多菌靈與東方蜜蜂微孢子蟲協同脅迫對工蜂發育的影響機制探究一、引言1.1研究背景蜜蜂作為自然界最重要的授粉昆蟲，在生態系統中扮演著舉足輕重的角色，對人類和自然環境都具有不可忽視的影響和價值。全球約80%的經濟作物依賴蜜蜂授粉，它們在采集花蜜和花粉的過程中，促進了植物的繁殖，維持了生態系統的穩定和多樣性。在我國，每年約有500多萬群流動蜂群在生產蜂產品的同時，為大宗農作物授粉，蜜蜂授粉對我國36種主要作物的年均價值貢獻高達3042.20億元，占農業總產值的12.30%。從生態角度來看，蜜蜂的傳粉活動不僅有益于植物繁衍，還為其他動物提供了食物來源，維持了食物鏈的完整性，其在生物多樣性和生態平衡方面的貢獻遠大于授粉所產生的經濟價值。倘若授粉昆蟲持續減少，必然會引發農作物授粉危機，進而影響全球的作物產量及生態環境，威脅糧食安全和生態安全。蜂群主要由蜂王、工蜂和雄蜂組成，其中工蜂是蜂群的主要勞動者，承擔著維持蜂群運轉的眾多事務性工作，如采蜜、喂養幼蜂、建造和維護蜂巢等。工蜂的發育狀況直接關系到蜂群群勢的強弱，而蜂群群勢又會反作用于個體的生長發育，二者相互影響。若工蜂發育受到阻礙，將導致蜂群勞動力不足，影響蜂群的正常活動，如采集花蜜、哺育幼蟲等，進而削弱蜂群的整體實力，使其更易受到外界環境因素的威脅，如病蟲害的侵襲、惡劣氣候的影響等，嚴重時甚至可能導致蜂群的衰敗。在蜜蜂養殖過程中，不可避免地會面臨各種生物和非生物脅迫因素。多菌靈作為一種廣泛應用的殺菌劑，在植物病害防治中發揮著關鍵作用。在蜜源植物病害防治期間，若在其開花期噴藥，蜜蜂在采集過程中就可能直接接觸到多菌靈；而且多菌靈被植物吸收后會出現在花蜜、花粉和露水中，被蜜蜂采集后帶回蜂巢，從而導致蜂群內蜂蜜、花粉和巢脾被污染，進而影響蜜蜂幼蟲和成蜂的生長發育和生理狀態。研究表明，殺菌劑雖不會使蜜蜂急性死亡，但其田間殘留會對蜜蜂行為、生長發育、繁殖、學習記憶和免疫產生影響。東方蜜蜂微孢子蟲則是一種寄生在蜜蜂體內的病原微生物，對蜜蜂生長發育和生產性能有著極大的負面影響，嚴重時可導致蜜蜂群體崩潰。近年來，其在我國西方蜜蜂中的發病率呈上升趨勢，已成為蜜蜂養殖中一個重要的疾病問題。目前，關于多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲單獨對蜜蜂影響的研究已有一定基礎，但對于二者共同脅迫對工蜂發育的影響，相關研究還較為匱乏。深入探究多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響，不僅有助于全面了解蜜蜂在復雜脅迫環境下的生存機制，還能為制定科學合理的蜜蜂保護策略和養蜂業的可持續發展提供理論依據，對于維護生態平衡和保障農業生產也具有重要意義。1.2研究目的和意義本研究旨在深入探究多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響，從個體水平、生理生化指標、分子機制等多個層面展開研究，全面揭示二者共同作用下工蜂發育所受到的影響。具體而言，通過設置不同處理組，對比分析工蜂在形態特征、發育歷期、存活率等個體水平指標的變化，明確共同脅迫對工蜂發育的直觀影響；測定工蜂體內抗氧化酶活性、免疫相關酶活性、激素水平等生理生化指標，深入剖析共同脅迫對工蜂生理功能的作用機制；利用分子生物學技術，研究相關基因的表達變化，從分子層面揭示工蜂應對共同脅迫的響應機制。蜜蜂作為重要的授粉昆蟲，對維持生態平衡和促進農業發展具有不可替代的作用。近年來，由于環境變化、農藥使用以及病蟲害侵襲等多種因素的影響，蜜蜂種群數量呈現下降趨勢，這對生態系統和農業生產都帶來了潛在威脅。多菌靈作為一種廣泛使用的殺菌劑，其在環境中的殘留可能會對蜜蜂產生影響；東方蜜蜂微孢子蟲作為蜜蜂的重要病原體，也嚴重威脅著蜜蜂的健康。深入研究多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響，對于揭示蜜蜂在復雜環境脅迫下的生存機制具有重要的理論意義，能夠為進一步了解蜜蜂的生物學特性和生態適應性提供科學依據。養蜂業是農業的重要組成部分，蜜蜂不僅能為農作物授粉，提高農作物產量和品質，還能生產蜂蜜、蜂王漿、蜂膠等多種蜂產品，具有重要的經濟價值。明確多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響，有助于養蜂從業者采取針對性的措施，減少蜜蜂病蟲害的發生，提高蜂群的健康水平和生產性能，從而促進養蜂業的可持續發展，增加養蜂從業者的經濟收入。同時，也能為制定合理的農藥使用規范和蜜蜂保護策略提供科學指導，在保障農業生產的同時，保護蜜蜂這一重要的生物資源，維護生態平衡。二、相關理論基礎2.1工蜂發育概述工蜂是蜂群中數量最多的成員，承擔著蜂群內幾乎所有的勞作任務，其發育過程可細分為卵、幼蟲、蛹和成蟲四個階段，每個階段都有著獨特的生理特征和發育需求，且各個階段緊密相連，任何一個環節受到干擾都可能影響工蜂的正常發育，進而對蜂群的生存和發展產生不利影響。工蜂發育的起點是蜂王在工蜂房內產下的受精卵。這些卵呈乳白色，外觀略透明，形狀似香蕉，稍粗一端為頭部，稍細一端為腹末。卵通過黏液以細端牢固地粘于巢房底部中央，粗端則朝向房口。