乙肝病毒解析

---HBVlargesurfaceprotein

南昌市第八人民醫(yī)院第一頁(yè)，共二十六頁(yè)。病毒血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)直接指標(biāo)：外膜蛋白(外表抗原〕、降解或代謝產(chǎn)物蛋白、病毒核酸DNA或RNA間接指標(biāo)：各種抗體IgG、IgM等第二頁(yè)，共二十六頁(yè)。目前乙肝實(shí)驗(yàn)血清學(xué)檢測(cè)的需要狀況：指標(biāo)不少，但是缺少以下關(guān)鍵指標(biāo)1,什么是e-CHB肝炎〔e抗原陰性肝炎〕血清學(xué)指標(biāo)？２、抗病毒治療沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室終點(diǎn)指標(biāo)，臨床肝炎治療合理用藥指導(dǎo)，防止過(guò)度用藥．特別是ＤＮＡ陰性后應(yīng)該持續(xù)多長(zhǎng)時(shí)間用藥？第三頁(yè)，共二十六頁(yè)。目前臨床乙肝病毒檢測(cè)的缺陷１、HBeAg陰性肝炎(小三陽(yáng)肝炎)的血清學(xué)診斷指標(biāo)缺乏過(guò)去認(rèn)為大三陽(yáng)轉(zhuǎn)小三陽(yáng)即HBeAg的陰轉(zhuǎn)意味著乙肝病毒復(fù)制降低，傳染性減弱，但是近年國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)局部小三陽(yáng)在血清轉(zhuǎn)化〔或變異〕后病毒仍然復(fù)制，而且預(yù)后更嚴(yán)重。但是目前沒(méi)有血清免疫學(xué)指標(biāo)可以檢測(cè)小三陽(yáng)病毒攜帶者是否病毒復(fù)制！２、藥物治療效果評(píng)價(jià)血清學(xué)指標(biāo)缺乏由于HBsAg非常難轉(zhuǎn)陰，而HBVDNA轉(zhuǎn)陰停藥容易反彈，抗病毒治療缺乏終點(diǎn)指標(biāo)！第四頁(yè)，共二十六頁(yè)。抗病毒治療效果監(jiān)測(cè)臨床上缺乏評(píng)估抗病毒治療效果的指標(biāo)。以HBVDNA陰轉(zhuǎn)作為治療的終點(diǎn)不恰當(dāng)，此時(shí)停藥病情易反復(fù)。第五頁(yè)，共二十六頁(yè)。

小三陽(yáng)兩種預(yù)后病毒休眠\(yùn)不復(fù)制\預(yù)后好病毒保持復(fù)制水平\肝硬化\肝癌什么指標(biāo)能夠分辨開?第六頁(yè)，共二十六頁(yè)。抗病毒治療過(guò)程中病毒顆粒消退順序

最先消失其次消失最后消失DNA陽(yáng)性大蛋白陽(yáng)性DNA陰性大蛋白陽(yáng)性DNA陰性大蛋白陰性第七頁(yè)，共二十六頁(yè)。抗病毒治療效果監(jiān)測(cè)臨床上缺乏評(píng)估抗病毒治療效果的指標(biāo)。以HBVDNA陰轉(zhuǎn)作為治療的終點(diǎn)不恰當(dāng)，此時(shí)停藥病情易反復(fù)。第八頁(yè)，共二十六頁(yè)。

沒(méi)有指標(biāo)預(yù)示治療終點(diǎn)期望HBsAg轉(zhuǎn)陰，帶來(lái)過(guò)高期待，導(dǎo)致過(guò)度用藥，增加患者負(fù)擔(dān)以及浪費(fèi)資源；據(jù)估計(jì)每年20-40％左右的治療是“多余〞的。ＤＮＡ陰轉(zhuǎn)就停藥，導(dǎo)致過(guò)早停藥，引起病情反彈第九頁(yè)，共二十六頁(yè)。尋找比外周血DNA檢測(cè)更適宜的指標(biāo)大局部人熟悉的“乙肝兩對(duì)半〞檢測(cè)，其實(shí)并非乙肝病毒的傳染物質(zhì)和致病物，乙肝兩對(duì)半〞只能反映一個(gè)人是否感染過(guò)乙肝，卻不能直接深入地揭示乙肝病毒在人體內(nèi)的復(fù)制和致病情況，也就不能更好地指導(dǎo)臨床用藥和制訂治療方案。有效的方法──乙肝病毒DNA定量試驗(yàn)，但是外周血中DNA陰轉(zhuǎn)已經(jīng)不能作為治療終點(diǎn)還有比DNA更好的標(biāo)志物嗎第十頁(yè)，共二十六頁(yè)。HBeAg陰性活動(dòng)期肝炎HBeAg陰性活動(dòng)期肝炎臨床診斷現(xiàn)狀：(1)傳統(tǒng)“兩對(duì)半〞指標(biāo)不能反映此類患者HBV復(fù)制程度；(2)缺乏指導(dǎo)合理治療的指標(biāo)；(3)HBVDNA檢測(cè)不易于各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)廣泛開展；(4)臨床上急需能夠反映HBV復(fù)制程度及指導(dǎo)治療的血清學(xué)指標(biāo)。

