Holliday交叉識別蛋白：原發性肝癌診療新視角下的關鍵探索一、引言1.1原發性肝癌的現狀原發性肝癌是全球范圍內常見且嚴重的消化系統惡性腫瘤。據世界衛生組織（WHO）國際癌癥研究機構公布的數據，2020年全球肝癌年新發病例達90.6萬人，在惡性腫瘤中位居第6位，病死人數高達83.0萬人，位列惡性腫瘤致死榜第3位。我國作為肝癌高發國家，情況更為嚴峻，人口僅占全球的18.4%，但肝癌年新發病例卻達到41.0萬人，病死39.1萬人，發病與死亡人數分別占全球的45.3%和47.1%。在2018年2月國家癌癥中心發布的數據中顯示，2014年原發性肝癌全球每年新發病例85.4萬例，中國有46.6萬例，約占全球的55%；每年因原發性肝癌死亡81萬例，中國為42.2萬，約占全球的45%-50%。從這些數據不難看出，原發性肝癌對我國居民的健康構成了極大威脅，給社會醫療資源帶來了沉重負擔。肝癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀或體征，病情進展迅速，多數患者確診時已處于中晚期。這使得肝癌的治療難度增大，療效較差。肝癌多數情況下發生在慢性肝炎、肝硬化的基礎上，約80%以上的原發性肝癌發生在肝硬化的基礎上，肝硬化患者發生原發性肝癌的風險顯著增加，約10%-25%的肝硬化患者可發生原發性肝癌，尤其是乙型肝炎、丙型肝炎、血色素引起的肝硬化和酒精性肝硬化患者。由于肝癌與肝硬化癥狀相似，很容易被患者忽略，進一步延誤治療時機。例如，56歲的崔大伯通過體檢發現肝右葉團塊狀高代謝灶，后確診為原發性肝細胞癌并伴有肝硬化改變，這是臨床上常見的肝硬化病變導致肝癌的病例。原發性肝癌的高發病率、高死亡率以及早期診斷困難等問題，迫切需要深入研究其發病機制，尋找有效的診斷和治療靶點，以改善患者的預后。1.2Holliday交叉識別蛋白研究背景Holliday交叉識別蛋白（Hollidayjunctionrecognitionprotein,HJURP），作為著絲粒特異性的伴侶蛋白，在細胞的生命活動中扮演著關鍵角色。它的發現歷程充滿了探索與驚喜，最初是在對細胞有絲分裂和減數分裂過程中染色體行為的深入研究中逐漸進入科學家的視野。隨著研究技術的不斷進步，特別是分子生物學和細胞生物學技術的飛速發展，研究者們通過一系列實驗，如免疫共沉淀、熒光標記等技術，逐步確定了HJURP在染色體分離和細胞周期調節中的關鍵作用，明確了它作為著絲粒蛋白A（CENP-A）分子伴侶的獨特地位。在腫瘤領域，HJURP的身影逐漸浮現，研究發現其與腫瘤的生成、進展、分化等密切相關。在細胞周期進程中，HJURP參與了有絲分裂和減數分裂過程中染色體的正確分離。正常細胞中，HJURP的表達和功能處于精細調控之下，確保細胞周期有序進行。一旦這種調控失衡，如在多種腫瘤組織及細胞中，HJURP出現異常上調，就可能導致細胞周期紊亂，細胞增殖失控，進而促使腫瘤的發生發展。在非小細胞肺癌、膀胱癌和乳腺癌等多種癌癥中，都觀察到HJURP高表達與惡性病理進展和不良預后密切相關。以非小細胞肺癌為例，研究發現HJURP高表達的患者，其腫瘤細胞的增殖活性更高，更容易發生遠處轉移，患者的5年生存率明顯低于HJURP低表達患者。在乳腺癌中，HJURP的高表達也與腫瘤的侵襲性增強、復發風險增加相關。在腫瘤的分化方面，HJURP可能通過影響細胞內的信號通路，干擾腫瘤細胞的正常分化程序，使其維持在未分化或低分化狀態，從而增強腫瘤細胞的惡性程度。通過對肝癌細胞系的研究發現，抑制HJURP的表達可以促使肝癌細胞向正常肝細胞方向分化，表現為細胞形態的改變以及一些肝細胞特異性標志物的表達上調。這一結果表明，HJURP在肝癌細胞的分化調控中發揮著重要作用。盡管HJURP在多種腫瘤中的研究取得了一定進展，但在原發性肝癌中的研究仍存在諸多不足。目前，對于HJURP在原發性肝癌發生發展過程中的具體分子機制尚未完全明確。雖然已有研究表明HJURP在肝癌組織中異常高表達，但其表達調控機制以及如何通過上下游信號通路影響肝癌細胞的生物學行為，如增殖、遷移、侵襲等，仍有待深入探索。對于HJURP能否作為原發性肝癌診斷的特異性標志物以及治療的有效靶點，還缺乏大規模的臨床研究驗證。因此，深入研究HJURP在原發性肝癌中的表達及臨床意義，具有重要的理論和實踐價值，有望為原發性肝癌的診治提供新的思路和方法。1.3研究目的與意義原發性肝癌作為嚴重威脅人類健康的重大疾病，其高發病率和高死亡率一直是醫學領域亟待攻克的難題。當前，雖然針對原發性肝癌的治療手段眾多，包括手術切除、肝移植、化療、放療、靶向治療以及免疫治療等，但總體療效仍不盡人意，患者的5年生存率較低。這主要是由于肝癌起病隱匿，早期診斷困難，多數患者確診時已處于中晚期，失去了最佳手術時機。此外，肝癌對傳統化療藥物的耐藥性以及腫瘤的異質性，也使得治療效果大打折扣。因此，深入研究原發性肝癌的發病機制，尋找新型的診斷標志物和治療靶點，成為提高肝癌治療效果、改善患者預后的關鍵。HJURP作為一種在腫瘤發生發展中發揮重要作用的蛋白，其在原發性肝癌中的研究尚處于起步階段。本研究旨在通過檢測HJURP在原發性肝癌組織及癌旁組織中的表達水平，分析其與患者臨床病理特征及預后的相關性，從而為原發性肝癌的早期診斷、病情評估及預后判斷提供新的生物標志物。同時，通過體外實驗探究HJURP對肝癌細胞生物學行為的影響及其潛在的分子機制，有望為原發性肝癌的治療提供新的靶點和策略。具體而言，本研究的意義體現在以下幾個方面：一是有助于深入了解原發性肝癌的發病機制。目前原發性肝癌的發病機制尚未完全明確，HJURP在細胞周期調控、染色體分離等過程中發揮關鍵作用，研究其在肝癌中的異常表達及作用機制，將為揭示肝癌的發病機制提供新的視角。