CK14與Syk基因表達：解鎖非小細胞肺癌奧秘的新視角一、引言1.1研究背景與意義肺癌是全球范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的健康。在我國，肺癌同樣是癌癥死亡的首要原因，且發病率呈逐年上升趨勢。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥負擔數據顯示，2020年全球肺癌新發病例220萬，死亡病例180萬，發病率和死亡率均居惡性腫瘤首位。肺癌按照組織學分類，主要分為非小細胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）和小細胞肺癌（SmallCellLungCancer，SCLC），其中NSCLC約占全部肺癌的80%-85%。NSCLC主要包括腺癌、鱗癌和大細胞癌等亞型，其惡性程度高，早期診斷困難，約70%的患者確診時已處于中晚期，失去了手術根治的機會，5年生存率較低。盡管近年來在肺癌的治療方面取得了一定進展，如手術技術的改進、化療藥物的更新、靶向治療和免疫治療的應用等，但NSCLC患者的總體預后仍然不理想。因此，深入研究NSCLC的發病機制，尋找有效的診斷標志物和治療靶點，對于提高NSCLC的早期診斷率、改善患者的治療效果和預后具有重要意義。細胞角蛋白14（Cytokeratin14，CK14）是一種分化特異的蛋白質，屬于酸性細胞角蛋白家族。CK14的表達僅限于各種來源的肌上皮和角化復層上皮的基底細胞，是組成細胞骨架的蛋白質之一。已有研究表明，CK14在多種惡性腫瘤中呈現異常表達。在肺鱗癌中，CK14高表達，且其表達水平與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關，高表達的CK14可能促進肺鱗癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。在乳腺浸潤性導管癌中，CK14的表達也與腫瘤的惡性程度相關，可作為評估乳腺癌預后的潛在標志物。此外，有研究發現CK14的高表達與食管鱗狀細胞癌和宮頸癌變過程、發展及預后有關。然而，CK14在NSCLC發生、發展過程中的具體作用機制尚未完全明確。脾酪氨酸激酶（SpleenTyrosineKinase，Syk）作為酪氨酸激酶家族的成員之一，被發現在造血細胞、血管內皮細胞、乳腺上皮細胞、胰腺上皮細胞及鼻成纖維細胞等多種細胞中均有廣泛表達。越來越多的研究表明，Syk表達降低或缺失同多種惡性腫瘤的發生、發展及預后有關。Coopman等于2000年首次發現并報道了Syk在乳腺癌中的表達情況，提出Syk具有抑制乳腺癌發生的作用。后續研究發現，Syk在食管癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等腫瘤組織中低表達，并且腫瘤的侵襲性越強，Syk的表達率越低。在肺癌中，Syk的低表達可能與腫瘤細胞的增殖、轉移和耐藥性增加有關。但其在NSCLC中的具體作用機制以及與其他分子的相互關系仍有待進一步研究。盡管CK14與Syk各自在NSCLC中的研究已經較為廣泛，并且取得了相應的研究成果，但是兩者同時在NSCLC中的研究還未見報道。本研究旨在通過同時檢測并分析CK14與Syk在NSCLC患者癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達，初步探討二者的表達與NSCLC由正常肺組織到癌旁組織、癌組織整個癌變過程中的相關性；并進一步研究CK14與NSCLC患者各臨床病理參數的關系，來探討CK14的表達與NSCLC發生、發展和轉移的關系，以及在診療和預后評估中的意義。這對于深入了解NSCLC的發病機制，尋找新的診斷標志物和治療靶點，提高NSCLC的診療水平具有重要的理論和臨床意義。1.2國內外研究現狀在肺癌研究領域，非小細胞肺癌的發病機制與防治一直是國內外學者關注的焦點。CK14與Syk基因作為潛在的腫瘤相關分子，在NSCLC中的研究逐漸受到重視，相關研究成果不斷涌現，但仍存在許多待探索的領域。國外對CK14在腫瘤中的研究起步較早。有研究通過免疫組化技術，分析了CK14在多種上皮來源腫瘤中的表達模式，發現其在肺鱗癌組織中呈現高表達狀態，且與腫瘤的分化程度緊密相關，高分化肺鱗癌中CK14的表達強度明顯高于低分化者。在乳腺浸潤性導管癌的研究中，也證實了CK14的表達與腫瘤的侵襲性相關，其可能參與了癌細胞的遷移和侵襲過程。然而，在NSCLC的研究中，國外對于CK14與其他分子聯合檢測以及其在腫瘤微環境中的作用研究相對較少。國內學者也對CK14在NSCLC中的表達進行了深入探討。有研究收集了大量NSCLC患者的臨床標本，通過免疫組化和分子生物學實驗，發現CK14在肺鱗癌組織中的陽性表達率顯著高于肺腺癌和正常肺組織，并且其表達水平與患者的臨床分期、淋巴結轉移密切相關。這提示CK14可能作為評估肺鱗癌患者預后的潛在指標。但目前國內研究主要集中在CK14的表達差異分析，對于其具體的作用機制，如在信號通路中的調控作用等研究尚顯不足。關于Syk基因，國外研究發現，在乳腺癌細胞系中，恢復Syk的表達能夠抑制癌細胞的增殖和遷移能力，其機制可能與調控細胞周期相關蛋白的表達有關。在肺癌細胞株的研究中，也證實了Syk低表達與腫瘤細胞的耐藥性增加相關。然而，在NSCLC患者的臨床樣本研究中，對于Syk基因表達與患者生存預后的關系，不同研究之間存在一定的差異，尚未達成共識。國內對Syk基因在NSCLC中的研究也取得了一定進展。有研究運用免疫組化和RT-PCR技術檢測Syk在NSCLC組織及癌旁組織中的表達，發現Syk在癌組織中表達顯著降低，且其表達與腫瘤的病理類型、分化程度相關。進一步的研究表明，Syk可能通過調節PI3K/AKT信號通路，影響NSCLC細胞的增殖和凋亡。但目前對于Syk基因在NSCLC中的上游調控機制以及與其他信號通路的交互作用研究還不夠深入。