化學研究方法-色譜分析色譜分析

化學研究方法-色譜分析重現(xiàn)1903年俄羅斯植物學家Tsweet茨維特植物提取液CaCO3玻璃柱石油醚淋洗石油醚色譜色：顏色譜：圖譜1906年茨維特論文發(fā)表創(chuàng)建1903化學研究方法-色譜分析石油醚液相石油醚固相CaCO3流動相石油醚固定相CaCO3兩相本質(zhì)：混合物分離遷移固定液載氣化學研究方法-色譜分析12.1

色譜法分類填充柱色譜毛細管色譜分配色譜離子色譜排阻色譜等氣相色譜液相色譜氣體液體超臨界流動相化學研究方法-色譜分析分離效率高檢測靈敏度高多組分、復雜樣品的測定應用范圍廣：生命/藥物食品/環(huán)境化學研究方法-色譜分析載氣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)色譜柱檢測器氣相色譜分析流程示意圖1–

載氣鋼瓶；2–

減壓閥；3–

干燥管；4–

針形閥；5–

流量計；6–

壓力表；7–

進樣器；9–

色譜室；

10–

檢測器；11–

記錄儀化學研究方法-色譜分析將液體試樣瞬間氣化的裝置毛細管色譜常用1μL全自動液體進樣器填充柱色譜常用10μL化學研究方法-色譜分析控制面板CombiPal

三合一裝置頂空加熱裝置化學研究方法-色譜分析利用被測樣品（氣-液和氣-固）加熱平衡后，取其揮發(fā)氣體部分進入氣相色譜儀分析。化學研究方法-色譜分析填充柱毛細管柱(開管柱)內(nèi)徑粗3-5mm柱長1-3m/常用不銹鋼內(nèi)徑細0.2-0.5mm柱長20-100m/常用石英過去時現(xiàn)在時化學研究方法-色譜分析目前GC的主流主要為開管柱opentubularcolumn管內(nèi)壁涂漬固定液，無載體空心管主要特點分離能力強分析時間快柱容量小適用更復雜對象高載氣流速進樣量小/分流化學研究方法-色譜分析分流比常20:1原因：柱容量小毛細管柱進樣量必須極小（一般液樣10-2～10-3微升，氣樣約1微升）何時不用分流？化學研究方法-色譜分析熱導檢測器氫火焰離子檢測器電子捕獲檢測器火焰光度檢測器質(zhì)譜檢測器TCD

thermalconductivitydetectorFPD

flamephotometricdetectorFID

hydrogenflameionizationdetectorMSD

massspectrumdetectorECD

electroncapturedetector化學研究方法-色譜分析熱敏電阻不同氣體的熱擴散作用改變電阻“萬能”檢測器，但是靈敏度低常用于填充柱和濃度較大時熱敏電阻絲R參熱敏電阻絲R測載氣+組份參比池測量池純載氣構(gòu)造化學研究方法-色譜分析（1）含碳物質(zhì)氫火焰中離子化（2）外電場作用形成電流,與待測物質(zhì)量正比（1）檢測含碳有機化合物更通用（2）無機氣體、水、四氯化碳等含氫少或不含氫的物質(zhì)靈敏度低或不響應化學研究方法-色譜分析

確定每個色譜峰代表何種物質(zhì)利用氣相色譜的檢測信號峰高或峰面積，進行定量和半定量分析化學研究方法-色譜分析純標準樣對照文獻值對照儀器聯(lián)用定性保留值標樣加入雙柱定性相對保留值保留指數(shù)GC-MSGC-NIR身高法找人！流行中！色譜自身定性—保留值化學研究方法-色譜分析定量校正因子絕對校正因子相對校正因子原因:不同檢測器對不同組分的靈敏度不同測量f’常用標準物:苯(TCD),正庚烷（FID)自身測得,受條件影響相對某種標準物/便于比較化學研究方法-色譜分析

特點及要求：§簡便、準確§進樣量/操作條件對結(jié)果影響不大(同時)§試樣中所有組分必須全出峰化學研究方法-色譜分析內(nèi)標物要滿足以下要求：試樣中無與被測組分性質(zhì)相似不與待測組分反應峰鄰近又較好分離目的:為消除進樣量、操作條件對色譜定量的影響方法:定量地將內(nèi)標準物質(zhì)加入試樣中并混勻常用定量方法化學研究方法-色譜分析方法:已知濃度標準系列作工作曲線要求:進樣量和分離操作條件必須相同常用定量方法化學研究方法-色譜分析熱導檢測器氫火焰離子檢測器電子捕獲檢測器火焰光度檢測器質(zhì)譜檢測器TCD

thermalconductivitydetectorFPD

flamephotometricdetectorFID

hydrogenflameionizationdetectorMSD

massspectrumdetectorECD

electroncapturedetector化學研究方法-色譜分析商品名:HP-INNOWax30m×0.25mm×0.25um聚乙二醇:極性強商品名:HP-130m×0.25mm×0.25um二甲基聚硅氧烷:弱極性乙苯/對/間/鄰二甲苯分成4峰乙苯/對間/鄰二甲苯只有3峰固定液極性化學研究方法-色譜分析由圖可見存在最佳流速（uopt）。實際流速通常稍大于最佳流速，以縮短分析時間。化學研究方法-色譜分析

