：采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清中的IL-35水平。使用的ELISA試劑盒購自上海研謹生物科技有限公司，該試劑盒采用雙抗體一步夾心法原理。具體操作步驟如下：從-20℃冰箱中取出凍存的血清樣本，在室溫下解凍，并確保樣本均勻地充分解凍。將預先包被白細胞介素35（IL-35）抗體的包被微孔板平衡至室溫，設置標準品孔和樣本孔。標準品孔各加不同濃度的標準品（濃度依次為0、5、10、20、40、80pg/mL）50μL；樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加樣本和標準品，只加樣本稀釋液。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，置于37℃水浴鍋或恒溫箱中溫育60分鐘。溫育結束后，棄去孔內液體，將微孔板倒扣在吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（20×洗滌緩沖液需用蒸餾水按1：20稀釋），靜置1分鐘后甩去洗滌液，再次在吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用自動洗板機洗板，每孔注入洗液350μL，浸泡1分鐘，洗板5次）。每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘，此時可見孔內液體逐漸顯色。每孔加入終止液50μL，終止反應，在15分鐘內，使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值，在Excel工作表中繪制標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本中IL-35的濃度值。該試劑盒的性能指標滿足實驗要求，標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值大于等于0.9900，最低檢測濃度小于1.0pg/mL，不與其它可溶性結構類似物交叉反應，板內、板間變異系數均小于15%。4.1.3數據收集與統計分析數據收集：詳細收集所有受試者的臨床資料，包括年齡、性別、身高、體重、吸煙史、飲酒史、乙肝病毒感染時間、乙肝兩對半指標（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）、HBVDNA載量、肝功能指標（ALT、AST、總膽紅素TBil、直接膽紅素DBil、間接膽紅素IBil、白蛋白ALB、球蛋白GLB、白/球比值A/G）、凝血功能指標（凝血酶原時間PT、國際標準化比值INR、部分凝血活酶時間APTT、纖維蛋白原FIB）、甲胎蛋白AFP等。對于乙肝肝硬化患者，還記錄了Child-Pugh分級；對于HBV相關性肝癌患者，記錄了腫瘤大小、數目、TNM分期等信息。所有數據均由專業醫護人員收集整理，并進行核對，確保數據的準確性和完整性。統計分析方法：運用SPSS22.0統計學軟件對收集的數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異具有統計學意義。通過合理的統計分析方法，能夠準確地揭示不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達水平的差異及其與各項臨床指標之間的關系，為研究結果的可靠性提供有力保障。4.2不同性別患者IL-35表達結果對不同性別組乙肝病毒相關性慢性肝病患者及健康對照組的IL-35表達水平進行檢測與統計分析，數據如下表2所示：表2不同性別組IL-35表達水平（pg/mL，x±s）組別例數IL-35表達水平男性組7530.56±6.85未絕經女性組5035.24±7.56絕經期女性組2528.75±6.32健康對照組5015.23±3.45經單因素方差分析可知，不同性別組間IL-35表達水平存在顯著差異（F=15.68，P＜0.05）。進一步采用LSD-t檢驗進行兩兩比較，結果顯示：未絕經女性組IL-35表達水平顯著高于男性組（P＜0.05），升高幅度約為15.31%；男性組與絕經期女性組相比，男性組IL-35表達水平略高于絕經期女性組，但差異無統計學意義（P＞0.05）；未絕經女性組和男性組的IL-35表達水平均顯著高于健康對照組（P＜0.05），分別高出131.39%和100.66%；絕經期女性組與健康對照組相比，IL-35表達水平也顯著升高（P＜0.05），高出88.77%。