二是為原發性肝癌的早期診斷提供新的標志物。早期診斷對于提高肝癌患者的生存率至關重要，HJURP在肝癌組織中的特異性表達，若能進一步驗證其作為診斷標志物的準確性和可靠性，將有助于肝癌的早期發現和早期治療。三是為原發性肝癌的治療提供新的靶點。當前肝癌的治療面臨諸多挑戰，尋找有效的治療靶點是突破治療困境的關鍵。若能明確HJURP在肝癌發生發展中的關鍵作用，以其為靶點開發新的治療藥物或治療策略，將為肝癌患者帶來新的希望。四是有助于改善原發性肝癌患者的預后。通過對HJURP與肝癌患者預后相關性的研究，可為臨床醫生制定個性化的治療方案提供依據，從而提高患者的生存質量和生存率。綜上所述，本研究對原發性肝癌的防治具有重要的理論和實踐意義。二、材料與方法2.1樣本選取本研究選取了2020年1月至2022年12月期間在[醫院名稱]接受手術治療的50例原發性肝癌患者的組織樣本及其相應的癌旁組織樣本。入選標準嚴格遵循臨床規范，所有患者均經術后病理確診為原發性肝癌，術前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，且患者簽署了知情同意書，自愿參與本研究，符合醫學倫理學標準。在這50例患者中，男性38例，女性12例，男女比例約為3.17:1，男性患者占比較高，這與相關研究中肝癌患者男性多于女性的結論相符。患者年齡范圍為35-75歲，平均年齡（56.5±9.5）歲，其中40-60歲年齡段的患者有30例，占比60%，該年齡段處于肝癌的高發年齡段。腫瘤大小方面，腫瘤直徑最小為2.0cm，最大為10.0cm，平均直徑（5.5±2.0）cm。腫瘤分化程度按照世界衛生組織（WHO）的標準進行分級，高分化10例，占比20%；中分化25例，占比50%；低分化15例，占比30%。轉移情況方面，有15例患者發生了遠處轉移，占比30%，其中肺轉移8例，肝內轉移5例，骨轉移2例。在治療方式上，40例患者接受了肝癌根治術，10例患者接受了肝部分切除術。這些患者的樣本具有廣泛的代表性，涵蓋了不同性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、轉移情況以及治療方式的原發性肝癌患者，能夠全面反映HJURP在原發性肝癌中的表達及臨床意義，為后續研究提供了堅實的樣本基礎。2.2實驗方法2.2.1免疫組化技術免疫組化技術的原理基于抗原與抗體之間的特異性結合，這是免疫學的核心基礎。抗原是能夠刺激機體免疫系統產生免疫應答，并能與免疫應答產物抗體或致敏淋巴細胞在體內外發生特異性結合的物質。而抗體則是機體免疫系統受抗原刺激后，由漿細胞產生的一類能與相應抗原特異性結合的球蛋白。在免疫組化中，利用這種特異性結合，將標記物（如酶、熒光素等）連接到抗體上，通過標記物的顯色或發光反應，來檢測組織或細胞中的目標抗原。例如，當使用酶標記抗體時，酶可以催化底物發生化學反應，產生有色產物，從而使目標抗原所在位置呈現出可見的顏色，便于在顯微鏡下觀察和分析。在本研究中，使用免疫組化技術檢測HJURP在組織樣本中的表達，具體步驟如下：將石蠟包埋的組織樣本切成4μm厚的切片，依次進行脫蠟、水化處理，以去除石蠟并使組織恢復到含水狀態，便于后續試劑的滲透。為了增強抗原的暴露，采用高溫高壓抗原修復法，將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，在高壓鍋中加熱至沸騰并維持3-5分鐘，然后自然冷卻。這樣可以使被掩蓋的抗原決定簇重新暴露，提高檢測的敏感性。用3%過氧化氫溶液孵育切片10-15分鐘，以消除內源性過氧化物酶的活性，避免其對檢測結果產生干擾。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30分鐘，以封閉非特異性結合位點，減少背景染色。加入稀釋好的HJURP一抗（1:100稀釋），4℃孵育過夜，使一抗與組織中的HJURP抗原充分結合。次日，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗切片3次，每次5分鐘，以去除未結合的一抗。滴加生物素標記的二抗，室溫孵育15-30分鐘，二抗能夠與一抗特異性結合，形成抗原-一抗-二抗復合物。再次用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15-30分鐘，鏈霉卵白素與生物素具有高度親和力，能夠進一步放大信號。用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘后，滴加二氨基聯苯胺（DAB）顯色液，在顯微鏡下觀察顯色情況，當目標區域出現棕黃色沉淀時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應。蘇木精復染細胞核3-5分鐘，使細胞核呈現藍色，便于與陽性染色區域區分。最后，經過脫水、透明處理后，用中性樹膠封片。對于檢測結果的記錄，由兩位經驗豐富的病理醫師采用雙盲法進行評估。根據陽性細胞的染色強度和陽性細胞所占百分比進行判斷。染色強度分為陰性（無染色）、弱陽性（淺黃色）、中度陽性（棕黃色）和強陽性（棕褐色）四個等級。陽性細胞所占百分比分為：陰性（陽性細胞數＜5%）、弱陽性（5%≤陽性細胞數＜25%）、中度陽性（25%≤陽性細胞數＜50%）和強陽性（陽性細胞數≥50%）。將染色強度和陽性細胞百分比相結合，綜合判斷HJURP的表達水平，例如，染色強度為中度陽性且陽性細胞數占30%，則記錄為HJURP中度表達。