pcr證考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的主要作用是（）A.基因表達(dá)分析B.基因克隆C.核酸的體外擴(kuò)增D.蛋白質(zhì)表達(dá)答案：C2.PCR反應(yīng)體系中，哪種成分提供了反應(yīng)的模板（）A.dNTPsB.引物C.模板DNAD.Taq酶答案：C3.Taq酶的作用是（）A.合成引物B.提供反應(yīng)模板C.催化DNA合成D.結(jié)合到DNA模板上答案：C4.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供反應(yīng)起始位點B.提供能量C.作為反應(yīng)底物D.終止反應(yīng)答案：A5.PCR反應(yīng)的變性步驟是將（）A.引物變性B.模板DNA雙鏈解開C.Taq酶變性D.dNTPs變性答案：B6.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的基本成分（）A.RNA聚合酶B.模板DNAC.引物D.dNTPs答案：A7.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）A.Taq酶活性B.引物的長度和序列C.dNTPs濃度D.模板DNA長度答案：B8.一個標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)循環(huán)次數(shù)通常為（）A.10-15次B.15-20次C.20-30次D.30-40次答案：C9.在PCR反應(yīng)中，dNTPs的作用是（）A.構(gòu)建引物B.提供能量C.作為合成DNA的原料D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：C10.PCR反應(yīng)中防止反應(yīng)體系污染的措施不包括（）A.實驗分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.增加反應(yīng)體系體積D.嚴(yán)格遵守操作規(guī)程答案：C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.基因工程D.考古學(xué)研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶質(zhì)量答案：ABC3.PCR反應(yīng)的特點包括（）A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.操作簡便D.對模板要求低答案：ABC4.以下哪些是提高PCR反應(yīng)效率的方法（）A.優(yōu)化引物設(shè)計B.提高退火溫度C.增加模板量D.提高Taq酶濃度答案：ABC5.PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽性結(jié)果B.假陰性結(jié)果C.非特異性擴(kuò)增D.擴(kuò)增效率低答案：ABCD6.以下屬于PCR反應(yīng)體系優(yōu)化內(nèi)容的有（）A.引物濃度優(yōu)化B.模板濃度優(yōu)化C.退火溫度優(yōu)化D.dNTPs濃度優(yōu)化答案：ABCD7.在進(jìn)行PCR實驗時，需要注意的生物安全問題包括（）A.防止樣本中的病原體污染B.避免擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠污染C.正確處理實驗廢棄物D.防止人員被樣本中的病原體感染答案：ABCD8.以下哪些可以作為PCR反應(yīng)的模板（）A.基因組DNAB.cDNAC.質(zhì)粒DNAD.RNA（反轉(zhuǎn)錄后）答案：ABCD9.與傳統(tǒng)的DNA擴(kuò)增方法相比，PCR的優(yōu)勢在于（）A.速度快B.準(zhǔn)確性高C.可大量擴(kuò)增D.不需要模板答案：ABC10.PCR反應(yīng)的延伸階段，Taq酶（）A.沿模板鏈合成新的DNA鏈B.以dNTPs為原料C.需要引物引導(dǎo)D.對溫度有嚴(yán)格要求答案：ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)只能擴(kuò)增DNA，不能擴(kuò)增RNA。（）答案：錯誤2.引物越長，PCR反應(yīng)的特異性越高。（）答案：正確3.Taq酶在高溫下會失活。（）答案：錯誤4.只要有足夠的dNTPs，PCR反應(yīng)就可以無限循環(huán)進(jìn)行。（）答案：錯誤5.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤6.在PCR反應(yīng)中，模板DNA的純度越高越好。（）答案：正確7.退火溫度越高，引物與模板的結(jié)合越牢固。（）答案：錯誤8.PCR反應(yīng)的結(jié)果可以直接用于基因治療。（）答案：錯誤9.增加引物濃度一定能提高PCR反應(yīng)的特異性。（）答案：錯誤10.非特異性擴(kuò)增是PCR反應(yīng)中最常見的問題之一。（）答案：正確四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)是一種體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程的技術(shù)。以DNA為模板，在Taq酶的作用下，以dNTPs為原料，按照堿基互補(bǔ)配對原則，由引物引導(dǎo)合成新的DNA鏈。通過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（合成新DNA鏈）三個步驟的多次循環(huán)，實現(xiàn)DNA的大量擴(kuò)增。2.請說明PCR反應(yīng)中引物設(shè)計的基本原則。答案：引物設(shè)計基本原則包括：長度合適（一般18-25個堿基）；GC含量適中（40%-60%）；避免引物內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；引物之間不能有互補(bǔ)序列；引物3′端要與模板嚴(yán)格互補(bǔ)等。3.簡述在PCR反應(yīng)中出現(xiàn)假陽性結(jié)果的可能原因。答案：可能原因包括：樣本交叉污染；擴(kuò)增產(chǎn)物污染；試劑污染；實驗室氣溶膠污染等。4.請列舉PCR反應(yīng)中常用的質(zhì)量控制措施。答案：常用質(zhì)量控制措施有：使用陽性和陰性對照；實驗分區(qū)操作；嚴(yán)格遵守操作規(guī)程；對試劑和儀器進(jìn)行校準(zhǔn)等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何提高PCR反應(yīng)的特異性。答案：可通過優(yōu)化引物設(shè)計（保證特異性、合適長度等）、選擇合適的退火溫度、提高模板純度、減少循環(huán)次數(shù)等方法提高PCR反應(yīng)特異性。2.探討PCR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測中的應(yīng)用。答案：PCR技術(shù)可用于檢測新冠病毒核酸。通過設(shè)計針對新冠病毒特定基因序列的引物，進(jìn)行擴(kuò)增，若有擴(kuò)增產(chǎn)物則可能感染新冠病毒，對疫情防控中病例診斷等有重要意義。3.請分析PCR反應(yīng)中模板質(zhì)量對反應(yīng)結(jié)果的影響。答案：模板質(zhì)量