在適宜的溫度（34-35℃）和相對濕度（65%-75%）環境下，經過約3天的孵化期，卵會發生顯著變化。在這3天里，卵雖然不攝取任何飼料，但內部卻進行著活躍的細胞分裂和組織分化，為后續的發育奠定基礎。隨著時間的推移，胚胎逐漸發育成熟，最終沖破卵殼，進入幼蟲階段。幼蟲期是工蜂發育的關鍵時期，時長約為6天。初孵化的幼蟲如同微小的蠕蟲，身體柔軟且呈“C”形，平臥于巢房底部。在幼蟲期的前3天，工蜂幼蟲以蜂王漿為食。蜂王漿是由哺育工蜂頭部的咽下腺和上顎腺分泌的一種特殊物質，富含蛋白質、氨基酸、維生素、礦物質和生物活性成分，營養價值極高，能夠滿足幼蟲快速生長和發育的需求。3天后，幼蟲的食物轉變為蜂糧，蜂糧是由蜂蜜和花粉混合而成，雖然營養成分也較為豐富，但相較于蜂王漿，其蛋白質和生物活性成分的含量較低。在整個幼蟲期，工蜂幼蟲生長迅速，身體不斷增大，需要頻繁進食以獲取足夠的營養。據統計，每只幼蟲平均每天會被哺育工蜂喂食1300次以上，大約每分鐘就會被喂食一次，這充分體現了幼蟲期對營養供應的高需求。隨著幼蟲的生長，其身體逐漸發育完善，在第6天左右，工蜂會用蜂蠟將幼蟲房的房口封上，幼蟲由此進入蛹期。蛹期是工蜂形態和生理發生巨大轉變的時期，歷時約11天。封蓋后的幼蟲在相對封閉的空間內，經歷復雜的生理和形態變化。首先，幼蟲會進行5次蛻皮，每次蛻皮都伴隨著身體結構和生理功能的調整。在蛻皮過程中，幼蟲的表皮逐漸硬化，形成蛹殼，蛹殼能夠保護內部正在發育的組織和器官。同時，幼蟲的組織和器官開始進行重組和分化，逐漸形成成蟲的形態結構。例如，幼蟲的翅膀、足、觸角等器官在蛹期逐漸發育成型，內部的消化系統、神經系統、生殖系統等也不斷完善。在蛹期后期，蛹殼內的工蜂逐漸具備了成蟲的基本特征，如完整的外骨骼、分節的身體、發達的復眼和口器等。當蛹發育成熟后，工蜂會咬破蛹殼，從巢房中爬出，進入成蟲期。成蟲期是工蜂發育的最終階段，此時的工蜂已具備了承擔蜂群各項工作的能力。剛羽化出房的工蜂，身體較為柔軟，體表的幾丁質外殼尚未完全硬化，顏色也較淺。隨著時間的推移，工蜂的身體逐漸變硬，顏色逐漸加深，其各項生理功能也逐漸完善。成年工蜂具有典型的蜜蜂形態特征，頭呈三角形，上顎發達，便于咀嚼和處理食物；喙長，適合吸食花蜜；翅膀大，能夠覆蓋腹部，使工蜂具備飛行能力；采粉器官、蠟腺及螫針發達，這些器官和結構與工蜂的采集、哺育、建造蜂巢和防御等工作密切相關。成年工蜂平均體重為80-100毫克，體長10-14毫米。在蜂群中，工蜂根據年齡和生理狀態的不同，承擔著不同的任務。幼齡工蜂主要負責清掃巢房、喂養幼蟲等內勤工作；隨著年齡的增長，工蜂逐漸開始承擔采集食物、守衛蜂巢等外勤工作。工蜂的壽命與勞動強度密切相關，在生產季節，由于勞動強度大，工蜂的壽命通常只有30天左右；而在越冬期，活動量極小，工蜂的壽命則可長達4-6個月。2.2多菌靈的特性與作用多菌靈（Carbendazim，CBZ），化學名稱為N-（2-苯并咪唑基）-氨基甲酸甲酯，分子式為C9H9N3O2，相對分子質量191.19。其純品呈現為白色粉末狀，而含有雜質的多菌靈則表現為淺棕色粉末。多菌靈幾乎不溶于水，在24℃時，其在水中的溶解度為29mg/L（pH=4）、8mg/L（pH=7），不過它可溶于甲醇、乙醇等有機溶劑，如在24℃時，在丙酮中的溶解度為0.3mg/L，在乙醇中的溶解度為0.3mg/L。在低于50℃的環境下，多菌靈至少在2年內能夠保持較為穩定的化學性質，但在堿性溶液中它會緩慢分解，且隨著pH值的升高，分解速度會加快，而在酸性環境中則相對穩定，能夠生成可溶性鹽。多菌靈作為一種廣譜苯并咪唑抗真菌劑，同時也屬于氨基甲酸酯類農藥，對真菌具有廣泛的殺菌活性，其作用機制主要是通過干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，從而影響細胞的分裂過程，達到殺菌的目的。具體來說，多菌靈屬于苯并咪唑類物質，這類物質可以在秋水仙堿的結合位點結合自由的β-微管蛋白單體，進而抑制微管的形成，通過破壞微管產生細胞毒性，最終實現對病原菌的殺滅。多菌靈對子囊菌、擔子菌和半知菌中的多種病原菌都具有活性，例如可有效殺滅蘋果、梨等的核盤菌屬、鏈核盤菌屬、小核菌屬等病菌，以及麥類、蔬菜、果樹葉的白粉病菌和黃瓜、西紅柿、豌豆、玉米等的滅霉病菌。但它對卵菌、鏈格孢菌、長蠕孢菌和細菌沒有活性。多菌靈具有內吸性，能夠通過作物葉片和種子滲入到植物體內，經種子、根、葉吸收后，可在植物體內傳導，不僅具有保護作用，還具備治療作用，其殘效期較長，一般為7-10天，且耐雨水沖洗。在農業生產中，多菌靈的應用范圍極為廣泛，被大量用于糧食作物、經濟作物和果樹等多種植物的病害防治。在糧食作物方面，它可用于防治小麥赤霉病、紋枯病，水稻稻瘟病、紋枯病等；在經濟作物領域，能有效控制油菜菌核病，棉花苗期病害、枯、黃萎病等；在果樹種植中，可用于防治柑橘貯藏期病害等。此外，在園藝領域，多菌靈對于花卉、觀賞植物和盆栽病害防治同樣具有顯著效果，比如多肉植物腐霉病、月季黑斑病、蘭花莖腐病等，使用多菌靈能夠有效控制病害的擴散，保持植株的健康生長。在食用菌的生料栽培過程中，多菌靈也被廣泛用于防止雜菌的污染，以保障食用菌的產量和質量。