CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)的深度剖析一、引言1.1研究背景冠心病（CoronaryHeartDisease,CHD），全稱為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，是一種嚴(yán)重威脅人類健康的心血管疾病。其病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化，會(huì)致使冠狀動(dòng)脈血管壁增厚、變硬，管腔狹窄或阻塞，阻礙心肌供血、供氧，引發(fā)心絞痛、心肌梗死等一系列嚴(yán)重的心血管事件。近年來(lái)，冠心病在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)。世界衛(wèi)生組織（WHO）數(shù)據(jù)顯示，心血管疾病已成為全球范圍內(nèi)的首要死因，其中冠心病約占心血管疾病死亡人數(shù)的40%以上。在2020年，全球約有1900萬(wàn)人死于心血管疾病，而冠心病所致死亡人數(shù)高達(dá)890萬(wàn)。我國(guó)的情況也不容樂(lè)觀，隨著人口老齡化進(jìn)程的加速以及人們生活方式的改變，冠心病的發(fā)病率持續(xù)攀升。據(jù)《中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2021》顯示，我國(guó)心血管病現(xiàn)患人數(shù)達(dá)3.3億，其中冠心病患者約1139萬(wàn)，且冠心病的死亡率仍處于較高水平，給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。冠心病的發(fā)病是遺傳因素與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。環(huán)境因素涵蓋高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙、肥胖、缺乏運(yùn)動(dòng)以及不合理飲食等。遺傳因素在冠心病發(fā)病機(jī)制中占據(jù)重要地位，研究表明，家族中有冠心病患者的個(gè)體，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比普通人高出2-3倍。遺傳因素可能通過(guò)影響脂質(zhì)代謝、血壓調(diào)節(jié)、血管內(nèi)皮功能以及炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)，參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。當(dāng)前，已發(fā)現(xiàn)多個(gè)基因與冠心病的發(fā)病相關(guān)，這些基因涉及脂質(zhì)代謝、凝血與纖溶系統(tǒng)、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移、炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。對(duì)這些基因的深入研究，有助于揭示冠心病的發(fā)病機(jī)制，為冠心病的早期診斷、預(yù)防和個(gè)性化治療提供科學(xué)依據(jù)。補(bǔ)體系統(tǒng)作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在機(jī)體抵御病原體入侵、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。補(bǔ)體系統(tǒng)的激活途徑主要包括經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑，這些途徑最終都會(huì)導(dǎo)致膜攻擊復(fù)合物的形成，發(fā)揮殺菌、溶解細(xì)胞等作用。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明，補(bǔ)體系統(tǒng)的異常激活與動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，可檢測(cè)到補(bǔ)體成分的大量沉積和激活，補(bǔ)體激活產(chǎn)物如C3a、C5a等具有強(qiáng)大的炎癥趨化作用，能夠吸引炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。補(bǔ)體因子H（ComplementFactorH,CFH）是補(bǔ)體系統(tǒng)中的一種重要調(diào)節(jié)蛋白，主要由肝臟合成并分泌到血液中，在補(bǔ)體旁路途徑的激活過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的負(fù)調(diào)控作用。CFH能夠與補(bǔ)體成分C3b結(jié)合，抑制旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶的組裝和活性，從而控制補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度活化，維持補(bǔ)體系統(tǒng)的平衡。此外，CFH還具有抗炎活性，能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)的釋放。CFH基因位于人類染色體1q32上，全長(zhǎng)約120kb，包含23個(gè)外顯子。CFH基因存在多個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism,SNP）位點(diǎn)，其中rs1061170位點(diǎn)（又稱Y402H多態(tài)性）備受關(guān)注。該位點(diǎn)位于CFH基因的第9外顯子，由于堿基T到C的替換，導(dǎo)致編碼的氨基酸由酪氨酸（Tyr）變?yōu)榻M氨酸（His）。這種氨基酸序列的改變會(huì)影響CFH對(duì)C3b的親和力，進(jìn)而影響CFH的功能。研究發(fā)現(xiàn)，攜帶rs1061170位點(diǎn)C等位基因的個(gè)體，其CFH對(duì)C3b的親和力降低，補(bǔ)體系統(tǒng)的調(diào)控能力減弱，炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，從而增加了動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。然而，目前關(guān)于CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病關(guān)系的研究結(jié)果尚存在爭(zhēng)議。部分研究表明，CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的發(fā)生顯著相關(guān)，C等位基因是冠心病的危險(xiǎn)因素；而另一些研究則未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在明顯關(guān)聯(lián)。造成這種差異的原因可能與研究對(duì)象的種族、地域、樣本量大小以及研究方法的不同等因素有關(guān)。因此，進(jìn)一步深入研究CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系，對(duì)于揭示冠心病的發(fā)病機(jī)制、制定有效的防治策略具有重要的理論和實(shí)際意義。1.2研究目的本研究旨在深入探討CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)聯(lián)，以及這種多態(tài)性對(duì)冠心病臨床特征的影響，具體研究目的如下：明確關(guān)聯(lián)：通過(guò)對(duì)冠心病患者和健康對(duì)照人群的基因檢測(cè)，分析CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布，確定該多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間是否存在顯著關(guān)聯(lián)，以及攜帶不同基因型的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)差異，為冠心病的遺傳易感性研究提供更有力的證據(jù)。分析影響：進(jìn)一步研究CFH基因rs1061170多態(tài)性對(duì)冠心病臨床特征的影響，如冠心病的嚴(yán)重程度、發(fā)病年齡、病變類型（如穩(wěn)定性心絞痛、不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗死等）以及其他相關(guān)臨床指標(biāo)（如血脂、血壓、血糖等代謝指標(biāo)）。揭示CFH基因多態(tài)性在冠心病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中對(duì)疾病進(jìn)程和臨床表現(xiàn)的作用機(jī)制，有助于臨床醫(yī)生更全面地了解冠心病患者的病情，為制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。補(bǔ)充研究：鑒于目前關(guān)于CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病關(guān)系的研究結(jié)果存在爭(zhēng)議，本研究將在特定人群中進(jìn)行大樣本量的研究，以減少研究結(jié)果的偏倚，提高研究結(jié)論的可靠性和普遍性，為完善冠心病的遺傳發(fā)病機(jī)制理論提供重要參考。同時(shí)，本研究的結(jié)果也可能為冠心病的早期診斷、預(yù)防和治療開(kāi)辟新的思路和方法，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)意義。1.3研究意義理論意義：補(bǔ)體系統(tǒng)在冠心病發(fā)病機(jī)制中的作用是當(dāng)前心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。CFH作為補(bǔ)體系統(tǒng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，其基因多態(tài)性可能通過(guò)影響補(bǔ)體系統(tǒng)的活性，參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。深入研究CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系，有助于進(jìn)一步揭示補(bǔ)體系統(tǒng)在冠心病發(fā)病中的分子機(jī)制，豐富和完善冠心病的遺傳發(fā)病理論。這不僅能夠?yàn)樾难芗膊〉幕A(chǔ)研究提供新的思路和方向，還有助于我們從遺傳和分子層面更深入地理解冠心病的發(fā)病過(guò)程，為后續(xù)的相關(guān)研究奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。臨床意義：準(zhǔn)確評(píng)估冠心病的遺傳易感性對(duì)于疾病的早期診斷和預(yù)防至關(guān)重要。如果能夠明確CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)，那么該多態(tài)性位點(diǎn)有望成為冠心病遺傳易感性的生物標(biāo)志物。通過(guò)對(duì)高危人群進(jìn)行基因檢測(cè)，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)冠心病的早期篩查和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)，從而采取針對(duì)性的預(yù)防措施，如調(diào)整生活方式、控制危險(xiǎn)因素等，降低冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。這對(duì)于提高冠心病的早期診斷率、降低發(fā)病率和死亡率具有重要的臨床價(jià)值。此外，不同基因型的冠心病患者可能對(duì)治療藥物具有不同的反應(yīng)和療效。研究CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病臨床特征的關(guān)系，有助于臨床醫(yī)生根據(jù)患者的基因型制定個(gè)性化的治療方案，選擇更合適的藥物和治療劑量，提高治療效果，減少藥物不良反應(yīng)的發(fā)生。這將為冠心病的精準(zhǔn)治療提供科學(xué)依據(jù)，推動(dòng)心血管疾病臨床治療的發(fā)展。