標準解讀

《DB32/T 3686-2019 山羊副流感病毒3型檢測技術規程》是江蘇省地方標準之一，旨在規范山羊副流感病毒3型（Goat Parainfluenza Virus Type 3, GPV-3）的實驗室檢測方法。該標準詳細規定了從樣品采集到結果報告整個過程的技術要求，適用于獸醫實驗室對GPV-3進行診斷性檢測。

標準首先明確了適用范圍，指出其主要用于指導從事動物疫病防控工作的技術人員正確執行GPV-3的檢測工作。接著，文件列舉了引用文件，這些文件為本標準提供了必要的背景信息和技術支持。

在術語和定義部分，標準對涉及的專業詞匯進行了明確界定，確保所有使用者對于關鍵概念有一致的理解。這包括但不限于“山羊副流感病毒3型”、“RT-PCR”等重要術語。

樣品采集與處理章節中，標準詳述了如何正確收集疑似感染GPV-3的山羊樣本，以及如何保存、運輸這些樣本以保證其質量不受影響。此外，還特別強調了生物安全措施的重要性，提醒操作人員采取適當防護措施防止交叉污染及個人傷害。

檢測方法部分介紹了兩種主要的檢測手段：實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（Real-time RT-PCR）和常規逆轉錄聚合酶鏈反應（Conventional RT-PCR）。每種方法都有詳細的步驟說明，涵蓋了試劑準備、模板制備、擴增條件設定等內容，并給出了陽性對照品的選擇建議。

最后，關于結果分析與報告，標準提出了具體的要求。當使用Real-time RT-PCR時，需根據Ct值判斷樣品是否含有GPV-3；而采用Conventional RT-PCR，則通過電泳圖譜來識別特異性條帶的存在與否。無論哪種方式，最終都需要形成書面報告，內容應包括但不限于實驗日期、檢測方法、結果判定等信息。


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....

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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2019-12-03 頒布
  • 2019-12-25 實施
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文檔簡介

ICS6502030

B40..

江蘇省地方標準

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型檢測技術規程

TechnicalregulationsfordetectionofCaprineparainfluenzavirus3

2019-12-03發布2019-12-25實施

江蘇省市場監督管理局發布

DB32/T3686—2019

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由江蘇省農業科學院提出并歸口

。

本標準起草單位江蘇省農業科學院

:。

本標準主要起草人李文良毛立李基棕郝飛劉茂軍楊蕾蕾孫敏

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3686—2019

山羊副流感病毒3型檢測技術規程

1范圍

本標準規定了山羊副流感病毒型的病原學檢測病毒核酸

3(Caprineparaifluenzavirus3,CPIV3)(

的和熒光定量檢測血清學檢測血凝抑制試驗的技術要求

RT-PCRRT-PCR)、[(HI)]。

本標準適用于山羊副流感病毒型及其感染情況的實驗室檢測

3。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

實驗室生物安全通用要求

GB19489

獸醫診斷樣品采集保存與運輸技術規范

NY/T541、

3病原學檢測

31材料

.

材料包括微量移液器水處理的管水處理的吸頭擴增管試劑三

:、DEPCEP、DEPC、PCR、TRIzol、

氯甲烷異丙醇處理水用水符合的規定反轉錄酶聚合酶混合液

、、DEPC(GB/T6682)、/TaqDNA、2×

一步法反應緩沖液一步法熒光定量試劑盒緩沖液瓊脂糖核酸染料引物

RT-PCR、RT-PCR、TAE、、、

引物與探針參見附錄

MF/MR、qMF/qMR(A)。

32儀器設備

.

儀器設備包括儀熒光定量儀臺式冷凍離心機電泳儀和水平電泳槽凝膠成相儀或

:PCR、PCR、、、(

紫外透射儀

)。

33反轉錄-聚合酶鏈式反應RT-PCR

.()

331樣品處理與RNA的提取

..

采集羊的鼻拭子氣管拭子或肺臟樣品的采集保存和運輸應符合的相關規定取

、(、NY/T541)。

待檢樣品液至無菌無酶的管中使用試劑提取試劑盒或自動化核酸

200μL、RNAEP,TRIzol、RNA

提取儀等方法提取

RNA。

332RT-PCR反應

..

反應使用體系一步法反應緩沖液引物各

RT-PCR20μL:10μL2×RT-PCR、MF/MR0.5μL

反轉錄酶聚合酶混合液模板處理水

(10μmol/L)、0.4μL/TaqDNA、4μLRNA,4.6μLDEPC。

反應條件為反轉錄預變性進行個

:

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