第十一頁(yè)，共二十六頁(yè)。解決方案通過(guò)研制針對(duì)復(fù)雜構(gòu)象結(jié)構(gòu)的大蛋白的單抗直接檢測(cè)大蛋白反式激活域大蛋白是外周血中唯一可以檢測(cè)的病毒反式激活因子大蛋白與肝內(nèi)病毒復(fù)制密切相關(guān)，和病情反彈密切相關(guān)，是抗病毒治療的輔助終點(diǎn)指標(biāo)第十二頁(yè)，共二十六頁(yè)。大蛋白檢測(cè)可以彌補(bǔ)目前工程的缺乏

-----檢測(cè)Dane顆粒、管狀病毒顆粒大蛋白與肝內(nèi)病毒復(fù)制〔不是外周血〕密切相關(guān)用于e抗原檢測(cè)的補(bǔ)充大蛋白晚于血液內(nèi)ＤＮＡ消退，早于HBsAg消退大蛋白直接導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，直接毒性作用大蛋白具有反式激活增強(qiáng)病毒復(fù)制作用第十三頁(yè)，共二十六頁(yè)。HBV-LHBs臨床使用的意義

-----e抗原的補(bǔ)充１、病毒攜帶者體內(nèi)病毒復(fù)制確實(shí)切血清學(xué)指標(biāo)，特別是e抗原變異或轉(zhuǎn)化后可作為e抗原的補(bǔ)充。2、大蛋白具有反式激活病毒復(fù)制的能力，大蛋白存在與否可預(yù)測(cè)病情反彈，大蛋白轉(zhuǎn)陰是病毒去除的最早跡象，可以作為抗病毒治療終點(diǎn)輔助指標(biāo)。第十四頁(yè)，共二十六頁(yè)。HBV的外表抗原的組成不存在單獨(dú)前Ｓ１蛋白，前Ｓ１是大蛋白一局部第十五頁(yè)，共二十六頁(yè)。乙肝病毒包膜蛋白研究進(jìn)展1995-2004年發(fā)現(xiàn)大蛋白前S區(qū)有復(fù)雜構(gòu)象結(jié)構(gòu)，是被發(fā)現(xiàn)具有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的第一個(gè)病毒外膜蛋白1996－９８年發(fā)現(xiàn)大蛋白具有反式激活病毒復(fù)制的作用2002年發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致肝細(xì)胞病變及凋亡的主要原因是大蛋白〔致病性蛋白〕2003年Nature發(fā)表文章總結(jié)其反式激活機(jī)理2004年國(guó)際上進(jìn)行大蛋白特殊拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)研究2004年成功構(gòu)建針對(duì)構(gòu)象型表位的單克隆抗體第十六頁(yè)，共二十六頁(yè)。反式激活蛋白在同一條核酸鏈上起調(diào)控基因表達(dá)作用的核酸序列稱為順式作用元件；反式激活〔transactivation〕,既某一基因的編碼蛋白轉(zhuǎn)而激活同一基因的遠(yuǎn)離部位，或另一基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒的一些組成蛋白具有反式激活作用。第十七頁(yè)，共二十六頁(yè)。蛋白質(zhì)DNA

反式激活作用第十八頁(yè)，共二十六頁(yè)。大蛋白試劑臨床研究1、HBVDNA陽(yáng)性標(biāo)本中HBV－LP的陽(yáng)性符合率注：1阿德福韋抗病毒治療患者43例，共檢出HBVDNA陽(yáng)性152次；

2拉米夫定抗病毒治療患者51例，共檢出HBVDNA陽(yáng)性133次。第十九頁(yè)，共二十六頁(yè)。2、不同HBVDNA拷貝數(shù)中HBV－LP陽(yáng)性率以及OD值比較大蛋白試劑臨床研究注：解放軍傳染病研究所，HBVDNA拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值與HBV－LPOD值的相關(guān)系數(shù)r=0.945第二十頁(yè)，共二十六頁(yè)。大蛋白試劑臨床研究注：北京地壇醫(yī)院與沈陽(yáng)傳染病醫(yī)院匯總，其中北京地壇醫(yī)院為阿德福韋抗病毒治療患者標(biāo)本。HBVDNA拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值與HBV－LP含量〔ng〕的相關(guān)系數(shù)3、不同HBVDNA拷貝數(shù)中HBV－LP陽(yáng)性率以及含量比較r=0.935第二十一頁(yè)，共二十六頁(yè)。大蛋白試劑臨床研究第二十二頁(yè)，共二十六頁(yè)。大蛋白試劑臨床研究5、HBVDNA、HBeAg與HBV－LP三者在乙肝患者中的比較第二十三