準確控制分離需要的溫度。當試樣復雜時，分離室溫度需要按一定程序控制溫度變化，各組分在最佳溫度下分離；保證液體試樣瞬間氣化；保證被分離后的組分通過時不在此冷凝；低于固定液使用溫度低于組分沸點能低則低！化學研究方法-色譜分析問什么要采用分流技術(shù)？化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析確定待測樣是否符合GC要求沸點低，<350oC,易揮發(fā)，熱穩(wěn)定濃度盡可能低：小于10ppm待測樣不能含有水份(特殊柱：水樣)溶劑沸點盡可能低，盡量不選用丙酮柱溫要低于固定液使用溫度樣品必須經(jīng)過0.45μm或0.22μm的濾膜過濾化學研究方法-色譜分析測定對象拓展檢測器不同化學研究方法-色譜分析項目LCHPLC色譜柱柱長/cm10-20010-25色譜柱柱內(nèi)徑/mm10-503-5固定相粒度：粒徑/μm75-6005-50色譜柱入口壓力/Mpa0.001-0.12-20色譜柱柱效/(理論塔板數(shù)/m)2-502×105-5×104進樣量/g1-1010-6-10-2分析時間/h1-200.05-1.0化學研究方法-色譜分析1、農(nóng)藥殘留量分析：含氯農(nóng)藥、有機磷

農(nóng)藥、除蟲菊等

2、致癌物質(zhì)：硝基呋喃及其代謝物、霉

素、亞硝胺、苯并芘等

3、水質(zhì)分析：內(nèi)分泌污染物等

4、其它……

化學研究方法-色譜分析1、蛋白質(zhì)分析

2、肽類的分析

3、核酸

4、氨基酸

5、其它……

化學研究方法-色譜分析1、新藥研發(fā)：目標物的檢測、純度等

2、藥品的預處理：片劑，油膏，水劑等

3、體液：血、尿、脊椎液、唾液等

4、抗菌素：青霉素、甾族(激素)等

5、其它……化學研究方法-色譜分析進樣口檢測器色譜圖色譜柱溶劑泵混合器化學研究方法-色譜分析溶劑柜真空脫氣機G1322A四元泵G1311A裝有高分子膜的真空容器。溶解氣體的分子尺寸較小，與高分子膜有更強的親和力。

只有一個泵，配有比例閥，能夠在不同時間吸取不同溶劑化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析自動進樣100樣品盤/機器手/自動洗針機械手樣品盤化學研究方法-色譜分析柱溫箱外掛架化學研究方法-色譜分析UV/Vis雙燈，全波長檢測，需選擇目標分析物的特征波長即可，兼顧強度與噪聲水平ＤＡＤ檢測器鎢燈耦合透鏡氘燈光源透鏡(消色差透鏡)氧化鈥濾光片支撐透鏡Flowcell光譜透鏡光柵陣列狹縫化學研究方法-色譜分析MSD化學研究方法-色譜分析進樣器高壓泵流動相色譜柱檢測器數(shù)據(jù)處理化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析反相HPLC

極性:固定相<流動相固定相-極性弱流動相(甲醇,乙腈等)-極性強極性小物質(zhì)后出峰正相HPLC

極性:固定相>流動相固定相-極性強流動相(己烷,庚烷)-極性弱極性物質(zhì)后出峰正相色譜20%反相色譜80%正相色譜20%反相色譜80%與固定相

極性相近

tR長主流化學研究方法-色譜分析類型性質(zhì)色譜分離方式烷基C8非極性反相、離子對烷基C18非極性反相、離子對苯基非極性反相芳硝基弱極性反相或正相氰基極性正相（反相）氨基極性正相（反相、陰離子交換）色譜柱的類型及適用范圍化學研究方法-色譜分析常用溶劑：乙腈、甲醇、水等等度洗脫：流動相比例恒定

梯度洗脫：逐步提高有機溶劑比例實際使用：甲醇-水/乙腈-水混合體系化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析化學研究方法-色譜分析進樣前，必須檢測樣品pH值，允許范圍2~7樣品必須經(jīng)過0.45μm或0.22μm的濾膜過濾進HPLC的樣品需要嚴格控制樣品的濃度范圍，防止系統(tǒng)污染及平頭峰的出現(xiàn)。化學研究方法-色譜分析連接色譜柱時，應注意連接方向，防止反接、反沖色譜柱。每次實驗結(jié)束時，應使色譜柱內(nèi)充滿純有機溶劑。化學研究方法-色譜分析HPLC流動相的所有溶劑至少需經(jīng)過G4砂芯漏斗的過濾，且需要超聲脫氣HPLC流動相的溶劑至少應為HPLC級/色譜級并與填料相匹配，水應為高純水（在夏季應每天更換）嚴禁長時間以純水