DB62/T2522—2021羊梭菌性疾病防治技術(shù)規(guī)范2021-09-04實施2021-09-04實施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB62/T2522—2014《羊梭菌病防治技術(shù)規(guī)范》,與DB62/T2522—2014相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了文件名稱；——更改了規(guī)范性引用文件；——更改了術(shù)語和定義，增加了更加詳細的內(nèi)容；剖檢變化和實驗室診斷等內(nèi)容，增加了更加詳細的表述； 增加了細菌分離及生化反應(yīng)試驗培養(yǎng)、毒素測定。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。本文件由甘肅省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心、成縣索池鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站、卓尼縣動物疫病預(yù)防控制中心、金川區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：盧旺銀、徐崢嶸、梁斌、張莉、鄭紅飛、祁福紅、包世民、陳永超、車小蛟。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2014年首次發(fā)布為DB62/T2522—2014;——本次為第一次修訂。本文件由甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心解釋。各單位或個人在執(zhí)行本文件過程中如發(fā)現(xiàn)需要修改和補充之處，請隨時將意見和建議反饋至《羊梭菌性疾病防治技術(shù)規(guī)范》地方標(biāo)準(zhǔn)編制組(地址：甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)紅柳灘路41號，郵編：730046,聯(lián)系人：鄭紅飛，E-mail:635582032@,聯(lián)系方式,以供今后修訂時參考。1僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T39915動物飼養(yǎng)場防疫準(zhǔn)則NY/T1167畜禽場環(huán)境質(zhì)量及衛(wèi)生控制規(guī)范NY/T1168畜禽糞便無害化處理技術(shù)規(guī)范NY5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則NY5032無公害食品畜禽飼料和飼料添加劑使用準(zhǔn)則NY/T5151無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則由腐敗梭菌引起的一種急性傳染病，以突然死亡，胃底或幽門區(qū)點、斑狀或彌漫性24.1羊快疫6月齡～18月齡營養(yǎng)狀況較好的綿羊最易感，山羊和鹿也可感染發(fā)病。主節(jié)經(jīng)消化道感染。潮濕低洼的環(huán)境以及寒冷腔、心包有大量積液，暴露于空氣易于凝固，膽無菌采取病死羊心臟、肝臟、脾臟涂片，用革蘭氏、瑞氏或美藍染色后鏡檢，可見革蘭氏陽性的、兩端鈍圓、單個或短鏈的桿狀細菌，有的數(shù)個連接在一起形成長短不等3.2符合4.1.1、4.1.2和4.1.3的，同時符合或的，確診為羊快疫。4.2羊腸毒血癥4.2.1流行特點2月齡～12月齡的綿羊最易發(fā)病，山羊少見。本病具有明顯的季節(jié)性和條件性。在牧區(qū)，多發(fā)生于春末夏初，或秋季牧草結(jié)籽后；在農(nóng)區(qū)，多發(fā)于采收和收糧季節(jié)。4.2.2臨床癥狀抽搐型突然發(fā)病，死亡前，四肢劇烈劃動，肌肉抽搐，眼球轉(zhuǎn)動，磨牙，流涎，隨后頭頸顯著抽搐，于2h~4h內(nèi)死亡。昏迷型病程稍長，羊只表現(xiàn)不安、步態(tài)不穩(wěn)，隨后倒地，呼吸急促，心跳加快，全身肌肉震顫，感覺敏感，流涎，上下頜摩擦“咯咯”作響，角弓反張，鼻流白沫，眼結(jié)膜和口黏膜蒼白，角膜反射消失，四肢和耳尖發(fā)冷，發(fā)出哀鳴，繼而昏迷，有的病羊發(fā)生腹瀉，排黑色或深綠色稀糞，通常在3h～4h內(nèi)死亡。4.2.3剖檢變化病死羊尸體僵硬，腹部膨大，口鼻流出泡沫狀液體或黃綠色胃內(nèi)容物。真胃含有未消化的飼料；小腸黏膜充血、出血，嚴(yán)重的整個腸壁呈血紅色，腸內(nèi)有血紅色內(nèi)容物；膽囊腫大；腎臟腫大、充血、實質(zhì)變軟，重者軟化如泥狀，稍加觸壓即爛；肺臟充血、水腫，氣管和支氣管內(nèi)充滿白色泡沫；胸腔、腹腔及心包腔內(nèi)有灰黃色積液，混有纖維素性滲出物；心臟擴張，心外膜有出血點，心冠部脂肪黃染；全身淋巴結(jié)腫大、充血。4.2.4實驗室診斷細菌學(xué)檢查無菌采取病死羊的小腸內(nèi)容物、腎、淋巴結(jié)或刮取病變部黏膜涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見到大量有莢膜的兩端鈍圓、短粗、單個、成對或短鏈狀革蘭氏陽性桿菌。細菌分離培養(yǎng)無菌采取病死羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟等病料分別接種于葡萄糖鮮血瓊脂和肝片肉湯，37℃厭氧培養(yǎng)24h,可見在葡萄糖鮮血瓊脂上形成微隆起、表面有放射狀條紋、邊緣呈鋸齒狀、灰白色、半透明、在肝片肉湯培養(yǎng)基可見肝片肉湯渾濁，產(chǎn)生氣泡，管底形成白色沉淀物。