pcr實驗室考試題目及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應的基本步驟不包括（）A.變性B.復性C.延伸D.轉錄答案：D2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化效率低D.易失活答案：A3.PCR引物設計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B4.以下哪種物質不是PCR反應體系的成分（）A.dNTPB.模板DNAC.限制性內切酶D.引物答案：C5.PCR實驗中，防止污染的關鍵是（）A.實驗器材消毒B.試劑質量C.分區操作D.操作人員技能答案：C6.熒光定量PCR技術不能用于（）A.基因表達分析B.病原體核酸定量C.基因克隆D.病毒載量監測答案：C7.進行PCR實驗時，通常使用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.PBSC.檸檬酸鈉D.硼酸緩沖液答案：A8.PCR反應中，復性溫度一般比引物Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃答案：B9.逆轉錄PCR可用于（）A.擴增基因組DNAB.擴增RNAC.擴增線粒體DNAD.擴增葉綠體DNA答案：B10.以下關于PCR循環數說法正確的是（）A.循環數越多越好B.一般25-35個循環C.循環數與產物量無關D.固定為40個循環答案：B二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術的應用領域包括（）A.疾病診斷B.法醫鑒定C.基因克隆D.物種進化研究答案：ABCD2.影響PCR反應的因素有（）A.模板質量B.引物濃度C.Mg2?濃度D.反應溫度答案：ABCD3.PCR實驗室分區包括（）A.試劑準備區B.樣本制備區C.擴增區D.產物分析區答案：ABCD4.以下屬于PCR引物設計原則的是（）A.長度合適B.避免形成引物二聚體C.GC含量適中D.特異性強答案：ABCD5.熒光定量PCR常用的熒光化學物質有（）A.SYBRGreenIB.FAMC.ROXD.TAMRA答案：ABCD6.PCR產物的檢測方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.熒光定量檢測答案：ABCD7.逆轉錄PCR需要的酶有（）A.逆轉錄酶B.Taq酶C.限制性內切酶D.DNA連接酶答案：AB8.以下哪些操作可防止PCR實驗室污染（）A.定期清潔消毒B.不同區域專用器材C.佩戴口罩手套D.實驗后及時清理答案：ABCD9.PCR技術中引物的作用是（）A.提供3'-OH末端B.引導DNA合成方向C.識別模板D.提高反應效率答案：ABC10.熱啟動PCR的優點有（）A.減少非特異性擴增B.提高擴增效率C.降低引物二聚體形成D.增加模板穩定性答案：ABC三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術可以擴增任意長度的DNA片段。（）答案：錯誤2.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，因此保真性較差。（）答案：正確3.引物濃度越高，PCR反應效果越好。（）答案：錯誤4.PCR實驗室不需要進行嚴格的通風換氣。（）答案：錯誤5.熒光定量PCR能對基因進行絕對定量和相對定量分析。（）答案：正確6.逆轉錄PCR是先將RNA逆轉錄為cDNA，再進行PCR擴增。（）答案：正確7.實驗中發現PCR產物條帶模糊，一定是模板質量問題。（）答案：錯誤8.PCR反應體系中，Mg2?濃度對反應無影響。（）答案：錯誤9.進行PCR實驗時，不同批次的試劑可以隨意混用。（）答案：錯誤10.PCR技術只能擴增雙鏈DNA。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR技術的基本原理。答案：PCR技術以模板DNA、引物、dNTP、Taq酶等為原料，經過高溫變性使雙鏈DNA解開為單鏈，低溫復性讓引物與模板結合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環實現特定DNA片段的大量擴增。2.說明PCR實驗室分區的意義。答案：PCR實驗室分區可有效防止交叉污染。各區域功能不同且獨立，試劑準備區避免試劑受污染，樣本制備區防止樣本間交叉污染，擴增區和產物分析區防止產物對前面環節造成污染，確保實驗結果準確性。3.簡述熒光定量PCR的原理。答案：熒光定量PCR在傳統PCR基礎上，加入熒光標記物。隨著PCR反應進行，熒光信號強度與PCR產物量呈正比。通過檢測熒光信號，利用標準曲線對起始模板進行定量分析，實現對核酸的精確定量。4.引物設計應注意哪些要點？答案：引物長度一般15-30bp；GC含量40%-60%；避免引物自身互補形成發卡結構和引物二聚體；上下游引物Tm值相差不超過5℃；引物3'端堿基最好為G或C；具有特異性，與模板結合準確。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論PCR實驗中出現非特異性擴增的原因及解決方法。答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度過低、模板復雜、Mg2?濃度過高。解決方法有重新設計引物，提高特異性；適當提高退火溫度；對模板進行純化；優化Mg2?濃度；采用熱啟動PCR減少非特異起始。2.若PCR產物電泳后無條帶，可能有哪些原因及如何解決？答案：原因有模板問題（如含量低、降解）、引物問題（設計不當、濃度低）、酶活性問題、反應條件不合適。解決辦法為重新提取高質量模板，優化引物設計和濃度，確保酶活性，調整反應溫度、時間和循環數等條件。3.談談PCR技術在臨床診斷中的應用及局限性。答案：應用于病原體檢測，如病毒、細菌；遺傳性疾病診斷；腫瘤診斷和監測。局限性在于易污染致假陽性；靈敏度高可能把微量病原體誤判為感染；對操作人員