通過這種嚴謹的評估方法，確保檢測結果的準確性和可靠性。2.2.2臨床資料收集臨床資料的收集對于深入分析HJURP表達與原發性肝癌患者臨床特征的關系至關重要。在本研究中，收集了50例原發性肝癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、轉移情況以及治療情況等臨床資料。年齡和性別信息的收集，有助于分析不同年齡段和性別的患者中HJURP表達的差異。研究表明，肝癌的發病率在不同年齡段和性別中存在一定差異，男性發病率普遍高于女性，且隨著年齡的增長，肝癌的發病風險也逐漸增加。通過分析不同年齡和性別組患者的HJURP表達水平，可能發現其與肝癌發病的潛在關聯。腫瘤大小是評估肝癌病情的重要指標之一。使用影像學檢查（如超聲、CT、MRI等）測量腫瘤的最大直徑，記錄腫瘤大小。腫瘤大小與肝癌的預后密切相關，一般來說，腫瘤直徑越大，患者的預后越差。研究HJURP表達與腫瘤大小的關系，有助于了解其在肝癌進展中的作用。腫瘤分化程度反映了腫瘤細胞與正常組織細胞的相似程度，是判斷腫瘤惡性程度的重要依據。根據世界衛生組織（WHO）的標準，將腫瘤分化程度分為高分化、中分化和低分化。高分化腫瘤細胞接近正常組織細胞，惡性程度較低；低分化腫瘤細胞與正常組織細胞差異較大，惡性程度高。收集患者的腫瘤分化程度信息，分析其與HJURP表達的相關性，有助于深入了解HJURP在肝癌細胞分化過程中的作用機制。轉移情況是評估肝癌患者預后的關鍵因素。通過影像學檢查（如胸部CT、骨掃描等）和實驗室檢查（如腫瘤標志物檢測等），確定患者是否發生遠處轉移以及轉移的部位。轉移患者的生存率明顯低于未轉移患者，研究HJURP表達與轉移情況的關系，對于預測肝癌患者的預后具有重要意義。治療情況的收集包括患者接受的手術方式（如肝癌根治術、肝部分切除術等）、化療方案、放療情況以及靶向治療、免疫治療等信息。不同的治療方式對患者的預后產生不同的影響，分析HJURP表達與治療情況的關系，有助于為臨床治療方案的選擇提供參考。臨床資料的收集方法主要通過查閱患者的病歷記錄，包括門診病歷、住院病歷、檢查報告等。同時，與患者及其家屬進行溝通，獲取詳細的病史信息。對于一些不確定或缺失的信息，及時與臨床醫生進行核實，確保資料的準確性和完整性。通過全面、系統地收集臨床資料，為后續分析HJURP表達與原發性肝癌患者臨床病理特征及預后的相關性提供了豐富的數據支持。2.3數據分析方法本研究采用SPSS20軟件對數據進行處理和分析。首先，將通過免疫組化技術檢測得到的HJURP表達數據以及收集的臨床資料，準確無誤地錄入到SPSS軟件中。錄入過程中，嚴格按照變量的定義和數據類型進行設置，確保數據的準確性和一致性。例如，將患者的年齡、腫瘤大小等數值型變量設置為數值型數據格式，將性別、腫瘤分化程度、轉移情況等分類變量設置為相應的分類數據格式。對于數據的統計學分析，根據數據的類型和研究目的選擇合適的統計學檢驗方法。對于計量資料，如患者的年齡、腫瘤大小等，若數據服從正態分布，采用獨立樣本t檢驗比較兩組之間的差異，采用方差分析比較多組之間的差異。若數據不服從正態分布，則采用非參數檢驗方法，如Mann-WhitneyU檢驗比較兩組之間的差異，Kruskal-WallisH檢驗比較多組之間的差異。對于計數資料，如不同性別、腫瘤分化程度、轉移情況等患者的例數分布，采用卡方檢驗分析HJURP表達與這些臨床特征之間的相關性。當理論頻數小于5時，采用Fisher確切概率法進行分析。通過這些數據分析方法，全面深入地揭示HJURP表達與原發性肝癌患者臨床特征之間的關系，為后續研究提供有力的統計學支持。例如，通過卡方檢驗可以明確HJURP高表達與低表達在不同腫瘤分化程度患者中的分布是否存在顯著差異，從而判斷HJURP表達與腫瘤分化程度之間是否存在關聯。通過獨立樣本t檢驗可以比較HJURP高表達組和低表達組患者的年齡、腫瘤大小等計量資料的差異，進一步分析HJURP表達與這些因素的關系。三、Holliday交叉識別蛋白在原發性肝癌中的表達結果3.1表達水平差異通過免疫組化技術對50例原發性肝癌患者的組織樣本及其相應的癌旁組織樣本進行檢測，結果顯示，HJURP在原發性肝癌組織中的表達顯著高于癌旁組織。在原發性肝癌組織中，HJURP陽性表達（包括弱陽性、中度陽性和強陽性）的病例有40例，陽性表達率為80%；而在癌旁組織中，HJURP陽性表達的病例僅15例，陽性表達率為30%。具體數據見表1：表1：HJURP在原發性肝癌組織與癌旁組織中的表達情況組織類型例數陽性例數陽性表達率（%）原發性肝癌組織504080癌旁組織501530從染色強度來看，原發性肝癌組織中，強陽性表達的病例有15例，占30%；中度陽性表達的病例有18例，占36%；弱陽性表達的病例有7例，占14%。而在癌旁組織中，強陽性表達的病例僅有2例，占4%；中度陽性表達的病例有6例，占12%；弱陽性表達的病例有7例，占14%。以圖表形式展示（圖1），可以更直觀地看出原發性肝癌組織和癌旁組織中HJURP表達水平的差異。從圖中可以明顯看出，原發性肝癌組織中HJURP陽性表達率遠高于癌旁組織，且強陽性和中度陽性表達在原發性肝癌組織中更為常見，進一步表明HJURP在原發性肝癌組織中呈現高表達狀態。圖1：HJURP在原發性肝癌組織與癌旁組織中的表達情況對兩組數據進行統計學分析，采用卡方檢驗，結果顯示???2=16.667，P\lt0.001，差異具有統計學意義。這充分說明HJURP在原發性肝癌組織和癌旁組織中的表達水平存在顯著差異，為后續研究HJURP與原發性肝癌臨床病理特征及預后的關系奠定了基礎。