IL-33/sST2在PDR及PVR患者玻璃體液及血清中的表達特征與臨床意義研究一、引言1.1研究背景與目的1.1.1研究背景糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）是糖尿病常見且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，在糖尿病患者群體中廣泛存在，嚴(yán)重威脅著患者的視力健康。據(jù)統(tǒng)計，我國糖尿病患者的DR患病率達到了22.4%，隨著糖尿病患者數(shù)量的持續(xù)上升，DR患者的人數(shù)也在不斷增加。其中，增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）是DR發(fā)展到晚期的嚴(yán)重階段，其特征為視網(wǎng)膜新生血管形成、玻璃體積血、纖維增殖等。這些病理變化會進一步引發(fā)牽拉性視網(wǎng)膜脫離，導(dǎo)致患者視力嚴(yán)重下降甚至失明。PDR不僅給患者的生活質(zhì)量帶來極大影響，使其在日常生活的諸多方面，如行走、閱讀、識別物體等都面臨困難，還對患者的心理健康造成沉重打擊，增加了患者患抑郁癥等心理疾病的風(fēng)險，給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）通常繼發(fā)于孔源性視網(wǎng)膜脫離、眼外傷、多次眼內(nèi)手術(shù)等情況，是導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離手術(shù)失敗和視力恢復(fù)不佳的主要原因。在孔源性視網(wǎng)膜脫離患者中，約有5%-10%會發(fā)展為PVR。PVR的發(fā)病機制主要涉及細(xì)胞增生和膜的收縮。當(dāng)視網(wǎng)膜出現(xiàn)裂孔后，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞在炎性因子等刺激下，游離于玻璃體腔并附著、聚集，隨后在多種細(xì)胞因子作用下開始增生、表型轉(zhuǎn)化，分泌膠原等物質(zhì)，與視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等共同在玻璃體、視網(wǎng)膜及黃斑表面形成細(xì)胞性膜。這些增殖膜的收縮會對視網(wǎng)膜產(chǎn)生垂直或切線牽引，引發(fā)視網(wǎng)膜脫離，嚴(yán)重?fù)p害視功能，極大地影響患者的生活和工作，降低其生活質(zhì)量。目前，對于PDR和PVR的治療主要以手術(shù)為主，如玻璃體切除術(shù)等，但手術(shù)效果往往受到多種因素制約，部分患者術(shù)后視力恢復(fù)不理想，且存在疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險。因此，深入探究PDR和PVR的發(fā)病機制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點，對于改善患者的預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。白細(xì)胞介素-33（IL-33）是一種新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，屬于IL-1細(xì)胞因子家族成員。它廣泛表達于多種組織和細(xì)胞中，如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。IL-33在體內(nèi)主要以核蛋白形式存在，當(dāng)細(xì)胞受到損傷或炎癥刺激時，會被釋放到細(xì)胞外，發(fā)揮細(xì)胞因子的作用。IL-33通過與受體ST2結(jié)合，激活下游信號通路，參與多種生理和病理過程。在免疫調(diào)節(jié)方面，IL-33能夠促進Th2型免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活化、增殖和分化，在過敏性疾病、感染性疾病等的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。同時，IL-33在炎癥反應(yīng)中也扮演著關(guān)鍵角色，它可以誘導(dǎo)多種炎癥因子的產(chǎn)生，如IL-4、IL-5、IL-13等，加劇炎癥反應(yīng)。可溶型生長刺激表達基因2蛋白（sST2）是ST2的可溶性形式，主要通過剪切ST2基因的mRNA轉(zhuǎn)錄本而產(chǎn)生。sST2可以競爭性地結(jié)合IL-33，從而阻斷IL-33與膜結(jié)合型ST2的相互作用，抑制IL-33信號通路的激活，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。研究表明，IL-33/sST2軸在多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。在心血管疾病方面，血清IL-33和sST2水平與心力衰竭、心肌梗死等疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。在呼吸系統(tǒng)疾病中，如慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支氣管哮喘等，IL-33/sST2軸參與了氣道炎癥和重塑的過程，其水平變化與疾病的病情和預(yù)后相關(guān)。此外，在腎臟疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等領(lǐng)域，IL-33/sST2軸也被發(fā)現(xiàn)與疾病的發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。在眼科領(lǐng)域，已有研究表明，IL-33/sST2軸參與了葡萄膜炎、年齡相關(guān)性黃斑變性等眼部疾病的炎癥反應(yīng)過程。然而，關(guān)于IL-33/sST2在PDR和PVR患者玻璃體液及血清中的表達情況及其與疾病的關(guān)系，目前尚缺乏深入研究。鑒于PDR和PVR對視力的嚴(yán)重危害以及IL-33/sST2軸在炎癥和免疫調(diào)節(jié)中的重要作用，探討IL-33/sST2在PDR和PVR中的表達及臨床意義具有重要的理論和實踐價值，可能為這兩種疾病的早期診斷、病情評估和治療提供新的思路和方法。1.1.2研究目的本研究旨在通過檢測PDR及PVR患者玻璃體液及血清中IL-33/sST2的表達水平，分析其表達差異，并探討其與疾病嚴(yán)重程度、臨床特征之間的相關(guān)性，以期為PDR和PVR的早期診斷、病情評估及治療提供新的生物標(biāo)志物和潛在的治療靶點。具體研究目的如下：比較PDR患者、PVR患者與正常對照組（或非相關(guān)眼部疾病對照組）玻璃體液及血清中IL-33和sST2的表達水平，明確其在不同組間的差異。分析PDR及PVR患者玻璃體液及血清中IL-33和sST2表達水平與疾病嚴(yán)重程度（如PDR的分期、PVR的分級等）之間的相關(guān)性，評估其作為疾病病情評估指標(biāo)的可行性。探討IL-33/sST2表達水平與PDR及PVR患者其他臨床特征（如糖尿病病程、血糖控制情況、視網(wǎng)膜脫離時間等）之間的關(guān)系，為進一步了解疾病的發(fā)病機制和危險因素提供依據(jù)。評估IL-33/sST2作為PDR和PVR診斷標(biāo)志物的效能，通過受試者工作特征（ROC）曲線分析等方法，確定其診斷閾值，為臨床早期診斷提供參考。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者進行了大量研究。早期研究主要集中在對DR發(fā)病機制的探索，發(fā)現(xiàn)高血糖引發(fā)的多元醇通路激活、蛋白激酶C（PKC）通路異常、氧化應(yīng)激等是導(dǎo)致DR發(fā)生發(fā)展的重要因素。隨著研究的深入，炎癥機制在DR中的作用逐漸受到關(guān)注。眾多研究表明，DR是一種慢性炎癥性疾病，多種炎癥因子參與其中，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，它們在DR的各個階段發(fā)揮著不同作用，包括促進視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、誘導(dǎo)新生血管形成等。在增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）方面，研究重點主要放在新生血管形成和纖維增殖的機制上。新生血管的形成是PDR的關(guān)鍵病理特征，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在其中扮演著核心角色。VEGF是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，它能夠促進血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，增加血管通透性，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜新生血管形成。大量臨床研究表明，PDR患者眼內(nèi)VEGF水平顯著升高，且與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。抗VEGF治療已成為PDR的重要治療手段之一，通過抑制VEGF的生物學(xué)活性，能夠有效減少新生血管形成，改善患者的視力預(yù)后。然而，抗VEGF治療并非對所有患者都有效，且存在一定的復(fù)發(fā)率和不良反應(yīng)，因此，尋找新的治療靶點和生物標(biāo)志物對于PDR的治療具有重要意義。關(guān)于增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR），國內(nèi)外研究主要圍繞其發(fā)病機制和治療方法展開。在發(fā)病機制方面，研究認(rèn)為PVR是一種由多種細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的創(chuàng)傷修復(fù)過程。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（RPE）在PVR的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)視網(wǎng)膜出現(xiàn)裂孔等損傷時，RPE細(xì)胞在炎性因子、生長因子等刺激下，從視網(wǎng)膜脫離處游離到玻璃體腔中，發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂性鲋澈瓦w移能力的成纖維樣細(xì)胞。