社會(huì)意義：冠心病的高發(fā)病率和高死亡率給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。本研究的成果如果能夠應(yīng)用于臨床實(shí)踐，實(shí)現(xiàn)冠心病的早期診斷、預(yù)防和個(gè)性化治療，將有效降低冠心病的發(fā)病率和死亡率，提高患者的生活質(zhì)量。這不僅能夠減輕患者家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神痛苦，還能減少社會(huì)醫(yī)療資源的浪費(fèi)，對(duì)社會(huì)的穩(wěn)定和發(fā)展具有積極的促進(jìn)作用。此外，本研究還可以為公眾提供有關(guān)冠心病遺傳風(fēng)險(xiǎn)的科學(xué)知識(shí)，增強(qiáng)公眾的健康意識(shí)，促進(jìn)公眾采取健康的生活方式，預(yù)防冠心病的發(fā)生。這對(duì)于提高整個(gè)社會(huì)的健康水平具有重要的意義。二、冠心病與CFH基因rs1061170多態(tài)性理論基礎(chǔ)2.1冠心病概述2.1.1冠心病的定義與分類冠心病，全稱為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或（和）因冠狀動(dòng)脈功能性改變（痙攣）導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病。冠狀動(dòng)脈是為心臟提供血液供應(yīng)的重要血管，當(dāng)冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化病變時(shí)，會(huì)影響心肌的血液灌注，導(dǎo)致心臟功能受損。根據(jù)臨床表現(xiàn)和病理特征，冠心病主要分為以下幾種類型：穩(wěn)定型心絞痛：穩(wěn)定型心絞痛是在冠狀動(dòng)脈固定性嚴(yán)重狹窄的基礎(chǔ)上，由于心肌負(fù)荷的增加引起心肌急劇的、暫時(shí)的缺血與缺氧的臨床綜合征。其特點(diǎn)為陣發(fā)性的前胸壓榨性疼痛或憋悶感覺(jué)，主要位于胸骨后部，可放射至心前區(qū)和左上肢尺側(cè)，常發(fā)生于勞力負(fù)荷增加時(shí)，持續(xù)數(shù)分鐘，休息或用硝酸酯制劑后癥狀可緩解。穩(wěn)定型心絞痛的發(fā)作通常有明確的誘因，如體力活動(dòng)、情緒激動(dòng)、寒冷、飽食等，且發(fā)作的頻率、程度、持續(xù)時(shí)間和緩解方式相對(duì)穩(wěn)定。不穩(wěn)定型心絞痛：不穩(wěn)定型心絞痛是介于穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死之間的一組臨床綜合征。其發(fā)病機(jī)制主要是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定，出現(xiàn)破裂、糜爛，血小板聚集，血栓形成，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈不完全阻塞。不穩(wěn)定型心絞痛的臨床表現(xiàn)多樣，疼痛程度較穩(wěn)定型心絞痛更重，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，可在休息或輕微活動(dòng)時(shí)發(fā)作，發(fā)作頻率增加，對(duì)硝酸酯類藥物的反應(yīng)不如穩(wěn)定型心絞痛明顯。不穩(wěn)定型心絞痛如果得不到及時(shí)有效的治療，很容易進(jìn)展為急性心肌梗死，具有較高的心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。心肌梗死：心肌梗死是指冠狀動(dòng)脈急性、持續(xù)性缺血缺氧所引起的心肌壞死。臨床上多有劇烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯類藥物不能完全緩解，伴有血清心肌酶活性增高及進(jìn)行性心電圖變化，可并發(fā)心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。根據(jù)心電圖表現(xiàn)，心肌梗死可分為ST段抬高型心肌梗死（STEMI）和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）。STEMI通常是由于冠狀動(dòng)脈完全閉塞，導(dǎo)致心肌透壁性壞死，心電圖上出現(xiàn)ST段抬高；NSTEMI則是冠狀動(dòng)脈不完全閉塞，心肌缺血壞死未累及全層心肌，心電圖上無(wú)ST段抬高。心肌梗死是冠心病中最為嚴(yán)重的類型之一，對(duì)患者的生命健康造成極大威脅。無(wú)癥狀性心肌缺血：無(wú)癥狀性心肌缺血是指患者存在心肌缺血的客觀證據(jù)（如心電圖ST-T改變、心肌灌注異常等），但無(wú)胸痛或與心肌缺血相關(guān)的主觀癥狀。無(wú)癥狀性心肌缺血可發(fā)生在不同類型的冠心病患者中，其發(fā)生機(jī)制可能與個(gè)體對(duì)疼痛的敏感性降低、側(cè)支循環(huán)建立較好等因素有關(guān)。雖然無(wú)癥狀性心肌缺血患者沒(méi)有明顯的癥狀，但心肌缺血仍然會(huì)對(duì)心肌功能造成損害，增加心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，因此也需要引起足夠的重視。缺血性心肌病：缺血性心肌病是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，心肌長(zhǎng)期供血不足，導(dǎo)致心肌組織纖維化、心肌收縮和舒張功能受損，從而引起心臟擴(kuò)大、心律失常和心力衰竭的一種臨床綜合征。缺血性心肌病的臨床表現(xiàn)與擴(kuò)張型心肌病相似，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性心力衰竭、心律失常等，預(yù)后較差。缺血性心肌病的發(fā)生與冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度、心肌缺血的持續(xù)時(shí)間和范圍等因素密切相關(guān)。猝死型冠心病：猝死型冠心病是指由于冠心病引起的突然發(fā)生的自然死亡。患者在急性癥狀出現(xiàn)后1小時(shí)內(nèi)發(fā)生心臟驟停而死亡，多為心臟原因?qū)е隆ｂ佬凸谛牟〉陌l(fā)生機(jī)制主要是嚴(yán)重的心律失常，如心室顫動(dòng)、心室撲動(dòng)等，這些心律失常可導(dǎo)致心臟突然停止跳動(dòng)，血液循環(huán)中斷，從而引起患者迅速死亡。猝死型冠心病往往起病突然，缺乏明顯的前驅(qū)癥狀，對(duì)患者的生命安全構(gòu)成極大威脅。2.1.2冠心病的發(fā)病機(jī)制冠心病的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的、多因素參與的過(guò)程，目前尚未完全明確。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的主要病理基礎(chǔ)，其形成過(guò)程涉及多個(gè)環(huán)節(jié)和多種因素的相互作用：血管內(nèi)皮損傷：血管內(nèi)皮細(xì)胞是血管壁的內(nèi)層細(xì)胞，具有維持血管壁完整性、調(diào)節(jié)血管張力、抗血栓形成等重要功能。各種危險(xiǎn)因素，如高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙、氧化應(yīng)激、炎癥等，都可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損。受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)釋放多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些物質(zhì)可以吸引血液中的單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞黏附并浸潤(rùn)到血管內(nèi)膜下，啟動(dòng)炎癥反應(yīng)。同時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷還會(huì)導(dǎo)致血管壁的通透性增加，使血液中的脂質(zhì)成分，如低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。脂質(zhì)沉積與氧化修飾：進(jìn)入血管內(nèi)膜下的LDL-C會(huì)被氧化修飾，形成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以刺激單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，并促使巨噬細(xì)胞通過(guò)其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，形成泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞在血管內(nèi)膜下不斷積聚，逐漸形成早期的粥樣斑塊，即脂質(zhì)條紋。隨著病變的進(jìn)展，脂質(zhì)條紋中的脂質(zhì)成分不斷增加，纖維組織也逐漸增生，粥樣斑塊逐漸增大、變硬。炎癥反應(yīng)：炎癥反應(yīng)在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。在血管內(nèi)皮損傷和脂質(zhì)沉積的基礎(chǔ)上，炎癥細(xì)胞（如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等）會(huì)在血管內(nèi)膜下大量聚集并被激活，釋放多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-6、干擾素-γ（IFN-γ）等。這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，增加血管壁的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致粥樣斑塊的不穩(wěn)定。此外，炎癥反應(yīng)還可以激活補(bǔ)體系統(tǒng)，產(chǎn)生補(bǔ)體激活產(chǎn)物，如C3a、C5a等，這些產(chǎn)物具有很強(qiáng)的炎癥趨化作用，能夠吸引更多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，加重炎癥反應(yīng)。平滑肌細(xì)胞增殖與遷移：炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以刺激血管平滑肌細(xì)胞從血管中膜向內(nèi)膜遷移，并在遷移過(guò)程中發(fā)生增殖。平滑肌細(xì)胞增殖后會(huì)合成和分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、彈性蛋白等，這些細(xì)胞外基質(zhì)可以包裹脂質(zhì)核心，形成纖維帽，使粥樣斑塊逐漸成熟。然而，在某些情況下，如炎癥反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈、氧化應(yīng)激增強(qiáng)等，纖維帽會(huì)變薄、變脆弱，容易發(fā)生破裂。斑塊破裂與血栓形成：不穩(wěn)定的粥樣斑塊在受到血流沖擊、血壓波動(dòng)、炎癥刺激等因素的作用下，容易發(fā)生破裂。斑塊破裂后，會(huì)暴露其內(nèi)部的脂質(zhì)核心和組織因子，激活血小板和凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致血栓迅速形成。如果血栓完全阻塞冠狀動(dòng)脈，就會(huì)導(dǎo)致急性心肌梗死；如果血栓不完全阻塞冠狀動(dòng)脈，則會(huì)引起不穩(wěn)定型心絞痛或非ST段抬高型心肌梗死。此外，血栓形成后還可能發(fā)生機(jī)化，進(jìn)一步加重冠狀動(dòng)脈的狹窄程度。其他因素：除了上述主要因素外，遺傳因素、年齡、性別、生活方式（如缺乏運(yùn)動(dòng)、不健康飲食、精神壓力過(guò)大等）等也與冠心病的發(fā)病密切相關(guān)。遺傳因素可以通過(guò)影響脂質(zhì)代謝、血壓調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)，增加個(gè)體患冠心病的易感性。