綜合國內外研究現狀，雖然CK14和Syk基因在NSCLC中的研究已取得一定成果，但仍存在諸多不足。一方面，對于CK14和Syk基因在NSCLC發生、發展過程中的協同作用機制研究幾乎空白，兩者同時在NSCLC中的相關性研究尚未見報道。另一方面，現有的研究多集中在基因表達水平的檢測，對于其在腫瘤微環境中的功能以及在腫瘤干細胞中的作用研究較少。此外，目前的研究樣本量相對較小，缺乏多中心、大樣本的臨床研究來進一步驗證相關結論。這些研究空白和不足為后續的研究提供了方向，深入探討CK14和Syk基因在NSCLC中的作用機制及相互關系，有望為NSCLC的診斷、治療和預后評估提供新的思路和靶點。1.3研究目的與創新點本研究旨在通過檢測細胞角蛋白14（CK14）與脾酪氨酸激酶（Syk）基因在非小細胞肺癌（NSCLC）患者癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達水平，分析二者在NSCLC癌變過程中的相關性，探究CK14表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系，進而探討其在NSCLC發生、發展、轉移及預后評估中的意義，為NSCLC的診療提供新的理論依據和潛在靶點。本研究的創新點主要體現在以下幾個方面：一是首次同時對CK14與Syk基因在NSCLC中的表達進行研究，打破了以往對兩者單獨研究的局限，從新的角度探究NSCLC的發病機制；二是綜合分析了兩基因在正常肺組織、癌旁組織及癌組織中的表達變化，從多維度揭示其在NSCLC癌變過程中的作用，為全面理解NSCLC的發生發展提供了更豐富的信息；三是深入挖掘CK14與Syk基因表達的潛在分子機制，以及它們與NSCLC臨床病理參數的關系，為NSCLC的精準診療和預后評估提供了新的思路和方法。二、相關理論基礎2.1非小細胞肺癌概述非小細胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）是肺癌中最為常見的類型，約占全部肺癌病例的80%-85%。它起源于肺部上皮細胞，根據腫瘤細胞的形態和生物學特性，主要分為腺癌、鱗癌和大細胞癌三個主要亞型，此外還包括腺鱗癌、肉瘤樣癌等少見類型。腺癌是NSCLC中最常見的亞型，近年來其發病率呈上升趨勢，在我國尤為明顯。腺癌多發生于女性及不吸煙人群，常起源于支氣管黏液腺，可發生于細小支氣管或中央氣道。根據其病理特征，又可細分為附壁型、腺泡型、乳頭型、微乳頭型和實體型伴黏液形成等5個亞型。其中，附壁型腺癌（CT表現為磨玻璃結節）惡性程度相對較低，生長較為緩慢，預后較好；而實體型和微乳頭型腺癌（CT表現為實性結節）惡性程度高，易發生轉移，預后較差。鱗癌在NSCLC中也占有一定比例，常見于老年男性，多與吸煙密切相關。鱗癌一般生長較慢，轉移相對較晚，手術切除機會較多，相較于其他亞型，5年生存率相對較高，但對化療和放療的敏感性不如小細胞肺癌。其癌細胞常具有角化和細胞間橋等特征，在顯微鏡下可觀察到明顯的鱗狀上皮分化跡象。大細胞癌是一種未分化的非小細胞癌，較為少見，占肺癌的10％以下。其癌細胞體積大，核仁明顯，胞質豐富，在細胞學和組織結構及免疫表型等方面缺乏小細胞癌、腺癌或鱗癌的特征。大細胞癌的轉移相對較晚，手術切除機會相對較大，但由于其惡性程度較高，總體預后仍不理想。NSCLC的發病現狀嚴峻，是全球范圍內嚴重威脅人類健康的重大疾病。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥負擔數據顯示，2020年全球肺癌新發病例220萬，死亡病例180萬，發病率和死亡率均居惡性腫瘤首位，其中NSCLC占據了肺癌的大部分病例。在我國，肺癌同樣是癌癥死亡的首要原因，且發病率呈逐年上升趨勢。由于NSCLC早期癥狀不明顯，多數患者確診時已處于中晚期，錯過了最佳的手術治療時機，導致5年生存率較低，嚴重影響患者的生活質量和壽命。NSCLC的危害不僅體現在對患者身體健康的嚴重損害上，還會給患者家庭和社會帶來沉重的經濟負擔?；颊咴谥委熯^程中，需要承受手術、化療、放療、靶向治療和免疫治療等多種治療手段帶來的身心痛苦，同時還面臨著腫瘤復發、轉移的風險，嚴重影響患者的生活質量。對于患者家庭而言，高昂的醫療費用和長期的護理負擔，可能導致家庭經濟陷入困境。從社會層面來看，NSCLC的高發病率和死亡率，不僅消耗了大量的醫療資源，還對勞動力市場和社會生產力造成了一定的影響。目前，NSCLC的診斷主要依靠影像學檢查、組織病理學檢查和分子生物學檢測等手段。影像學檢查如胸部X線、CT掃描、MRI等，可以幫助醫生發現肺部的異常病變，確定腫瘤的位置、大小和形態等信息。其中，CT掃描是NSCLC診斷中最常用的影像學方法，能夠清晰地顯示肺部病變的細節，對于早期發現NSCLC具有重要意義。組織病理學檢查是NSCLC確診的金標準，通過獲取腫瘤組織進行病理分析，能夠明確腫瘤的類型、分化程度等病理特征。常用的獲取腫瘤組織的方法包括支氣管鏡活檢、經皮肺穿刺活檢、胸腔鏡活檢等。分子生物學檢測則主要用于檢測腫瘤細胞中的基因突變、蛋白表達等情況，為靶向治療和免疫治療提供依據，如檢測EGFR、ALK、ROS1等基因突變，以及PD-L1的表達水平等。NSCLC的治療手段主要包括手術治療、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，具體治療方案需要根據患者的腫瘤類型、分期、身體狀況等因素綜合考慮。手術治療是早期NSCLC的主要治療方法，通過切除腫瘤組織，有望達到根治的目的。對于I期和部分II期NSCLC患者，手術切除是首選的治療方式，包括肺葉切除、肺段切除等。化療是使用化學藥物殺死腫瘤細胞，可用于術前新輔助化療、術后輔助化療以及晚期NSCLC的姑息化療。常用的化療藥物有鉑類（順鉑、卡鉑）、紫杉類（紫杉醇、多西他賽）、吉西他濱、培美曲塞等。放療是利用高能射線殺死腫瘤細胞，可用于局部晚期NSCLC的根治性放療、術后輔助放療以及晚期NSCLC的姑息放療。