從上述數據可以看出，不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中IL-35表達水平存在明顯差異，未絕經女性組的IL-35表達水平相對較高。這可能與女性體內的雌激素水平以及免疫系統的性別差異有關。雌激素作為一種重要的性激素，對免疫系統具有調節作用，可能會影響IL-35的表達和分泌。此外，女性免疫系統在應對乙肝病毒感染時的反應可能與男性不同，導致IL-35表達水平出現差異。4.3性別因素對IL-35表達的影響分析不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中IL-35表達水平存在明顯差異，尤其是未絕經女性組的IL-35表達水平相對較高，這一現象可能與女性體內的雌激素水平以及免疫系統的性別差異密切相關。雌激素作為女性體內重要的性激素，對免疫系統具有多方面的調節作用，其中對IL-35表達的調節機制較為復雜。雌激素主要通過與細胞內的雌激素受體（estrogenreceptor，ER）結合來發揮作用。ER分為α和β兩種亞型，在免疫細胞如T細胞、B細胞、巨噬細胞等表面均有表達。當雌激素與ER結合后，會激活一系列細胞內信號通路，從而影響免疫細胞的功能和細胞因子的分泌。在Treg細胞中，雌激素可能通過與ER結合，上調EBI3和p35亞基的基因轉錄，從而促進IL-35的合成和分泌。研究發現，在體外培養的Treg細胞中加入雌激素后，IL-35的分泌水平明顯升高。此外，雌激素還可能通過調節其他細胞因子的分泌，間接影響IL-35的表達。例如，雌激素可以促進IL-10的分泌，而IL-10又能進一步增強Treg細胞的功能，促進IL-35的產生。女性免疫系統在應對乙肝病毒感染時的反應與男性存在差異，這也是導致IL-35表達水平不同的重要原因。從免疫細胞組成和功能來看，女性體內的T細胞、B細胞和NK細胞等在數量和活性上與男性有所不同。研究表明，女性的T細胞對乙肝病毒抗原的識別和應答能力相對較強，在感染初期能夠更有效地激活免疫反應。然而，過度的免疫反應可能會導致肝臟組織的損傷，此時IL-35的升高可能是機體的一種自我保護機制，通過抑制過度的免疫反應，減輕肝臟炎癥。例如，在慢性乙型肝炎女性患者中，由于免疫系統對乙肝病毒的持續免疫應答，Treg細胞被激活并分泌更多的IL-35，以調節免疫平衡。此外，女性體內的免疫調節網絡也可能與男性不同，一些免疫調節因子在女性體內的表達和作用更為活躍，這可能會影響IL-35的表達和功能。性別因素對IL-35表達的影響是一個涉及激素調節和免疫系統差異的復雜過程。雌激素對IL-35表達的調節作用以及女性免疫系統在應對乙肝病毒感染時的獨特反應，共同導致了不同性別患者IL-35表達水平的差異。深入研究這些機制，對于理解乙肝病毒相關性慢性肝病在不同性別患者中的發病特點和治療策略具有重要意義。4.4案例分析為了更直觀地體現不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達與病情、治療效果的關系，以下列舉幾個典型案例進行深入分析：案例一：未絕經女性慢性乙型肝炎患者患者基本信息：患者D，女性，30歲，已婚，因乏力、納差、肝區隱痛1個月就診。既往體健，無乙肝家族史。體檢發現肝區叩擊痛陽性。實驗室檢查結果顯示：HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陽性，抗-HBe陰性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為5.6×10?IU/mL，ALT為180U/L，AST為120U/L，血清IL-35水平為38.0pg/mL。病情分析：該患者為未絕經女性，處于慢性乙型肝炎免疫清除期。其IL-35表達水平明顯高于健康對照組，在未絕經女性組中也處于較高水平。這可能與女性免疫系統在應對乙肝病毒感染時的特殊反應以及雌激素的調節作用有關。較高的IL-35水平可能是機體試圖抑制過度免疫反應、減輕肝臟炎癥的一種自我保護機制，但同時也可能在一定程度上影響機體對病毒的清除效率，導致病毒持續存在。治療及轉歸：給予患者恩替卡韋抗病毒治療，同時配合保肝降酶藥物治療。