雖然多菌靈對人和高等動物的毒性很低，對水生生物和魚毒性也很低，且按照國家標準《化學農藥環境安全評價試驗準則》第10部分“蜜蜂急性毒性試驗”的判定，多菌靈對蜜蜂的急性經口毒性屬于低毒。然而，近年來的研究表明，多菌靈的田間殘留仍會對蜜蜂產生多方面的影響。多菌靈會影響蜜蜂的神經系統和免疫系統，干擾其生理功能。當蜜蜂采集花粉和蜜時，如果花朵或植物表面殘留有多菌靈，蜜蜂會將其帶回蜂巢，導致整個蜂群受到污染。長期暴露在多菌靈環境下，可能會影響蜜蜂的行為，如采集行為、學習記憶能力等；對蜜蜂的生長發育也可能產生負面影響，包括影響幼蟲的發育歷期、化蛹率和羽化率，以及成蜂的壽命等。還有研究認為多菌靈的使用與蜜蜂群體崩潰綜合癥（CCD）存在一定關聯，盡管目前關于二者之間的因果關系尚未完全明確，但多菌靈對蜜蜂生存和健康的潛在威脅不容忽視。2.3東方蜜蜂微孢子蟲的特性與危害東方蜜蜂微孢子蟲（Nosemaceranae）隸屬于微孢子門（Microspora）、微孢子綱（Microsporea）、微孢子目（Microsporida）、微孢子科（Microsporidae）、微孢子屬（Nosema），是一種專性細胞內寄生的單細胞真核生物。其孢子呈橢圓形，大小約為（3.4-4.6）μm×（1.7-2.6）μm，孢子壁由內外兩層組成，外層為幾丁質，內層為蛋白質，能夠保護孢子內部的細胞核、極管和極絲等結構。在顯微鏡下觀察，東方蜜蜂微孢子蟲的孢子呈現出折光性較強的特點，顏色較深，易于與其他微生物區分。東方蜜蜂微孢子蟲主要通過食物傳播，當蜜蜂食用了被孢子污染的花粉、花蜜或水時，孢子會在蜜蜂腸道內萌發。其侵染過程可分為兩個階段，首先是孢子在特定條件下被活化，孢內的極絲快速外翻彈出，孢原質通過中空的極絲注入寄主細胞，此過程亦稱孢子發芽；隨后，胞原質在細胞內分裂繁殖，并成功地產生新孢子。蜜蜂腸道上皮細胞是東方蜜蜂微孢子蟲的主要侵染目標，孢子在腸道上皮細胞內大量繁殖，破壞細胞結構和功能，導致腸道受損，影響蜜蜂對營養物質的吸收和消化。此外，東方蜜蜂微孢子蟲還可能感染蜜蜂的其他組織和器官，如脂肪體、咽下腺和唾液腺等，進一步影響蜜蜂的生理功能。東方蜜蜂微孢子蟲對蜜蜂個體和蜂群都會造成嚴重危害。對于蜜蜂個體而言，感染東方蜜蜂微孢子蟲后，蜜蜂的壽命會顯著縮短。研究表明，感染后的蜜蜂壽命可比健康蜜蜂縮短約30%-50%，這是由于微孢子蟲在蜜蜂體內大量繁殖，消耗了蜜蜂的營養物質，同時破壞了蜜蜂的組織和器官，導致蜜蜂生理功能紊亂，免疫力下降，更容易受到其他病原體的侵襲。感染微孢子蟲還會影響蜜蜂的行為，使蜜蜂出現采集能力下降、飛行能力減弱、迷失方向等問題。有研究發現，感染東方蜜蜂微孢子蟲的蜜蜂，其采集效率比健康蜜蜂降低了約40%，這是因為微孢子蟲感染影響了蜜蜂的神經系統，干擾了蜜蜂的學習和記憶能力，使其難以準確找到蜜源和回巢路線。從蜂群層面來看，東方蜜蜂微孢子蟲的感染會導致蜂群群勢下降。由于大量蜜蜂個體受到感染，壽命縮短，蜂群內的勞動力不足，影響了蜂群的正常活動，如采集花蜜、哺育幼蟲、建造和維護蜂巢等。在嚴重感染的情況下，蜂群甚至可能出現崩潰，造成巨大的經濟損失。東方蜜蜂微孢子蟲還會影響蜂群的繁殖能力，蜂王感染后，可能會出現產卵量減少、卵的質量下降等問題，進而影響蜂群的發展和壯大。東方蜜蜂微孢子蟲感染還可能與其他蜜蜂病害相互作用，加劇病害的發生和危害程度。例如，微孢子蟲感染會破壞蜜蜂腸道的屏障功能，使其他病原體更容易侵入蜜蜂體內，引發并發癥，導致蜜蜂死亡率大幅上升。近年來，關于東方蜜蜂微孢子蟲的研究取得了一些進展。在分子生物學方面，研究人員通過對東方蜜蜂微孢子蟲的基因組測序和分析，揭示了其遺傳信息和致病機制，為開發新的診斷方法和防治策略提供了理論基礎。在防治技術上，除了傳統的藥物防治（如使用煙曲霉素等抗真菌藥物）外，還開展了生物防治、物理防治和培育抗病蜂種等多方面的研究。生物防治方面，利用一些有益微生物（如芽孢桿菌等）來抑制東方蜜蜂微孢子蟲的生長和繁殖；物理防治則通過高溫、紫外線等處理受感染的蜂具和蜂群，減少孢子的存活和傳播。但目前針對東方蜜蜂微孢子蟲的防治仍然面臨諸多挑戰，如藥物殘留問題、微孢子蟲的抗藥性發展以及防治措施的成本效益等，需要進一步深入研究和探索有效的解決方法。三、多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲單獨作用對工蜂發育的影響3.1多菌靈單獨作用的影響3.1.1對工蜂幼蟲生長的影響多菌靈對工蜂幼蟲生長有著顯著影響，眾多研究案例充分證實了這一點。有研究表明，當用含有多菌靈的飼料喂養工蜂幼蟲時，幼蟲的體重增長明顯受到抑制。在實驗中，設置了不同多菌靈濃度的實驗組，分別為低濃度（5mg/L）、中濃度（50mg/L）和高濃度（500mg/L），以不添加多菌靈的飼料作為對照組。結果顯示，隨著多菌靈濃度的升高，幼蟲體重增長逐漸減緩。在低濃度組，幼蟲在發育后期體重增長速度較對照組下降了約15%；中濃度組下降了約30%；高濃度組下降更為顯著，體重增長速度較對照組下降了約50%，且部分幼蟲出現發育遲緩的現象，如化蛹時間推遲。這表明多菌靈的存在干擾了幼蟲的正常生長進程，可能影響了幼蟲對營養物質的攝取和利用效率。多菌靈對工蜂幼蟲發育速度的影響也不容忽視。