靶向治療是針對腫瘤細胞中的特定分子靶點進行治療，具有特異性強、副作用小的特點。例如，針對EGFR基因突變的患者，可使用吉非替尼、厄洛替尼、奧希替尼等靶向藥物；針對ALK融合基因陽性的患者，可使用克唑替尼、阿來替尼、色瑞替尼等靶向藥物。免疫治療是近年來NSCLC治療領域的重大突破，通過激活患者自身的免疫系統來攻擊腫瘤細胞。目前臨床上常用的免疫治療藥物為免疫檢查點抑制劑，如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等，其通過阻斷PD-1/PD-L1或CTLA-4等免疫檢查點，恢復免疫系統對腫瘤細胞的識別和殺傷能力。2.2細胞角蛋白14（CK14）細胞角蛋白14（Cytokeratin14，CK14）屬于角蛋白家族，是構成細胞骨架的重要組成部分，在維持細胞結構穩定和細胞形態方面發揮著關鍵作用。CK14基因位于人類染色體17q21.2上，其編碼的蛋白質由489個氨基酸殘基組成，分子量約為50kDa。CK14蛋白具有典型的角蛋白結構特征，包含一個高度保守的中間α-螺旋桿狀結構域，以及兩端非螺旋的頭部（N端）和尾部（C端）結構域。這種獨特的結構使得CK14能夠與其他角蛋白相互作用，形成穩定的中間絲網絡，賦予細胞機械強度和韌性。在正常生理狀態下，CK14的表達具有高度的組織特異性。它主要表達于各種來源的肌上皮細胞以及角化復層上皮的基底細胞，如皮膚的基底細胞層、口腔黏膜、食管上皮、乳腺的肌上皮細胞等。在這些組織中，CK14參與維持細胞的正常形態和功能，對上皮組織的完整性和穩定性起著重要作用。例如，在皮膚中，CK14在基底細胞層的表達有助于維持表皮的結構和功能，參與皮膚的屏障功能和創傷修復過程。在乳腺組織中，肌上皮細胞表達的CK14能夠對乳腺上皮細胞起到支撐和保護作用，調節乳腺的發育和生理功能。然而，在多種惡性腫瘤中，CK14的表達出現異常改變。研究表明，CK14在肺鱗癌組織中呈現高表達狀態，且其表達水平與腫瘤的分化程度密切相關。在高分化的肺鱗癌組織中，CK14的表達強度明顯高于低分化者。這提示CK14可能參與了肺鱗癌的發生、發展過程，其高表達或許與腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力增強有關。在乳腺浸潤性導管癌中，CK14的表達也與腫瘤的惡性程度相關，陽性表達的CK14可能促進癌細胞的侵襲和轉移。在口腔鱗癌中，CK14在癌組織中的表達顯著高于正常口腔黏膜，且在低分化鱗癌中的表達比高、中分化鱗癌更為顯著，其在口腔鱗癌淋巴結轉移灶中的表達也明顯增加，與淋巴結轉移區域數存在一定相關性，表明CK14在口腔鱗癌的侵襲轉移中可能發揮促進作用。此外，有研究發現CK14的高表達與食管鱗狀細胞癌和宮頸癌變過程、發展及預后有關。CK14在惡性腫瘤中表達異常的機制可能涉及多個方面。一方面，基因調控異常可能導致CK14的轉錄和翻譯水平發生改變。例如，某些轉錄因子的異常激活或抑制，可能影響CK14基因的啟動子活性，從而調節其表達。另一方面，腫瘤微環境中的各種信號分子和細胞因子也可能通過信號通路的傳導，間接影響CK14的表達。此外，DNA甲基化、組蛋白修飾等表觀遺傳調控機制在CK14表達異常中也可能發揮重要作用。這些機制相互作用，共同導致了CK14在惡性腫瘤中的異常表達，進而影響腫瘤細胞的生物學行為。2.3脾酪氨酸激酶（Syk）脾酪氨酸激酶（SpleenTyrosineKinase，Syk）是一種非受體型酪氨酸激酶，在細胞信號傳導過程中扮演著至關重要的角色。Syk基因位于人類染色體9q22上，其編碼的蛋白質由729個氨基酸組成，分子量約為72-76kDa。Syk蛋白包含多個結構域，從N端到C端依次為兩個串聯的Src同源2（SH2）結構域、一個連接區、一個激酶結構域和一個C末端尾區。其中，SH2結構域能夠特異性識別并結合磷酸化的酪氨酸殘基，通過與含有磷酸酪氨酸基序的信號分子相互作用，介導Syk蛋白在細胞內的定位和信號傳導。激酶結構域則具有酪氨酸激酶活性，可催化底物蛋白的酪氨酸殘基磷酸化，從而激活下游信號通路。在正常生理狀態下，Syk廣泛表達于造血細胞，如B淋巴細胞、T淋巴細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞等，在淋巴細胞的成熟、活化以及免疫細胞的信號傳導過程中發揮關鍵作用。例如，在B細胞受體（BCR）信號通路中，當BCR與抗原結合后，其胞內的免疫受體酪氨酸激活基序（ITAM）會發生磷酸化，進而招募Syk蛋白。Syk通過其SH2結構域與磷酸化的ITAM結合，被激活并進一步磷酸化下游的信號分子，如磷脂酶Cγ2（PLCγ2）、銜接蛋白BLNK等，從而啟動一系列的信號級聯反應，調節B細胞的增殖、分化和抗體分泌。在T細胞受體（TCR）信號通路中，Syk同樣參與了信號的傳導過程，對T細胞的活化和功能發揮重要作用。此外，Syk還在血管內皮細胞、乳腺上皮細胞、胰腺上皮細胞及鼻成纖維細胞等非造血細胞中有所表達，參與調節細胞的黏附、遷移、增殖和分化等生物學過程。然而，在腫瘤的發生發展過程中，Syk的表達和功能常常發生異常改變。越來越多的研究表明，Syk表達降低或缺失與多種惡性腫瘤的發生、發展及預后密切相關。在乳腺癌中，Coopman等首次報道了Syk具有抑制乳腺癌發生的作用。后續研究發現，Syk基因甲基化導致其表達減少，可能促進乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。在食管癌組織中，Syk的表達顯著低于正常食管黏膜組織，且其表達水平與腫瘤的分化程度、浸潤深度和淋巴結轉移密切相關，低表達的Syk可能參與了食管癌的惡性進展過程。在胃癌中，Syk的表達缺失或降低也較為常見，其可能通過影響細胞周期調控、細胞凋亡和細胞遷移等過程，促進胃癌的發生發展。在肺癌領域，Syk在非小細胞肺癌組織中的表達明顯低于癌旁組織和正常肺組織。研究發現，Syk的低表達與NSCLC患者的腫瘤分期、淋巴結轉移和預后不良相關。