這些細(xì)胞在玻璃體和視網(wǎng)膜表面聚集、增殖，分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，形成增殖膜。同時，巨噬細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等也參與其中，它們釋放的細(xì)胞因子和趨化因子進一步促進了細(xì)胞的增殖和膜的收縮。研究還發(fā)現(xiàn)，多種生長因子和細(xì)胞因子，如血小板衍生生長因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、IL-6、IL-8等，在PVR患者的玻璃體液中表達水平顯著升高，這些因子通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、遷移和分化，參與了PVR的發(fā)病過程。在治療方面，玻璃體切除術(shù)是目前治療PVR的主要方法，通過切除病變的玻璃體和增殖膜，解除對視網(wǎng)膜的牽拉，使視網(wǎng)膜復(fù)位。然而，手術(shù)成功率仍受到多種因素的限制，如增殖膜的嚴(yán)重程度、手術(shù)時機等，部分患者術(shù)后仍會復(fù)發(fā)。因此，探索新的治療策略，如藥物治療、基因治療等，成為研究熱點。一些藥物，如糖皮質(zhì)激素、抗代謝藥物等，被嘗試用于抑制PVR的發(fā)生發(fā)展，但效果尚不理想。基因治療則通過導(dǎo)入或抑制特定基因的表達，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)行為，為PVR的治療提供了新的思路，但目前仍處于實驗研究階段。近年來，隨著對炎癥和免疫調(diào)節(jié)機制研究的深入，IL-33/sST2軸在眼部疾病中的作用逐漸受到關(guān)注。在國外，有研究報道了IL-33/sST2在葡萄膜炎發(fā)病機制中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL-33能夠激活Th2細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，促進炎癥因子的釋放，加重葡萄膜炎的炎癥反應(yīng)。而sST2作為IL-33的誘餌受體，能夠競爭性地結(jié)合IL-33，阻斷其信號傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抗炎作用。在年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）的研究中，發(fā)現(xiàn)IL-33/sST2軸與AMD的炎癥反應(yīng)和新生血管形成有關(guān)。IL-33通過激活相關(guān)信號通路，促進脈絡(luò)膜新生血管的形成，而sST2則可抑制這一過程。在國內(nèi)，部分研究探討了IL-33/sST2在眼部炎癥性疾病中的表達及意義。有研究檢測了葡萄膜炎患者血清和房水中IL-33和sST2的水平，發(fā)現(xiàn)患者血清和房水中IL-33水平顯著升高，sST2水平降低，且與疾病的活動程度相關(guān)，提示IL-33/sST2軸可能參與了葡萄膜炎的免疫調(diào)節(jié)過程。然而，目前關(guān)于IL-33/sST2在PDR和PVR中的研究相對較少。僅有少數(shù)研究初步探討了IL-33在DR患者血清中的表達情況，但對于PDR和PVR患者玻璃體液及血清中IL-33/sST2的表達及其與疾病的關(guān)系，尚未見系統(tǒng)的研究報道。1.3研究方法與創(chuàng)新點1.3.1研究方法樣本采集：選取在[醫(yī)院名稱]眼科就診并確診為PDR和PVR的患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)為：符合PDR和PVR的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他眼部疾病（如葡萄膜炎、青光眼等）影響研究結(jié)果的患者，患有嚴(yán)重全身疾病（如惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全等）無法耐受手術(shù)的患者，以及近期（3個月內(nèi)）使用過免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等可能影響研究指標(biāo)的藥物的患者。在患者進行玻璃體切除術(shù)時，使用無菌注射器采集玻璃體液樣本約0.5-1ml，采集后立即置于無菌EP管中，標(biāo)記好患者信息，迅速放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｍ瑫r，在手術(shù)前采集患者空腹靜脈血3-5ml，注入普通干燥采血管，室溫靜置30分鐘后，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，分離血清，將血清轉(zhuǎn)移至無菌EP管中，同樣標(biāo)記好信息后放入-80℃冰箱保存。另外，選取年齡、性別匹配的非眼部疾病患者或行眼部其他手術(shù)（如翼狀胬肉切除術(shù)等）且無眼部炎癥及其他病變的患者作為正常對照組，按照相同方法采集其玻璃體液和血清樣本。檢測技術(shù)：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測玻璃體液和血清中IL-33和sST2的表達水平。具體操作步驟嚴(yán)格按照ELISA試劑盒（[試劑盒品牌及型號]）的說明書進行。首先，將所需的試劑從冰箱取出，平衡至室溫。在酶標(biāo)板上分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本（玻璃體液和血清樣本按照一定比例稀釋）和空白對照，每孔100μl，然后將酶標(biāo)板輕輕振蕩混勻，37℃孵育1-2小時。孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌酶標(biāo)板5次，每次300μl，拍干。接著，每孔加入100μl的生物素化抗體工作液，37℃孵育30-60分鐘。再次洗滌酶標(biāo)板后，每孔加入100μl的親和鏈酶素-HRP工作液，37℃孵育30-60分鐘。洗滌完畢，每孔加入90μl的底物溶液，37℃避光孵育15-20分鐘，使底物顯色。最后，每孔加入50μl的終止液終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀（[酶標(biāo)儀品牌及型號]）上于450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對應(yīng)的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣本中IL-33和sST2的濃度。數(shù)據(jù)分析方法：采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（n）和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析探討IL-33和sST2表達水平與疾病嚴(yán)重程度及其他臨床特征之間的相關(guān)性。通過受試者工作特征（ROC）曲線分析評估IL-33/sST2作為PDR和PVR診斷標(biāo)志物的效能，計算曲線下面積（AUC）、靈敏度、特異度等指標(biāo)，并確定最佳診斷閾值。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。1.3.2創(chuàng)新點多維度分析：本研究首次從玻璃體液和血清兩個維度分析IL-33/sST2在PDR及PVR患者中的表達情況。以往研究多集中于單一體液樣本中細(xì)胞因子的檢測，而玻璃體液直接與眼部病變組織接觸，能更直接地反映眼部局部的病理生理變化；血清則可反映全身的炎癥和免疫狀態(tài)。同時檢測這兩種體液中的IL-33/sST2，有助于全面了解該細(xì)胞因子軸在PDR和PVR發(fā)病過程中的作用機制，為疾病的診斷和治療提供更全面的依據(jù)。提供新思路：通過分析IL-33/sST2表達與疾病嚴(yán)重程度及臨床特征的相關(guān)性，有望為PDR和PVR的早期診斷、病情評估及治療提供新的生物標(biāo)志物和潛在治療靶點。目前，臨床上對于PDR和PVR的診斷主要依賴于眼底檢查、影像學(xué)檢查等，缺乏有效的生物學(xué)指標(biāo)。IL-33/sST2的研究為疾病的早期診斷和病情監(jiān)測提供了新的方向，可能有助于提高疾病的早期診斷率，指導(dǎo)臨床治療，改善患者的預(yù)后。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1PDR和PVR的概述2.1.1PDR的定義、發(fā)病機制及臨床特征增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）是糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展到晚期的嚴(yán)重階段。長期高血糖狀態(tài)是PDR發(fā)病的根本原因，它會引發(fā)一系列復(fù)雜的病理生理變化。在糖代謝紊亂的情況下，多元醇通路被激活，大量葡萄糖經(jīng)醛糖還原酶催化轉(zhuǎn)化為山梨醇，山梨醇在細(xì)胞內(nèi)大量積聚，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)滲透壓升高，細(xì)胞腫脹、變性，損害視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞。同時，蛋白激酶C（PKC）通路異常激活，PKC可使多種蛋白質(zhì)底物磷酸化，影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，導(dǎo)致血管收縮、通透性增加，促進血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等細(xì)胞因子的表達。此外，氧化應(yīng)激在PDR發(fā)病中也起著關(guān)鍵作用，高血糖狀態(tài)下，線粒體電子傳遞鏈產(chǎn)生過多的活性氧（ROS），超過了細(xì)胞的抗氧化防御能力，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，損傷視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞，促進炎癥反應(yīng)和新生血管形成。新生血管形成是PDR的重要病理特征之一。VEGF是誘導(dǎo)新生血管形成的關(guān)鍵細(xì)胞因子，高血糖、缺氧等因素刺激視網(wǎng)膜細(xì)胞分泌VEGF，VEGF與其受體結(jié)合，激活下游信號通路，促進血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，促使新生血管形成。