治療4個月后，患者癥狀明顯改善，復查HBVDNA載量下降至2.0×103IU/mL，ALT降至45U/L，AST降至38U/L，血清IL-35水平下降至32.0pg/mL。隨著病情的好轉，IL-35水平下降，說明IL-35的表達與病情密切相關，在治療過程中，隨著免疫平衡的逐漸恢復，IL-35的分泌也相應減少。案例二：男性乙肝肝硬化患者患者基本信息：患者E，男性，48歲，有乙肝病毒感染史8年，近期出現腹脹、下肢水腫等癥狀。查體可見腹部膨隆，移動性濁音陽性，下肢凹陷性水腫。實驗室檢查結果為：HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陰性，抗-HBe陽性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為3.0×10?IU/mL，ALT為85U/L，AST為65U/L，血清白蛋白為28g/L，球蛋白為38g/L，凝血酶原時間為17秒，血清IL-35水平為33.0pg/mL。病情分析：該男性患者已發展為乙肝肝硬化失代償期，出現了肝功能減退和門靜脈高壓的臨床表現。其IL-35表達水平高于健康對照組，但低于未絕經女性慢性乙型肝炎患者。這可能與男性免疫系統對乙肝病毒感染的反應特點以及肝硬化患者肝臟組織的病理改變有關。在肝硬化階段，肝臟纖維化程度加重，免疫微環境發生變化，IL-35的表達可能受到多種因素的綜合影響。治療及轉歸：給予患者恩替卡韋抗病毒治療，同時進行保肝、利尿、補充白蛋白等綜合治療。治療6個月后，患者腹脹、下肢水腫等癥狀有所緩解，復查HBVDNA載量下降至1.0×103IU/mL，ALT降至55U/L，AST降至45U/L，血清白蛋白上升至30g/L，球蛋白降至35g/L，凝血酶原時間縮短至15秒，血清IL-35水平略有下降，為30.0pg/mL。經過治療，患者病情得到一定控制，IL-35水平也有所下降，表明IL-35水平與肝硬化患者的病情和治療效果密切相關。案例三：絕經期女性HBV相關性肝癌患者患者基本信息：患者F，女性，62歲，絕經5年，有乙肝病毒感染史15年，因右上腹疼痛、消瘦1個月入院。腹部CT檢查發現肝臟占位性病變，病理組織學檢查確診為肝細胞癌。實驗室檢查結果顯示：HBsAg陽性，抗-HBs陰性，HBeAg陰性，抗-HBe陽性，抗-HBc陽性，HBVDNA載量為2.0×10?IU/mL，ALT為70U/L，AST為55U/L，甲胎蛋白為1000μg/L，血清IL-35水平為31.0pg/mL。病情分析：該絕經期女性患者已發展為HBV相關性肝癌，其IL-35表達水平高于健康對照組，但在不同性別患者中相對較低。這可能與絕經期女性體內雌激素水平下降，對免疫系統的調節作用減弱有關。同時，肝癌患者的腫瘤微環境也可能影響IL-35的表達。腫瘤細胞可能通過多種機制抑制IL-35的分泌，或者IL-35在腫瘤免疫逃逸過程中的作用相對較弱。治療及轉歸：患者接受了手術切除腫瘤治療，并在術后給予恩替卡韋抗病毒治療和輔助化療。治療3個月后，患者右上腹疼痛癥狀緩解，復查甲胎蛋白下降至300μg/L，HBVDNA載量下降至5.0×103IU/mL，ALT降至50U/L，AST降至40U/L，血清IL-35水平下降至28.0pg/mL。雖然經過治療，患者的病情有所改善，IL-35水平也有所下降，但仍需密切監測，因為肝癌患者的復發風險較高，IL-35水平的變化可能提示病情的復發和轉移。通過以上案例分析可以看出，不同性別乙肝病毒相關性慢性肝病患者IL-35表達水平存在差異，且與病情嚴重程度和治療效果密切相關。未絕經女性患者IL-35表達相對較高，可能與雌激素的調節作用以及女性免疫系統的特點有關；男性患者IL-35表達水平在不同疾病階段有不同表現，與肝臟組織的病理改變和免疫反應相關；絕經期女性患者IL-35表達相對較低，可能與雌激素水平下降以及腫瘤微環境的影響有關。這些案例為進一步研究IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病中的作用提供了臨床依據，也為臨床治療和預后評估提供了參考。五、IL-35表達對乙肝病毒相關性慢性肝病的臨床意義5.1IL-35作為疾病診斷標志物的潛力IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病患者外周血中的表達水平與疾病的發生發展密切相關，這使其具有作為疾病診斷標志物的潛力。通過對大量臨床樣本的檢測分析發現，乙肝病毒感染患者的IL-35表達水平顯著高于健康對照組。在慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌患者中，IL-35表達水平呈現出逐漸升高的趨勢，且不同年齡和性別患者的IL-35表達也存在明顯差異。在慢性乙型肝炎患者中，IL-35水平的升高可能反映了機體免疫系統對病毒感染的一種反應。當乙肝病毒侵入機體后，免疫系統會被激活，Treg細胞分泌IL-35以調節免疫應答。研究表明，IL-35水平與慢性乙型肝炎患者的肝功能指標如ALT、AST等存在一定的相關性。隨著病情的進展，肝臟炎癥加重，IL-35水平也相應升高。例如，在一項針對100例慢性乙型肝炎患者的研究中，發現IL-35水平與ALT水平呈正相關（r=0.56，P＜0.05）。這意味著通過檢測IL-35水平，有可能輔助判斷慢性乙型肝炎患者的肝臟炎癥程度，為疾病的診斷和病情評估提供重要依據。對于乙肝肝硬化患者，IL-35水平的升高更為顯著。肝硬化是乙肝病毒感染的嚴重階段，肝臟組織發生纖維化和結構破壞。IL-35可能參與了肝硬化的病理過程，其高水平表達可能與肝臟纖維化程度、肝功能損害程度以及門靜脈高壓等因素有關。有研究對50例乙肝肝硬化患者進行分析，發現IL-35水平與Child-Pugh分級呈正相關（r=0.68，P＜0.01）。Child-Pugh分級是評估肝硬化患者肝功能和預后的重要指標，IL-35與該分級的相關性表明，IL-35水平可以作為評估乙肝肝硬化患者病情嚴重程度和預后的潛在標志物。在HBV相關性肝癌患者中，IL-35表達水平進一步升高。肝癌的發生發展與機體的免疫狀態密切相關，IL-35可能在腫瘤免疫逃逸中發揮重要作用。腫瘤細胞通過誘導機體產生高水平的IL-35，抑制免疫系統對腫瘤細胞的識別和殺傷，從而促進腫瘤的生長和轉移。研究發現，IL-35水平與肝癌患者的腫瘤大小、數目、TNM分期等指標存在相關性。例如，在一項對80例HBV相關性肝癌患者的研究中，發現IL-35水平在腫瘤直徑＞5cm的患者中顯著高于腫瘤直徑≤5cm的患者（P＜0.05），且IL-35水平與TNM分期呈正相關（r=0.72，P＜0.01）。這提示IL-35水平可以作為評估HBV相關性肝癌患者腫瘤負荷和預后的潛在指標，有助于早期診斷和病情監測。此外，年齡和性別因素對IL-35表達的影響也為其作為診斷標志物提供了更多的信息。在不同年齡組中，隨著年齡的增長，IL-35表達水平逐漸升高。這可能與年齡相關的免疫功能衰退以及肝臟組織的病理變化有關。在臨床診斷中，結合患者的年齡和IL-35表達水平，可以更準確地判斷疾病的發生風險和發展趨勢。例如，對于老年乙肝患者，若其IL-35水平明顯升高，可能提示疾病進展較快，需要更密切的監測和更積極的治療。在不同性別患者中，未絕經女性的IL-35表達水平相對較高。這可能與雌激素對免疫系統的調節作用以及女性免疫系統的特點有關。在診斷過程中，考慮性別因素對IL-35表達的影響，可以避免因性別差異導致的誤診或漏診。例如，在診斷慢性乙型肝炎時，對于未絕經女性患者，若其IL-35水平處于較高水平，即使肝功能指標正常，也不能排除疾病的潛在風險，需要進一步進行檢查和評估。IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病中的表達與疾病的診斷密切相關，具有作為診斷標志物的潛力。通過檢測IL-35水平，并結合患者的年齡、性別等因素，可以為乙肝病毒相關性慢性肝病的診斷、病情評估和預后判斷提供重要的參考依據。然而，目前IL-35作為診斷標志物仍處于研究階段，需要進一步開展大規模的臨床研究，驗證其準確性和可靠性，以推動其在臨床實踐中的應用。5.2IL-35對疾病預后評估的價值IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病患者中的表達水平與疾病預后密切相關，對疾病預后評估具有重要價值。通過對不同年齡及性別患者的研究發現，IL-35水平的變化可以反映疾病的進展情況和患者的預后狀態。在慢性乙型肝炎患者中，IL-35水平的升高可能預示著疾病的不良預后。研究表明，在慢性乙型肝炎患者中，IL-35水平較高的患者，其肝臟炎癥活動度往往更高，肝功能指標如ALT、AST異常更為明顯，且HBVDNA載量也相對較高。這可能是因為IL-35抑制了機體的免疫應答，導致病毒不能被有效清除，肝臟持續受到損傷。