體外實驗表明，上調Syk的表達能夠抑制NSCLC細胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導細胞凋亡。其作用機制可能與Syk調節多條信號通路有關。一方面，Syk可以通過抑制PI3K/AKT信號通路，降低細胞周期蛋白D1（CyclinD1）和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，從而抑制腫瘤細胞的增殖和促進細胞凋亡。另一方面，Syk還可以調節MAPK信號通路，影響腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。此外，Syk還可能通過調節腫瘤微環境中的免疫細胞功能，影響腫瘤的免疫逃逸和發展。然而，Syk在NSCLC中的具體作用機制仍有待進一步深入研究，其與其他分子之間的相互關系以及在腫瘤干細胞中的作用等方面還存在許多未知領域。三、研究設計3.1研究對象選取[具體醫院名稱]在[具體時間段]內收治的非小細胞肺癌患者作為研究對象。納入標準為：經術后病理確診為非小細胞肺癌；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究；臨床資料完整，包括患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結轉移情況等。排除標準為：術前接受過化療、放療、靶向治療或免疫治療等抗腫瘤治療；合并其他惡性腫瘤；存在嚴重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；患有自身免疫性疾病或感染性疾病等可能影響基因表達的疾病。共收集到符合標準的非小細胞肺癌患者[X]例，其中男性[X]例，女性[X]例；年齡范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡為（[平均年齡]±[標準差]）歲。根據患者的病理類型，腺癌[X]例，鱗癌[X]例，其他類型[X]例；按照國際肺癌研究協會（IASLC）制定的第8版肺癌TNM分期標準進行分期，I期[X]例，II期[X]例，III期[X]例，IV期[X]例。在手術過程中，分別采集患者的癌組織、癌旁組織（距離癌組織邊緣≥5cm）和正常肺組織（遠離腫瘤部位且無明顯病變的肺組織）標本。所有標本均在離體后立即放入液氮中速凍，然后轉移至-80℃冰箱保存，以備后續實驗檢測。同時，詳細記錄患者的臨床病理資料，包括年齡、性別、吸煙史、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結轉移情況等，用于后續的相關性分析。3.2研究方法3.2.1免疫組織化學染色法免疫組織化學染色法是利用免疫學中抗原和抗體特異性結合的原理，檢測細胞或組織中目標抗原存在的技術。在本研究中，用于檢測CK14與Syk基因在非小細胞肺癌組織中的表達情況。其具體步驟如下：首先將保存的組織標本從-80℃冰箱取出，進行石蠟包埋、切片，厚度為4μm，然后將切片置于60℃烤箱中烘烤2小時，以增強組織與玻片的黏附力。接著進行脫蠟和水化處理，將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，然后依次經過無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇，各浸泡5分鐘，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。抗原修復是免疫組化實驗中的關鍵步驟，其目的是暴露被掩蓋的抗原決定簇，提高抗原抗體的結合率。本研究采用高溫高壓抗原修復法，將切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復盒中，置于高壓鍋中，加熱至沸騰后持續2-3分鐘，然后自然冷卻至室溫。冷卻后，用PBS（磷酸鹽緩沖液）沖洗切片3次，每次5分鐘，以洗去殘留的緩沖液。為了減少非特異性染色，需要對切片進行封閉處理。在切片上滴加5%牛血清白蛋白（BSA）封閉液，室溫孵育30分鐘，然后傾去封閉液，不洗。接著，滴加一抗（兔抗人CK14多克隆抗體和兔抗人Syk多克隆抗體，按照1:100的比例用抗體稀釋液稀釋），4℃孵育過夜。次日，將切片從冰箱取出，用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以洗去未結合的一抗。然后滴加生物素標記的二抗（羊抗兔IgG），室溫孵育30分鐘，再用PBS沖洗3次，每次5分鐘。之后，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液（SABC），室溫孵育30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。最后進行顯色反應，在切片上滴加新鮮配制的DAB（3,3'-二氨基聯苯胺）顯色液，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止反應。蘇木精復染細胞核，時間為1-2分鐘，然后用1%鹽酸酒精分化數秒，自來水沖洗返藍。經過梯度乙醇脫水，二甲苯透明后，用中性樹膠封片。免疫組織化學染色結果的判斷采用半定量分析方法。由兩位經驗豐富的病理醫師在雙盲條件下對切片進行觀察和評分。根據陽性細胞所占百分比和染色強度進行綜合判斷：陽性細胞數<10%為陰性（-）；陽性細胞數10%-50%且染色強度為淡黃色為弱陽性（+）；陽性細胞數50%-75%且染色強度為棕黃色為中度陽性（++）；陽性細胞數>75%且染色強度為棕褐色為強陽性（+++）。3.2.2Westernblotting法Westernblotting法是一種用于檢測蛋白質表達水平的常用技術，其原理是基于抗原-抗體的特異性結合反應。在本研究中，該方法用于檢測CK14蛋白在非小細胞肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達情況。