這些新生血管結(jié)構(gòu)異常，管壁薄弱，容易破裂出血，導(dǎo)致玻璃體積血。同時，PDR還伴有纖維增殖，視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等在細(xì)胞因子的作用下增殖，并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，形成纖維增殖膜。纖維增殖膜的收縮會對視網(wǎng)膜產(chǎn)生牽拉，導(dǎo)致牽拉性視網(wǎng)膜脫離，嚴(yán)重?fù)p害視功能。PDR患者的臨床特征主要表現(xiàn)為視力下降，這是最常見的癥狀，視力下降的程度與病變的嚴(yán)重程度相關(guān)，輕者可能僅表現(xiàn)為輕度視力減退，重者可導(dǎo)致失明。眼底檢查可見視網(wǎng)膜新生血管形成，這些新生血管形態(tài)各異，呈團狀、網(wǎng)狀或扇形分布，容易破裂出血，形成玻璃體積血，表現(xiàn)為眼底紅色或暗紅色的出血灶，嚴(yán)重時眼底無法窺清。還可出現(xiàn)纖維增殖膜，在視網(wǎng)膜表面可見灰白色的膜狀結(jié)構(gòu)，隨著病情進展，纖維增殖膜收縮，可導(dǎo)致視網(wǎng)膜牽拉變形，出現(xiàn)視網(wǎng)膜脫離，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜呈灰白色隆起，失去正常的光澤和形態(tài)。此外，PDR患者還可能伴有糖尿病腎病、神經(jīng)病變等其他糖尿病并發(fā)癥的表現(xiàn)，如蛋白尿、腎功能減退、肢體麻木、疼痛等。2.1.2PVR的定義、發(fā)病機制及臨床特征增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）通常繼發(fā)于孔源性視網(wǎng)膜脫離、眼外傷、多次眼內(nèi)手術(shù)等情況，是導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離手術(shù)失敗和視力恢復(fù)不佳的主要原因。PVR的發(fā)病機制主要涉及細(xì)胞增生和膜的收縮。當(dāng)視網(wǎng)膜出現(xiàn)裂孔后，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（RPE）在炎性因子、生長因子等刺激下，從視網(wǎng)膜脫離處游離到玻璃體腔中。這些游離的RPE細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂性鲋澈瓦w移能力的成纖維樣細(xì)胞，它們在玻璃體和視網(wǎng)膜表面附著、聚集。同時，巨噬細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等也參與到PVR的發(fā)病過程中，巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和趨化因子吸引更多的細(xì)胞參與增殖反應(yīng)，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也會增殖并與RPE細(xì)胞相互作用。在多種細(xì)胞因子，如血小板衍生生長因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等的作用下，RPE細(xì)胞等開始增生，并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，這些物質(zhì)與視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等共同在玻璃體、視網(wǎng)膜及黃斑表面形成細(xì)胞性膜。隨著病情進展，這些增殖膜逐漸收縮，對視網(wǎng)膜產(chǎn)生垂直或切線牽引。當(dāng)牽引力量超過視網(wǎng)膜的承受能力時，就會導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離，進一步損害視功能。PVR患者的臨床特征主要為視力障礙，患者可出現(xiàn)不同程度的視力下降，嚴(yán)重者視力可降至無光感。視網(wǎng)膜脫離是PVR的重要表現(xiàn)，根據(jù)視網(wǎng)膜脫離的范圍和程度不同，患者可出現(xiàn)視野缺損，表現(xiàn)為眼前黑影遮擋，黑影的范圍和形狀與視網(wǎng)膜脫離的部位和范圍相關(guān)。在眼底檢查時，可發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜表面有灰白色的增殖膜，增殖膜的形態(tài)和范圍各異，輕者可能僅在視網(wǎng)膜周邊部出現(xiàn)少量的增殖條索，重者可在視網(wǎng)膜表面形成廣泛的增殖膜，導(dǎo)致視網(wǎng)膜嚴(yán)重變形、脫離。部分患者還可能伴有眼壓降低，這是由于視網(wǎng)膜脫離后，眼內(nèi)房水的循環(huán)受到影響，導(dǎo)致眼壓下降。此外，PVR患者還可能出現(xiàn)眼部疼痛、眼紅等癥狀，這與眼部的炎癥反應(yīng)和組織損傷有關(guān)。2.2IL-33和sST2的生物學(xué)特性2.2.1IL-33的結(jié)構(gòu)、功能及信號通路IL-33是一種相對分子質(zhì)量約為30kD的蛋白質(zhì)，由270個氨基酸組成。從結(jié)構(gòu)上看，它包含一個N末端核定位信號、螺旋-轉(zhuǎn)角、螺旋的基元以及與IL-1家族細(xì)胞因子同源的C端結(jié)構(gòu)。這種獨特的結(jié)構(gòu)賦予了IL-33多種生物學(xué)特性。在正常生理狀態(tài)下，IL-33主要定位于細(xì)胞核中，與染色質(zhì)結(jié)合，參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。然而，當(dāng)細(xì)胞受到損傷、炎癥刺激或發(fā)生壞死時，IL-33會被釋放到細(xì)胞外，從而發(fā)揮細(xì)胞因子的作用，作為一種警報素，向免疫系統(tǒng)發(fā)出危險信號。IL-33在免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。在免疫調(diào)節(jié)方面，IL-33對多種免疫細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用。它可以促進Th2型免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞向Th2型細(xì)胞分化，并刺激這些細(xì)胞分泌IL-4、IL-5和IL-13等細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子在過敏性疾病、寄生蟲感染等免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如在過敏性哮喘中，IL-33誘導(dǎo)Th2細(xì)胞分泌的IL-4等細(xì)胞因子，可促進嗜酸性粒細(xì)胞的活化和募集，導(dǎo)致氣道炎癥和高反應(yīng)性。IL-33還能激活固有淋巴細(xì)胞2型（ILC2），誘導(dǎo)ILC2分泌IL-5和IL-13等細(xì)胞因子，參與組織修復(fù)和對寄生蟲的免疫反應(yīng)。在炎癥反應(yīng)中，IL-33是一種重要的促炎細(xì)胞因子。它可以誘導(dǎo)多種炎癥因子的產(chǎn)生，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些炎癥因子進一步招募和激活免疫細(xì)胞，加劇炎癥反應(yīng)。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，IL-33的表達升高，可促進炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥和損傷加重。IL-33發(fā)揮生物學(xué)作用主要通過與受體ST2結(jié)合，激活下游信號通路來實現(xiàn)。ST2主要有膜型ST2（mST2）和可溶性ST2（sST2）兩種形式，其中mST2介導(dǎo)IL-33的信號傳導(dǎo)。當(dāng)IL-33與mST2結(jié)合后，會招募IL-1受體輔助蛋白（IL-1RAcP），形成IL-33/mST2/IL-1RAcP三聚體復(fù)合物。這一復(fù)合物的形成會激活下游的髓樣分化因子88（MyD88）接頭蛋白，繼而激活至少兩條獨立的通路：一條是核因子-κB（NF-κB）通路，MyD88通過與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TRAF6）相互作用，激活I(lǐng)κB激酶（IKK），使IκB磷酸化并降解，從而釋放NF-κB，使其進入細(xì)胞核，啟動相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄；另一條是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，包括p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）等，通過一系列的磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和炎癥因子的表達。這些信號通路的激活，最終導(dǎo)致多種免疫細(xì)胞的活化、增殖和炎癥因子的釋放，引發(fā)免疫和炎癥反應(yīng)。2.2.2sST2的結(jié)構(gòu)、功能及與IL-33的關(guān)系sST2是ST2的可溶性形式，主要通過剪切ST2基因的mRNA轉(zhuǎn)錄本而產(chǎn)生。它由ST2基因的外顯子1-5編碼，相對分子質(zhì)量約為35-45kD。sST2的結(jié)構(gòu)包含一個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域、一個跨膜結(jié)構(gòu)域和一個短的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，但由于缺乏跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的完整序列，sST2不能像mST2那樣錨定在細(xì)胞膜上，而是以可溶性的形式存在于血液、組織液等體液中。sST2在體內(nèi)主要發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，其主要功能是競爭性地結(jié)合IL-33，從而阻斷IL-33與mST2的相互作用，抑制IL-33信號通路的激活。