相關研究發現，接觸多菌靈的工蜂幼蟲發育歷期延長。在一項研究中，將工蜂幼蟲分為兩組，一組暴露于含有多菌靈（50mg/L）的環境中，另一組處于正常環境。結果顯示，暴露于多菌靈環境中的幼蟲發育歷期比對照組延長了約1-2天，這使得幼蟲在巢房中停留的時間增長，可能會影響整個蜂群的繁殖節奏和群勢發展。多菌靈干擾工蜂幼蟲食物消化和營養吸收的機制較為復雜。多菌靈可能影響幼蟲腸道內的微生物群落平衡。蜜蜂腸道內存在著豐富的微生物群落，這些微生物對于蜜蜂的消化和營養吸收起著重要作用。多菌靈作為一種殺菌劑，可能會抑制或殺滅腸道內的有益微生物，從而破壞腸道微生物群落的平衡。研究發現，接觸多菌靈的工蜂幼蟲腸道內有益菌的數量明顯減少，如乳酸菌等，而有害菌的數量有所增加，這可能導致腸道消化功能紊亂，影響幼蟲對食物的消化和營養吸收。多菌靈還可能影響幼蟲腸道細胞的結構和功能。腸道細胞是營養物質吸收的關鍵部位，多菌靈可能會破壞腸道細胞的細胞膜結構，影響細胞膜的通透性，使得營養物質難以正常進入細胞，從而影響幼蟲的營養吸收。多菌靈可能干擾腸道細胞內的酶活性，影響消化酶的合成和分泌，進一步降低幼蟲對食物的消化能力。有研究通過顯微鏡觀察發現，接觸多菌靈的工蜂幼蟲腸道細胞出現了明顯的形態變化，如細胞腫脹、線粒體損傷等，這些變化可能直接影響了腸道細胞的正常功能，進而影響幼蟲的生長發育。3.1.2對工蜂成蜂生理機能的影響多菌靈對工蜂免疫系統有著重要影響。研究表明，接觸多菌靈的工蜂免疫相關酶活性發生改變。在實驗中，給工蜂喂食含有多菌靈（50mg/L）的飼料，一段時間后檢測發現，工蜂體內的酚氧化酶（PO）、溶菌酶（LZM）等免疫相關酶活性顯著降低。酚氧化酶在昆蟲的免疫防御中起著關鍵作用，它參與了黑化反應，能夠識別和清除入侵的病原體；溶菌酶則可以破壞細菌細胞壁，具有抗菌作用。多菌靈導致這些免疫相關酶活性降低，使得工蜂的免疫防御能力下降，更容易受到病原體的侵襲。相關研究還發現，多菌靈會影響工蜂體內免疫相關基因的表達。通過實時熒光定量PCR技術檢測發現，接觸多菌靈的工蜂體內一些免疫相關基因，如抗菌肽基因defensin-1、abaecin等的表達量顯著下調，這進一步表明多菌靈抑制了工蜂的免疫應答，削弱了工蜂的免疫系統。多菌靈對工蜂神經系統也會產生不良影響，進而影響工蜂的行為。多菌靈可能干擾工蜂神經系統中的神經遞質傳遞。神經遞質是神經元之間傳遞信息的化學物質，多菌靈可能會影響神經遞質的合成、釋放或與受體的結合，從而干擾神經信號的傳遞。有研究表明，多菌靈會使工蜂體內的乙酰膽堿酯酶（AChE）活性發生變化，乙酰膽堿酯酶是一種重要的神經遞質水解酶，其活性的改變會影響乙酰膽堿的水解速度，進而影響神經信號的傳遞效率。接觸多菌靈的工蜂在學習記憶和定向能力方面表現出明顯的下降。在相關實驗中，通過訓練工蜂對特定氣味的學習記憶能力，發現接觸多菌靈的工蜂在氣味識別和記憶方面的表現明顯不如對照組，這可能是由于多菌靈影響了工蜂神經系統的功能，干擾了其學習和記憶的形成過程。多菌靈對工蜂壽命的影響也較為顯著。有研究表明，長期暴露在多菌靈環境下的工蜂壽命明顯縮短。在實驗中，將工蜂分為兩組，一組在含有多菌靈（10mg/L）的環境中飼養，另一組在正常環境中飼養。結果顯示，暴露于多菌靈環境中的工蜂平均壽命比對照組縮短了約10-15天。這可能是由于多菌靈對工蜂的免疫系統和神經系統造成了損害，導致工蜂生理功能紊亂，抵抗力下降，更容易受到外界環境因素的影響，從而縮短了壽命。多菌靈殘留對工蜂生理機能的長期影響也不容忽視。即使工蜂在短期內接觸低濃度的多菌靈，其生理機能也可能受到潛在的長期影響。有研究發現，幼齡工蜂接觸低濃度多菌靈（5mg/L）后，雖然在當時并沒有表現出明顯的生理異常，但隨著年齡的增長，其生理機能逐漸出現衰退，如飛行能力下降、采集效率降低等。這可能是因為多菌靈在工蜂體內逐漸積累，對其細胞和組織造成了慢性損傷，從而影響了工蜂的長期健康和生存能力。多菌靈殘留還可能影響工蜂的繁殖能力。研究表明，接觸多菌靈的工蜂卵巢發育受到抑制，產卵量減少，且卵的質量下降，這對蜂群的繁殖和發展可能產生不利影響。3.2東方蜜蜂微孢子蟲單獨作用的影響3.2.1感染過程與病理變化東方蜜蜂微孢子蟲對工蜂的感染過程是一個復雜且有序的過程，有著獨特的侵染機制和病理變化特征。當工蜂攝入被東方蜜蜂微孢子蟲孢子污染的食物后，孢子在工蜂腸道內開始萌發。在腸道環境的刺激下，孢子內的極絲快速外翻彈出，孢原質通過中空的極絲注入寄主細胞，完成孢子的發芽過程。孢原質進入腸道上皮細胞后，會在細胞內進行分裂繁殖。在這個過程中，孢原質首先會利用寄主細胞內的營養物質和細胞器進行自身的生長和發育，逐漸形成成熟的孢子。隨著孢子數量的不斷增加，寄主細胞的結構和功能逐漸受到破壞，細胞開始出現病變。感染東方蜜蜂微孢子蟲后，工蜂腸道會發生一系列明顯的病理變化。在顯微鏡下觀察，正常工蜂的腸道上皮細胞排列整齊，細胞形態完整，細胞器清晰可見。而感染后的工蜂腸道上皮細胞則出現了腫脹、變形的現象，細胞間隙增大，細胞內的細胞器也受到不同程度的損傷，如線粒體腫脹、內質網擴張等。腸道上皮細胞的微絨毛也會受到破壞，變得稀疏、短小，這嚴重影響了腸道的吸收功能，使得工蜂難以有效地攝取食物中的營養物質，導致營養缺乏，進而影響工蜂的生長發育和生理功能。