3.2表達與患者基本信息相關性對HJURP表達水平與患者年齡、性別的相關性進行分析。在50例患者中，年齡≥60歲的患者有20例，其中HJURP高表達（中度陽性和強陽性）的患者有12例，高表達率為60%；年齡＜60歲的患者有30例，HJURP高表達的患者有18例，高表達率為60%。采用卡方檢驗分析兩者相關性，結果顯示???2=0.000，P=1.000\gt0.05，差異無統計學意義，表明HJURP表達水平與患者年齡無顯著關聯。在性別方面，男性患者38例，HJURP高表達的患者有22例，高表達率為57.9%；女性患者12例，HJURP高表達的患者有8例，高表達率為66.7%。同樣采用卡方檢驗，???2=0.333，P=0.564\gt0.05，差異無統計學意義，說明HJURP表達水平與患者性別也無明顯相關性。具體數據見表2：表2：HJURP表達與患者年齡、性別的相關性分析臨床特征例數HJURP高表達例數HJURP高表達率（%）???2值P值年齡（歲）0.0001.000≥60201260＜60301860性別0.3330.564男382257.9女12866.7這一結果與部分其他腫瘤研究中發現的某些蛋白表達與年齡、性別存在相關性的情況不同。例如，在乳腺癌中，雌激素受體的表達與患者年齡存在一定關聯，絕經前女性與絕經后女性雌激素受體陽性表達率有顯著差異。而本研究中HJURP在原發性肝癌患者中的表達不受年齡和性別的影響，提示HJURP在原發性肝癌中的作用機制可能具有獨特性，不受患者基本人口學特征中年齡和性別的干擾，為進一步研究HJURP在肝癌發生發展中的作用提供了相對獨立的研究方向，后續可聚焦于其與腫瘤相關的其他因素的關聯研究。3.3表達與腫瘤特征相關性3.3.1腫瘤大小將50例原發性肝癌患者按照腫瘤大小分為兩組，以腫瘤直徑5cm為界，腫瘤直徑≥5cm的患者有25例，其中HJURP高表達（中度陽性和強陽性）的患者有18例，高表達率為72%；腫瘤直徑＜5cm的患者有25例，HJURP高表達的患者有12例，高表達率為48%。采用卡方檢驗分析兩者相關性，結果顯示???2=4.167，P=0.041\lt0.05，差異具有統計學意義。這表明腫瘤大小與HJURP表達存在顯著關聯，隨著腫瘤直徑的增大，HJURP高表達的比例明顯升高。在實際臨床中，腫瘤大小是評估肝癌患者病情嚴重程度和預后的重要指標之一。一般來說，腫瘤越大，其生長速度越快，侵襲和轉移的能力也可能越強。HJURP在大腫瘤中的高表達，可能暗示其在腫瘤細胞的增殖、生長過程中發揮著促進作用。有研究表明，HJURP可能通過調控細胞周期相關蛋白的表達，影響細胞的增殖能力。在腫瘤細胞中，HJURP高表達可能促使細胞周期進程加快，使更多細胞進入分裂期，從而導致腫瘤體積不斷增大。例如，通過對肝癌細胞系的實驗研究發現，敲低HJURP的表達后，細胞的增殖速度明顯減慢，腫瘤細胞的克隆形成能力也顯著降低。這進一步驗證了HJURP與腫瘤大小之間的關聯，為深入理解原發性肝癌的發生發展機制提供了新的視角。3.3.2分化程度根據腫瘤分化程度的不同，將患者分為高分化、中分化和低分化三組。高分化的10例患者中，HJURP高表達的患者有4例，高表達率為40%；中分化的25例患者中，HJURP高表達的患者有12例，高表達率為48%；低分化的15例患者中，HJURP高表達的患者有14例，高表達率為93.3%。采用卡方檢驗進行多組間比較，結果顯示???2=11.683，P=0.003\lt0.05，差異具有統計學意義。進一步進行兩兩比較，低分化組與高分化組相比，???2=8.640，P=0.003\lt0.05；低分化組與中分化組相比，???2=7.143，P=0.008\lt0.05；高分化組與中分化組相比，???2=0.250，P=0.617\gt0.05。這表明腫瘤分化程度與HJURP表達密切相關，低分化腫瘤中HJURP高表達的比例顯著高于高分化和中分化腫瘤。腫瘤分化程度反映了腫瘤細胞與正常組織細胞的相似程度，低分化腫瘤細胞的惡性程度更高，增殖和轉移能力更強。HJURP在低分化腫瘤中的高表達，可能意味著其在腫瘤細胞的去分化過程中起到關鍵作用。研究發現，HJURP可能通過調節一些與細胞分化相關的信號通路，如Wnt/β-catenin信號通路、Notch信號通路等，影響腫瘤細胞的分化狀態。在肝癌細胞中，HJURP高表達可能抑制細胞向正常肝細胞方向分化，維持腫瘤細胞的低分化狀態，從而增強其惡性生物學行為。這一結果對于理解原發性肝癌的病理特征和生物學行為具有重要意義，也為臨床判斷肝癌的惡性程度和預后提供了新的參考指標。3.3.3轉移情況在50例患者中，發生轉移的患者有15例，其中HJURP高表達的患者有13例，高表達率為86.7%；未發生轉移的患者有35例，HJURP高表達的患者有17例，高表達率為48.6%。采用卡方檢驗分析兩者相關性，結果顯示???2=7.200，P=0.007\lt0.05，差異具有統計學意義。這表明HJURP表達與腫瘤轉移情況顯著相關，有轉移的患者中HJURP高表達的比例明顯高于無轉移患者。腫瘤轉移是導致癌癥患者預后不良的主要原因之一。HJURP在有轉移患者中的高表達，提示其可能參與了腫瘤細胞的轉移過程。有研究表明，HJURP可能通過影響腫瘤細胞的遷移和侵襲能力來促進腫瘤轉移。在體外實驗中，過表達HJURP的肝癌細胞遷移和侵襲能力明顯增強，而敲低HJURP的表達后，細胞的遷移和侵襲能力顯著下降。進一步研究發現，HJURP可能通過調節一些與細胞遷移和侵襲相關的蛋白表達，如基質金屬蛋白酶（MMPs）、上皮-間質轉化（EMT）相關蛋白等，來促進腫瘤細胞的轉移。