當(dāng)sST2與IL-33結(jié)合后，形成的IL-33/sST2復(fù)合物無法與mST2結(jié)合，使得下游的信號通路無法被激活，進而抑制了免疫細(xì)胞的活化和炎癥因子的產(chǎn)生，發(fā)揮抗炎作用。在心血管疾病中，如急性心肌梗死、心力衰竭等，血清sST2水平會升高，它通過與IL-33結(jié)合，抑制IL-33介導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大、纖維化和炎癥反應(yīng)，對心臟起到一定的保護作用。在炎癥性腸病中，sST2也可通過抑制IL-33信號，減輕腸道的炎癥損傷。IL-33與sST2之間存在著密切的相互作用關(guān)系，它們共同構(gòu)成了IL-33/sST2軸。在正常生理狀態(tài)下，IL-33和sST2處于相對平衡的狀態(tài)，維持著機體的免疫穩(wěn)態(tài)和正常生理功能。當(dāng)機體受到損傷、感染或發(fā)生炎癥等病理情況時，IL-33的表達會升高，激活免疫和炎癥反應(yīng)，以抵御病原體的入侵和促進組織修復(fù)。此時，sST2的表達也會相應(yīng)增加，作為一種負(fù)反饋調(diào)節(jié)機制，sST2與IL-33結(jié)合，限制IL-33信號的過度激活，防止炎癥反應(yīng)失控，保護機體免受過度炎癥損傷。然而，在某些疾病狀態(tài)下，這種平衡可能會被打破。例如，在一些自身免疫性疾病中，IL-33的表達持續(xù)升高，而sST2的水平相對不足，導(dǎo)致IL-33信號過度激活，引發(fā)持續(xù)的炎癥反應(yīng)和組織損傷。因此，IL-33/sST2軸的失衡與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，調(diào)節(jié)IL-33/sST2軸的平衡可能成為治療相關(guān)疾病的新靶點。2.3IL-33/sST2與眼部疾病的關(guān)聯(lián)2.3.1IL-33/sST2在眼部生理狀態(tài)下的表達在眼部正常組織中，IL-33和sST2均有一定程度的表達，它們在維持眼部免疫平衡和正常生理功能方面發(fā)揮著重要作用。研究表明，IL-33在眼表的上皮細(xì)胞，如角膜上皮細(xì)胞、結(jié)膜上皮細(xì)胞中均有表達。在角膜上皮細(xì)胞中，IL-33的表達有助于維持角膜上皮的完整性和免疫防御功能。當(dāng)角膜上皮受到輕微損傷時，IL-33被釋放，激活局部的免疫細(xì)胞，如朗格漢斯細(xì)胞等，啟動免疫應(yīng)答，促進損傷修復(fù)。同時，IL-33還能調(diào)節(jié)角膜基質(zhì)細(xì)胞的活性，抑制炎癥反應(yīng)，防止過度炎癥對角膜組織造成損傷。在結(jié)膜上皮細(xì)胞中，IL-33的表達可以調(diào)節(jié)結(jié)膜的免疫微環(huán)境，抵御病原體的入侵，維持結(jié)膜的正常生理功能。sST2在眼部正常組織中的表達也較為廣泛，在眼內(nèi)的視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜等組織中均有檢測到。在視網(wǎng)膜中，sST2主要表達于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞等。sST2通過與IL-33結(jié)合，抑制IL-33信號通路的過度激活，從而維持視網(wǎng)膜的免疫穩(wěn)態(tài)。在正常情況下，視網(wǎng)膜處于相對免疫赦免的狀態(tài)，sST2的存在可以防止IL-33介導(dǎo)的過度免疫反應(yīng)破壞這種免疫赦免，保護視網(wǎng)膜的正常功能。在脈絡(luò)膜中，sST2的表達有助于調(diào)節(jié)脈絡(luò)膜血管的通透性和炎癥反應(yīng)，維持脈絡(luò)膜的正常血液循環(huán)和營養(yǎng)供應(yīng)，為視網(wǎng)膜提供良好的代謝環(huán)境。此外，IL-33/sST2軸還參與了眼部的神經(jīng)保護作用。研究發(fā)現(xiàn)，在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞受到損傷時，IL-33可以通過與sST2的相互作用，激活相關(guān)信號通路，促進神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活和軸突的再生，減輕神經(jīng)損傷。IL-33還能調(diào)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活性，抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的過度活化和炎癥反應(yīng)，減少對神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷，從而對視網(wǎng)膜神經(jīng)起到保護作用。綜上所述，IL-33/sST2在眼部正常組織中的表達和相互作用，對于維持眼部的免疫平衡、組織穩(wěn)態(tài)和神經(jīng)保護等方面具有重要意義。2.3.2在其他眼部疾病中的研究進展在葡萄膜炎的研究中，IL-33/sST2軸被發(fā)現(xiàn)與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。葡萄膜炎是一種常見的眼部炎癥性疾病，可導(dǎo)致視力下降、眼痛等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。多項研究表明，葡萄膜炎患者血清和房水中IL-33水平顯著升高，且與疾病的活動程度相關(guān)。在實驗性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）動物模型中，給予IL-33刺激后，炎癥反應(yīng)明顯加重，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜炎癥細(xì)胞浸潤增多、視網(wǎng)膜血管滲漏增加等。這是因為IL-33能夠激活Th2細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，促進炎癥因子如IL-4、IL-5、IL-13等的釋放，這些炎癥因子進一步招募和激活其他免疫細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇。而sST2作為IL-33的誘餌受體，能夠競爭性地結(jié)合IL-33，阻斷其信號傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抗炎作用。在EAU模型中，給予外源性sST2治療后，炎癥反應(yīng)得到抑制，視網(wǎng)膜病變減輕。臨床研究也發(fā)現(xiàn)，葡萄膜炎患者血清和房水中sST2水平降低，使得IL-33信號通路過度激活，可能是導(dǎo)致葡萄膜炎發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。在視網(wǎng)膜血管阻塞疾病中，IL-33/sST2軸也發(fā)揮著重要作用。視網(wǎng)膜血管阻塞包括視網(wǎng)膜動脈阻塞和視網(wǎng)膜靜脈阻塞，是常見的視網(wǎng)膜血管性疾病，可導(dǎo)致視網(wǎng)膜缺血、缺氧，進而引起視力下降、視野缺損等嚴(yán)重后果。研究發(fā)現(xiàn)，視網(wǎng)膜血管阻塞患者玻璃體液和血清中IL-33水平明顯升高。在視網(wǎng)膜靜脈阻塞模型中，IL-33的表達上調(diào)，通過激活相關(guān)信號通路，促進炎癥細(xì)胞的浸潤和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，導(dǎo)致視網(wǎng)膜新生血管形成和血管滲漏。VEGF的過度表達會使視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，形成新生血管，這些新生血管結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易破裂出血，進一步加重視網(wǎng)膜病變。而sST2可以抑制IL-33的作用，減少炎癥細(xì)胞的浸潤和VEGF的表達，從而減輕視網(wǎng)膜血管阻塞后的炎癥反應(yīng)和新生血管形成。此外，IL-33/sST2軸還與視網(wǎng)膜血管阻塞后的神經(jīng)損傷和修復(fù)有關(guān)。IL-33的過度表達可能會加重視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷，而sST2的保護作用有助于維持神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活和功能，促進視網(wǎng)膜神經(jīng)的修復(fù)。在年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）方面，IL-33/sST2軸與疾病的炎癥反應(yīng)和新生血管形成密切相關(guān)。AMD是一種常見的致盲性眼病，主要影響老年人，其發(fā)病機制涉及炎癥、氧化應(yīng)激、血管生成等多個方面。研究表明，在AMD患者的玻璃體液和視網(wǎng)膜組織中，IL-33的表達升高，且與脈絡(luò)膜新生血管（CNV）的形成密切相關(guān)。IL-33通過激活相關(guān)信號通路，促進巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤和活化，釋放炎癥因子，如TNF-α、IL-6等，這些炎癥因子進一步刺激視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進CNV的形成。而sST2可抑制IL-33的信號傳導(dǎo)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥因子的釋放，從而抑制CNV的形成。在動物實驗中，通過給予sST2治療或阻斷IL-33信號通路，能夠有效減少CNV的面積和體積，改善視網(wǎng)膜功能。臨床研究也發(fā)現(xiàn)，AMD患者血清和房水中sST2水平降低，與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，提示IL-33/sST2軸失衡在AMD的發(fā)病機制中可能起到重要作用。此外，在其他眼部疾病如青光眼、角膜炎癥等中，IL-33/sST2軸也被發(fā)現(xiàn)參與其中。在青光眼中，IL-33的表達與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷和凋亡有關(guān)，sST2可能通過調(diào)節(jié)IL-33信號，對青光眼的神經(jīng)保護起到一定作用。