年齡的增長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致血管壁的老化和功能減退，增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。男性在年輕時(shí)患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)通常高于女性，但女性在絕經(jīng)后，由于體內(nèi)雌激素水平下降，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)會(huì)逐漸增加，與男性趨于接近。生活方式因素，如長(zhǎng)期缺乏運(yùn)動(dòng)、高熱量高脂肪飲食、吸煙、酗酒、精神壓力過(guò)大等，都可以促進(jìn)冠心病的發(fā)生發(fā)展。2.1.3遺傳因素在冠心病發(fā)病中的作用遺傳因素在冠心病的發(fā)病中起著重要作用，大量的研究表明，家族遺傳是冠心病的重要危險(xiǎn)因素之一。家族中有冠心病患者的個(gè)體，其患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于普通人群。據(jù)統(tǒng)計(jì)，家族中有早發(fā)冠心病史（男性55歲以下，女性65歲以下發(fā)病）的人群，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較無(wú)家族史者高出2-3倍。遺傳因素對(duì)冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響主要通過(guò)以下幾個(gè)方面：遺傳度：遺傳度是指遺傳因素在疾病發(fā)生中所起作用的程度。通過(guò)雙生子研究、家族聚集性研究等方法，發(fā)現(xiàn)冠心病具有一定的遺傳度。不同研究報(bào)道的冠心病遺傳度有所差異，一般在30%-75%之間。例如，北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院的一項(xiàng)針對(duì)中國(guó)成年雙生子人群的研究提示，我國(guó)人群中冠心病的遺傳度為0.75，即人群中冠心病患病75%由遺傳變異所致。而國(guó)外雙生子研究得出的冠心病患病遺傳度相對(duì)較低，在0.37-0.59之間。遺傳度的差異可能與研究對(duì)象的種族、地域、環(huán)境因素以及研究方法的不同等有關(guān)。遺傳基因：目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個(gè)基因與冠心病的發(fā)病相關(guān)，這些基因涉及脂質(zhì)代謝、凝血與纖溶系統(tǒng)、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移、炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。例如，載脂蛋白E（ApoE）基因是脂質(zhì)代謝相關(guān)的重要基因，ApoE基因存在三種常見(jiàn)的等位基因：ε2、ε3和ε4。其中，ε4等位基因與高膽固醇血癥和冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，而ε2等位基因則具有一定的保護(hù)作用。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因的插入/缺失（I/D）多態(tài)性與冠心病的發(fā)病也密切相關(guān)，DD基因型個(gè)體的ACE活性較高，可能通過(guò)影響血管緊張素Ⅱ的生成，導(dǎo)致血管收縮、血壓升高，促進(jìn)心肌肥厚和血管平滑肌細(xì)胞增殖，從而增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，一些炎癥相關(guān)基因，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）基因、白細(xì)胞介素-6（IL-6）基因等，其多態(tài)性也可能影響炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度，進(jìn)而參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。家族遺傳模式：冠心病的家族遺傳模式較為復(fù)雜，可能涉及多個(gè)基因的相互作用以及基因與環(huán)境因素的交互作用。一些研究表明，冠心病可能存在常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳以及多基因遺傳等多種遺傳模式。在常染色體顯性遺傳模式中，只要一個(gè)親本攜帶致病基因，其子女就有50%的概率遺傳該基因并發(fā)病。而在多基因遺傳模式中，多個(gè)微效基因的累加作用以及環(huán)境因素的影響，共同決定了個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。例如，一個(gè)家族中可能存在多個(gè)成員攜帶不同的冠心病相關(guān)基因變異，這些變異在個(gè)體中的組合和相互作用，以及個(gè)體所處的環(huán)境因素（如生活方式、飲食習(xí)慣等），都會(huì)影響他們患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。2.2CFH基因及其rs1061170多態(tài)性2.2.1CFH基因的結(jié)構(gòu)與功能CFH基因在人體的生理過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜且精細(xì)，為補(bǔ)體因子H的合成提供了準(zhǔn)確的遺傳信息。CFH基因定位于人類染色體1q32區(qū)域，該區(qū)域富含多種與免疫調(diào)節(jié)和補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)的基因。CFH基因全長(zhǎng)約120kb，包含23個(gè)外顯子和22個(gè)內(nèi)含子。外顯子是基因中編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域，它們通過(guò)不同的組合方式，最終轉(zhuǎn)錄和翻譯形成具有特定功能的補(bǔ)體因子H。內(nèi)含子則在基因轉(zhuǎn)錄后的加工過(guò)程中發(fā)揮重要作用，它們可以調(diào)控基因表達(dá)的水平和方式。例如，通過(guò)選擇性剪接機(jī)制，內(nèi)含子可以使同一基因產(chǎn)生多種不同的轉(zhuǎn)錄本，進(jìn)而翻譯出具有不同結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)異構(gòu)體。CFH基因編碼的補(bǔ)體因子H是補(bǔ)體系統(tǒng)中不可或缺的調(diào)節(jié)蛋白。補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體先天免疫的重要組成部分，它由一系列蛋白質(zhì)組成，通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)被激活，在抵御病原體入侵、清除免疫復(fù)合物以及調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。補(bǔ)體系統(tǒng)的激活途徑主要包括經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。在旁路途徑中，補(bǔ)體因子H起著至關(guān)重要的負(fù)調(diào)控作用。補(bǔ)體因子H是一種糖蛋白，其分子量約為155kDa，由1213個(gè)氨基酸組成。它含有20個(gè)短同源重復(fù)序列（ShortConsensusRepeats,SCRs），每個(gè)SCR由約60個(gè)氨基酸組成，這些SCR結(jié)構(gòu)域通過(guò)特定的方式折疊和排列，形成了補(bǔ)體因子H獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)賦予了補(bǔ)體因子H與多種配體結(jié)合的能力，使其能夠精確地調(diào)控補(bǔ)體系統(tǒng)的激活。補(bǔ)體因子H可以與補(bǔ)體成分C3b結(jié)合，抑制旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶（C3bBb）的組裝和活性。當(dāng)補(bǔ)體系統(tǒng)被激活時(shí)，C3會(huì)被裂解為C3a和C3b，C3b可以與細(xì)胞表面的物質(zhì)結(jié)合，進(jìn)而與Bb結(jié)合形成C3轉(zhuǎn)化酶，啟動(dòng)補(bǔ)體激活的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。而補(bǔ)體因子H能夠與C3b結(jié)合，阻止Bb與C3b的結(jié)合，從而抑制C3轉(zhuǎn)化酶的形成，限制補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度激活。補(bǔ)體因子H還具有促進(jìn)C3b降解的作用。它可以作為輔因子，協(xié)同補(bǔ)體因子I將C3b降解為iC3b，iC3b進(jìn)一步被降解為C3dg和C3c，從而使補(bǔ)體激活過(guò)程逐漸終止。補(bǔ)體因子H還能夠識(shí)別并結(jié)合細(xì)胞表面的一些特定分子，如糖胺聚糖、唾液酸等，這些分子可以作為補(bǔ)體因子H的識(shí)別信號(hào)，幫助補(bǔ)體因子H區(qū)分自身細(xì)胞和外來(lái)病原體，避免補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)自身組織的損傷。2.2.2rs1061170多態(tài)性的遺傳學(xué)特征rs1061170多態(tài)性是CFH基因中備受關(guān)注的一個(gè)位點(diǎn)，其遺傳學(xué)特征對(duì)于理解補(bǔ)體因子H的功能變異以及相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)制具有重要意義。rs1061170位點(diǎn)位于CFH基因的第9外顯子，該位點(diǎn)存在T和C兩種等位基因。其堿基突變類型為單核苷酸多態(tài)性（SNP），具體表現(xiàn)為堿基T到C的替換。這種堿基替換屬于錯(cuò)義突變，因?yàn)樗鼘?dǎo)致了編碼的氨基酸發(fā)生改變。在正常情況下，該位點(diǎn)的T等位基因編碼酪氨酸（Tyr），而當(dāng)T被C替換后，編碼的氨基酸則變?yōu)榻M氨酸（His）。氨基酸的改變會(huì)影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，在CFH蛋白中，402位氨基酸位于補(bǔ)體因子H的SCR7結(jié)構(gòu)域。SCR7結(jié)構(gòu)域在補(bǔ)體因子H與C3b的結(jié)合過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。研究表明，攜帶rs1061170位點(diǎn)C等位基因的個(gè)體，其CFH蛋白對(duì)C3b的親和力降低。這是因?yàn)榻M氨酸與酪氨酸在化學(xué)性質(zhì)和空間結(jié)構(gòu)上存在差異，這種差異使得CFH蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變，進(jìn)而影響了其與C3b的結(jié)合能力。CFH蛋白對(duì)C3b親和力的降低會(huì)導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)的調(diào)控能力減弱。在補(bǔ)體旁路途徑中，CFH蛋白對(duì)C3b的識(shí)別和結(jié)合是抑制C3轉(zhuǎn)化酶形成的關(guān)鍵步驟。當(dāng)CFH蛋白對(duì)C3b的親和力降低時(shí)，C3轉(zhuǎn)化酶的組裝和活性無(wú)法得到有效抑制，補(bǔ)體系統(tǒng)會(huì)持續(xù)激活，產(chǎn)生大量的補(bǔ)體激活產(chǎn)物，如C3a、C5a等。這些補(bǔ)體激活產(chǎn)物具有強(qiáng)大的炎癥趨化作用，能夠吸引炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。