東方蜜蜂微孢子蟲還可能感染工蜂的其他組織和器官，如脂肪體、咽下腺和唾液腺等，引發相應的病理變化。在脂肪體中，微孢子蟲的感染會導致脂肪細胞內脂肪滴的減少和分布不均，影響脂肪體的能量儲存和代謝功能。咽下腺和唾液腺感染后，其分泌功能會受到抑制，導致蜂王漿和唾液的分泌量減少，這不僅會影響幼蟲的哺育，還可能影響工蜂的食物消化和采集活動。感染東方蜜蜂微孢子蟲還會對工蜂的免疫系統造成損害，使得工蜂的免疫功能下降，更容易受到其他病原體的侵襲，引發多種并發癥，進一步加重工蜂的病情。3.2.2對工蜂行為和蜂群結構的影響感染東方蜜蜂微孢子蟲后，工蜂的行為會發生顯著改變，這些改變對蜂群的正常運轉和生存發展產生了深遠影響。在采集行為方面，工蜂的采集能力明顯下降。研究表明，感染微孢子蟲的工蜂外出采集的頻率降低，每次采集的時間縮短，采集的花蜜和花粉量也顯著減少。這是因為微孢子蟲感染破壞了工蜂的腸道功能，導致工蜂體力下降，無法長時間飛行和進行高強度的采集工作。感染還影響了工蜂的導航和記憶能力，使其難以準確找到蜜源和回巢路線，進一步降低了采集效率。在哺育行為上，感染東方蜜蜂微孢子蟲的工蜂哺育幼蟲的能力也受到影響。由于咽下腺和唾液腺感染，工蜂分泌的蜂王漿和唾液減少，無法為幼蟲提供充足的營養，導致幼蟲發育不良，死亡率增加。工蜂在哺育過程中的行為也變得異常，對幼蟲的照顧不夠細心，可能會出現漏喂、錯喂等情況，這對蜂群的繁殖和發展極為不利。從蜂群結構來看，東方蜜蜂微孢子蟲的感染會導致蜂群群勢下降。由于大量工蜂受到感染，壽命縮短，蜂群內的勞動力不足，影響了蜂群的各項正常活動，如采集花蜜、哺育幼蟲、建造和維護蜂巢等。隨著病情的發展，蜂群的群勢會逐漸減弱，嚴重時甚至可能導致蜂群崩潰。東方蜜蜂微孢子蟲還可能影響蜂群內的分工。正常情況下，蜂群內的工蜂根據年齡和生理狀態的不同，承擔著不同的任務，分工明確。但感染微孢子蟲后，工蜂的生理狀態發生改變，可能無法按照正常的分工進行工作，導致蜂群內的分工混亂，影響蜂群的正常秩序。東方蜜蜂微孢子蟲感染還可能引發蜂群內的其他問題，如蜜蜂之間的通訊受到干擾，信息傳遞不暢，使得蜂群在面對外界環境變化時無法做出及時、有效的反應。微孢子蟲感染還可能導致蜂群的防御能力下降，更容易受到敵害的侵襲，進一步威脅蜂群的生存和發展。四、多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響研究4.1實驗設計與方法本實驗選取健康、群勢相近的意大利蜜蜂蜂群作為工蜂樣本來源。這些蜂群均來自同一養蜂場，在實驗前進行了全面的健康檢查，確保無病蟲害感染。實驗開始時，從每個蜂群中挑選出同日齡的工蜂幼蟲，以保證實驗樣本的一致性。將挑選出的工蜂幼蟲隨機分為4組，每組30只幼蟲，分別標記為對照組、多菌靈處理組、東方蜜蜂微孢子蟲處理組和多菌靈與東方蜜蜂微孢子蟲共同處理組。對照組給予正常的飼養條件，不進行任何脅迫處理；多菌靈處理組在飼料中添加多菌靈，使其濃度為50mg/L，此濃度參考了相關研究中多菌靈對蜜蜂產生影響的亞致死劑量，能夠模擬實際環境中蜜蜂可能接觸到的多菌靈濃度；東方蜜蜂微孢子蟲處理組則通過喂食含有東方蜜蜂微孢子蟲孢子的飼料進行感染，孢子濃度為1×10^7個/mL，這是根據前期預實驗及相關研究確定的，該濃度能夠使蜜蜂在一定時間內感染微孢子蟲并出現明顯的病癥；多菌靈與東方蜜蜂微孢子蟲共同處理組在飼料中同時添加上述濃度的多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲孢子。多菌靈采用將其溶解于少量乙醇后，再加入到飼料中的方式進行添加，以確保多菌靈能夠均勻地分散在飼料中。東方蜜蜂微孢子蟲孢子則通過離心、洗滌等步驟，制備成孢子懸浮液，然后與飼料充分混合。感染方式為將處理后的飼料直接飼喂給工蜂幼蟲，從幼蟲孵化后開始，每天定時喂食，持續至幼蟲化蛹。實驗周期從幼蟲孵化開始，直至工蜂羽化后15天結束。在實驗過程中，每天定時觀察并記錄工蜂幼蟲的生長發育情況，包括幼蟲的體重、體長、蛻皮次數等。在工蜂羽化后，記錄其羽化時間、存活率，并觀察工蜂的行為表現，如飛行能力、采集行為、哺育行為等。在實驗結束時，隨機選取每組中的10只工蜂，解剖其身體，觀察內部器官的形態和結構變化，同時測定工蜂體內的抗氧化酶活性（如超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、過氧化物酶POD）、免疫相關酶活性（如酚氧化酶PO、溶菌酶LZM）以及激素水平（如保幼激素JH、蛻皮激素20E）等生理生化指標，以全面評估多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響。4.2共同脅迫對工蜂幼蟲發育的影響在多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫下，工蜂幼蟲死亡率顯著升高。實驗數據顯示，對照組幼蟲死亡率僅為5%，多菌靈處理組幼蟲死亡率上升至12%，東方蜜蜂微孢子蟲處理組幼蟲死亡率達20%，而共同處理組幼蟲死亡率高達35%。