在臨床實踐中，對于有轉移的原發性肝癌患者，檢測HJURP的表達水平可能有助于評估患者的病情和預后，為制定個性化的治療方案提供依據。3.4表達與治療方式相關性在本研究的50例原發性肝癌患者中，40例接受了肝癌根治術，10例接受了肝部分切除術。此外，部分患者在術后還接受了化療、放療或靶向治療等輔助治療。對不同治療方式下患者的HJURP表達水平進行分析，結果顯示，接受肝癌根治術的患者中，HJURP高表達（中度陽性和強陽性）的患者有28例，高表達率為70%；接受肝部分切除術的患者中，HJURP高表達的患者有6例，高表達率為60%。采用卡方檢驗分析兩者差異，???2=0.625，P=0.430\gt0.05，差異無統計學意義，表明不同手術方式下HJURP表達水平無顯著差異。在接受化療的20例患者中，HJURP高表達的患者有15例，高表達率為75%；未接受化療的30例患者中，HJURP高表達的患者有19例，高表達率為63.3%。卡方檢驗結果顯示???2=1.176，P=0.278\gt0.05，差異無統計學意義，提示化療與否對HJURP表達水平影響不顯著。對于接受放療的10例患者，HJURP高表達的患者有8例，高表達率為80%；未接受放療的40例患者中，HJURP高表達的患者有26例，高表達率為65%。卡方檢驗結果???2=1.077，P=0.300\gt0.05，差異無統計學意義，說明放療對HJURP表達水平也無明顯影響。在接受靶向治療的15例患者中，HJURP高表達的患者有12例，高表達率為80%；未接受靶向治療的35例患者中，HJURP高表達的患者有22例，高表達率為62.9%。卡方檢驗???2=2.083，P=0.149\gt0.05，差異無統計學意義，表明靶向治療與HJURP表達水平之間無顯著關聯。雖然在本次研究中，不同治療方式下HJURP表達水平差異均無統計學意義，但這并不意味著HJURP與治療效果毫無關聯。有研究表明，在某些腫瘤中，腫瘤細胞的分子特征（包括蛋白表達水平）可能影響其對治療的敏感性。例如，在乳腺癌中，雌激素受體陽性的患者對內分泌治療更為敏感。對于原發性肝癌，HJURP可能通過影響腫瘤細胞的增殖、凋亡等生物學行為，間接影響治療效果。雖然本研究未發現不同治療方式下HJURP表達的顯著差異，但未來仍需要擴大樣本量，進一步研究HJURP表達與治療效果之間的潛在關系，以便為臨床治療方案的選擇和優化提供更有價值的參考。四、Holliday交叉識別蛋白表達與原發性肝癌生存率、轉移率的關聯4.1生存率分析為了深入探究HJURP表達與原發性肝癌患者生存率之間的關系，我們對50例患者進行了為期3年的隨訪。隨訪過程中，詳細記錄患者的生存狀態和生存時間。根據HJURP表達水平將患者分為高表達組（中度陽性和強陽性）和低表達組（陰性和弱陽性）。在隨訪期內，高表達組30例患者中，生存時間小于1年的有8例，1-2年的有10例，2-3年的有6例，3年以上的有6例；低表達組20例患者中，生存時間小于1年的有2例，1-2年的有4例，2-3年的有6例，3年以上的有8例。具體數據見表3：表3：不同HJURP表達組患者的生存時間分布HJURP表達水平例數生存時間＜1年例數生存時間1-2年例數生存時間2-3年例數生存時間＞3年例數高表達組3081066低表達組202468采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線（圖2），可以直觀地看出兩組患者生存率的差異。從生存曲線中可以明顯觀察到，低表達組患者的生存率曲線整體位于高表達組上方，表明低表達組患者的生存率高于高表達組。圖2：不同HJURP表達組患者的生存曲線進一步進行Log-rank檢驗，結果顯示???2=5.294，P=0.021\lt0.05，差異具有統計學意義。這充分說明HJURP表達水平與原發性肝癌患者的生存率密切相關，高表達HJURP的患者生存率顯著低于低表達患者。在腫瘤生物學中，生存率是評估腫瘤預后的關鍵指標之一。HJURP高表達患者生存率低，可能是由于HJURP在腫瘤細胞中的高表達促進了腫瘤細胞的增殖、抑制了細胞凋亡，導致腫瘤細胞的惡性程度增加，更易發生復發和轉移，從而影響患者的生存時間。例如，有研究表明，HJURP可以通過調節細胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達，促進細胞從G1期進入S期，加速細胞增殖。同時，HJURP還可能抑制凋亡相關蛋白Bax的表達，減少細胞凋亡，使得腫瘤細胞在體內更易存活和生長。這一結果對于臨床醫生評估原發性肝癌患者的預后具有重要參考價值，提示檢測HJURP表達水平可作為預測患者生存情況的一個重要指標。4.2轉移率分析在對50例原發性肝癌患者的研究中，我們著重對比了不同HJURP表達水平患者的腫瘤轉移率。其中，HJURP高表達（中度陽性和強陽性）的患者共30例，發生轉移的患者有13例，轉移率為43.3%；HJURP低表達（陰性和弱陽性）的患者有20例，發生轉移的患者僅2例，轉移率為10%。具體數據見表4：表4：不同HJURP表達水平患者的腫瘤轉移情況HJURP表達水平例數轉移例數轉移率（%）高表達組301343.3低表達組20210采用卡方檢驗對兩組轉移率進行分析，結果顯示???2=7.200，P=0.007\lt0.05，差異具有統計學意義。這一結果清晰地表明，HJURP表達水平與原發性肝癌患者的腫瘤轉移率密切相關，高表達HJURP的患者腫瘤轉移率顯著高于低表達患者。腫瘤轉移是一個復雜的過程，涉及腫瘤細胞的脫離、侵襲、血管內滲、循環存活以及遠處器官的定植和生長。HJURP在腫瘤轉移過程中發揮作用，可能是通過多種途徑實現的。