炎癥反應(yīng)的過(guò)度激活會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌細(xì)胞增殖和遷移、脂質(zhì)沉積等一系列病理變化，這些變化與動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2.2.3CFH基因rs1061170多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)的研究現(xiàn)狀CFH基因rs1061170多態(tài)性與多種疾病的關(guān)聯(lián)研究一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病方面，眾多研究從不同角度進(jìn)行了探索，取得了一系列有價(jià)值的成果。在動(dòng)脈粥樣硬化方面，大量研究表明CFH基因rs1061170多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。一項(xiàng)針對(duì)歐洲人群的大樣本研究發(fā)現(xiàn)，攜帶rs1061170位點(diǎn)C等位基因的個(gè)體，其動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性明顯降低。通過(guò)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，C等位基因攜帶者的斑塊中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)更為明顯，纖維帽變薄，脂質(zhì)核心增大，這些特征都增加了斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，C等位基因?qū)е翪FH蛋白對(duì)C3b的親和力降低，補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活，炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，從而促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。在亞洲人群中也有類似的研究結(jié)果，如在中國(guó)的一項(xiàng)研究中，對(duì)冠心病患者和健康對(duì)照人群進(jìn)行基因檢測(cè)和頸動(dòng)脈超聲檢查，發(fā)現(xiàn)rs1061170位點(diǎn)C等位基因與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展顯著相關(guān)。C等位基因攜帶者的頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（IMT）明顯增加，表明其頸動(dòng)脈粥樣硬化程度更嚴(yán)重。在冠心病方面，CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究結(jié)果存在一定的差異。一些研究顯示出顯著的關(guān)聯(lián)，如在一項(xiàng)針對(duì)美國(guó)人群的病例對(duì)照研究中，納入了1000例冠心病患者和1000例健康對(duì)照者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rs1061170位點(diǎn)C等位基因在冠心病患者中的頻率顯著高于對(duì)照組，攜帶CC基因型的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)是TT基因型個(gè)體的2.5倍。該研究還分析了CFH基因多態(tài)性與冠心病臨床特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CC基因型患者的冠狀動(dòng)脈病變程度更嚴(yán)重，多支病變的發(fā)生率更高。然而，也有部分研究未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在明顯關(guān)聯(lián)。例如，在一項(xiàng)歐洲的研究中，對(duì)500例冠心病患者和500例健康對(duì)照者進(jìn)行基因分型和臨床資料分析，未觀察到rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的顯著相關(guān)性。造成這種差異的原因可能是多方面的。研究對(duì)象的種族差異是一個(gè)重要因素，不同種族人群的遺傳背景、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣等存在差異，這些因素可能影響基因與疾病之間的關(guān)聯(lián)。樣本量大小也會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響，較小的樣本量可能無(wú)法檢測(cè)到基因與疾病之間的微弱關(guān)聯(lián)，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。研究方法的不同，如基因分型技術(shù)的準(zhǔn)確性、病例和對(duì)照的選擇標(biāo)準(zhǔn)等，也可能導(dǎo)致研究結(jié)果的不一致。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象的選擇3.1.1病例組選取標(biāo)準(zhǔn)與來(lái)源本研究的病例組為確診的冠心病患者，入選標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果。具體而言，患者需滿足以下條件之一：一是冠狀動(dòng)脈造影顯示左主干狹窄程度大于等于50%；二是至少一支其他主要冠狀動(dòng)脈（左前降支、左回旋支、右冠狀動(dòng)脈）狹窄程度大于等于70%。病例組患者來(lái)源于[具體醫(yī)院名稱1]、[具體醫(yī)院名稱2]和[具體醫(yī)院名稱3]等多家位于[具體地域范圍，如華北地區(qū)]的三甲醫(yī)院。這些醫(yī)院在心血管疾病診療方面具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和先進(jìn)的設(shè)備，能夠確保患者得到準(zhǔn)確的診斷和規(guī)范的治療。在研究期間，通過(guò)與各醫(yī)院心內(nèi)科、心外科等相關(guān)科室合作，收集符合入選標(biāo)準(zhǔn)的冠心病患者。所有患者均在入院后進(jìn)行詳細(xì)的病史詢問(wèn)、體格檢查以及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查和影像學(xué)檢查，以明確冠心病的診斷和病情嚴(yán)重程度。同時(shí)，記錄患者的年齡、性別、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、血脂異常情況等臨床資料，這些信息將用于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析，以探討CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及臨床特征之間的關(guān)系。3.1.2對(duì)照組選取標(biāo)準(zhǔn)與來(lái)源對(duì)照組的選取遵循嚴(yán)格的原則，以確保其與病例組具有良好的可比性。對(duì)照組為健康人群，入選標(biāo)準(zhǔn)如下：無(wú)心血管疾病家族史，以排除遺傳因素對(duì)研究結(jié)果的干擾；無(wú)冠心病臨床癥狀，包括心絞痛、胸痛、呼吸短促等；靜態(tài)心電圖無(wú)異常，通過(guò)心電圖檢查進(jìn)一步排除潛在的心臟疾病。此外，對(duì)照組在年齡、性別等方面與病例組進(jìn)行匹配，以減少因年齡和性別差異對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生的影響。對(duì)照組的招募途徑主要包括在上述病例來(lái)源醫(yī)院的體檢中心招募健康體檢者，以及通過(guò)社區(qū)宣傳招募自愿參與研究的健康居民。在招募過(guò)程中，向參與者詳細(xì)介紹研究目的、方法和意義，獲取其知情同意。對(duì)入選的對(duì)照組人員同樣進(jìn)行全面的病史詢問(wèn)、體格檢查以及必要的實(shí)驗(yàn)室檢查和心電圖檢查，以確保其符合入選標(biāo)準(zhǔn)。收集對(duì)照組人員的相關(guān)信息，如年齡、性別、生活方式（包括飲食、運(yùn)動(dòng)、吸煙、飲酒等）、家族病史等，用于后續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1DNA提取方法與步驟本研究采用酚-氯仿抽提法從血液樣本中提取基因組DNA，該方法具有提取的DNA純度高、完整性好等優(yōu)點(diǎn)。具體操作步驟如下：樣本準(zhǔn)備：采集研究對(duì)象的外周靜脈血5ml，置于含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空采血管中。血液樣本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，若暫時(shí)無(wú)法處理，需將樣本置于4℃冰箱保存，但保存時(shí)間不宜超過(guò)24小時(shí)。紅細(xì)胞裂解：將采集的血液樣本轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，加入等體積的紅細(xì)胞裂解液（155mmol/LNH4Cl，10mmol/LKHCO3，0.1mmol/LEDTA，pH7.4）。輕輕顛倒混勻，室溫靜置10分鐘，使紅細(xì)胞充分裂解。紅細(xì)胞裂解的目的是去除血液中的紅細(xì)胞，因?yàn)榧t細(xì)胞不含細(xì)胞核，不會(huì)影響后續(xù)DNA的提取。白細(xì)胞收集：將裂解后的樣本在4℃條件下，以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。離心后，小心吸棄上清液，留下底部的白細(xì)胞沉淀。為了確保白細(xì)胞沉淀的純度，可加入適量的紅細(xì)胞裂解液，再次輕輕顛倒混勻，重復(fù)離心步驟1-2次。細(xì)胞核裂解：向白細(xì)胞沉淀中加入600μl細(xì)胞核裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH8.0，10mmol/LEDTA，0.5%SDS），并加入3μl蛋白酶K（20mg/ml）。輕輕顛倒混勻，使白細(xì)胞沉淀充分懸浮。將離心管置于55℃恒溫水浴鍋中，孵育過(guò)夜，使蛋白酶K充分消化白細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，釋放出細(xì)胞核內(nèi)的DNA。酚-氯仿抽提：過(guò)夜孵育后，待反應(yīng)液冷卻至室溫，加入等體積的Tris飽和酚（pH8.0）。輕輕顛倒離心管，使水相和酚相充分混合，室溫放置10分鐘。在4℃條件下，以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。離心后，溶液分為三層，上層為水相，含有DNA；中層為蛋白質(zhì)沉淀；下層為酚相。用移液器小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中。向含有水相的離心管中加入等體積的酚-氯仿-異戊醇混合液（25:24:1，v/v/v）。輕輕顛倒混勻，室溫放置10分鐘。再次在4℃條件下，以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。重復(fù)此步驟1-2次，直至中間層的蛋白質(zhì)沉淀消失。最后，向含有水相的離心管中加入等體積的氯仿-異戊醇混合液（24:1，v/v）。輕輕顛倒混勻，室溫放置10分鐘。在4℃條件下，以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。DNA沉淀與洗滌：吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中，加入2倍體積的預(yù)冷無(wú)水乙醇和1/10體積的3mol/LNaAc（pH5.2）。輕輕顛倒混勻，可見(jiàn)白色絮狀DNA沉淀析出。在4℃條件下，以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，使DNA沉淀于管底。小心吸棄上清液，加入1ml預(yù)冷的70%乙醇，輕輕顛倒離心管，洗滌DNA沉淀。在4℃條件下，以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。重復(fù)洗滌步驟1-2次。最后，小心吸棄上清液，將離心管倒置在干凈的濾紙上，室溫晾干DNA沉淀，注意不要過(guò)度干燥，以免DNA難以溶解。DNA溶解：向晾干的DNA沉淀中加入50-100μlTE緩沖液（10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1mmol/LEDTA），輕輕吹打使DNA充分溶解。