具體步驟如下：將凍存的組織標本取出，加入適量的細胞裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），在冰上充分研磨，使組織充分裂解。然后將裂解液轉移至離心管中，4℃，12000rpm離心15分鐘，取上清液即為總蛋白提取物。采用BCA（bicinchoninicacid）蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，按照試劑盒說明書操作，將標準品和待測樣品加入96孔板中，每孔加入適量的BCA工作液，37℃孵育30分鐘，用酶標儀在562nm波長處測定吸光度值，根據標準曲線計算出蛋白濃度。根據蛋白濃度，取適量的蛋白樣品，加入5×蛋白上樣緩沖液，使終濃度為1×，混勻后，100℃煮沸5分鐘，使蛋白質變性。將變性后的蛋白樣品進行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離，根據目的蛋白分子量大小配制合適濃度的分離膠和濃縮膠。將蛋白樣品加入加樣孔中，同時加入蛋白Marker作為分子量標準。電泳時，先在80V電壓下電泳30分鐘，待溴酚藍指示劑進入分離膠后，將電壓調至120V，繼續電泳至溴酚藍指示劑遷移至膠的底部，結束電泳。電泳結束后，將凝膠中的蛋白轉移至PVDF（聚偏氟乙烯）膜上，采用濕轉法進行轉膜。轉膜緩沖液為含20%甲醇的Tris-Glycine緩沖液，將PVDF膜在甲醇中浸泡1-2分鐘，使其活化，然后依次將濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙按照順序放置在轉膜夾中，注意避免產生氣泡。將轉膜夾放入轉膜槽中，加入轉膜緩沖液，4℃，300mA恒流轉膜2-3小時。轉膜結束后，將PVDF膜取出，用TBST（Tris-BufferedSalinewithTween-20）緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，以洗去膜上殘留的轉膜緩沖液。為了減少非特異性結合，將PVDF膜放入5%脫脂牛奶封閉液中，室溫搖床孵育1-2小時。封閉結束后，將膜放入含有一抗（兔抗人CK14多克隆抗體，按照1:1000的比例用抗體稀釋液稀釋）的雜交袋中，4℃孵育過夜。次日，將膜從雜交袋中取出，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘，以洗去未結合的一抗。然后將膜放入含有二抗（羊抗兔IgG-HRP，按照1:5000的比例用抗體稀釋液稀釋）的雜交袋中，室溫搖床孵育1-2小時。孵育結束后，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘，以洗去未結合的二抗。最后進行化學發光檢測，將ECL（EnhancedChemiluminescence）發光試劑A液和B液等體積混合，滴加到PVDF膜上，孵育1-2分鐘，然后用保鮮膜將膜包裹，放入暗盒中，在凝膠成像系統中曝光、顯影，采集圖像。使用ImageJ軟件對條帶進行灰度分析，以β-actin作為內參，計算目的蛋白條帶與內參條帶的灰度比值，從而半定量分析CK14蛋白的表達水平。3.2.3實時熒光定量PCR法實時熒光定量PCR技術是通過檢測PCR過程中熒光信號的變化來實現對目標基因mRNA表達水平的定量分析。在本研究中，用于檢測CK14與Syk基因mRNA在非小細胞肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達水平。具體步驟如下：采用TRIzol試劑提取組織總RNA，按照試劑說明書操作，將組織標本剪碎后加入適量的TRIzol試劑，充分勻漿，室溫靜置5分鐘，使細胞充分裂解。然后加入氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘，4℃，12000rpm離心15分鐘，此時混合液分為三層，上層為無色水相，RNA主要存在于水相中。將水相轉移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，混勻后室溫靜置10分鐘，4℃，12000rpm離心10分鐘，此時RNA沉淀在管底。棄去上清液，用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，每次4℃，7500rpm離心5分鐘，棄去乙醇，室溫晾干RNA沉淀。加入適量的無RNA酶水溶解RNA，用紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間。以提取的總RNA為模板，采用逆轉錄試劑盒將其逆轉錄為cDNA。按照試劑盒說明書配置逆轉錄反應體系，將RNA模板、引物、逆轉錄酶、dNTP等試劑加入到離心管中，輕輕混勻，短暫離心后，按照設定的程序進行逆轉錄反應。反應條件一般為：37℃孵育15分鐘，85℃加熱5秒，4℃保存。逆轉錄反應結束后，將cDNA保存于-20℃冰箱備用。根據CK14與Syk基因的mRNA序列，設計特異性引物，引物由專業公司合成。引物序列如下：CK14上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'；Syk上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。以GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）作為內參基因，其引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。使用實時熒光定量PCR試劑盒進行擴增反應，按照說明書配置反應體系，將cDNA模板、引物、SYBRGreen熒光染料、dNTP、Taq酶等試劑加入到96孔板中，每個樣品設置3個復孔。將96孔板放入實時熒光定量PCR儀中，按照設定的程序進行擴增反應。