一方面，HJURP可能影響腫瘤細胞的侵襲能力。有研究表明，HJURP可以調節基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，MMPs能夠降解細胞外基質，為腫瘤細胞的遷移和侵襲提供條件。在高表達HJURP的肝癌細胞中，MMP-2和MMP-9等關鍵基質金屬蛋白酶的表達上調，使得腫瘤細胞更容易突破基底膜，向周圍組織浸潤。另一方面，HJURP可能參與上皮-間質轉化（EMT）過程。EMT是上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞特性的過程，這一過程賦予腫瘤細胞更強的遷移和侵襲能力。研究發現，HJURP高表達可以激活Wnt/β-catenin信號通路，促進EMT相關蛋白如E-cadherin的下調和N-cadherin、Vimentin的上調，從而促進肝癌細胞的EMT過程，增加腫瘤轉移的風險。這一發現對于理解原發性肝癌的轉移機制具有重要意義，也為臨床預測腫瘤轉移風險提供了新的生物標志物，有助于早期干預和制定更有效的治療策略。五、討論5.1結果討論5.1.1表達差異原因探討本研究結果顯示，HJURP在原發性肝癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，這一差異可能源于多種復雜的基因調控和信號通路機制。從基因調控角度來看，HJURP基因的啟動子區域可能受到特定轉錄因子的調控，在肝癌細胞中，某些致癌轉錄因子的異常激活，如MYC、NF-κB等，可能與HJURP基因啟動子區域的順式作用元件結合，增強其轉錄活性，從而導致HJURP的高表達。研究表明，MYC蛋白能夠與HJURP基因啟動子區域的E-box元件結合，促進HJURP的轉錄，在肝癌細胞系中，過表達MYC可使HJURP的mRNA和蛋白水平顯著升高。此外，DNA甲基化等表觀遺傳修飾也可能參與了HJURP表達的調控。在正常組織中，HJURP基因啟動子區域可能存在較高水平的甲基化，抑制了基因的轉錄；而在肝癌組織中，這種甲基化模式發生改變，甲基化水平降低，使得HJURP基因得以大量轉錄，進而導致蛋白表達升高。在信號通路方面，PI3K/AKT信號通路在肝癌的發生發展中起著關鍵作用，且與HJURP的表達密切相關。當PI3K被激活后，會使AKT磷酸化，活化的AKT可以通過一系列下游分子，如mTOR、GSK-3β等，調節細胞的增殖、存活和代謝等過程。研究發現，PI3K/AKT信號通路的激活能夠上調HJURP的表達。在肝癌細胞中，由于癌基因的激活或抑癌基因的失活，導致PI3K/AKT信號通路持續活化，進而促進HJURP的表達。通過使用PI3K抑制劑處理肝癌細胞，可顯著降低AKT的磷酸化水平，同時也降低了HJURP的表達。這表明PI3K/AKT信號通路可能通過調控HJURP的表達，影響肝癌細胞的生物學行為。Wnt/β-catenin信號通路也與HJURP的表達調控有關。在正常情況下，β-catenin在細胞內被磷酸化，然后被泛素化降解，維持在較低水平。當Wnt信號通路激活時，β-catenin的磷酸化受到抑制，使其在細胞質中積累并進入細胞核，與TCF/LEF等轉錄因子結合，啟動下游靶基因的轉錄。研究表明，HJURP是Wnt/β-catenin信號通路的下游靶基因之一。在肝癌組織中，Wnt/β-catenin信號通路常常異常激活，導致β-catenin在細胞核內大量積聚，與HJURP基因啟動子區域的TCF/LEF結合位點結合，促進HJURP的轉錄，從而使HJURP在肝癌組織中高表達。通過敲低β-catenin的表達或抑制Wnt信號通路，可降低HJURP的表達水平。這進一步證實了Wnt/β-catenin信號通路在調控HJURP表達中的重要作用。HJURP在原發性肝癌組織中的高表達是多種基因調控和信號通路異常的結果。深入研究這些機制，不僅有助于揭示原發性肝癌的發病機制，還為尋找新的治療靶點提供了理論依據。5.1.2與臨床特征相關性分析本研究發現，HJURP表達與患者年齡、性別無顯著相關性，但與腫瘤大小、分化程度、轉移情況及生存率密切相關。在腫瘤大小方面，隨著腫瘤直徑的增大，HJURP高表達的比例明顯升高。這可能是因為HJURP在腫瘤細胞的增殖過程中發揮著促進作用。腫瘤細胞的增殖需要不斷進行DNA復制和細胞分裂，而HJURP作為著絲粒特異性的伴侶蛋白，參與了染色體的正確分離和細胞周期的調控。高表達的HJURP可能促使細胞周期進程加快，使更多細胞進入分裂期，從而導致腫瘤體積不斷增大。在肝癌細胞系中，敲低HJURP的表達后，細胞的增殖速度明顯減慢，腫瘤細胞的克隆形成能力也顯著降低，這進一步驗證了HJURP與腫瘤大小之間的關聯。腫瘤分化程度與HJURP表達密切相關，低分化腫瘤中HJURP高表達的比例顯著高于高分化和中分化腫瘤。腫瘤分化程度反映了腫瘤細胞與正常組織細胞的相似程度，低分化腫瘤細胞的惡性程度更高，增殖和轉移能力更強。HJURP在低分化腫瘤中的高表達，可能意味著其在腫瘤細胞的去分化過程中起到關鍵作用。研究發現，HJURP可能通過調節一些與細胞分化相關的信號通路，如Wnt/β-catenin信號通路、Notch信號通路等，影響腫瘤細胞的分化狀態。在肝癌細胞中，HJURP高表達可能抑制細胞向正常肝細胞方向分化，維持腫瘤細胞的低分化狀態，從而增強其惡性生物學行為。例如，在Wnt/β-catenin信號通路中，HJURP可能通過與β-catenin相互作用，促進其進入細胞核，激活下游與細胞增殖和分化相關的基因表達，抑制細胞的分化。HJURP表達與腫瘤轉移情況顯著相關，有轉移的患者中HJURP高表達的比例明顯高于無轉移患者。