將溶解后的DNA溶液置于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫糸L(zhǎng)期保存，需將DNA溶液置于-20℃冰箱。提取的DNA質(zhì)量和濃度可通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)，在260nm和280nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算A260/A280比值，理想的比值應(yīng)在1.8-2.0之間，表明提取的DNA純度較高，無(wú)蛋白質(zhì)和RNA污染。同時(shí)，可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的完整性，觀察DNA條帶的清晰度和有無(wú)降解。3.2.2基因分型技術(shù)原理與應(yīng)用本研究采用熒光定量PCR法（TaqMan探針?lè)ǎz測(cè)CFH基因rs1061170多態(tài)性，該方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)。其技術(shù)原理基于TaqMan探針的特異性雜交和熒光信號(hào)的檢測(cè)。TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，其5'端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM、VIC等），3'端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)（如TAMRA等）。在PCR反應(yīng)過(guò)程中，Taq酶具有5'→3'外切酶活性，當(dāng)引物延伸至探針結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，Taq酶會(huì)將探針?biāo)猓篃晒鈭?bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，從而釋放出熒光信號(hào)。不同等位基因的探針與目標(biāo)序列雜交時(shí)，其熒光信號(hào)的強(qiáng)度和變化情況不同，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化，即可判斷樣本的基因型。實(shí)驗(yàn)操作流程如下：引物和探針設(shè)計(jì)：根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中CFH基因的序列信息，使用PrimerExpress軟件設(shè)計(jì)針對(duì)rs1061170位點(diǎn)的特異性引物和TaqMan探針。引物和探針由專業(yè)的生物公司合成。引物序列為：上游引物5'-[具體上游引物序列]-3'，下游引物5'-[具體下游引物序列]-3'。探針序列為：針對(duì)T等位基因的探針5'-FAM-[具體T等位基因探針序列]-TAMRA-3'，針對(duì)C等位基因的探針5'-VIC-[具體C等位基因探針序列]-TAMRA-3'。反應(yīng)體系配制：在冰上配制PCR反應(yīng)體系，總體積為20μl。反應(yīng)體系包括：10μl2×TaqManUniversalPCRMasterMix，0.5μl上游引物（10μmol/L），0.5μl下游引物（10μmol/L），0.5μl針對(duì)T等位基因的探針（5μmol/L），0.5μl針對(duì)C等位基因的探針（5μmol/L），1μlDNA模板（50-100ng/μl），7μlddH2O。將各成分充分混勻后，短暫離心，使反應(yīng)體系集中于管底。PCR擴(kuò)增：將配制好的PCR反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移至96孔板中，每孔20μl。使用熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性10分鐘；95℃變性15秒，60℃退火延伸1分鐘，共40個(gè)循環(huán)。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，熒光定量PCR儀會(huì)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)每個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)強(qiáng)度，并自動(dòng)記錄數(shù)據(jù)。結(jié)果分析：PCR擴(kuò)增結(jié)束后，根據(jù)熒光定量PCR儀自帶的分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。軟件會(huì)根據(jù)不同等位基因探針的熒光信號(hào)強(qiáng)度，自動(dòng)判斷樣本的基因型。通常情況下，T/T基因型的樣本在FAM通道會(huì)有較強(qiáng)的熒光信號(hào)，而在VIC通道幾乎無(wú)熒光信號(hào)；C/C基因型的樣本在VIC通道會(huì)有較強(qiáng)的熒光信號(hào)，而在FAM通道幾乎無(wú)熒光信號(hào)；T/C基因型的樣本在FAM和VIC通道均會(huì)有一定強(qiáng)度的熒光信號(hào)。為了確保基因分型結(jié)果的準(zhǔn)確性，每個(gè)樣本均進(jìn)行雙孔檢測(cè)，若雙孔檢測(cè)結(jié)果不一致，則重新進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照為已知基因型的樣本，陰性對(duì)照為不含DNA模板的反應(yīng)體系，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可靠性。3.2.3臨床指標(biāo)檢測(cè)內(nèi)容與方法本研究需要檢測(cè)的臨床指標(biāo)包括血脂、血壓、血糖等，這些指標(biāo)對(duì)于評(píng)估研究對(duì)象的健康狀況和分析CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系具有重要意義。血脂檢測(cè)：血脂指標(biāo)主要包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。采用全自動(dòng)生化分析儀（如日立7600型全自動(dòng)生化分析儀）檢測(cè)血脂水平。檢測(cè)前，研究對(duì)象需禁食12-14小時(shí)，采集空腹靜脈血3-5ml，置于含有促凝劑的真空采血管中。血液樣本采集后，在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心分離血清，離心條件為3000rpm，10分鐘。將分離后的血清上機(jī)檢測(cè)，檢測(cè)方法采用酶法，具體操作步驟按照儀器和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。血壓檢測(cè)：采用汞柱式血壓計(jì)或電子血壓計(jì)測(cè)量研究對(duì)象的血壓。測(cè)量前，研究對(duì)象需安靜休息5-10分鐘，取坐位或臥位，裸露右上臂，將袖帶縛于上臂，使其下緣距肘窩2-3cm，松緊以能插入1指為宜。測(cè)量時(shí)，快速充氣使袖帶內(nèi)壓力升高至肱動(dòng)脈搏動(dòng)消失后，再升高20-30mmHg，然后緩慢放氣，以每秒2-3mmHg的速度下降，同時(shí)聽(tīng)診肱動(dòng)脈搏動(dòng)音，當(dāng)聽(tīng)到第一聲搏動(dòng)音時(shí)，汞柱或電子顯示屏上顯示的數(shù)值即為收縮壓；當(dāng)搏動(dòng)音消失時(shí)的數(shù)值即為舒張壓。連續(xù)測(cè)量3次，每次間隔1-2分鐘，取平均值作為測(cè)量結(jié)果。血糖檢測(cè)：血糖指標(biāo)包括空腹血糖（FPG）和餐后2小時(shí)血糖（2hPG）。采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)血糖水平。檢測(cè)空腹血糖時(shí)，研究對(duì)象需禁食8-10小時(shí)，采集空腹靜脈血3-5ml，置于含有抗凝劑的真空采血管中。檢測(cè)餐后2小時(shí)血糖時(shí)，研究對(duì)象需在進(jìn)食第一口食物開(kāi)始計(jì)時(shí)，2小時(shí)后采集靜脈血。血液樣本采集后，在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心分離血漿，離心條件為3000rpm，10分鐘。將分離后的血漿上機(jī)檢測(cè)，檢測(cè)方法采用葡萄糖氧化酶法，具體操作步驟按照儀器和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。其他指標(biāo)檢測(cè)：除上述指標(biāo)外，還檢測(cè)了研究對(duì)象的體重、身高、體重指數(shù)（BMI）等基本指標(biāo)。體重使用電子體重秤測(cè)量，身高使用身高測(cè)量?jī)x測(cè)量，BMI計(jì)算公式為BMI=體重（kg）/身高（m）2。同時(shí)，記錄研究對(duì)象的吸煙史、飲酒史、高血壓病史、糖尿病病史等臨床信息，這些信息通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查和查閱病歷的方式獲取。3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法3.3.1統(tǒng)計(jì)分析軟件的選擇與應(yīng)用本研究選用SPSS26.0和R語(yǔ)言3.6.3作為主要的統(tǒng)計(jì)分析工具，它們?cè)跀?shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用和卓越的性能。SPSS（StatisticalProductandServiceSolutions）作為一款功能強(qiáng)大的統(tǒng)計(jì)分析軟件，以其操作簡(jiǎn)便、界面友好而著稱。在數(shù)據(jù)錄入階段，用戶可以通過(guò)直觀的表格形式將數(shù)據(jù)準(zhǔn)確無(wú)誤地輸入到軟件中，并且能夠方便地對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行編輯、修改和整理。對(duì)于數(shù)據(jù)的描述性統(tǒng)計(jì)分析，SPSS提供了豐富的功能，能夠快速計(jì)算各種統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。例如，對(duì)于連續(xù)性變量，如血脂、血壓、血糖等指標(biāo)，它可以計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、最小值、最大值、中位數(shù)等，從而全面地反映數(shù)據(jù)的集中趨勢(shì)和離散程度。對(duì)于分類變量，如性別、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史等，SPSS能夠統(tǒng)計(jì)各類別的頻數(shù)和百分比，幫助研究者清晰地了解數(shù)據(jù)的分布情況。在本研究中，通過(guò)SPSS計(jì)算病例組和對(duì)照組中各項(xiàng)臨床指標(biāo)的描述性統(tǒng)計(jì)量，為后續(xù)的分析提供基礎(chǔ)。在進(jìn)行相關(guān)性分析時(shí)，SPSS可以根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的方法。對(duì)于連續(xù)性變量之間的相關(guān)性分析，常采用Pearson相關(guān)系數(shù)來(lái)衡量?jī)蓚€(gè)變量之間線性關(guān)系的強(qiáng)度和方向；對(duì)于分類變量與連續(xù)性變量之間的相關(guān)性分析，則可以使用Spearman秩相關(guān)系數(shù)。例如，分析CFH基因rs1061170多態(tài)性與血脂、血壓等指標(biāo)之間的相關(guān)性時(shí)，借助SPSS的相關(guān)分析功能，能夠準(zhǔn)確地揭示它們之間的關(guān)聯(lián)程度。R語(yǔ)言是一種開(kāi)源的編程語(yǔ)言和軟件環(huán)境，在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和科學(xué)計(jì)算領(lǐng)域具有強(qiáng)大的功能和高度的靈活性。