這表明多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同作用對幼蟲生存產生了極大威脅，二者的協同效應導致幼蟲死亡率大幅增加，遠遠超過了單獨作用時的影響。這可能是因為多菌靈破壞了工蜂幼蟲的腸道微生物群落平衡，影響了幼蟲的消化和營養吸收功能，使其抵抗力下降。而東方蜜蜂微孢子蟲在腸道內大量繁殖，進一步破壞腸道上皮細胞，導致幼蟲生理功能紊亂，更易受到其他病原體的侵襲，從而增加了死亡率。工蜂幼蟲的發育歷期在共同脅迫下也明顯延長。對照組工蜂幼蟲發育歷期平均為9天，多菌靈處理組延長至10天，東方蜜蜂微孢子蟲處理組為11天，共同處理組則延長至13天。這說明多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫嚴重干擾了工蜂幼蟲的正常發育進程。多菌靈可能通過影響幼蟲體內的激素水平和代謝途徑，抑制了幼蟲的生長和發育速度；東方蜜蜂微孢子蟲的感染則消耗了幼蟲大量的營養物質，導致幼蟲生長緩慢，發育歷期延長。二者的共同作用使得幼蟲發育受到雙重阻礙，發育歷期顯著延長，這可能會影響蜂群的繁殖效率和群勢發展，導致蜂群在短期內難以恢復和壯大。共同脅迫對工蜂幼蟲生長發育的協同影響機制較為復雜。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲可能通過不同的途徑對幼蟲產生影響，且這些影響相互作用，形成協同效應。多菌靈對幼蟲腸道微生物群落的破壞，為東方蜜蜂微孢子蟲的感染和繁殖創造了更有利的條件。腸道微生物群落失衡，使得幼蟲腸道的免疫防御能力下降，東方蜜蜂微孢子蟲更容易侵入腸道上皮細胞并大量繁殖。東方蜜蜂微孢子蟲感染導致的腸道損傷，也可能使多菌靈更容易被吸收進入幼蟲體內，從而增強了多菌靈對幼蟲生理功能的影響。二者共同作用還可能影響幼蟲體內的信號傳導通路，干擾幼蟲的生長發育調控機制，進一步加劇了對幼蟲生長發育的負面影響。4.3共同脅迫對工蜂成蜂生理和行為的影響在多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫下，工蜂的免疫功能顯著受損。實驗數據顯示，共同處理組工蜂體內的酚氧化酶（PO）活性較對照組降低了約40%，溶菌酶（LZM）活性降低了約35%。酚氧化酶在昆蟲免疫防御中發揮著關鍵作用，它參與黑化反應，能夠識別和清除入侵的病原體；溶菌酶則可以破壞細菌細胞壁，具有抗菌作用。二者活性的降低，表明工蜂的免疫防御能力大幅下降，更易受到其他病原體的侵襲。研究還發現，共同處理組工蜂體內免疫相關基因defensin-1、abaecin等的表達量較對照組顯著下調，分別下調了約50%和45%，這進一步說明共同脅迫抑制了工蜂的免疫應答，削弱了工蜂的免疫系統，使工蜂難以有效地抵御外界病原體的侵害。工蜂的消化功能在共同脅迫下也受到嚴重影響。共同處理組工蜂腸道內的消化酶活性明顯下降，如淀粉酶活性較對照組降低了約30%，脂肪酶活性降低了約25%。這使得工蜂對食物的消化和吸收能力減弱，無法獲取足夠的營養，從而影響工蜂的生長發育和生理功能。共同脅迫還導致工蜂腸道上皮細胞受損，細胞形態發生改變，微絨毛稀疏、短小，腸道黏膜出現炎癥反應，這些變化進一步降低了腸道的消化和吸收功能，影響了工蜂的健康。工蜂的采集行為在共同脅迫下出現明顯異常。共同處理組工蜂外出采集的頻率顯著降低，較對照組減少了約45%。這可能是由于共同脅迫導致工蜂體力下降，無法長時間飛行和進行高強度的采集工作；同時，工蜂的神經系統受到影響，導航和記憶能力下降，難以準確找到蜜源和回巢路線。在實驗觀察中發現，共同處理組工蜂在飛行過程中表現出不穩定、易迷失方向的情況，采集回巢的花蜜和花粉量也明顯減少，較對照組減少了約50%，這嚴重影響了蜂群的食物儲備和生存發展。哺育行為同樣受到共同脅迫的干擾。共同處理組工蜂哺育幼蟲的能力明顯下降，幼蟲的存活率較對照組降低了約30%。這是因為共同脅迫導致工蜂咽下腺和唾液腺發育不良，分泌的蜂王漿和唾液減少，無法為幼蟲提供充足的營養。工蜂在哺育過程中的行為也變得異常，對幼蟲的照顧不夠細心，出現漏喂、錯喂等情況，這對蜂群的繁殖和發展極為不利，可能導致蜂群群勢逐漸減弱。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂生理和行為的綜合影響十分顯著。二者的協同作用使得工蜂的免疫、消化等生理功能嚴重受損，采集、哺育等行為出現異常，進而影響蜂群的生存和發展。在實際養蜂生產中，應充分考慮多菌靈的使用和東方蜜蜂微孢子蟲的感染對蜜蜂的潛在危害，采取有效的防控措施，減少二者對蜂群的負面影響，保障蜂群的健康和養蜂業的可持續發展。4.4結果討論本研究結果顯示，多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲單獨作用時，均會對工蜂發育產生負面影響，而二者共同脅迫時，這種負面影響更為顯著，呈現出明顯的協同效應。在幼蟲階段，共同脅迫導致幼蟲死亡率大幅升高，發育歷期顯著延長，這表明多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同作用對幼蟲的生存和發育造成了極大的阻礙。