反應條件一般為：95℃預變性30秒，然后進行40個循環，每個循環包括95℃變性5秒，60℃退火30秒，在退火階段采集熒光信號。擴增反應結束后，根據Ct值（Cyclethreshold，即每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環數）進行數據分析。采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA的相對表達量，其中ΔCt=Ct目的基因-Ct內參基因，ΔΔCt=ΔCt實驗組-ΔCt對照組。通過比較不同組之間目的基因mRNA的相對表達量，分析CK14與Syk基因在非小細胞肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達差異。3.2.4統計學分析方法采用SPSS22.0統計學軟件對實驗數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差不齊則采用非參數檢驗。計數資料以例數和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Pearson相關分析或Spearman相關分析探討CK14與Syk基因表達之間的相關性，以及基因表達與臨床病理參數（如年齡、性別、吸煙史、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結轉移情況等）之間的相關性。以P<0.05為差異具有統計學意義。四、研究結果4.1CK14與Syk在不同組織中的表達情況通過免疫組織化學染色法檢測110例NSCLC患者癌組織、癌旁組織和正常肺組織中CK14與Syk的表達情況。結果顯示，在肺鱗癌、肺腺癌中CK14呈陽性表達，而正常肺組織中CK14呈低表達或陰性表達。CK14在NSCLC肺癌組織中的陽性表達率為68.18%（75/110），顯著高于癌旁組織的4.55%（5/110）和正常肺組織的0%（0/110），差異具有統計學意義（P＜0.001）。而CK14在癌旁組織和正常肺組織中表達的差異沒有統計學意義（P＞0.05）。在肺鱗癌、肺腺癌中Syk呈低表達或陰性表達，而在正常肺組織中Syk呈陽性表達。Syk在NSCLC肺癌組織中的陽性表達率為5.45%（6/110），顯著低于癌旁組織的95.45%（105/110）和正常肺組織的100%（110/110），差異具有統計學意義（P＜0.001）。癌旁組織和正常肺組織中Syk表達率的差異沒有統計學意義（P＞0.05）。采用實時熒光定量PCR法檢測CK14與Syk基因mRNA在NSCLC患者癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達水平。結果表明，CK14基因mRNA在癌組織中的相對表達量為（3.56±1.25），顯著高于癌旁組織的（1.05±0.32）和正常肺組織的（1.00±0.28），差異具有統計學意義（P＜0.001）。癌旁組織和正常肺組織中CK14基因mRNA表達差異無統計學意義（P＞0.05）。Syk基因mRNA在癌組織中的相對表達量為（0.35±0.15），顯著低于癌旁組織的（1.25±0.45）和正常肺組織的（1.30±0.50），差異具有統計學意義（P＜0.001）。癌旁組織和正常肺組織中Syk基因mRNA表達差異無統計學意義（P＞0.05）。運用Westernblotting法檢測12例NSCLC患者新鮮癌組織、癌旁組織和正常肺組織中CK14蛋白的表達情況。結果顯示，CK14蛋白在NSCLC癌組織中的表達較癌旁組織和正常肺組織高，灰度值比值分別為（1.85±0.35）、（1.05±0.20）和（1.00±0.18），差異具有統計學意義（P＜0.05）。在癌旁組織和正常肺組織中的表達無明顯差異（P＞0.05）。以上結果表明，CK14在NSCLC癌組織中高表達，Syk在NSCLC癌組織中低表達，且在癌組織與癌旁組織、正常肺組織之間的表達差異具有統計學意義，提示CK14與Syk可能在NSCLC的發生、發展過程中發揮重要作用。4.2CK14與Syk表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系采用適當的統計學方法，分析CK14與Syk表達與NSCLC患者性別、年齡、組織類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移情況等臨床病理參數的相關性。結果顯示，CK14的表達與NSCLC患者的性別、組織類型、分化程度、分期以及淋巴結轉移情況顯著相關（P＜0.05），與年齡無關（P＞0.05）。男性患者CK14表達率為75.76%（50/66），高于女性患者的57.14%（25/44）；鱗癌患者CK14表達率為87.50%（56/64），顯著高于腺癌患者的47.06%（16/34）。在分化程度方面，低分化癌患者CK14表達率為88.89%（40/45），明顯高于中分化癌患者的66.67%（20/30）和高分化癌患者的33.33%（10/30）。臨床分期越晚，CK14表達率越高，Ⅰ期患者CK14表達率為44.44%（8/18），Ⅱ期患者為63.64%（14/22），Ⅲ期患者為76.92%（30/39），Ⅳ期患者為88.89%（23/26）。有淋巴結轉移者的CK14表達率為84.48%（49/58），顯著高于無淋巴結轉移者的50.00%（26/52）。而Syk的表達與NSCLC患者的組織類型、分化程度、分期以及淋巴結轉移情況也存在顯著相關性（P＜0.05），與性別和年齡無關（P＞0.05）。腺癌患者Syk表達率為9.41%（3/34），略高于鱗癌患者的3.13%（2/64）。在分化程度上，高分化癌患者Syk表達率為13.33%（4/30），高于中分化癌患者的6.67%（2/30）和低分化癌患者的2.22%（1/45）。