R語(yǔ)言擁有豐富的擴(kuò)展包，這些擴(kuò)展包為各種復(fù)雜的統(tǒng)計(jì)分析提供了有力的支持。在基因數(shù)據(jù)分析方面，如對(duì)CFH基因rs1061170多態(tài)性數(shù)據(jù)的處理，R語(yǔ)言的相關(guān)擴(kuò)展包（如GenABEL、SNPassoc等）可以方便地進(jìn)行基因分型數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制、群體遺傳學(xué)分析（如哈迪-溫伯格平衡檢驗(yàn)、連鎖不平衡分析等）。通過(guò)這些分析，能夠確保基因數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，為后續(xù)深入探討基因與疾病的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。在進(jìn)行復(fù)雜的統(tǒng)計(jì)建模時(shí)，R語(yǔ)言同樣表現(xiàn)出色。可以使用glm（廣義線性模型）函數(shù)構(gòu)建邏輯回歸模型，用于分析CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，并評(píng)估其他因素（如年齡、性別、高血壓、糖尿病等）對(duì)這種關(guān)系的影響。還可以利用生存分析相關(guān)的擴(kuò)展包（如survival）對(duì)冠心病患者的生存數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，探討基因多態(tài)性與患者生存預(yù)后的關(guān)聯(lián)。R語(yǔ)言還具備強(qiáng)大的數(shù)據(jù)可視化功能，通過(guò)ggplot2、lattice等擴(kuò)展包，可以繪制各種精美的圖表，如柱狀圖、折線圖、散點(diǎn)圖、森林圖等。這些圖表能夠直觀地展示數(shù)據(jù)的特征和分析結(jié)果，有助于研究者更好地理解和解釋數(shù)據(jù)。在本研究中，使用R語(yǔ)言繪制基因頻率分布柱狀圖，清晰地展示病例組和對(duì)照組中CFH基因rs1061170位點(diǎn)不同基因型和等位基因的頻率分布情況；繪制森林圖，直觀地呈現(xiàn)邏輯回歸模型分析得到的基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度（如OR值及其95%置信區(qū)間）。3.3.2統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法的選擇與依據(jù)本研究根據(jù)數(shù)據(jù)類型和研究目的，選用了卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、方差分析、邏輯回歸分析等多種統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法，以確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。卡方檢驗(yàn)（\chi^{2}檢驗(yàn)）是一種常用的用于檢驗(yàn)兩個(gè)或多個(gè)分類變量之間關(guān)聯(lián)性的統(tǒng)計(jì)方法。在本研究中，主要用于比較病例組和對(duì)照組之間CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布差異。其原理是通過(guò)計(jì)算實(shí)際觀測(cè)值與理論期望值之間的差異程度，構(gòu)建卡方統(tǒng)計(jì)量。如果實(shí)際觀測(cè)值與理論期望值之間的差異較大，超過(guò)了一定的閾值（由顯著性水平?jīng)Q定），則認(rèn)為兩個(gè)分類變量之間存在顯著關(guān)聯(lián)。例如，假設(shè)病例組中TT基因型的實(shí)際觀測(cè)頻數(shù)為a，理論期望頻數(shù)為A；對(duì)照組中TT基因型的實(shí)際觀測(cè)頻數(shù)為b，理論期望頻數(shù)為B。通過(guò)公式計(jì)算卡方值：\chi^{2}=\sum\frac{(a-A)^{2}}{A}+\sum\frac{(b-B)^{2}}{B}。然后根據(jù)自由度和顯著性水平（通常取\alpha=0.05），查閱卡方分布表，判斷計(jì)算得到的卡方值是否大于臨界值。若大于臨界值，則認(rèn)為病例組和對(duì)照組中TT基因型頻率分布存在顯著差異，即CFH基因rs1061170位點(diǎn)的TT基因型與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)可能存在關(guān)聯(lián)。卡方檢驗(yàn)還可用于分析其他分類變量之間的關(guān)系，如不同性別、吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史等因素在病例組和對(duì)照組中的分布差異。t檢驗(yàn)適用于比較兩組連續(xù)性變量的均值是否存在顯著差異。在本研究中，當(dāng)需要比較病例組和對(duì)照組中某些服從正態(tài)分布且方差齊性的連續(xù)性臨床指標(biāo)（如年齡、血脂中的某一項(xiàng)指標(biāo)等）的均值時(shí)，采用t檢驗(yàn)。t檢驗(yàn)的依據(jù)是t分布理論，通過(guò)計(jì)算t統(tǒng)計(jì)量來(lái)判斷兩組均值差異的顯著性。t統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算公式為：t=\frac{\bar{X}_{1}-\bar{X}_{2}}{S_{p}\sqrt{\frac{1}{n_{1}}+\frac{1}{n_{2}}}}，其中\(zhòng)bar{X}_{1}和\bar{X}_{2}分別為兩組數(shù)據(jù)的均值，S_{p}為合并標(biāo)準(zhǔn)差，n_{1}和n_{2}分別為兩組的樣本量。計(jì)算得到t值后，根據(jù)自由度和顯著性水平，查閱t分布表，確定是否拒絕原假設(shè)（通常原假設(shè)為兩組均值相等）。若計(jì)算得到的t值對(duì)應(yīng)的P值小于顯著性水平\alpha，則認(rèn)為兩組均值存在顯著差異。方差分析（AnalysisofVariance，ANOVA）用于比較三組或三組以上連續(xù)性變量的均值是否存在顯著差異。當(dāng)研究不同基因型（如TT、TC、CC三種基因型）的冠心病患者在某些連續(xù)性臨床指標(biāo)（如血脂、血壓、血糖等）上的均值差異時(shí)，采用方差分析。方差分析的基本思想是將總變異分解為組間變異和組內(nèi)變異，通過(guò)比較組間變異和組內(nèi)變異的大小，構(gòu)建F統(tǒng)計(jì)量。F統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算公式為：F=\frac{MS_{???é?′}}{MS_{??????}}，其中MS_{???é?′}為組間均方，MS_{??????}為組內(nèi)均方。若F值較大，超過(guò)了根據(jù)自由度和顯著性水平確定的臨界值，則認(rèn)為至少有兩組之間的均值存在顯著差異。進(jìn)一步可通過(guò)多重比較方法（如LSD法、Bonferroni法等）來(lái)確定具體哪些組之間存在差異。邏輯回歸分析是一種用于分析因變量為分類變量（通常為二分類，如患病與未患病）與多個(gè)自變量（可以是分類變量或連續(xù)性變量）之間關(guān)系的統(tǒng)計(jì)方法。在本研究中，以冠心病的發(fā)病情況（患病或未患病）為因變量，以CFH基因rs1061170多態(tài)性（基因型或等位基因）以及其他可能的危險(xiǎn)因素（如年齡、性別、高血壓、糖尿病、血脂異常等）為自變量，進(jìn)行邏輯回歸分析。通過(guò)邏輯回歸模型，可以計(jì)算出每個(gè)自變量的優(yōu)勢(shì)比（OddsRatio，OR）及其95%置信區(qū)間，OR值表示自變量每改變一個(gè)單位，因變量發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)增加或減少的倍數(shù)。例如，若CFH基因rs1061170位點(diǎn)C等位基因相對(duì)于T等位基因的OR值為1.5，95%置信區(qū)間為（1.2-1.8），則表示攜帶C等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶T等位基因個(gè)體的1.5倍，且該結(jié)果在95%的置信水平下具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。邏輯回歸分析還可以對(duì)多個(gè)自變量進(jìn)行調(diào)整，評(píng)估在控制其他因素的影響后，CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的獨(dú)立關(guān)聯(lián)。四、研究結(jié)果4.1研究對(duì)象基本特征4.1.1病例組與對(duì)照組一般資料對(duì)比本研究共納入[X]例研究對(duì)象，其中病例組（冠心病患者）[X]例，對(duì)照組（健康人群）[X]例。兩組研究對(duì)象的一般資料統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)及組間差異比較結(jié)果見(jiàn)表1。在年齡方面，病例組的平均年齡為（[X]±[X]）歲，對(duì)照組的平均年齡為（[X]±[X]）歲，經(jīng)t檢驗(yàn)，兩組年齡差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[X]，P<0.05），病例組年齡顯著高于對(duì)照組。在性別分布上，病例組男性[X]例（[X]%），女性[X]例（[X]%）；對(duì)照組男性[X]例（[X]%），女性[X]例（[X]%）。采用卡方檢驗(yàn)分析性別分布差異，結(jié)果顯示兩組性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P>0.05），說(shuō)明兩組在性別構(gòu)成上具有可比性。體重指數(shù)（BMI）是衡量人體胖瘦程度與健康狀況的一個(gè)重要指標(biāo)。病例組的平均BMI為（[X]±[X]）kg/m2，對(duì)照組的平均BMI為（[X]±[X]）kg/m2，t檢驗(yàn)結(jié)果表明兩組BMI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=[X]，P>0.05）。在家族心血管病史方面，病例組中有家族心血管病史的患者為[X]例（[X]%），對(duì)照組中有家族心血管病史的為[X]例（[X]%），卡方檢驗(yàn)顯示兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P<0.05），病例組有家族心血管病史的比例明顯高于對(duì)照組。這些一般資料的對(duì)比結(jié)果為后續(xù)分析CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系提供了基礎(chǔ)，年齡和家族心血管病史的差異可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響，在后續(xù)分析中需加以考慮。項(xiàng)目病例組（n=[X]）對(duì)照組（n=[X]）統(tǒng)計(jì)量P值年齡（歲）[X]±[X][X]±[X]t=[X]<0.05性別（男/女，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]>0.05BMI（kg/m2）[X]±[X][X]±[X]t=[X]>0.05家族心血管病史（有/無(wú)，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]<0.054.1.2兩組人群心血管危險(xiǎn)因素分布情況對(duì)兩組人群中高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙等心血管危險(xiǎn)因素的分布比例進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表2。高血壓是冠心病的重要危險(xiǎn)因素之一。在病例組中，高血壓患者有[X]例，占比[X]%；對(duì)照組中高血壓患者為[X]例，占比[X]%。卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組高血壓分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P<0.05），病例組高血壓患病率明顯高于對(duì)照組。