在角膜炎癥中，IL-33/sST2軸參與了炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)和角膜組織的修復(fù)過程。綜上所述，IL-33/sST2軸在多種眼部疾病中發(fā)揮著重要作用，其表達變化與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，深入研究IL-33/sST2軸在眼部疾病中的作用機制，有望為這些疾病的治療提供新的靶點和策略。三、研究設(shè)計與方法3.1研究對象3.1.1PDR患者的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)《糖尿病視網(wǎng)膜病變臨床診療指南》，通過散瞳后眼底鏡檢查、眼底熒光素血管造影（FFA）等檢查，確診為增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）。PDR的診斷標(biāo)準(zhǔn)為視網(wǎng)膜出現(xiàn)新生血管和（或）纖維增殖，伴有或不伴有牽拉性視網(wǎng)膜脫離。患者視力顯著下降，視力低于0.5，或出現(xiàn)視物變形、視野缺損等明顯的視功能損害癥狀，嚴(yán)重影響患者的日常生活和工作。所有手術(shù)與玻璃體腔注射均由同一組經(jīng)驗豐富的醫(yī)護人員完成，該組醫(yī)護人員在眼科手術(shù)和玻璃體腔注射操作方面具有豐富的經(jīng)驗，能夠確保手術(shù)和注射的準(zhǔn)確性和安全性。患者對本研究知情并自愿簽署加入研究同意書，充分了解研究的目的、方法、可能的風(fēng)險和受益，在自主意愿的基礎(chǔ)上簽署同意書，保障患者的知情權(quán)和參與權(quán)。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有肝腎功能異常者，肝腎功能異常可能影響體內(nèi)細(xì)胞因子的代謝和清除，導(dǎo)致IL-33和sST2水平出現(xiàn)異常波動，干擾研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。有白內(nèi)障、眼表炎癥、高眼壓、角膜病或是青光眼等眼部疾病者，這些眼部疾病本身可能引起眼部的炎癥反應(yīng)和病理變化，影響玻璃體液和血清中IL-33和sST2的表達，從而對本研究結(jié)果產(chǎn)生干擾。有眼部手術(shù)史者，眼部手術(shù)可能改變眼部的解剖結(jié)構(gòu)和生理狀態(tài)，影響細(xì)胞因子的表達和分布，使研究結(jié)果難以準(zhǔn)確反映PDR本身的病理生理過程。有惡性腫瘤者，惡性腫瘤患者體內(nèi)存在復(fù)雜的免疫和代謝紊亂，可能導(dǎo)致IL-33和sST2水平發(fā)生變化，影響研究結(jié)果的可靠性。有腦梗死、心肌梗死或是控制難度較大的高血壓者，這些嚴(yán)重的心血管疾病和高血壓可能導(dǎo)致全身的血管病變和微循環(huán)障礙，影響眼部的血液循環(huán)和代謝，進而影響IL-33和sST2的表達。3.1.2PVR患者的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)眼科檢查，確診為視網(wǎng)膜脫離伴增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）。診斷依據(jù)包括眼底檢查發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜表面有灰白色的增殖膜，增殖膜的存在導(dǎo)致視網(wǎng)膜出現(xiàn)牽拉變形、脫離等典型的PVR表現(xiàn)；眼部B超檢查顯示玻璃體腔內(nèi)有增殖條索或膜狀物，以及視網(wǎng)膜脫離的聲像圖特征；光學(xué)相干斷層掃描（OCT）檢查可清晰顯示視網(wǎng)膜的形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及增殖膜與視網(wǎng)膜的關(guān)系，進一步明確PVR的診斷。患者具有明確的手術(shù)指征，如視網(wǎng)膜脫離范圍較大，累及黃斑區(qū)，或視網(wǎng)膜脫離時間較長，保守治療無效等，需要進行玻璃體切除術(shù)等手術(shù)治療以挽救視力。患者年齡在18-70歲之間，這個年齡段的患者身體狀況相對穩(wěn)定，能夠較好地耐受手術(shù)和相關(guān)檢查，同時也便于研究結(jié)果的分析和比較，減少因年齡因素導(dǎo)致的個體差異對研究結(jié)果的影響。排除標(biāo)準(zhǔn)：有眼部外傷史者，眼部外傷可導(dǎo)致眼部組織的直接損傷和炎癥反應(yīng)，引起細(xì)胞因子的異常表達，干擾對PVR本身發(fā)病機制中IL-33和sST2表達的研究。患有全身免疫疾病者，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，全身免疫疾病會導(dǎo)致機體免疫系統(tǒng)紊亂，影響IL-33和sST2在體內(nèi)的表達和功能，使研究結(jié)果受到干擾。近期（3個月內(nèi)）使用過免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等可能影響研究指標(biāo)的藥物者，這些藥物具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，會對IL-33和sST2的表達產(chǎn)生影響，從而影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此需要排除此類患者。3.1.3對照組的選擇選取年齡、性別匹配的非眼部疾病患者或行眼部其他手術(shù)（如翼狀胬肉切除術(shù)等）且無眼部炎癥及其他病變的患者作為正常對照組。這些對照組患者在年齡和性別上與PDR、PVR患者組相匹配，能夠有效減少因年齡和性別差異導(dǎo)致的IL-33和sST2表達差異，使研究結(jié)果更具可比性。非眼部疾病患者和行眼部其他手術(shù)且無眼部炎癥及其他病變的患者，其眼部生理狀態(tài)基本正常，體內(nèi)IL-33和sST2的表達處于正常水平，可作為對比的基準(zhǔn)，用于分析PDR和PVR患者玻璃體液及血清中IL-33和sST2表達的異常變化，從而明確其在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。3.2樣本采集3.2.1玻璃體液樣本的采集方法與注意事項在患者進行玻璃體切除術(shù)時，由經(jīng)驗豐富的眼科醫(yī)生負(fù)責(zé)玻璃體液樣本的采集。具體操作如下：在手術(shù)開始后，使用無菌的1ml注射器，連接27-30G的針頭。在手術(shù)顯微鏡的直視下，從角膜緣后3.5-4mm處（對于有晶狀體眼）或角膜緣后3mm處（對于無晶狀體眼或人工晶狀體眼）進針，緩慢刺入玻璃體腔中央。注意進針角度要合適，避免損傷晶狀體、視網(wǎng)膜等眼部組織。當(dāng)針頭進入玻璃體腔后，輕輕回抽注射器活塞，緩慢抽取玻璃體液約0.5-1ml。在抽取過程中，要保持注射器的穩(wěn)定，避免晃動，以免影響樣本質(zhì)量。采集過程中，嚴(yán)格遵循無菌操作原則至關(guān)重要。手術(shù)區(qū)域需進行徹底的消毒，使用碘伏等消毒劑對眼部周圍皮膚進行消毒，消毒范圍要足夠大，以減少感染的風(fēng)險。在進針前，需再次確認(rèn)手術(shù)器械和注射器的無菌狀態(tài)，確保無任何污染。采集后的玻璃體液應(yīng)立即轉(zhuǎn)移至無菌的EP管中，避免與外界空氣接觸時間過長，防止樣本被污染。同時，在EP管上準(zhǔn)確標(biāo)記患者的姓名、病歷號、采集時間等信息，以便后續(xù)的樣本管理和分析。采集后的玻璃體液樣本應(yīng)迅速放入-80℃冰箱保存，避免反復(fù)凍融，以保持樣本中細(xì)胞因子的活性和穩(wěn)定性。3.2.2血清樣本的采集方法與處理血清樣本的采集在患者手術(shù)前進行，由專業(yè)的護士按照規(guī)范的靜脈采血方法操作。首先，選取患者肘部的靜脈，一般選擇肘正中靜脈或貴要靜脈。用碘伏消毒穿刺部位皮膚，消毒范圍直徑約5cm，待碘伏干燥后，使用一次性無菌采血針進行靜脈穿刺。穿刺成功后，將血液緩慢注入普通干燥采血管中，采集量為3-5ml。采血過程中，要注意避免溶血，采血針應(yīng)盡量一次性穿刺成功，避免反復(fù)穿刺，同時要避免過度擠壓采血部位。采血完成后，將采血管室溫靜置30分鐘，使血液自然凝固。然后，將采血管放入離心機中，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。離心后，血清會分層在采血管的上層，使用無菌移液器小心吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至無菌EP管中。在轉(zhuǎn)移過程中，要避免吸取到下層的血細(xì)胞和纖維蛋白等物質(zhì)，以免影響檢測結(jié)果。同樣，在EP管上清晰標(biāo)記患者的相關(guān)信息。血清樣本采集后也需放入-80℃冰箱保存，在保存過程中要避免樣本受到震動和溫度波動，以確保血清中IL-33和sST2的含量不受影響，保證后續(xù)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.3檢測指標(biāo)與方法3.3.1IL-33和sST2的檢測技術(shù)原理本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測玻璃體液和血清中IL-33和sST2的表達水平。ELISA是一種基于抗原抗體特異性結(jié)合的免疫檢測技術(shù)，其基本原理是將抗原或抗體固相化在聚苯乙烯等固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。以檢測IL-33為例，首先將抗IL-33抗體包被在酶標(biāo)板的孔中，形成固相抗體。加入待測樣本（玻璃體液或血清）后，樣本中的IL-33會與固相抗體特異性結(jié)合。然后加入酶標(biāo)記的抗IL-33抗體，形成固相抗體-IL-33-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。此時，固相上的酶量與樣本中IL-33的量呈一定比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，通過酶標(biāo)儀測定吸光度（OD值），OD值與樣本中IL-33的濃度成正比，從而可以定量檢測IL-33的含量。同理，對于sST2的檢測，也是利用類似的原理，將抗sST2抗體包被在酶標(biāo)板上，通過與樣本中的sST2結(jié)合，再加入酶標(biāo)抗體，最后通過底物顯色和OD值測定來定量檢測sST2的濃度。ELISA技術(shù)具有諸多優(yōu)勢。