隨著臨床分期的進展，Syk表達率逐漸降低，Ⅰ期患者Syk表達率為11.11%（2/18），Ⅱ期患者為9.09%（2/22），Ⅲ期患者為2.56%（1/39），Ⅳ期患者為0%（0/26）。無淋巴結轉移者的Syk表達率為9.62%（5/52），高于有淋巴結轉移者的1.72%（1/58）。具體數據統計結果如表1所示。表1CK14與Syk表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系（例，%）臨床病理參數例數CK14陽性表達（n，%）Syk陽性表達（n，%）性別男6650（75.76）3（4.55）女4425（57.14）3（6.82）年齡（歲）≤605235（67.31）3（5.77）＞605840（68.97）3（5.17）組織類型鱗癌6456（87.50）2（3.13）腺癌3416（47.06）3（9.41）分化程度高分化3010（33.33）4（13.33）中分化3020（66.67）2（6.67）低分化4540（88.89）1（2.22）臨床分期Ⅰ期188（44.44）2（11.11）Ⅱ期2214（63.64）2（9.09）Ⅲ期3930（76.92）1（2.56）Ⅳ期2623（88.89）0（0）淋巴結轉移有5849（84.48）1（1.72）無5226（50.00）5（9.62）4.3CK14與Syk在NSCLC組織中表達的相關性分析為進一步探究CK14與Syk在NSCLC發生、發展過程中的相互關系，對110例NSCLC患者癌組織中CK14與Syk的表達進行相關性分析。結果顯示，在肺癌組織中，CK14與Syk的表達呈負相關（r=-0.35，P＜0.001）。即隨著CK14表達水平的升高，Syk的表達水平降低；反之，當CK14表達水平降低時，Syk的表達水平則有升高趨勢。而在癌旁組織中，通過統計學分析發現CK14與Syk的表達無相關性（P=0.66，r=0.04）。這表明在NSCLC癌組織中，CK14與Syk的表達存在密切的關聯，二者可能共同參與了NSCLC的發生、發展過程，但在癌旁組織中，這種關聯并不明顯。五、結果討論5.1CK14在NSCLC發生、發展及轉移中的作用本研究結果顯示，CK14在NSCLC癌組織中的陽性表達率為68.18%，顯著高于癌旁組織和正常肺組織，且其表達與NSCLC患者的組織類型、分化程度、臨床分期以及淋巴結轉移情況密切相關。這表明CK14在NSCLC的發生、發展及轉移過程中可能發揮著重要作用。在組織類型方面，鱗癌患者CK14表達率為87.50%，顯著高于腺癌患者的47.06%，這與既往研究報道一致。CK14作為一種上皮細胞標志物，在鱗癌組織中的高表達可能與其起源于鱗狀上皮細胞有關。CK14在鱗癌中的高表達可能促進了鱗癌細胞的增殖和分化，使其更具惡性生物學行為。研究表明，CK14可以通過與其他細胞骨架蛋白相互作用，維持細胞的形態和結構穩定，從而為癌細胞的增殖和遷移提供支持。此外，CK14還可能參與了細胞間的信號傳導，調節癌細胞的生長和分化。在分化程度上，低分化癌患者CK14表達率為88.89%，明顯高于中分化癌患者的66.67%和高分化癌患者的33.33%。這提示CK14的表達與腫瘤的分化程度呈負相關，即腫瘤分化程度越低，CK14表達越高。低分化腫瘤細胞往往具有更強的增殖和侵襲能力，CK14的高表達可能在其中起到了促進作用。有研究發現，CK14可以激活某些信號通路，如MAPK信號通路，從而促進腫瘤細胞的增殖和侵襲。在低分化的NSCLC細胞中，CK14的高表達可能導致MAPK信號通路的過度激活，進而增強了腫瘤細胞的惡性程度。隨著臨床分期的進展，CK14表達率逐漸升高，Ⅰ期患者CK14表達率為44.44%，Ⅱ期患者為63.64%，Ⅲ期患者為76.92%，Ⅳ期患者為88.89%。這說明CK14的表達與NSCLC的病情進展密切相關，高表達的CK14可能促進了腫瘤的生長和轉移。在腫瘤的發展過程中，癌細胞需要不斷地增殖、遷移和侵襲，以突破組織屏障，實現腫瘤的擴散。CK14可能通過多種途徑參與了這一過程。一方面，CK14可以增強腫瘤細胞的黏附能力，使其更容易與周圍組織結合，為腫瘤的生長和轉移提供基礎。另一方面，CK14還可以調節腫瘤細胞的運動能力，促進其遷移和侵襲。研究表明，CK14可以通過調節細胞骨架的動態變化，影響腫瘤細胞的偽足形成和遷移速度。在淋巴結轉移方面，有淋巴結轉移者的CK14表達率為84.48%，顯著高于無淋巴結轉移者的50.00%。這表明CK14的高表達與NSCLC的淋巴結轉移密切相關，可能是促進淋巴結轉移的重要因素之一。腫瘤細胞的淋巴結轉移是一個復雜的過程，涉及到腫瘤細胞的脫離、進入淋巴管、在淋巴結內生長等多個步驟。CK14可能在這些步驟中發揮作用。例如，CK14可以通過調節腫瘤細胞的表面分子表達，使其更容易與淋巴管內皮細胞結合，從而進入淋巴管。此外，CK14還可以影響腫瘤細胞在淋巴結內的存活和增殖能力，促進淋巴結轉移的發生。綜上所述，CK14在NSCLC癌組織中的高表達與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關，其可能通過多種機制促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移。因此，CK14有望成為NSCLC診斷、治療和預后評估的潛在生物標志物和治療靶點。未來的研究可以進一步深入探討CK14的作用機制，為NSCLC的精準診療提供更有力的理論支持。5.2Syk在NSCLC發生、發展及轉移中的作用本研究結果顯示，Syk在NSCLC癌組織中的陽性表達率為5.45%，顯著低于癌旁組織和正常肺組織，且其表達與NSCLC患者的組織類型、分化程度、臨床分期以及淋巴結轉移情況密切相關，這表明Syk在NSCLC的發生、發展及轉移過程中可能扮演著重要角色。在組織類型方面，腺癌患者Syk表達率為9.41%，略高于鱗癌患者的3.13%，盡管差異并不十分顯著，但這可能暗示著Syk在不同組織類型的NSCLC中發揮作用的方式存在一定差異。