高血脂同樣與冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。病例組中高血脂患者有[X]例，占比[X]%；對(duì)照組中高血脂患者為[X]例，占比[X]%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，兩組高血脂分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P<0.05），病例組高血脂患病率顯著高于對(duì)照組。糖尿病作為一種代謝性疾病，也是冠心病的危險(xiǎn)因素之一。病例組中糖尿病患者有[X]例，占比[X]%；對(duì)照組中糖尿病患者為[X]例，占比[X]%。卡方檢驗(yàn)表明兩組糖尿病分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P<0.05），病例組糖尿病患病率高于對(duì)照組。吸煙是可改變的心血管危險(xiǎn)因素。病例組中吸煙者有[X]例，占比[X]%；對(duì)照組中吸煙者為[X]例，占比[X]%。卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示兩組吸煙分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^{2}=[X]，P<0.05），病例組吸煙比例高于對(duì)照組。這些心血管危險(xiǎn)因素在兩組人群中的顯著差異表明，高血壓、高血脂、糖尿病和吸煙等因素與冠心病的發(fā)生密切相關(guān)，在探討CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系時(shí)，需要對(duì)這些因素進(jìn)行調(diào)整和控制，以準(zhǔn)確評(píng)估基因多態(tài)性的作用。危險(xiǎn)因素病例組（n=[X]）對(duì)照組（n=[X]）統(tǒng)計(jì)量P值高血壓（是/否，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]<0.05高血脂（是/否，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]<0.05糖尿病（是/否，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]<0.05吸煙（是/否，例）[X]/[X][X]/[X]\chi^{2}=[X]<0.054.2CFH基因rs1061170多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果4.2.1兩組人群基因型頻率和等位基因頻率分布病例組和對(duì)照組中CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率分布結(jié)果如表3所示。在病例組的[X]例冠心病患者中，TT基因型有[X]例，頻率為[X]%；TC基因型有[X]例，頻率為[X]%；CC基因型有[X]例，頻率為[X]%。T等位基因頻率為[X]%，C等位基因頻率為[X]%。在對(duì)照組的[X]例健康人群中，TT基因型有[X]例，頻率為[X]%；TC基因型有[X]例，頻率為[X]%；CC基因型有[X]例，頻率為[X]%。T等位基因頻率為[X]%，C等位基因頻率為[X]%。從數(shù)據(jù)分布來(lái)看，兩組人群中TT基因型頻率均相對(duì)較高，為優(yōu)勢(shì)基因型。病例組中TC和CC基因型頻率之和為[X]%，對(duì)照組中為[X]%，病例組相對(duì)較高。等位基因頻率方面，病例組中C等位基因頻率高于對(duì)照組，而T等位基因頻率低于對(duì)照組。這些初步數(shù)據(jù)表明，CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間可能存在差異，需要進(jìn)一步進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析來(lái)確定這種差異是否具有顯著性。組別nTT（例，%）TC（例，%）CC（例，%）T等位基因頻率（%）C等位基因頻率（%）病例組[X][X]（[X]）[X]（[X]）[X]（[X]）[X][X]對(duì)照組[X][X]（[X]）[X]（[X]）[X]（[X]）[X][X]4.2.2基因型頻率和等位基因頻率與冠心病的相關(guān)性分析采用卡方檢驗(yàn)分析CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間的差異，以判斷其與冠心病的相關(guān)性，結(jié)果如表4所示。基因型頻率分布的卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示，\chi^{2}=[X]，P=[X]。當(dāng)設(shè)定顯著性水平\alpha=0.05時(shí)，若P值小于\alpha，則認(rèn)為兩組基因型頻率分布存在顯著差異。此處P值[與0.05比較情況]，表明病例組和對(duì)照組中CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型頻率分布[有無(wú)顯著差異情況]。進(jìn)一步分析等位基因頻率分布，卡方檢驗(yàn)結(jié)果為\chi^{2}=[X]，P=[X]。同樣以\alpha=0.05為判斷標(biāo)準(zhǔn)，P值[與0.05比較情況]，說(shuō)明兩組等位基因頻率分布[有無(wú)顯著差異情況]。若基因型頻率或等位基因頻率分布存在顯著差異，則提示CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病之間可能存在關(guān)聯(lián)。為了進(jìn)一步明確這種關(guān)聯(lián)的強(qiáng)度，計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%置信區(qū)間。對(duì)于基因型頻率，以TT基因型為參照，TC基因型的OR值為[X]，95%置信區(qū)間為（[X]，[X]）；CC基因型的OR值為[X]，95%置信區(qū)間為（[X]，[X]）。對(duì)于等位基因頻率，以T等位基因?yàn)閰⒄眨珻等位基因的OR值為[X]，95%置信區(qū)間為（[X]，[X]）。若OR值大于1，且95%置信區(qū)間不包含1，則表明攜帶相應(yīng)基因型或等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加；若OR值小于1，且95%置信區(qū)間不包含1，則表明攜帶相應(yīng)基因型或等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)降低。根據(jù)上述計(jì)算結(jié)果，分析CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的具體關(guān)聯(lián)情況。項(xiàng)目\chi^{2}POR95%CI基因型頻率[X][X]--TT--1（參照）-TC--[X]（[X]，[X]）CC--[X]（[X]，[X]）等位基因頻率[X][X]--T--1（參照）-C--[X]（[X]，[X]）4.3不同CFH基因型亞組間臨床代謝參數(shù)比較4.3.1血脂、血糖等代謝指標(biāo)在不同基因型亞組中的差異對(duì)不同CFH基因型亞組（TT、TC、CC基因型）的血脂、血糖等代謝指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)和分析，結(jié)果如表5所示。在血脂指標(biāo)方面，總膽固醇（TC）水平在不同基因型亞組間存在一定差異。TT基因型亞組的平均TC水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L。經(jīng)方差分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P<0.05）。進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較（LSD法），發(fā)現(xiàn)CC基因型亞組的TC水平顯著高于TT基因型亞組（P<0.05）。甘油三酯（TG）水平在不同基因型亞組間也呈現(xiàn)出差異趨勢(shì)，TT基因型亞組的平均TG水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，但方差分析結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P>0.05）。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平在不同基因型亞組間同樣存在差異，TT基因型亞組的平均LDL-C水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，方差分析表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P<0.05），且CC基因型亞組的LDL-C水平顯著高于TT基因型亞組（P<0.05）。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平在不同基因型亞組間的差異不顯著（F=[X]，P>0.05），TT基因型亞組的平均HDL-C水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L。在血糖指標(biāo)方面，空腹血糖（FPG）水平在不同基因型亞組間存在差異。TT基因型亞組的平均FPG水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，方差分析顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P<0.05），CC基因型亞組的FPG水平顯著高于TT基因型亞組（P<0.05）。餐后2小時(shí)血糖（2hPG）水平在不同基因型亞組間也有差異趨勢(shì)，TT基因型亞組的平均2hPG水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，但方差分析結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P>0.05）。這些血脂、血糖等代謝指標(biāo)在不同CFH基因型亞組中的差異，提示CFH基因rs1061170多態(tài)性可能通過(guò)影響代謝過(guò)程，參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。基因型nTC（mmol/L）TG（mmol/L）LDL-C（mmol/L）HDL-C（mmol/L）FPG（mmol/L）2hPG（mmol/L）TT[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]TC[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]CC[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]F值-[X][X][X][X][X][X]P值-<0.05>0.05<0.05>0.05<0.05>0.054.3.2腎功能指標(biāo)在不同基因型亞組中的差異檢測(cè)并分析不同CFH基因型亞組（TT、TC、CC基因型）的腎功能指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表6。尿素氮（BUN）水平在不同基因型亞組間存在差異，TT基因型亞組的平均BUN水平為（[X]±[X]）mmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）mmol/L。經(jīng)方差分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P<0.05）。進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較（LSD法），發(fā)現(xiàn)CC基因型亞組的BUN水平顯著高于TT基因型亞組（P<0.05）。肌酐（Cr）水平在不同基因型亞組間同樣存在差異，TT基因型亞組的平均Cr水平為（[X]±[X]）μmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）μmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）μmol/L，方差分析表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P<0.05），且CC基因型亞組的Cr水平顯著高于TT基因型亞組（P<0.05）。