13I本文件規定了馬鈴薯對黃萎病(Verticilliumwilt)抗性的室內評價和田間評價的方法及程序。下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版標準病情指數(50.0)與同批次評價試驗中感病對照品種病情指數的比值，記作K。養室(使溫度保持在20℃~28℃)、不銹鋼鍋、電磁爐、培養皿、試管、剪子、鑷子、三角瓶等。選擇馬鈴薯黃萎菌強致病力菌株，在馬鈴薯瓊脂培養基(PDA)上活化7d~10d,挑取菌落邊緣1條件下恒溫振蕩培養5d后用2層滅菌紗布濾除菌絲，得到分生孢子懸浮液。在顯微鏡下用血球計數2將供試馬鈴薯品種及感病對照品種的種薯置于25℃催芽15d左右，待芽長至0.5cm后，用75%酒精消毒刀具，自尾芽開始切成立體小三角塊(25g～50g),保證每塊至少有1～2個芽眼。25℃攤開放置4h,待薯塊切口風干后播種于薄壁塑料育苗盆。育苗盆口徑為20cm,下部墊滅菌土(大田土壤重量：育苗基質重量=1:1,121℃,0.1MPa～0.15MPa,1h)5cm～6cm,壓實，每盆放置3上部覆土厚度為3cm～4cm,灌足自來水，在溫室中培養(培養溫度為20℃~28℃,出苗后10h光照，14h黑暗。陰天開補光燈，光照過強使用遮陽網)。每個品種播種5盆作為1次重復，重復4次。采用人工傷根接種法。待馬鈴薯出苗后15d,用消毒的壁紙刀將花盆底部切掉，再用壁紙刀沿花盆底部平切傷根，然后放到底部鋪有2cm滅菌土的同樣新花盆中，置于接種液(2.0L)中浸泡30人工黃萎病圃應建立在馬鈴薯代表性產區或土壤氣候條件相似、有利于黃萎病發生的地區；要求發病均勻，正常年份感病對照品種的病情指數達到40.0～60.0;病圃地勢平坦，排灌方便，周圍選用帶短絨的棉花毛籽作為繁殖病原菌的營養基質。首先將棉花毛籽放入容器中，加入自來水 (洗滌靈濃度0.1%)將棉籽浸沒，浸泡過夜；次日將棉籽裝入紗袋中并用甩干機甩干，然后裝入菌種繁殖袋中(每袋3.0kg),用棉塞和報紙封口，高壓濕熱滅菌1h(121℃,0.1MPa～0.15MPa)備將培養好的接種物用攪拌機或鐵锨攪拌均勻至單粒棉籽基本分開狀態于地表，隨即淺層(約20cm)旋耕，使接種物與土壤混合均勻。按照當地種植方式播種馬鈴薯于人工病圃中，每個品種重復3～4次，每個重復至少20株。病情嚴重度分成五個級別，病級值分別為0,1,2,3和4。各病級癥狀描述如下：1級：病株顯癥葉片數占總葉片數的比例≤25%,葉肉變為淡黃色或呈不規則形的黃色病斑；2級：25%<病株顯癥葉片數占總葉片數的比例≤50%,葉部褪綠形成病斑，病斑顏色大部分為3級：50%<病株顯癥葉片數占總葉片數的比例≤75%,有少數葉片凋落；34級：病株顯癥葉片數占總葉片數的比例＞75%，多為褐色枯斑，有的病株葉片脫落成光桿，整病情指數（DI計算結果精確到小數點后1位）相對病情指數（RDI）感病對照品種病情指數在40.0～60.0之間可采用相對病情指數，超出范圍 相對病情指數（RDI計算結果保留小數點后1位 9抗性評價123454A.1病原菌的分類地位A.2培養特性和孢子形態梗上的瓶梗末端逐個割裂。空氣干燥時，孢子在瓶梗末端聚集成堆，空氣濕潤時，則形成孢子球。顯微鏡下制片觀察時，孢子即散開，只留下梗端新生出的單個孢A.3癥狀盆栽馬鈴薯苗期黃萎病發病癥狀：下部葉片先表現癥狀，葉片或葉