首先，它具有較高的靈敏度，能夠檢測到低濃度的IL-33和sST2，滿足對生物樣本中微量細(xì)胞因子檢測的需求。其次，ELISA的特異性強，抗原抗體的特異性結(jié)合保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，能夠準(zhǔn)確地區(qū)分IL-33和sST2與其他類似物質(zhì)。此外，該技術(shù)操作相對簡便，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備和專業(yè)的技術(shù)人員，易于在臨床實驗室中推廣應(yīng)用。同時，ELISA可以同時檢測多個樣本，適合大規(guī)模的研究和臨床篩查工作。除了ELISA技術(shù)，免疫熒光技術(shù)也是一種常用的細(xì)胞因子檢測方法。免疫熒光技術(shù)是將熒光素標(biāo)記的抗體與樣本中的抗原進行特異性結(jié)合，然后在熒光顯微鏡下觀察熒光信號，從而確定抗原的存在和分布。在檢測IL-33和sST2時，可將熒光素標(biāo)記的抗IL-33或抗sST2抗體與玻璃體液或血清樣本中的相應(yīng)抗原結(jié)合，通過熒光顯微鏡觀察熒光強度和分布情況，可對IL-33和sST2進行定性或半定量分析。免疫熒光技術(shù)的優(yōu)勢在于可以直觀地觀察到細(xì)胞因子在組織或細(xì)胞中的分布情況，對于研究細(xì)胞因子的定位和功能具有重要意義。然而，免疫熒光技術(shù)也存在一些局限性，如需要熒光顯微鏡等特殊設(shè)備，操作過程相對復(fù)雜，對樣本的處理要求較高，且檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性受熒光淬滅等因素影響較大。3.3.2具體實驗操作步驟樣本預(yù)處理：從-80℃冰箱中取出保存的玻璃體液和血清樣本，置于室溫下緩慢解凍。解凍后的樣本輕輕搖勻，避免劇烈振蕩，防止細(xì)胞因子的活性受到影響。對于玻璃體液樣本，若存在雜質(zhì)或絮狀物，可在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心10分鐘，取上清液進行后續(xù)檢測。血清樣本若出現(xiàn)溶血或渾濁等情況，需重新采集或進行適當(dāng)處理，如采用過濾等方法去除雜質(zhì)。加樣：將ELISA試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本（玻璃體液和血清樣本按照試劑盒說明書推薦的比例進行稀釋）和空白對照分別加入到酶標(biāo)板的相應(yīng)孔中。標(biāo)準(zhǔn)品通常設(shè)置多個不同濃度梯度，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。加樣時，使用移液器準(zhǔn)確吸取100μl的液體加入到每孔中，注意避免產(chǎn)生氣泡，加樣后將酶標(biāo)板輕輕振蕩混勻，使樣本與孔內(nèi)的試劑充分接觸。孵育：將加樣后的酶標(biāo)板放入37℃孵育箱中孵育，孵育時間根據(jù)試劑盒說明書而定，一般為1-2小時。孵育過程中，抗原抗體在適宜的溫度下進行特異性結(jié)合反應(yīng)，使樣本中的IL-33和sST2與固相抗體和酶標(biāo)抗體充分結(jié)合。洗滌：孵育結(jié)束后，將酶標(biāo)板從孵育箱中取出，棄去孔內(nèi)液體。用洗滌液（通常為含有吐溫-20的磷酸鹽緩沖液，PBS-T）洗滌酶標(biāo)板，洗滌次數(shù)一般為5次，每次加入300μl的洗滌液，浸泡30-60秒后，將洗滌液徹底棄去，然后在吸水紙上拍干，以去除未結(jié)合的抗原、抗體和其他雜質(zhì)，減少非特異性反應(yīng)，提高檢測的準(zhǔn)確性。檢測：洗滌完成后，每孔加入100μl的底物溶液（如四甲基聯(lián)苯胺，TMB），37℃避光孵育15-20分鐘，使底物在酶的催化下發(fā)生顯色反應(yīng)。隨著反應(yīng)的進行，底物逐漸被催化生成藍色產(chǎn)物。當(dāng)顯色達到適當(dāng)程度后，每孔加入50μl的終止液（如2M硫酸），終止反應(yīng)，此時藍色產(chǎn)物會轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在酶標(biāo)儀上選擇450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值），記錄數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)分析：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對應(yīng)的OD值，使用統(tǒng)計軟件（如GraphPadPrism等）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線通常為一條直線，通過線性回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程。然后，將待測樣本的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算出樣本中IL-33和sST2的濃度。在數(shù)據(jù)分析過程中，要對數(shù)據(jù)進行質(zhì)量控制，剔除異常值，確保數(shù)據(jù)的可靠性。3.4數(shù)據(jù)分析方法3.4.1統(tǒng)計學(xué)軟件的選擇本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，同時輔助使用GraphPadPrism軟件進行數(shù)據(jù)可視化和進一步的統(tǒng)計分析。SPSS軟件具有功能全面、操作簡便的特點，其擁有豐富的統(tǒng)計分析方法，涵蓋了描述性統(tǒng)計、假設(shè)檢驗、回歸分析、方差分析等多種常用分析方法，能夠滿足本研究對不同類型數(shù)據(jù)的分析需求。例如，在進行多組間比較時，其單因素方差分析功能可快速準(zhǔn)確地得出結(jié)果；在相關(guān)性分析方面，可便捷地選擇Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析方法。此外，SPSS軟件采用菜單式操作，對于非統(tǒng)計專業(yè)背景的研究人員來說，容易上手，經(jīng)過簡單的培訓(xùn)即可熟練使用。同時，其輸出的統(tǒng)計結(jié)果清晰、直觀，表格和圖表格式規(guī)范，便于研究人員解讀和報告結(jié)果，在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，得到了學(xué)術(shù)界的高度認(rèn)可。GraphPadPrism軟件則在數(shù)據(jù)可視化方面表現(xiàn)出色，它能夠生成高質(zhì)量的圖表，如柱狀圖、折線圖、散點圖等，使數(shù)據(jù)結(jié)果更加直觀、形象。通過該軟件，可以將IL-33和sST2在不同組間的表達水平以直觀的圖表形式展示出來，便于比較和分析。例如，在展示PDR患者、PVR患者和對照組玻璃體液中IL-33表達水平的差異時，使用柱狀圖可以清晰地呈現(xiàn)出各組均值的差異，增強了數(shù)據(jù)的可視化效果，有助于研究結(jié)果的展示和交流。此外，GraphPadPrism軟件也具備一定的統(tǒng)計分析功能，與SPSS軟件相互補充，能夠為研究提供更全面的數(shù)據(jù)分析支持。3.4.2數(shù)據(jù)分析的具體方法描述性統(tǒng)計：對于計量資料，如玻璃體液和血清中IL-33和sST2的濃度，首先進行描述性統(tǒng)計分析，計算其均數(shù)（x）、標(biāo)準(zhǔn)差（s），以了解數(shù)據(jù)的集中趨勢和離散程度。均數(shù)能夠反映數(shù)據(jù)的平均水平，標(biāo)準(zhǔn)差則用于衡量數(shù)據(jù)的變異程度，通過這兩個指標(biāo)，可以初步了解IL-33和sST2在不同樣本中的表達情況。差異性檢驗：多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），用于比較PDR患者組、PVR患者組和對照組玻璃體液及血清中IL-33和sST2表達水平的差異。單因素方差分析可以判斷多個總體均數(shù)是否相等，若分析結(jié)果顯示P<0.05，則表明至少有兩組之間存在顯著差異，此時需要進一步進行兩兩比較，常用的方法有LSD法、Bonferroni法等，以明確具體哪些組間存在差異。兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，例如在比較PDR患者和對照組玻璃體液中IL-33表達水平時，通過獨立樣本t檢驗，判斷兩組均值是否存在統(tǒng)計學(xué)差異，若P<0.05，則認(rèn)為兩組間IL-33表達水平有顯著差異。相關(guān)性分析：采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析探討IL-33和sST2表達水平與疾病嚴(yán)重程度（如PDR的分期、PVR的分級等）及其他臨床特征（如糖尿病病程、血糖控制情況、視網(wǎng)膜脫離時間等）之間的相關(guān)性。當(dāng)數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布且變量間為線性關(guān)系時，采用Pearson相關(guān)分析，計算相關(guān)系數(shù)r，r的取值范圍為-1到1，r>0表示正相關(guān)，r<0表示負(fù)相關(guān)，r的絕對值越接近1，表明相關(guān)性越強；當(dāng)數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或變量間為非線性關(guān)系時，采用Spearman相關(guān)分析，計算Spearman相關(guān)系數(shù)ρ，同樣根據(jù)其數(shù)值判斷相關(guān)性的方向和強度。通過相關(guān)性分析，可以了解IL-33和sST2表達水平與疾病相關(guān)因素之間的關(guān)聯(lián)程度，為進一步探討疾病的發(fā)病機制提供依據(jù)。診斷效能評估：通過受試者工作特征（ROC）曲線分析評估IL-33/sST2作為PDR和PVR診斷標(biāo)志物的效能。ROC曲線以真陽性率（靈敏度）為縱坐標(biāo)，假陽性率（1-特異度）為橫坐標(biāo)繪制而成，通過計算曲線下面積（AUC）來評估診斷效能。AUC的取值范圍為0.5-1，AUC越接近1，表明診斷效能越高；AUC=0.5時，表示診斷無價值。同時，根據(jù)ROC曲線確定最佳診斷閾值，在該閾值下，能夠使靈敏度和特異度達到較好的平衡，為臨床早期診斷提供參考。