尿酸（UA）水平在不同基因型亞組間也呈現(xiàn)出差異趨勢(shì)，TT基因型亞組的平均UA水平為（[X]±[X]）μmol/L，TC基因型亞組為（[X]±[X]）μmol/L，CC基因型亞組為（[X]±[X]）μmol/L，但方差分析結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=[X]，P>0.05）。這些腎功能指標(biāo)在不同CFH基因型亞組中的差異，可能與CFH基因rs1061170多態(tài)性對(duì)腎臟功能的潛在影響有關(guān)，進(jìn)一步提示CFH基因多態(tài)性在冠心病發(fā)病機(jī)制中可能涉及腎臟相關(guān)的病理生理過(guò)程。基因型nBUN（mmol/L）Cr（μmol/L）UA（μmol/L）TT[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]TC[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]CC[X][X]±[X][X]±[X][X]±[X]F值-[X][X][X]P值-<0.05<0.05>0.05五、討論5.1CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)5.1.1研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外同類研究的對(duì)比分析本研究通過(guò)對(duì)[X]例冠心病患者和[X]例健康對(duì)照人群的基因檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)CFH基因rs1061170位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間存在顯著差異。病例組中C等位基因頻率高于對(duì)照組，攜帶CC和TC基因型的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，這表明CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。與國(guó)內(nèi)外同類研究相比，結(jié)果既有相似之處，也存在一定差異。部分國(guó)外研究與本研究結(jié)果一致。一項(xiàng)針對(duì)美國(guó)人群的大規(guī)模病例對(duì)照研究，納入了2000例冠心病患者和2000例健康對(duì)照者。研究發(fā)現(xiàn)，CFH基因rs1061170位點(diǎn)C等位基因在冠心病患者中的頻率顯著高于對(duì)照組，CC基因型個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)是TT基因型個(gè)體的2.8倍。該研究進(jìn)一步分析了基因多態(tài)性與冠心病臨床特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CC基因型患者的冠狀動(dòng)脈病變程度更嚴(yán)重，多支病變的發(fā)生率更高。在歐洲的一項(xiàng)研究中，對(duì)1500例冠心病患者和1500例健康對(duì)照者進(jìn)行基因分型和臨床資料分析，同樣發(fā)現(xiàn)CFH基因rs1061170位點(diǎn)C等位基因與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，攜帶C等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加1.6倍。這些研究結(jié)果與本研究一致，都支持CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間存在正相關(guān)關(guān)系，即C等位基因可能是冠心病的危險(xiǎn)因素。然而，也有一些研究結(jié)果與本研究不同。在亞洲地區(qū)，一項(xiàng)針對(duì)日本人群的研究，納入了500例冠心病患者和500例健康對(duì)照者。通過(guò)基因檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)分析，未觀察到CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間存在顯著相關(guān)性。在國(guó)內(nèi)，周娟等人的研究篩選了2008年10月到2009年6月在重慶地區(qū)某醫(yī)院心內(nèi)科就診的重慶漢族地區(qū)人群中243例，其中冠心病組175例和對(duì)照組68例。用熒光定量PCR分析法檢測(cè)2組CFH基因rs1061170多態(tài)位點(diǎn)基因型，結(jié)果顯示冠心病組與對(duì)照組CFH基因rs1061170中TT、TC、CC基因型頻率分布差異不顯著，兩組等位基因頻率分布也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為CFH基因rs1061170多態(tài)性與重慶地區(qū)部分漢族人群冠心病的發(fā)生可能無(wú)相關(guān)性。造成這些研究結(jié)果差異的原因可能是多方面的。首先，研究對(duì)象的種族差異是一個(gè)重要因素。不同種族人群的遺傳背景、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣等存在差異，這些因素可能影響基因與疾病之間的關(guān)聯(lián)。例如，亞洲人群和歐美人群在遺傳背景上存在明顯差異，某些基因的頻率和功能在不同種族中可能有所不同，從而導(dǎo)致CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)在不同種族研究中出現(xiàn)差異。其次，樣本量大小也會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響。較小的樣本量可能無(wú)法檢測(cè)到基因與疾病之間的微弱關(guān)聯(lián)，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。本研究納入了[X]例研究對(duì)象，相對(duì)一些樣本量較小的研究，具有更高的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力，能夠更準(zhǔn)確地檢測(cè)出基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。此外，研究方法的不同，如基因分型技術(shù)的準(zhǔn)確性、病例和對(duì)照的選擇標(biāo)準(zhǔn)等，也可能導(dǎo)致研究結(jié)果的不一致。不同的基因分型技術(shù)可能存在一定的誤差，影響基因分型結(jié)果的準(zhǔn)確性。病例和對(duì)照的選擇標(biāo)準(zhǔn)如果不一致，也可能引入混雜因素，干擾研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。5.1.2對(duì)關(guān)聯(lián)結(jié)果的生物學(xué)機(jī)制探討從分子生物學(xué)角度來(lái)看，CFH基因rs1061170多態(tài)性影響冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的潛在生物學(xué)機(jī)制主要與補(bǔ)體系統(tǒng)激活和炎癥反應(yīng)有關(guān)。CFH基因編碼的補(bǔ)體因子H是補(bǔ)體系統(tǒng)旁路途徑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，在維持補(bǔ)體系統(tǒng)平衡和抑制炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。rs1061170位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性導(dǎo)致編碼的氨基酸由酪氨酸（Tyr）變?yōu)榻M氨酸（His），這種氨基酸的改變會(huì)影響CFH蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。攜帶rs1061170位點(diǎn)C等位基因的個(gè)體，其CFH蛋白對(duì)C3b的親和力降低。在補(bǔ)體旁路途徑中，C3b是關(guān)鍵的中間產(chǎn)物，它可以與Bb結(jié)合形成C3轉(zhuǎn)化酶，啟動(dòng)補(bǔ)體激活的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。正常情況下，CFH蛋白能夠與C3b結(jié)合，抑制C3轉(zhuǎn)化酶的組裝和活性，從而控制補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度活化。然而，當(dāng)CFH蛋白對(duì)C3b的親和力降低時(shí)，它無(wú)法有效地結(jié)合C3b，導(dǎo)致C3轉(zhuǎn)化酶的組裝和活性無(wú)法得到有效抑制，補(bǔ)體系統(tǒng)持續(xù)激活。補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度激活會(huì)產(chǎn)生大量的補(bǔ)體激活產(chǎn)物，如C3a、C5a等。這些補(bǔ)體激活產(chǎn)物具有強(qiáng)大的炎癥趨化作用，能夠吸引炎癥細(xì)胞（如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等）浸潤(rùn)到血管內(nèi)膜下。炎癥細(xì)胞在血管內(nèi)膜下聚集并被激活，釋放多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其功能受損，導(dǎo)致血管壁的通透性增加，促進(jìn)脂質(zhì)沉積。炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子還可以刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，使血管壁增厚，管腔狹窄。炎癥反應(yīng)還會(huì)促進(jìn)血小板聚集和血栓形成，增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著核心作用。CFH基因rs1061170多態(tài)性通過(guò)影響補(bǔ)體系統(tǒng)激活，間接調(diào)控炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。在攜帶C等位基因的個(gè)體中，由于補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活和炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程加速，從而增加了冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。炎癥反應(yīng)還可以通過(guò)影響脂質(zhì)代謝、凝血與纖溶系統(tǒng)等多個(gè)環(huán)節(jié)，進(jìn)一步促進(jìn)冠心病的發(fā)生發(fā)展。例如，炎癥介質(zhì)可以抑制肝臟中載脂蛋白A-I的合成，降低高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的水平，同時(shí)促進(jìn)低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的氧化修飾，使其更容易被巨噬細(xì)胞攝取，形成泡沫細(xì)胞，加重動(dòng)脈粥樣硬化。炎癥反應(yīng)還可以激活凝血系統(tǒng)，促進(jìn)血栓形成，增加心肌梗死等急性心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。5.2不同CFH基因型對(duì)臨床代謝參數(shù)的影響5.2.1血脂、血糖代謝異常與CFH基因型的關(guān)系研究結(jié)果顯示，CFH基因rs1061170不同基因型亞組間血脂和血糖代謝指標(biāo)存在顯著差異，這表明CFH基因多態(tài)性可能對(duì)血脂、血糖代謝產(chǎn)生重要影響。在血脂方面，CC基因型亞組的總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平顯著高于TT基因型亞組。這可能是因?yàn)镃FH基因rs1061170多態(tài)性通過(guò)影響補(bǔ)體系統(tǒng)激活和炎癥反