毒素測定主要采取病死羊的回腸及其內(nèi)容物。用標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)氣莢膜梭菌抗毒素與處理得到的腸內(nèi)容物上清液做中和試驗。結(jié)果A、B、C型血清無中和作用，小鼠死亡，D型血清中和毒素，小鼠存活，則證明羊腸毒血癥病原為D型魏氏梭菌。操作方法按照附錄A執(zhí)行。44.3羊猝狙無菌采取病死羊的腸內(nèi)容物或黏膜壞死部分做涂片染色鏡檢，可見到大量單獨或成雙排列兩端鈍主要采取病死羊的回腸及其內(nèi)容物或刮取的病變部黏膜。用標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)氣莢膜梭菌抗毒素與處理得到4.4羊黑疫5主要引起12月齡以上的綿羊感染，尤其以24月齡～48月齡營養(yǎng)良好的綿羊最多發(fā)，病程十分急促，絕大多數(shù)病羊未見臨床癥狀突然死亡，少數(shù)病例病程稍長，可達1d～2d,一般不超達2cm～3cm,壞死灶灰黃色，界限清晰為不整圓形，周圍常有炎性充血帶，有時可見肝片吸蟲幼蟲或采集病羊的心、肝、脾、淋巴結(jié)等涂片，染色鏡檢，可見粗大、兩端鈍圓、菌體多平直或略彎曲、蔓延生長。4.5羔羊痢疾主要發(fā)生于7日齡以內(nèi)的羔羊，尤其2日齡～3日齡的發(fā)病最多，主要通過4.5.2臨床癥狀下痢型6充血，間或出血。肺臟充血淤血，心包有積培養(yǎng)24h,可見在葡萄糖鮮血瓊脂上形成微隆起、表面有放射狀條紋、邊緣呈鋸齒狀、主要采取病死羊的回腸及其內(nèi)容物或刮取的病變部黏膜。用標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)氣莢膜梭菌抗毒素與處理得到存活，則證明羔羊痢疾病原為B型魏氏梭菌。操作方法詳見附錄A。未發(fā)病的羊應(yīng)全群預(yù)防性給藥，可選用長效土霉素(15mg/kg體重，肌內(nèi)注射，1次/d,連用2d～3d)、7多西環(huán)素(2mg/kg體重，肌內(nèi)注射或靜脈注射，1次/d,連用2d～3d)、抗血清等。5030的規(guī)定。對被污染的圈舍和場地、用具，用3%的燒堿溶液或20%的漂白粉溶液消毒滅菌。6治療6.1使用國家批準(zhǔn)的針對本病的中西藥物，藥物的選用應(yīng)符合NY/T5030的規(guī)定。6.2選用青霉素(2萬Ukg～3萬Ukg體重，肌內(nèi)注射，2次/d～3次/d,連用2d～3d)、阿莫西林 (15mg/kg體重，肌內(nèi)注射，2次/d～3次/d,連用2d～3d)、土霉素(10mg/kg~20mg/kg體重，口服或肌內(nèi)注射，2次/d,連用3d~5d)、四環(huán)素(10mg/kg～20mg/kg體重，口服，2次/d,連用2d~3d)、磺胺六甲氧嘧啶(25mg/kg～50mg/kg體重，首次加倍，口服、肌內(nèi)注射或靜脈注射，1次/d~2次/d,連用3d~5d)、復(fù)方磺胺嘧啶鈉(以SD計20mg/kg~30mg/kg體重，肌內(nèi)注射，1次/d～2次/d,連用6.3羊黑疫可在發(fā)病早期靜脈或肌內(nèi)注射抗諾維梭菌血清50mL～80mL,連用1～2次，同時可用蛭得凈16mg/kg體重、三氯苯唑8mg/kg～12mg/kg體重、丙硫咪唑10mg/kg體重、硫雙二氯酚80mg/kg體重或硝氯酚4mg/kg~5mg/kg體重等進行全群驅(qū)蟲。6.4羊快疫可選用磺胺脒8g(或磺胺嘧啶2.5g),次硝酸鉍10g,鞣酸蛋白5g,加水100mL,混勻一次灌服，1次/d,連用2d～3d;或在發(fā)病早期灌服10%石灰乳50mL/次~100mL/次，間隔12h,連用2磺胺胍0.5g,鞣酸蛋白0.2g,次硝酸鉍0.2g,重碳酸鈉0.2g,加水灌服，每天3次。8(規(guī)范性)產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素的分離和鑒定方法A.1毒素檢查羊只死亡后，盡快取小腸內(nèi)容物(最好是回腸內(nèi)容物),加1%的氯仿防腐，在冷藏條件下送檢。實驗室在收到送檢材料后，用生理鹽水稀釋2～4倍(若內(nèi)容物稀薄，不必稀釋),充分混合后經(jīng)離心沉淀 (3000r/min)15min,取上清液，用賽氏濾器過濾后，1份直接注射動物(兩只),另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室溫處理1h以致活c和1毒素，破壞β毒素，然后注射另一組動物(兩只)。若無離心機和賽氏濾器，可用濾紙反復(fù)過濾，直到濾液清朗即可。動物可用小鼠(靜脈注射0.2mL～0.4mL)或家兔(靜脈注射2mL～4mL)。注射后至少觀察24h,根據(jù)兩組動物的反應(yīng)情況作出判斷。如腸毒素含量低，動物也可能于注射后一定時間內(nèi)呈現(xiàn)輕度昏迷，呼吸加快，經(jīng)1h左右可能恢復(fù)。正常綿羊腸內(nèi)容物注射后不引起反應(yīng)。也可用豚鼠進行毒素檢查。方法為皮內(nèi)注射上述檢濾液0.2mL～0.4mL,觀察48h,如果有毒素存在，注射部可見壞死變化。A.2中和試驗A.2.1取滅菌試管5支，編為1、2、3、4、5號，然后按表1所列，分別加入含毒素濾液、抗毒素和生理鹽水，每管總量為1.2mL。混合后將5個管同時放置37℃溫箱中，中和40min。表A.1中和試驗方法加樣表