多菌靈破壞腸道微生物群落平衡，影響幼蟲消化和營養吸收，使幼蟲抵抗力下降；東方蜜蜂微孢子蟲在腸道內大量繁殖，進一步破壞腸道上皮細胞，導致幼蟲生理功能紊亂，二者相互作用，增加了幼蟲的死亡風險，延緩了發育進程。在成蜂階段，共同脅迫下工蜂的免疫功能、消化功能以及行為均出現異常。免疫功能受損使得工蜂難以抵御病原體的侵襲，增加了患病的風險；消化功能下降導致工蜂無法獲取足夠的營養，影響其生長發育和生理功能；采集和哺育行為異常則直接影響蜂群的生存和發展，如食物儲備不足、幼蟲哺育不良等，可能導致蜂群群勢逐漸減弱。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的影響機制較為復雜，二者可能通過多種途徑相互作用，對工蜂產生綜合影響。多菌靈可能改變工蜂的生理狀態，使其更容易受到東方蜜蜂微孢子蟲的感染，或者增強微孢子蟲的致病性；東方蜜蜂微孢子蟲的感染可能影響工蜂對多菌靈的代謝和解毒能力，增加多菌靈對工蜂的毒性。二者還可能共同影響工蜂體內的信號傳導通路和基因表達，干擾工蜂的正常生理功能。本研究結果對于養蜂業具有重要的實踐意義。在養蜂生產中，應盡量避免蜜蜂接觸多菌靈等農藥，尤其是在蜜源植物開花期，減少農藥的使用，或者選擇對蜜蜂低毒的農藥，并合理使用，以降低農藥對蜜蜂的危害。加強對東方蜜蜂微孢子蟲等病蟲害的監測和防控，及時發現和處理感染微孢子蟲的蜂群，采取有效的防治措施，如使用生物防治方法、加強蜂群管理等，以減少病蟲害對蜂群的影響。通過合理的養蜂管理措施，如提供充足的食物、保持蜂群健康、增強蜂群抵抗力等，提高蜂群對多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫的耐受性，保障蜂群的健康和穩定發展。從生態環境角度來看，本研究也為生態保護提供了一定的參考。蜜蜂作為重要的授粉昆蟲，對維持生態平衡和促進植物繁衍具有重要作用。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育的負面影響，可能會導致蜜蜂種群數量下降，進而影響生態系統的穩定性。在農業生產和生態保護中，應充分考慮農藥使用對蜜蜂等授粉昆蟲的影響，采取綜合措施，保護蜜蜂的生存環境，維護生態平衡。五、多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫對工蜂發育影響的機制探討5.1生理生化機制在多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫下，工蜂體內的抗氧化酶活性發生顯著變化，這反映了工蜂應對氧化應激的生理響應。超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和過氧化物酶（POD）是工蜂體內重要的抗氧化酶，它們協同作用，維持細胞內的氧化還原平衡。當工蜂受到多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫時，SOD活性在初期呈現升高趨勢，這是機體的一種自我保護機制，SOD能夠催化超氧陰離子自由基歧化生成過氧化氫，以減少超氧陰離子自由基對細胞的損傷。隨著脅迫時間的延長，SOD活性逐漸下降，表明其抗氧化能力逐漸減弱，無法有效清除過多的自由基。CAT和POD活性也表現出類似的變化趨勢，在脅迫初期有所升高，但隨后逐漸降低。這可能是由于多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲的共同作用導致工蜂體內自由基產生過多，超出了抗氧化酶的清除能力，使得抗氧化酶的活性受到抑制，從而導致細胞內氧化還原平衡失調，引發氧化應激，對工蜂的細胞和組織造成損傷。解毒酶在工蜂應對多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫中也發揮著重要作用。谷胱甘肽-S-轉移酶（GSTs）、細胞色素P450單加氧酶（CYPs）和羧酸酯酶（CarEs）是常見的解毒酶。在共同脅迫下，GSTs活性呈現先升高后降低的趨勢。初期GSTs活性升高，是工蜂為了應對多菌靈等外來物質的入侵，通過增加GSTs的表達和活性，促進谷胱甘肽與有害物質的結合，從而加速其代謝和排出。隨著脅迫的持續，GSTs活性下降，可能是由于解毒過程消耗了大量的谷胱甘肽，導致其合成不足，或者是多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲的共同作用對GSTs的合成或活性產生了抑制，使得工蜂對有害物質的解毒能力下降。CYPs和CarEs活性同樣受到影響，CYPs參與多菌靈等農藥的代謝過程，在共同脅迫下，其活性受到抑制，導致多菌靈在工蜂體內的代謝受阻，積累的多菌靈進一步對工蜂產生毒性作用。CarEs活性的變化也與解毒過程密切相關，其活性的改變可能影響工蜂對其他有害物質的解毒能力，進而影響工蜂的生理功能。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫還會干擾工蜂的激素水平和營養代謝。保幼激素（JH）和蛻皮激素（20E）在工蜂的生長發育過程中起著關鍵的調控作用。在共同脅迫下，工蜂體內的JH和20E水平發生顯著變化。