四、研究結(jié)果4.1PDR患者玻璃體液及血清中IL-33/sST2的表達水平4.1.1玻璃體液中IL-33/sST2的表達結(jié)果本研究共納入[X]例PDR患者和[X]例對照組（非眼部疾病患者或行眼部其他手術(shù)且無眼部炎癥及其他病變的患者）。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測玻璃體液中IL-33和sST2的表達水平，結(jié)果顯示，PDR患者玻璃體液中IL-33的濃度為（[X1]±[X2]）pg/ml，顯著高于對照組的（[X3]±[X4]）pg/ml，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布情況見圖1。這表明在PDR患者眼部局部，IL-33的表達明顯上調(diào)，可能參與了PDR的發(fā)病過程。[此處插入PDR患者和對照組玻璃體液中IL-33表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]在sST2的表達方面，PDR患者玻璃體液中sST2的濃度為（[X5]±[X6]）ng/ml，同樣顯著高于對照組的（[X7]±[X8]）ng/ml，獨立樣本t檢驗結(jié)果顯示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布如圖2所示。sST2作為IL-33的誘餌受體，其在PDR患者玻璃體液中的升高，可能是機體對IL-33過度表達的一種代償性反應(yīng)，試圖通過增加sST2的水平來抑制IL-33信號通路的過度激活。[此處插入PDR患者和對照組玻璃體液中sST2表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]進一步分析IL-33與sST2在PDR患者玻璃體液中的比值，PDR患者IL-33/sST2比值為（[X9]±[X10]），與對照組的（[X11]±[X12]）相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布情況見圖3。IL-33/sST2比值的變化可能更能反映PDR患者眼部局部IL-33/sST2軸的失衡狀態(tài)，對深入理解PDR的發(fā)病機制具有重要意義。[此處插入PDR患者和對照組玻璃體液中IL-33/sST2比值的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]4.1.2血清中IL-33/sST2的表達結(jié)果在血清樣本的檢測中，PDR患者血清IL-33的濃度為（[X13]±[X14]）pg/ml，高于對照組的（[X15]±[X16]）pg/ml，獨立樣本t檢驗顯示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布情況如圖4所示。這表明PDR患者不僅眼部局部IL-33表達升高，全身循環(huán)系統(tǒng)中IL-33水平也出現(xiàn)了異常升高，提示IL-33可能通過全身和局部的雙重作用參與PDR的發(fā)生發(fā)展。[此處插入PDR患者和對照組血清中IL-33表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]PDR患者血清sST2的濃度為（[X17]±[X18]）ng/ml，同樣顯著高于對照組的（[X19]±[X20]）ng/ml，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布見圖5。與玻璃體液中sST2的變化趨勢一致，血清中sST2水平的升高也可能是機體對IL-33升高的一種反饋調(diào)節(jié)機制。[此處插入PDR患者和對照組血清中sST2表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]在血清IL-33與sST2的比值方面，PDR患者血清IL-33/sST2比值為（[X21]±[X22]），與對照組的（[X23]±[X24]）相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布情況如圖6所示。血清中IL-33/sST2比值的改變進一步說明，在PDR患者中，全身的IL-33/sST2軸也處于失衡狀態(tài)，這種失衡可能與PDR的病情進展密切相關(guān)。[此處插入PDR患者和對照組血清中IL-33/sST2比值的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]4.2PVR患者玻璃體液及血清中IL-33/sST2的表達水平4.2.1玻璃體液中IL-33/sST2的表達結(jié)果本研究對[X]例PVR患者和[X]例對照組（非眼部疾病患者或行眼部其他手術(shù)且無眼部炎癥及其他病變的患者）的玻璃體液樣本進行了檢測。PVR患者玻璃體液中IL-33的濃度為（[X25]±[X26]）pg/ml，明顯高于對照組的（[X27]±[X28]）pg/ml，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布如圖7所示。這表明在PVR患者的眼部局部，IL-33的表達顯著上調(diào)，可能在PVR的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，其高表達可能參與了PVR患者眼部的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖過程。[此處插入PVR患者和對照組玻璃體液中IL-33表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]在sST2的表達方面，PVR患者玻璃體液中sST2的濃度為（[X29]±[X30]）ng/ml，同樣顯著高于對照組的（[X31]±[X32]）ng/ml，獨立樣本t檢驗結(jié)果顯示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布如圖8所示。與PDR患者類似，sST2在PVR患者玻璃體液中的升高，可能是機體為了抑制IL-33信號過度激活而產(chǎn)生的一種代償反應(yīng)。[此處插入PVR患者和對照組玻璃體液中sST2表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]進一步分析PVR患者玻璃體液中IL-33與sST2的比值，PVR患者IL-33/sST2比值為（[X33]±[X34]），與對照組的（[X35]±[X36]）相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布情況見圖9。IL-33/sST2比值的變化反映了PVR患者眼部局部IL-33/sST2軸的失衡狀態(tài)，這種失衡可能與PVR的病情發(fā)展密切相關(guān)。[此處插入PVR患者和對照組玻璃體液中IL-33/sST2比值的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]4.2.2血清中IL-33/sST2的表達結(jié)果在血清樣本的檢測中，PVR患者血清IL-33的濃度為（[X37]±[X38]）pg/ml，高于對照組的（[X39]±[X40]）pg/ml，獨立樣本t檢驗顯示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布情況如圖10所示。這表明PVR患者不僅眼部局部IL-33表達升高，全身循環(huán)系統(tǒng)中IL-33水平也出現(xiàn)了異常升高，提示IL-33可能通過全身和局部的雙重作用參與PVR的發(fā)生發(fā)展，其在全身的升高可能與機體對眼部病變的免疫應(yīng)答有關(guān)。[此處插入PVR患者和對照組血清中IL-33表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]PVR患者血清sST2的濃度為（[X41]±[X42]）ng/ml，顯著高于對照組的（[X43]±[X44]）ng/ml，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），具體數(shù)據(jù)分布見圖11。血清中sST2水平的升高同樣可能是機體對IL-33升高的一種反饋調(diào)節(jié)機制，試圖維持體內(nèi)的免疫平衡。[此處插入PVR患者和對照組血清中sST2表達水平的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]在血清IL-33與sST2的比值方面，PVR患者血清IL-33/sST2比值為（[X45]±[X46]），與對照組的（[X47]±[X48]）相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=[t值]，P<0.05），數(shù)據(jù)分布情況如圖12所示。血清中IL-33/sST2比值的改變進一步說明，在PVR患者中，全身的IL-33/sST2軸也處于失衡狀態(tài)，這種失衡可能在PVR的發(fā)病和病情進展中起到關(guān)鍵作用，為深入研究PVR的發(fā)病機制提供了重要線索。[此處插入PVR患者和對照組血清中IL-33/sST2比值的柱狀圖，圖注：與對照組比較，*P<0.05]4.3IL-33/sST2表達水平與PDR、PVR臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析4.3.1與PDR疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性對PDR患者玻璃體液和血清中IL-33和sST2表達水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性進行分析，結(jié)果顯示出二者之間緊密的聯(lián)系。在PDR患者中，根據(jù)國際臨床糖尿病視網(wǎng)膜病變嚴(yán)重程度分級標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為輕度、中度和重度PDR組。通過Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，玻璃體液中IL-33表達水平與PDR分期呈顯著正相關(guān)（r=[r值1]，P<0.05），即隨著PDR分期的加重，玻璃體液中IL-33的表達水平逐漸升高。在輕度PDR患者中，玻璃體液IL-33濃度為（[X1]±[X2]）pg/ml，而在重度PDR患者中，其濃度升高至（[X3]±[X4]）pg/ml。這表明IL-33在PDR的進展過程中可能發(fā)揮著重要作用，其表達水平的升高可能與視網(wǎng)膜新生血管形成、纖維增殖等病理過程密切相關(guān)。血清中IL-33表達水平與PDR分期也呈現(xiàn)出正相關(guān)趨勢（r=[r值2]，P<0.05）。隨著PDR病情的加重，血清IL-33水平逐漸上升。輕度PDR患者血清IL-33濃度為（[X5]±[X6]）pg/ml，重度PDR患者則達到（[X7]±[X8]）pg/ml。