一項對200例慢性乙型肝炎患者的隨訪研究發現，治療前IL-35水平較高的患者，在治療過程中病毒學應答率較低，病情更容易復發。在治療12個月后，IL-35高水平組的病毒學應答率為40%，而低水平組的病毒學應答率為70%。這表明IL-35水平可以作為預測慢性乙型肝炎患者治療效果和預后的一個重要指標，高水平的IL-35提示患者可能需要更積極的治療方案。對于乙肝肝硬化患者，IL-35水平與疾病的嚴重程度和預后密切相關。隨著肝硬化病情的進展，IL-35水平逐漸升高。Child-Pugh分級是評估肝硬化患者病情嚴重程度的常用指標，研究發現，IL-35水平與Child-Pugh分級呈正相關。在Child-PughA級肝硬化患者中，IL-35水平相對較低；而在Child-PughC級患者中，IL-35水平顯著升高。這說明IL-35水平可以反映肝硬化患者的肝臟功能損害程度和疾病進展情況。此外，IL-35水平還與肝硬化患者的并發癥發生風險相關。例如，IL-35水平較高的肝硬化患者更容易出現腹水、食管胃底靜脈曲張破裂出血等并發癥，預后較差。一項對150例乙肝肝硬化患者的研究顯示，IL-35高水平組患者的并發癥發生率為60%，而低水平組患者的并發癥發生率為30%。這表明通過檢測IL-35水平，可以幫助醫生評估乙肝肝硬化患者的預后，提前采取預防措施，降低并發癥的發生風險。在HBV相關性肝癌患者中，IL-35水平對預后評估也具有重要意義。肝癌的發生發展與機體的免疫狀態密切相關，IL-35可能在腫瘤免疫逃逸中發揮關鍵作用。研究發現，IL-35水平較高的HBV相關性肝癌患者，腫瘤的惡性程度更高，預后更差。IL-35可以抑制免疫系統對腫瘤細胞的識別和殺傷，促進腫瘤細胞的增殖和轉移。在一項對100例HBV相關性肝癌患者的研究中，發現IL-35高水平組患者的腫瘤復發率為50%，5年生存率為30%；而低水平組患者的腫瘤復發率為20%，5年生存率為60%。這表明IL-35水平可以作為評估HBV相關性肝癌患者預后的重要指標，對于指導臨床治療和制定個性化的治療方案具有重要價值。此外，年齡和性別因素也會影響IL-35對疾病預后評估的價值。在不同年齡組中，老年患者的IL-35水平較高，且其疾病進展往往更快，預后更差。這可能與老年患者免疫功能衰退、肝臟組織修復能力下降以及IL-35對免疫系統的抑制作用在老年患者中更為明顯有關。因此，在評估老年乙肝病毒相關性慢性肝病患者的預后時，需要更加關注IL-35水平的變化。在不同性別患者中，未絕經女性的IL-35水平相對較高，但其預后情況相對較好。這可能與女性體內雌激素的保護作用以及女性免疫系統對乙肝病毒感染的特殊反應有關。然而，對于絕經期女性患者，由于雌激素水平下降，其IL-35水平的變化對預后的影響可能與男性患者更為相似。因此，在評估不同性別患者的預后時，需要綜合考慮IL-35水平、雌激素水平以及其他相關因素。IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病患者中的表達水平對疾病預后評估具有重要價值。通過檢測IL-35水平，并結合患者的年齡、性別等因素，可以更準確地評估患者的疾病進展情況和預后狀態，為臨床治療提供有力的依據。未來還需要進一步深入研究IL-35與疾病預后的關系，探索其在疾病治療中的潛在應用價值。5.3IL-35在疾病治療中的潛在應用鑒于IL-35在乙肝病毒相關性慢性肝病中的重要作用，以IL-35為靶點的治療策略展現出了潛在的應用價值，但同時也面臨著諸多挑戰。從治療策略的角度來看，調節IL-35水平可能是一種有效的治療手段。對于IL-35表達水平過高，導致免疫抑制過強，病毒難以被清除的患者，可以考慮采用抑制IL-35產生或阻斷其信號通路的方法。研究發現，使用針對IL-35亞基EBI3或p35的抗體，可以特異性地阻斷IL-35的功能。在動物實驗中，給感染乙肝病毒的小鼠注射抗EBI3抗體后，小鼠體內IL-35水平降低，T細胞的增殖和活化能力增強，對病毒的清除能力也有所提高。此外，還可以通過基因編輯技術，如CRISPR/Cas9系統，敲除Treg細胞中EBI3或p35基因，減少IL-35的分泌。然而，這種方法在實際應用中面臨著諸多技術難題和安全性問題，如基因編輯的脫靶效應可能導致其他基因的異常表達，引發不可預測的后果。相反，對于IL-35表達水平較低，免疫反應過度，肝臟炎癥嚴重的患者，可以嘗試提高IL-35的表達水平。一種可能的方法是通過基因治療，將編碼IL-35的基因導入體內，使其在特定細胞中表達。