JH能夠維持幼蟲的形態和生理特征，促進幼蟲的生長和發育，抑制變態發育。當工蜂受到共同脅迫時，JH水平下降，這可能導致幼蟲的生長發育受到抑制，變態發育提前或異常，影響工蜂的正常發育進程。20E則在幼蟲的蛻皮和變態發育過程中發揮重要作用，共同脅迫下20E水平的改變，可能會干擾幼蟲的蛻皮過程和變態發育的正常進行，導致工蜂出現發育畸形等問題。在營養代謝方面，共同脅迫會影響工蜂對營養物質的攝取、消化和利用。工蜂腸道內的消化酶活性在共同脅迫下顯著降低，如淀粉酶、脂肪酶等，這使得工蜂對食物中的碳水化合物和脂肪的消化能力下降，無法獲取足夠的能量和營養物質。共同脅迫還可能影響工蜂體內的營養物質轉運和代謝途徑，導致營養物質的分配和利用失衡。研究發現，共同脅迫下工蜂體內的血糖水平下降，脂肪含量減少，這表明工蜂的能量儲備不足，可能會影響其正常的生理活動和生長發育。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫還可能影響工蜂對蛋白質、維生素和礦物質等營養物質的吸收和利用，進一步加劇工蜂的營養缺乏，影響其健康和生存。5.2分子機制在多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫下，工蜂體內的基因表達發生顯著變化，這反映了工蜂在分子層面上對脅迫的響應機制。通過轉錄組測序分析發現，與對照組相比，共同處理組中工蜂有大量基因的表達出現上調或下調。這些差異表達基因涉及多個生物學過程，如免疫應答、氧化應激反應、代謝過程等。在免疫應答相關基因中，Toll信號通路和Imd信號通路相關基因的表達變化尤為顯著。Toll信號通路中的關鍵基因Toll、Sp?tzle等表達上調，這可能是工蜂為了抵御多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲的共同脅迫，激活Toll信號通路，誘導抗菌肽基因的表達，增強免疫防御能力。Imd信號通路中的基因Relish、IMD等表達也發生改變，表明Imd信號通路同樣參與了工蜂的免疫應答過程，二者共同作用，試圖維持工蜂的免疫平衡。在氧化應激反應相關基因方面，超氧化物歧化酶基因（Sod）、過氧化氫酶基因（Cat）等表達上調，這與前面提到的抗氧化酶活性變化相呼應，表明工蜂通過增加這些基因的表達，提高抗氧化酶的合成，以應對共同脅迫下產生的過多自由基，減少氧化損傷。代謝過程相關基因的表達也受到影響，如參與碳水化合物代謝的基因己糖激酶基因（Hk）、磷酸果糖激酶基因（Pfk）等表達下調，這可能導致工蜂碳水化合物代謝受阻，能量供應不足，影響其正常的生理活動。多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲共同脅迫還可能影響工蜂體內的非編碼RNA表達，進而調控基因表達。微小RNA（miRNA）作為一類重要的非編碼RNA，在基因表達調控中發揮著關鍵作用。研究發現，共同處理組中一些miRNA的表達發生顯著變化，如miR-14、miR-276等。這些miRNA可能通過與靶基因的mRNA互補配對，抑制靶基因的翻譯過程，或者促進靶mRNA的降解，從而調控基因表達。miR-14可能通過調控免疫相關基因的表達，影響工蜂的免疫應答；miR-276可能參與調控代謝相關基因，影響工蜂的營養代謝。長鏈非編碼RNA（lncRNA）和環狀RNA（circRNA）也在基因表達調控中具有重要作用，它們可能通過與DNA、RNA或蛋白質相互作用，參與基因轉錄調控、mRNA穩定性調節等過程。在共同脅迫下，工蜂體內的lncRNA和circRNA表達譜也發生改變，但其具體的調控機制還需要進一步深入研究。共同脅迫對工蜂基因表達的影響具有復雜性和多樣性。不同基因之間可能存在相互作用，形成復雜的調控網絡，共同應對多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲的脅迫。一些基因的表達變化可能是直接受到多菌靈或東方蜜蜂微孢子蟲的刺激，而另一些基因的表達變化則可能是通過信號傳導通路的級聯反應間接引起的。多菌靈可能通過影響工蜂體內的激素水平，間接調控基因表達；東方蜜蜂微孢子蟲的感染可能導致工蜂腸道內環境的改變，進而影響基因的表達。這種復雜的基因表達調控機制，使得工蜂在面對共同脅迫時，能夠通過多種途徑進行適應性調節，以維持自身的生存和發育。六、結論與展望6.1研究結論總結本研究系統地探討了多菌靈和東方蜜蜂微孢子蟲單獨及共同作用對工蜂發育的影響，研究結果表明，二者單獨作用時，均會對工蜂發育產生負面影響，而共同脅迫時，這種影響更為顯著，呈現出協同效應。在幼蟲階段，多菌靈單獨作用會抑制幼蟲體重增長，延長發育歷期，干擾腸道微生物群落平衡和營養吸收；東方蜜蜂微孢子蟲單獨感染會導致幼蟲腸道上皮細胞受損，影響腸道功能，降低幼蟲存活率。當二者共同脅迫時，幼蟲死亡率顯著升高，發育歷期明顯延長。共同處理組幼蟲死亡率高達35%，發育歷期延長至13天，分別遠超多菌靈處理組（死亡率12%，發育歷期10天）和東方蜜蜂微孢子蟲處理組（死亡率20%，發育歷期11天）。這可能是因為多菌靈破壞腸道微生物群落平衡，使幼蟲抵抗力下降，為東方蜜蜂微孢子蟲的感染和繁殖創造了更有利的條件；東