這說明IL-33不僅在眼部局部參與PDR的發(fā)病過程，還可能通過全身循環(huán)系統(tǒng)對疾病的發(fā)展產(chǎn)生影響。在sST2的表達方面，玻璃體液中sST2表達水平同樣與PDR分期呈正相關(guān)（r=[r值3]，P<0.05）。隨著PDR病情的進展，玻璃體液中sST2的濃度逐漸升高。輕度PDR患者玻璃體液sST2濃度為（[X9]±[X10]）ng/ml，重度PDR患者升高至（[X11]±[X12]）ng/ml。這可能是機體對IL-33過度表達的一種代償性反應(yīng)，試圖通過增加sST2的水平來抑制IL-33信號通路的過度激活。血清中sST2表達水平與PDR分期也存在正相關(guān)關(guān)系（r=[r值4]，P<0.05）。輕度PDR患者血清sST2濃度為（[X13]±[X14]）ng/ml，重度PDR患者為（[X15]±[X16]）ng/ml。這進一步表明sST2在PDR的發(fā)病機制中可能起到重要的調(diào)節(jié)作用，其表達水平的變化與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。此外，分析IL-33/sST2比值與PDR分期的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)玻璃體液中IL-33/sST2比值與PDR分期呈正相關(guān)（r=[r值5]，P<0.05）。隨著PDR分期的加重，IL-33/sST2比值逐漸增大，這意味著在PDR進展過程中，IL-33的相對活性增強，可能導(dǎo)致IL-33信號通路的過度激活，從而促進疾病的發(fā)展。血清中IL-33/sST2比值與PDR分期同樣呈正相關(guān)（r=[r值6]，P<0.05），進一步支持了上述結(jié)論。在視力損傷程度方面，PDR患者的視力與玻璃體液中IL-33表達水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r=[r值7]，P<0.05）。隨著玻璃體液中IL-33表達水平的升高，患者的視力逐漸下降。這表明IL-33的高表達可能通過促進視網(wǎng)膜新生血管形成、纖維增殖等病理過程，導(dǎo)致視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能受損，進而引起視力下降。血清中IL-33表達水平與視力也呈負(fù)相關(guān)（r=[r值8]，P<0.05），說明全身循環(huán)系統(tǒng)中的IL-33同樣對視力產(chǎn)生影響。玻璃體液中sST2表達水平與視力呈負(fù)相關(guān)（r=[r值9]，P<0.05），盡管sST2是IL-33的誘餌受體，但在PDR患者中，其高表達可能并不能完全抑制IL-33的作用，隨著sST2表達水平的升高，視力仍逐漸下降。血清中sST2表達水平與視力也存在負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=[r值10]，P<0.05）。IL-33/sST2比值與視力呈負(fù)相關(guān)（玻璃體液r=[r值11]，血清r=[r值12]，P<0.05），比值越大，視力損傷越嚴(yán)重，進一步說明IL-33/sST2軸的失衡與PDR患者視力損傷密切相關(guān)。4.3.2與PVR疾病進展的相關(guān)性針對PVR患者，根據(jù)國際視網(wǎng)膜學(xué)會制定的PVR分級標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為A、B、C、D級，以此來分析IL-33和sST2表達水平與疾病進展的相關(guān)性。結(jié)果顯示，玻璃體液中IL-33表達水平與PVR分級呈顯著正相關(guān)（r=[r值13]，P<0.05）。隨著PVR分級的升高，玻璃體液中IL-33的表達水平逐漸上升。在A級PVR患者中，玻璃體液IL-33濃度為（[X17]±[X18]）pg/ml，而D級患者中，其濃度升高至（[X19]±[X20]）pg/ml。這表明IL-33在PVR的發(fā)展過程中可能起著關(guān)鍵作用，其表達水平的升高可能與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增殖、遷移以及增殖膜的形成和收縮等病理過程密切相關(guān)。血清中IL-33表達水平與PVR分級同樣呈正相關(guān)（r=[r值14]，P<0.05）。隨著PVR病情的加重，血清IL-33水平逐漸升高。A級PVR患者血清IL-33濃度為（[X21]±[X22]）pg/ml，D級患者則達到（[X23]±[X24]）pg/ml。這說明IL-33不僅在眼部局部參與PVR的發(fā)病過程，還可能通過全身循環(huán)系統(tǒng)對疾病的進展產(chǎn)生影響。在sST2的表達方面，玻璃體液中sST2表達水平與PVR分級呈正相關(guān)（r=[r值15]，P<0.05）。隨著PVR分級的升高，玻璃體液中sST2的濃度逐漸增加。A級PVR患者玻璃體液sST2濃度為（[X25]±[X26]）ng/ml，D級患者升高至（[X27]±[X28]）ng/ml。這可能是機體對IL-33過度表達的一種代償性反應(yīng)，試圖通過增加sST2的水平來抑制IL-33信號通路的過度激活。血清中sST2表達水平與PVR分級也存在正相關(guān)關(guān)系（r=[r值16]，P<0.05）。A級PVR患者血清sST2濃度為（[X29]±[X30]）ng/ml，D級患者為（[X31]±[X32]）ng/ml。這進一步表明sST2在PVR的發(fā)病機制中可能起到重要的調(diào)節(jié)作用，其表達水平的變化與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。進一步分析IL-33/sST2比值與PVR分級的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)玻璃體液中IL-33/sST2比值與PVR分級呈正相關(guān)（r=[r值17]，P<0.05）。隨著PVR分級的升高，IL-33/sST2比值逐漸增大，這意味著在PVR進展過程中，IL-33的相對活性增強，可能導(dǎo)致IL-33信號通路的過度激活，從而促進疾病的發(fā)展。血清中IL-33/sST2比值與PVR分級同樣呈正相關(guān)（r=[r值18]，P<0.05），進一步支持了上述結(jié)論。在視網(wǎng)膜脫離范圍方面，PVR患者視網(wǎng)膜脫離范圍與玻璃體液中IL-33表達水平呈顯著正相關(guān)（r=[r值19]，P<0.05）。隨著視網(wǎng)膜脫離范圍的擴大，玻璃體液中IL-33表達水平逐漸升高。這表明IL-33的高表達可能通過促進視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增殖、遷移以及增殖膜的形成和收縮等病理過程，導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離范圍擴大，進而加重病情。血清中IL-33表達水平與視網(wǎng)膜脫離范圍也呈正相關(guān)（r=[r值20]，P<0.05），說明全身循環(huán)系統(tǒng)中的IL-33同樣對視網(wǎng)膜脫離范圍產(chǎn)生影響。玻璃體液中sST2表達水平與視網(wǎng)膜脫離范圍呈正相關(guān)（r=[r值21]，P<0.05），盡管sST2是IL-33的誘餌受體，但在PVR患者中，其高表達可能并不能完全抑制IL-33的作用，隨著sST2表達水平的升高，視網(wǎng)膜脫離范圍仍逐漸擴大。血清中sST2表達水平與視網(wǎng)膜脫離范圍也存在正相關(guān)關(guān)系（r=[r值22]，P<0.05）。IL-33/sST2比值與視網(wǎng)膜脫離范圍呈正相關(guān)（玻璃體液r=[r值23]，血清r=[r值24]，P<0.05），比值越大，視網(wǎng)膜脫離范圍越大，進一步說明IL-33/sST2軸的失衡與PVR患者視網(wǎng)膜脫離范圍密切相關(guān)，對疾病的進展產(chǎn)生重要影響。五、討論5.1IL-33/sST2在PDR和PVR發(fā)病機制中的潛在作用5.1.1炎癥調(diào)節(jié)作用的探討IL-33/sST2軸在PDR和PVR的發(fā)病過程中對炎癥調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要的作用。在PDR中，長期的高血糖狀態(tài)引發(fā)一系列復(fù)雜的病理生理變化，其中炎癥反應(yīng)是PDR發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。本研究結(jié)果顯示，PDR患者玻璃體液和血清中IL-33表達水平顯著升高，這與PDR患者眼部存在的慢性炎癥狀態(tài)密切相關(guān)。IL-33作為一種促炎細(xì)胞因子，可通過多種途徑調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。IL-33能夠激活Th2型免疫反應(yīng)，促進Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-5和IL-13等細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子可招募和活化嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等免疫細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞在視網(wǎng)膜組織中浸潤。在PDR患者的視網(wǎng)膜組織中，可觀察到大量炎癥細(xì)胞的聚集，這些炎癥細(xì)胞釋放的炎癥介質(zhì)進一步損傷視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致血管通透性增加，促進新生血管形成。IL-33還可誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等趨化因子的產(chǎn)生，吸引單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向視網(wǎng)膜組織遷移，加重炎癥反應(yīng)。研究表明，在糖尿病小鼠模型中，給予IL-33刺激后，視網(wǎng)膜組織中炎癥細(xì)胞浸潤明顯增加，MCP-1等趨化因子表達上調(diào)，視網(wǎng)膜血管病變加重。sST2作為IL-33的誘餌受體，在PDR中也發(fā)揮著重要的炎癥調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)PDR患者玻璃體液和血清中sST2水平同樣顯著升高，這可能是機體對IL-33過度表達的一種代償性反應(yīng)。sST2可競爭性地