大球蓋菇菌種生產技術規程2022-07-31實施2022-07-31實施 II 1 13術語和定義 14環境要求 2 2 27原種生產 38栽培種生產 3 4附錄A(資料性)原材料處理 6I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定本文件由甘肅省農業農村廳提出、歸口并監督實施。本文件主要起草單位：甘肅省科學院生物研究所、定西市農業科學研究院、甘肅省藥品監督管理局、甘肅省經濟作物技術推廣站、卓尼縣農業技術推廣站、甘南州種子工作站、酒泉市農業技術推廣服務中本文件主要起草人：楊阿麗、冉永紅、高鳳、趙玉卉、周亞婷、郭瑞、謝江波、何士劍、康當周、盧勇、王曉文、趙志強、樊友娟、馬維成、王淵、馬黎霞、陳小麗、葉丙鑫、何萬春。本文件由甘肅省科學院生物研究所負責解釋。各單位或個人在執行本文件過程中如發現需要修改和補充之處，請隨時將意見和建議反饋至甘肅省科學院生物研究所編著組(地址：甘肅省蘭州市城關區定西南路197號，郵政編碼：730000,E-mail:aliyang1012@163.com,聯系人：楊阿麗，聯系方式,以供今后修訂時參考。本文件規定了大球蓋菇菌種生產的術語與定義、環境要求、設備設施、母種生產、原種生產、栽培種生產、檢驗、入庫及留樣的技術流程要點。本文件適用于大球蓋菇菌種生產要求。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。環境空氣質量標準生活飲用水衛生標準食品包裝用聚丙烯成型品衛生標準NY/T528食用菌菌種生產技術規程NY/T1731食用菌菌種良好作業規范NY/T1742食用菌菌種通用技術要求NY/T5010無公害農產品種植業產地環境條件3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。大球蓋菇隸屬于擔子菌亞門(Basidiomycotin菌種culture生長在適宜基質上具結實性的菌絲培養物，包括母種、原種和栽培種。母種stockculture經各種方法選育得到的具有結實性的菌絲體純培養物及其繼代培養物，以玻璃試管或培養皿為培養容器和使用單位。也稱一級種、試管種。原種motherspawn由母種移植、擴大培養而成的菌絲體純培養物。也稱二級種。栽培種spawn12產用水符合GB5749的規定。菌種培養環境要求溫度控制范圍16℃~30℃,空氣相對濕度控制范圍5設備設施6母種生產6.1.1新鮮無病去皮馬鈴薯200g(煮20min取汁)、葡萄糖20g、瓊脂18g～20g、水1000mL。6.1.2新鮮無病去皮馬鈴薯200g(煮20min取汁)、磷酸二氫鉀1g、蛋白胨2g、硫酸鎂1g、葡萄糖20g、瓊脂18g～20g、水1000mL。6.1.3新鮮無病去皮馬鈴薯200g(煮20min取汁)、麥稈100g(煮30min取汁)、葡萄糖20g、瓊脂18g～20g、水1000mL。分裝培養基至試管1/4處，用棉塞(梳棉)或硅膠塞封閉試管口，牛皮紙包棉塞，橡皮筋扎緊，棉塞向上置于高壓滅菌鍋中，121℃(0.11MPa)下滅菌30min。固后，從擺好斜面的試管中抽取3%～5%的試管，28℃恒溫培養48h后，無微生物長出為滅菌合格。在超凈工作臺接種。接種前用紫外線燈照射30min,之后用75%酒精進行表面消毒(噴或擦拭)。接種后將試管置于恒溫培養箱中，20℃~25℃避光培養18d～30d。6.6貯存在0℃~4℃下貯存，貯存期不超過50d。7原種生產7.1培養基玉米芯38%,雜木屑30%,麥稈30%,生石灰2%,料含水量65%;或木屑70%,麩皮18%,谷殼10%,石灰1%,石膏1%,料含水量65%(原材料處理參見附錄A)。7.2容器原種采用450mL～750mL、耐126℃高溫的無色玻璃菌種瓶或800mL、耐126℃高溫的白色半透明符合GB9688規定的的塑料菌種瓶。采用裝瓶機或人工裝瓶，菌種瓶培養基中央插入直徑1cm～1.5cm長8cm~12cm的接種棒，每瓶裝培養基400g～600g。7.4滅菌培養基裝瓶后4h內進行滅菌，采用高壓滅菌，在121℃~124℃、0.11MPa～0.14MPa滅菌2.5h。7.5接種在超凈工作臺上接種。接種前用紫外線燈照射30min,之后用75%酒精進行表面消毒(噴或擦拭)。每瓶原種接入粒徑2cm～3cm大小的母種1～2塊。接種過程嚴格執行無菌操作，每批接種應為單一品種，若中途換品種需要對超凈工作臺進行再次表面消毒(噴或擦拭)。7.6培養培養溫度為22℃~26℃,空氣濕度在75%以下，通風避光培養35d～60d。接種后第3d、第5d、第7d以及長滿菌種瓶前后分別進行逐個檢驗，保留菌絲生長健壯、潔白、濃密，無污染的原種。7.7貯存在0℃~4℃下貯存，貯存期不超過40d。8栽培種生產8.1培養基麥稈57%,玉米芯20%,雜木屑20%,石膏1%,生石灰2%,料含水量65%;或木屑79%,麩皮20%,碳酸鈣1%,料含水量65%(原材料處理參見附錄A)。8.2容器栽培種采用≤17cmx35cm耐126℃高溫符合GB9688規定的聚丙烯塑料袋。34培養基裝袋后4h內裝入高壓滅菌鍋，在121℃~124℃、0.11MPa～0.14菌鍋可采用常壓滅菌，保證培養基不酸化的前提下使溫度快速達到100℃,并持續滅菌12h。)。在超凈工作臺上接種。接種前用紫外線燈照射30min,之后用75%酒精進行表面消毒。每袋栽培種接入原種量不得少于15g。接種過程嚴格執行無菌操作，每批接種應為單一品種，若中途換品種需要對培養溫度在22℃~26℃,空氣濕度在75%以下，通風避光培養35d～60d。接種后第3d、第5d、第7d在0℃~4℃下貯存，貯存期不超過30d。無無培養基不干縮，顏色均勻，無暗斑、無色素、生長均勻、無高溫抑制線緊貼瓶壁、無干縮無無無9.2入庫檢驗參照NY/T1731和NY/T1742。菌種檢驗完成后應及時入恒溫庫，詳細記錄各生產環節，溫度保持在0℃~4℃,適當通風并對空氣進行消毒。常生產出第一潮菇。56 (資料性)原材料處理木屑粒徑要求0.5cm～0.8cm左右，建堆時要求堆高1.5m,在堆料表面多次澆水，提前三個月堆放腐玉米芯粒徑要求0.5cm～0.8cm左右。加3%的生石灰后充分預濕。建1.5m寬，1m高的長堆。建堆后打