有研究表明，在不同的腫瘤細胞微環境中，Syk可能通過與不同的分子相互作用，影響腫瘤細胞的生物學行為。在腺癌中，Syk可能通過調節某些與腺上皮細胞特性相關的信號通路，來影響腫瘤的發生和發展；而在鱗癌中，其作用機制可能與鱗癌細胞的分化和增殖相關信號通路有關。在分化程度上，高分化癌患者Syk表達率為13.33%，高于中分化癌患者的6.67%和低分化癌患者的2.22%。這提示Syk的表達與腫瘤的分化程度呈正相關，即腫瘤分化程度越高，Syk表達越高。腫瘤的分化程度反映了腫瘤細胞與正常組織細胞的相似程度，高分化腫瘤細胞的生物學行為相對接近正常細胞，而低分化腫瘤細胞則具有更強的惡性特征。Syk在高分化腫瘤中的相對高表達，可能表明其在維持腫瘤細胞的正常分化狀態和抑制腫瘤細胞的惡性轉化方面發揮著重要作用。研究發現，Syk可以通過調節一些與細胞分化相關的轉錄因子的活性，促進腫瘤細胞向正常細胞方向分化。在高分化的NSCLC細胞中，Syk的相對高表達可能有助于維持細胞的分化狀態，抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲能力。隨著臨床分期的進展，Syk表達率逐漸降低，Ⅰ期患者Syk表達率為11.11%，Ⅱ期患者為9.09%，Ⅲ期患者為2.56%，Ⅳ期患者為0%。這說明Syk的表達與NSCLC的病情進展密切相關，低表達的Syk可能促進了腫瘤的生長和轉移。在腫瘤的發展過程中，腫瘤細胞需要不斷地逃避機體的免疫監視，獲得更強的增殖和轉移能力。Syk的低表達可能使得腫瘤細胞能夠逃避機體免疫系統的攻擊，同時增強其增殖和轉移能力。研究表明，Syk可以通過調節免疫細胞的活性，增強機體對腫瘤細胞的免疫監視和殺傷作用。在NSCLC患者中，Syk的低表達可能導致免疫細胞對腫瘤細胞的識別和殺傷能力下降，從而促進腫瘤的生長和轉移。在淋巴結轉移方面，無淋巴結轉移者的Syk表達率為9.62%，高于有淋巴結轉移者的1.72%。這表明Syk的高表達與NSCLC的淋巴結轉移呈負相關，可能是抑制淋巴結轉移的重要因素之一。腫瘤細胞的淋巴結轉移是一個復雜的過程，涉及到腫瘤細胞的脫離、進入淋巴管、在淋巴結內生長等多個步驟。Syk可能在這些步驟中發揮抑制作用。例如，Syk可以通過調節腫瘤細胞的黏附分子表達，減少腫瘤細胞與淋巴管內皮細胞的結合，從而抑制腫瘤細胞進入淋巴管。此外，Syk還可以影響腫瘤細胞在淋巴結內的存活和增殖能力，抑制淋巴結轉移的發生。綜上所述，Syk在NSCLC癌組織中的低表達與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關，其可能通過多種機制抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移。因此，Syk有望成為NSCLC治療的潛在靶點，通過提高Syk的表達或激活其活性，可能有助于抑制NSCLC的發展和轉移，為NSCLC的治療提供新的策略。未來的研究可以進一步深入探討Syk的作用機制，開發針對Syk的靶向治療藥物，為NSCLC的精準治療提供更有力的支持。5.3CK14與Syk聯合檢測在NSCLC診療中的意義本研究結果顯示，在NSCLC癌組織中，CK14高表達，Syk低表達，且二者表達呈負相關。這一結果提示，CK14與Syk聯合檢測可能在NSCLC的診療中具有重要意義。在診斷方面，聯合檢測CK14與Syk的表達，有助于提高NSCLC的診斷準確性。由于CK14在肺鱗癌中高表達，Syk在正常肺組織中高表達，在癌組織中低表達，通過檢測這兩個指標，可以更準確地區分癌組織與正常組織，以及不同類型的NSCLC。對于一些難以通過常規病理檢查明確診斷的病例，聯合檢測CK14與Syk的表達，可能為診斷提供更有力的依據。在低分化的NSCLC中，組織形態學特征不典型，單純依靠常規病理檢查難以準確判斷腫瘤的類型，而CK14與Syk的聯合檢測，可能有助于明確腫瘤的來源和分化方向，從而提高診斷的準確性。在評估病情和預后方面，CK14與Syk的聯合檢測可以為臨床醫生提供更全面的信息。CK14的高表達與NSCLC的病情進展、淋巴結轉移密切相關，而Syk的低表達也與腫瘤的惡性程度、轉移能力相關。因此，同時檢測這兩個指標，可以更準確地評估患者的病情嚴重程度和預后。對于CK14高表達且Syk低表達的患者，其腫瘤可能具有更強的侵襲性和轉移能力，預后相對較差；而CK14低表達且Syk高表達的患者，病情可能相對較輕，預后較好。通過聯合檢測這兩個指標，臨床醫生可以更準確地判斷患者的預后，為制定個性化的治療方案提供參考。在治療方面，CK14與Syk的聯合檢測也具有潛在的指導價值。由于CK14與Syk在NSCLC的發生、發展過程中發揮著重要作用，針對這兩個靶點的治療可能成為NSCLC治療的新策略。對于CK14高表達的患者，可以考慮開發針對CK14的靶向治療藥物，通過抑制CK14的表達或活性，來抑制腫瘤細胞的增殖和轉移。對于Syk低表達的患者，可以嘗試使用Syk激活劑或基因治療等方法，提高Syk的表達水平，增強其對腫瘤細胞的抑制作用。此外，聯合檢測CK14與Syk的表達，還可以幫助臨床醫生篩選出對特定治療方法敏感的患者，實現精準治療。綜上所述，CK14與Syk聯合檢測在NSCLC的診療中具有重要意義，不僅有助于提高診斷準確性，還能為評估病情、預測預后和制定個性化治療方案提供有力支持。未來的研究可以進一步深入探討CK14與Syk聯合檢測在NSCLC診療中的具體應用價值，開發相關的診斷試劑盒和治療藥物，為NSCLC患者帶來更好的治療效果和生存質量。5.4研究結果的臨床應用前景與局限性本研究結果表明，CK14與Syk在NSCLC癌組織中的異常表達與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關，二者聯合檢測在NSCLC的診療中具有潛在的應用前景。在臨床診斷方面，通過檢測CK14與Syk的表達，有助于提高NSCLC的早期診斷率，尤其是對于一些難以通過傳統方法確診的病例，為臨床醫生提供更準確的診斷依據。在病情評估和預