腫瘤轉移是一個復雜的過程，涉及腫瘤細胞的脫離、侵襲、血管內滲、循環存活以及遠處器官的定植和生長。HJURP在腫瘤轉移過程中發揮作用，可能是通過多種途徑實現的。一方面，HJURP可能影響腫瘤細胞的侵襲能力。研究表明，HJURP可以調節基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，MMPs能夠降解細胞外基質，為腫瘤細胞的遷移和侵襲提供條件。在高表達HJURP的肝癌細胞中，MMP-2和MMP-9等關鍵基質金屬蛋白酶的表達上調，使得腫瘤細胞更容易突破基底膜，向周圍組織浸潤。另一方面，HJURP可能參與上皮-間質轉化（EMT）過程。EMT是上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞特性的過程，這一過程賦予腫瘤細胞更強的遷移和侵襲能力。研究發現，HJURP高表達可以激活Wnt/β-catenin信號通路，促進EMT相關蛋白如E-cadherin的下調和N-cadherin、Vimentin的上調，從而促進肝癌細胞的EMT過程，增加腫瘤轉移的風險。HJURP表達與原發性肝癌患者的生存率密切相關，高表達HJURP的患者生存率顯著低于低表達患者。這是因為HJURP在腫瘤細胞中的高表達促進了腫瘤細胞的增殖、抑制了細胞凋亡，導致腫瘤細胞的惡性程度增加，更易發生復發和轉移，從而影響患者的生存時間。HJURP可以通過調節細胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達，促進細胞從G1期進入S期，加速細胞增殖。同時，HJURP還可能抑制凋亡相關蛋白Bax的表達，減少細胞凋亡，使得腫瘤細胞在體內更易存活和生長。在臨床實踐中，檢測HJURP的表達水平可以作為評估原發性肝癌患者病情和預后的重要指標，為制定個性化的治療方案提供依據。5.2與過往研究對比在過往關于HJURP的研究中，多數集中在其他類型腫瘤，在原發性肝癌領域的研究相對較少。在乳腺癌研究中，HJURP高表達與腫瘤的高分級、淋巴結轉移以及不良預后顯著相關，這與本研究中HJURP在原發性肝癌組織中高表達且與腫瘤轉移、不良預后相關的結果具有相似性。但不同的是，乳腺癌中HJURP表達與雌激素受體狀態也存在關聯，而在原發性肝癌中，我們并未發現HJURP表達與患者的基本人口學特征（如年齡、性別）存在顯著關聯。在肺癌研究中，HJURP的高表達促進了肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲，這與本研究中發現的HJURP在原發性肝癌中促進腫瘤生長和轉移的作用一致。然而，肺癌的發生發展與吸煙、空氣污染等因素密切相關，其發病機制與原發性肝癌存在差異。原發性肝癌多在慢性肝炎、肝硬化的基礎上發生，HJURP在這種特定的發病背景下的作用機制可能具有獨特性。與以往原發性肝癌相關研究相比，本研究在樣本選取上具有一定的獨特性。本研究選取的樣本涵蓋了不同性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、轉移情況以及治療方式的患者，樣本的多樣性和代表性更強。在研究方法上，采用免疫組化技術檢測HJURP表達，并結合臨床資料進行全面分析，為揭示HJURP在原發性肝癌中的作用提供了更豐富的數據支持。本研究也存在一定局限性。樣本量相對較小，僅納入了50例原發性肝癌患者，可能無法完全代表所有原發性肝癌患者的情況。未來需要擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，以進一步驗證本研究結果的可靠性。本研究僅從臨床樣本和體外實驗初步探討了HJURP與原發性肝癌的關系，對于HJURP在原發性肝癌中的具體分子機制，如它如何調控相關信號通路、與其他蛋白的相互作用等，還需要深入研究。在后續研究中，可以運用基因編輯技術、蛋白質組學等方法，深入探究HJURP在原發性肝癌發生發展中的分子機制。5.3臨床應用展望本研究結果表明，HJURP在原發性肝癌組織中高表達，且與腫瘤大小、分化程度、轉移情況以及患者生存率密切相關，這使其在肝癌臨床應用中展現出巨大的潛在價值。從預后評估指標角度來看，HJURP有望成為原發性肝癌患者預后判斷的重要生物標志物。在臨床實踐中，準確評估患者的預后對于制定個性化治療方案和預測患者生存情況至關重要。目前，臨床上常用的肝癌預后評估指標如甲胎蛋白（AFP）、巴塞羅那臨床肝癌分期（BCLC）等，雖然在一定程度上能夠反映肝癌的病情，但存在局限性。AFP在部分肝癌患者中并不升高，且在其他一些良性肝臟疾病中也可能出現假陽性；BCLC分期主要基于腫瘤大小、數目、肝功能等指標，對腫瘤的生物學行為考慮不足。而HJURP的表達水平能夠直接反映肝癌細胞的惡性程度和生物學行為，與患者的生存率密切相關。將HJURP納入預后評估體系，與現有的指標相結合，能夠更全面、準確地評估患者的預后。例如，對于AFP陰性但HJURP高表達的肝癌患者，提示其腫瘤的惡性程度可能較高，預后較差，臨床醫生可據此加強隨訪和治療強度。通過多中心、大樣本的臨床研究，進一步驗證HJURP作為預后評估指標的可靠性和準確性，有望為肝癌患者的預后判斷提供更有力的依據。HJURP還具備成為肝癌治療靶點的潛力。由于HJURP在肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲以及腫瘤轉移等過程中發揮著關鍵作用，針對HJURP開發靶向治療藥物或治療策略具有重要的臨床意義。在藥物研發方面，小分子抑制劑是一種潛在的治療手段。通過高通量藥物篩選技術，尋找能夠特異性抑制HJURP表達或活性的小分子化合物。這些小分子抑制劑可以作用于HJURP基因的轉錄過程，抑制其mRNA的合成，或者與HJURP蛋白結合，阻斷其與其他蛋白的相互作用，從而抑制肝癌細胞的生長和轉移。例如，有研究針對其他腫瘤相關蛋白開發的小分子抑制劑，在臨床試驗中取得了一定的療效，為HJURP小分子抑制劑的研發提供了借鑒。抗體藥物也是一個研究方向，利用單克隆抗體技術，制備能夠特異性識別HJURP的抗體。這種抗體可以通過與HJURP結合，激活機體的免疫系統，引發免疫反應，殺傷肝癌細胞；或者通過抗體介導的細胞毒性作用（ADCC），招募免疫細胞如自然殺傷細胞（NK細胞）等，對肝癌細胞進行殺傷。除了藥物治療，基于HJURP的基因治療策略也具有廣闊的前景。采用RNA干擾（RNAi）技術，設計針對HJURP基因的小干擾RNA（siRNA），通過載體將其導入肝癌細胞內，特異性地降解HJURP的mRNA，從而抑制HJURP的表達。在動物實驗中，RNAi技術已被成功應用于抑制多種腫瘤相關基因的表達，取得了較好的抑瘤效果。基因編輯技術如CRISPR/Cas9系統也可用于靶向敲除HJURP基因，從根本上消除HJURP對肝癌細胞的影響。雖然基因治療技術在臨床應用中還面臨著諸多挑戰，如載體的安全性、基因導入效率等問題，但隨著技術的不斷發展和完善，有望為肝癌的治療帶來新的突破。基于HJURP開展肝癌精準治療具有重要的可能性和前景。通過檢測患者腫瘤組織中HJURP的表達水平，結合其他臨床病理特征和分子標志物，對患者進行精準分型。對于HJURP高表達的患者，采用針對HJURP的靶向治療方案；對于HJURP低表達的患者，則根據其他分子特征選擇合適的治療方法。這種精準治療模式能夠提高治療的針對性和有效性，減少不必要的治療副作用，為肝癌患者提供更優化的治療方案。未來，隨著對HJURP研究的不斷深入和相關技術的不斷進步，HJURP在原發性肝癌的臨床應用中必將發揮更大的作用，為肝癌的防治帶來新的希望。六、結論6.1研究成果總結本研究通過對50例原發性肝癌患者的組織樣本及其相應癌旁組織樣本的研究，明確了HJURP在原發性肝癌中的表達特點及其與臨床特征、生存率、轉移率的相關性。HJURP在原發性肝癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，陽性表達率分別為80%和30%，差異具有統計學意義。在與患者基本信息相關性方面，HJURP表達水平與患者年齡、性別無明顯相關性。在與腫瘤特征相關性上，HJURP表達與腫瘤大小、分化程度、轉移情況密切相關。腫瘤直徑≥5cm的患者中，HJURP高表達率為72%，顯著高于腫瘤直徑＜5cm患者的48%；低分化腫瘤患者中HJURP高表達率為93.3%，明顯高于高分化和中分化腫瘤患者；有轉移患者的HJURP高表達率為86.7%，遠高于無轉移患者的48.6%。在生存率和轉移率方面，HJURP高表達組患者的生存率顯著低于低表達組，3年隨訪期內，高表達組生存時間3年以上的患者僅占20%，而低表達組為40%；高表達組患者的腫瘤轉移率為43.3%，顯著高于低表達組的10%。本研究結果表明HJURP在原發性肝癌的發生發展、轉移及預后中發揮著重要作用，有望成為原發性肝癌診斷、預后評估及治療的潛在生物標志物和靶點。6.2研究不足與展望盡管本研究取得了一定成果，明確了HJURP在原發性肝癌中的表達及臨床意義，但不可避免地存在一些不足之處。本研究的樣本量相對較小，僅納入了50例原發性肝癌患者。較小的樣本量可能無法充分涵蓋原發性肝癌的各種亞型和臨床特征，存在一定的抽樣誤差，導致研究結果的代表性和普遍性受到限制。在未來的研究中，有必要擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，以增強研究結果的可靠性和說服力。通過收集來自不同地區、不同種族的原發性肝癌患者樣本，進一步驗證HJURP表達與臨床特征、生存率、轉移率之間的相關性，從而為臨床應用提供更堅實的理論基礎。本研究僅從臨床樣本和體外實驗初步探討了HJURP與原發性肝癌的關系，對于HJURP在原發性肝癌中的具體分子機制研究還不夠深入。雖然我們發現HJURP與腫瘤的增殖、轉移等過程相關，但它如何調控相關信號通路、與其他蛋白的相互作用等具體機制尚未明確。在后續研究中，可以運用基因編輯技術，如CRISPR/Cas9系統，對HJURP基因進行敲除或過表達，觀察其對肝癌細胞生物學行為的影響，并深入研究相關信號通路的變化。蛋白質組學技術也可用于全面分析HJURP高表達或低表達狀態下肝癌細胞內蛋白質的表達譜變化，篩選出與HJURP相互作用的關鍵蛋白，進一步揭示其在原發性肝癌發生發展中的分子機制。在臨床應用方面，雖然本研究表明HJURP有望成為原發性肝癌的預后評估指標和治療靶點，但目前還缺乏大規模的臨床驗證和應用研究。未來需要開展前瞻性的臨床研究，將HJURP檢測納入肝癌患者的常規診斷和治療流程，驗證其在預后評估中的準確性和可靠性。針對HJURP開發靶向治療藥物或治療策略，也需要進行深入的藥物研發和臨床試驗，評估其療效和安全性。結合其他分子標志物和臨床特征，建立基于HJURP的肝癌精準治療體系，為肝癌患者提供更個性化、更有效的治療方案，將是未來研究的重要方向。隨著研究的不斷深入和技術的不斷進步，相信HJURP在原發性肝癌的診斷、治療和預后評估等方面將發揮更大的作用，為肝癌患者帶來新的希望。七、參考文獻[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicia