第3章第2節(jié)第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建二/第一步：目的基因的篩選與獲取一/第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三/第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定四/DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定五/一基因表達(dá)載體的構(gòu)建思考：如何獲得一只熒光魚基因工程的操作步驟1.目的基因的篩選與獲取2.基因表達(dá)載體構(gòu)建（核心）3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的檢測(cè)和鑒定任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體問題1：為什么構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體？①直接將生物的所有DNA導(dǎo)入受體，針對(duì)性差，無法確定是否導(dǎo)入受體細(xì)胞根據(jù)閱讀獲得的信息，思考下列問題：②目的基因?qū)胧荏w，往往會(huì)被細(xì)胞分泌的酶分解消化掉，不能表達(dá)③目的基因游離的DNA片段無法隨著細(xì)胞的分裂進(jìn)行復(fù)制，導(dǎo)致子代細(xì)胞不含有該基因④目的基因不含有表達(dá)元件，如啟動(dòng)子、終止子等，無法直接表達(dá)一基因表達(dá)載體的構(gòu)建任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體問題2：表達(dá)載體由哪些元件組成？復(fù)制原點(diǎn)根據(jù)閱讀獲得的信息，思考下列問題：復(fù)制原點(diǎn)標(biāo)記基因XbaⅠHindⅢBamHⅢSmaⅠ啟動(dòng)子標(biāo)記基因多克隆位點(diǎn)：多個(gè)限制酶切點(diǎn)啟動(dòng)子終止子終止子一基因表達(dá)載體的構(gòu)建一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子本質(zhì)：特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段位置：基因上游功能：RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出來需要蛋白質(zhì)特性：對(duì)于多細(xì)胞受體生物，具有物種特異性和基因表達(dá)的組織細(xì)胞特異性限制酶切割位點(diǎn)一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子誘導(dǎo)型啟動(dòng)子根據(jù)需要為目的基因加上受某種物質(zhì)或者環(huán)境因素影響而誘導(dǎo)表達(dá)的啟動(dòng)子，使目的基因在受體生物細(xì)胞中的表達(dá)受到控制。如：雌激素誘導(dǎo)啟動(dòng)子限制酶切割位點(diǎn)一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子不同類型啟動(dòng)子組成型啟動(dòng)子（一直干活）限制酶切割位點(diǎn)組織特性啟動(dòng)子（特定組織中干活）誘導(dǎo)型啟動(dòng)子（特定誘導(dǎo)物下干活）一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子本質(zhì)：特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段位置：基因下游功能：使轉(zhuǎn)錄在所需的地方停下來，即終止轉(zhuǎn)錄限制酶切割位點(diǎn)②終止子一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子位置：?jiǎn)?dòng)子和終止子之間

本質(zhì)：一般具有多種限制酶的酶切位點(diǎn)功能：目的基因插入的部位限制酶切割位點(diǎn)②終止子③多克隆位點(diǎn)一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子類型：限制酶切割位點(diǎn)②終止子③多克隆位點(diǎn)④標(biāo)記基因抗生素的抗性基因，如：抗氨芐青霉素基因、抗四環(huán)素基因熒光蛋白基因，如：綠色熒光蛋白基因（GFP）、紅色熒光蛋白基因（RFP）生化標(biāo)記基因，如：lacZ（β半乳糖苷酶基因）營養(yǎng)缺陷型基因，如：合成某些氨基酸功能：便于重組DNA分子的篩選一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(1)：表達(dá)載體組成①啟動(dòng)子特性：限制酶切割位點(diǎn)②終止子③多克隆位點(diǎn)④標(biāo)記基因與特定的受體細(xì)胞相匹配。功能：外源基因在受體細(xì)胞中能穩(wěn)定復(fù)制并遺傳⑤復(fù)制原點(diǎn)任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體問題3：酶切位點(diǎn)為何要位于啟動(dòng)子和終止子之間？酶切位點(diǎn)為目的基因的連接位點(diǎn)目的基因必需插入啟動(dòng)子與終止子之間才能被轉(zhuǎn)錄一基因表達(dá)載體的構(gòu)建（目的基因?yàn)楹我B在啟動(dòng)子和終止子之間？）限制酶切割位點(diǎn)箭頭表示的是：?jiǎn)?dòng)子的轉(zhuǎn)錄方向即基因轉(zhuǎn)錄的方向一基因表達(dá)載體的構(gòu)建1：表達(dá)載體(2)：表達(dá)載體構(gòu)建過程①用一定的限制酶切割載體，使其出現(xiàn)一個(gè)切口。②用同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段③將切下的基因片段拼接到載體的切口處，再加入適量DNA連接酶，形成了一個(gè)重組DNA分子基因表達(dá)載體任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體問題5：雙酶切比單酶切有哪些優(yōu)點(diǎn)？根據(jù)閱讀獲得的信息，思考下列問題：目的基因不會(huì)被環(huán)化一基因表達(dá)載體的構(gòu)建質(zhì)粒不會(huì)重新環(huán)化目的基因與質(zhì)粒不會(huì)發(fā)生反向連接任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體一基因表達(dá)載體的構(gòu)建問題4：保證目的基因按照一定順序插入，反插會(huì)產(chǎn)生什么影響？正向插入反向插入5’3’3’5’5’3’3’5’編碼鏈模板鏈5’3’AAUGCACmRNA編碼鏈模板鏈GUGCAUUmRNA一基因表達(dá)載體的構(gòu)建問題4：保證目的基因按照一定順序插入，反插會(huì)產(chǎn)生什么影響？5’-AAUGCAC-3’mRNA正向mRNA5’-GUGCAUU-3’mRNA反向mRNA5’-AAUGCAC-3’兩個(gè)mRNA恰好反向互補(bǔ)干擾翻譯的進(jìn)行（類別表觀遺傳中反義RNA使基因沉默）任務(wù)一：基因表達(dá)載體的構(gòu)建活動(dòng)1：構(gòu)建gfp基因的表達(dá)載體問題5：載體有哪些類型？表達(dá)載體相比，有哪些特點(diǎn)。根據(jù)閱讀獲得的信息，思考下列問題：一基因表達(dá)載體的構(gòu)建pBR載體只有：復(fù)制起點(diǎn)+抗性基因+酶切位點(diǎn)這類載體能否表達(dá)呢？沒有啟動(dòng)子、終止子等表達(dá)元件，無法表達(dá)。此類載體能復(fù)制，成為克隆載體。一基因表達(dá)載體的構(gòu)建2：載體的類型（1）表達(dá)載體復(fù)制原點(diǎn)+

表達(dá)元件+酶切位點(diǎn)+標(biāo)記基因

限制酶切割位點(diǎn)作用：目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，轉(zhuǎn)錄翻譯成蛋白質(zhì)。復(fù)制原點(diǎn)+酶切位點(diǎn)+標(biāo)記基因

作用：目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制，但不一定表達(dá)。（2）克隆載體一基因表達(dá)載體的構(gòu)建限制酶切割位點(diǎn)①啟動(dòng)子②終止子③多克隆位點(diǎn)（限制酶切位點(diǎn)）④標(biāo)記基因⑤復(fù)制原點(diǎn)基因表達(dá)載體必須具備的條件基因克隆載體必須具備的條件2：載體的類型第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建二/第一步：目的基因的篩選與獲取一/第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三/第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定四/DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定五/二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)1：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到斑馬魚受體細(xì)胞呢？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)1：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到斑馬魚受體細(xì)胞呢？問題1：選擇哪種細(xì)胞作為受體細(xì)胞適合？導(dǎo)入卵細(xì)胞（受精卵）可以獲得穩(wěn)定遺傳的個(gè)體二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)1：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到斑馬魚受體細(xì)胞呢？問題2：如何將載體導(dǎo)入到受精卵細(xì)胞？通過顯微注射的方法操作方法：首先將含有綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體提純，并使DNA濃度保持在1-3ug/ml;然后從雌性動(dòng)物體內(nèi)提取出卵（卵可以在體外受精，也可以在體內(nèi)受精），采用顯微注射儀進(jìn)行顯微注射。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1：目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（1）方法顯微注射法

受體細(xì)胞：受精卵（2）操作目的基因表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩┦芫岩浦诧@微注射法雌性動(dòng)物輸卵管和子宮發(fā)育為具有新性狀的動(dòng)物顯微鏡下用口徑1um的玻璃微管向受精卵注射含500-600個(gè)拷貝的含有目的基因的載體二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？問題2：有人認(rèn)為“農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒中的生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素基因表達(dá)刺激了楊樹枝條的增生”，同學(xué)們，你們認(rèn)為這個(gè)合理嗎？補(bǔ)充：當(dāng)微生物缺少選擇壓力時(shí)，可能會(huì)發(fā)生質(zhì)粒的丟失，導(dǎo)致質(zhì)粒基因控制的性狀不能穩(wěn)定遺傳植物產(chǎn)生冠癭瘤，說明兩個(gè)激素基因可以穩(wěn)定遺傳表達(dá)二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？問題3：結(jié)合下圖，嘗試說出Ti質(zhì)粒中的T-DNA序列是如何轉(zhuǎn)移到楊樹細(xì)胞中的，以及如何整合至其基因組的？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？問題3：結(jié)合下圖，嘗試說出Ti質(zhì)粒中的T-DNA序列是如何轉(zhuǎn)移到楊樹細(xì)胞中的，以及如何整合至其基因組的？當(dāng)植物體受損時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物（乙醚丁香酮），吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞。這時(shí)農(nóng)桿菌中的Ti-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA）可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，即植物細(xì)胞的基因組上。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？將目的基因連接在Ti質(zhì)粒上，農(nóng)桿菌侵染植物后，Ti質(zhì)粒中的T-DNA區(qū)段脫離質(zhì)粒攜帶目的基因的T-DNA進(jìn)入受體植物細(xì)胞并整合到染色體上。問題4：請(qǐng)說出科學(xué)家選擇農(nóng)桿菌作為植物轉(zhuǎn)基因過程中運(yùn)載體的理由？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？問題5：什么是冠癭堿？Ti質(zhì)粒上有冠癭的合成基因，為什么冠癭堿合成基因與冠癭堿代謝基因位于Ti質(zhì)粒上的不同位置？資料3：冠癭堿是一種含氮有機(jī)物，可以作為農(nóng)桿菌的碳源和氮源，其他微生物不能利用，因此，冠癭堿是農(nóng)桿菌專屬營養(yǎng)。冠癭堿合成基因位于T-DNA上，這個(gè)基因一同轉(zhuǎn)入楊樹基因組中，表達(dá)產(chǎn)物將冠癭堿的合成量增加。為農(nóng)桿菌生存提供重組的營養(yǎng)。冠癭堿代謝基因一直位于農(nóng)桿菌細(xì)胞中，此基因表達(dá)的酶可以幫助農(nóng)桿菌代謝利用冠癭堿。農(nóng)桿菌讓植物細(xì)胞幫助合成“營養(yǎng)物質(zhì)”二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？問題6：農(nóng)桿菌為什么要刺激楊樹枝條增生而長(zhǎng)出冠癭瘤，對(duì)農(nóng)桿菌有何種價(jià)值呢？當(dāng)3個(gè)結(jié)構(gòu)基因隨T-DNA轉(zhuǎn)移并整合至受體細(xì)胞染色體后，生長(zhǎng)素基因和細(xì)胞分裂素基因的表達(dá)產(chǎn)物引起質(zhì)粒轉(zhuǎn)化區(qū)植物細(xì)胞不斷分裂與生長(zhǎng)，加上冠癭堿合成基因不斷合成冠癭堿并積累，導(dǎo)致植物細(xì)胞感染處冠癭瘤的形成。楊樹被農(nóng)桿菌寄生后增生出冠癭瘤，對(duì)農(nóng)桿菌而言，植物增生為農(nóng)桿菌提供了更適宜的生存空間；同時(shí)合成冠癭堿，還幫農(nóng)桿菌提供營養(yǎng)。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)2：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到植物受體細(xì)胞呢？小節(jié)：農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法是目前植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)中常用的方法。農(nóng)桿菌是一種土壤細(xì)菌，它侵染植物細(xì)胞后，會(huì)使植物細(xì)胞形成腫瘤。受感染的細(xì)胞可產(chǎn)生正常細(xì)胞所不能產(chǎn)生的生物堿，被農(nóng)桿菌用作碳源和氮源。人們發(fā)現(xiàn)在農(nóng)桿菌中存在一種環(huán)形的Ti質(zhì)粒，該質(zhì)粒上的一段DNA能狗從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)細(xì)胞，這段DNA被稱為轉(zhuǎn)移DNA。T-DNA上包含有高等植物的生長(zhǎng)素編碼基因和細(xì)胞分裂素編碼基因，可以插入植物基因組，引起植物細(xì)胞的變化。將目的基因連接在T-DNA上，可將目的基因一同轉(zhuǎn)移到植物的基因組上二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）①轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的原核生物，自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)于大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。①工具

農(nóng)桿菌目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在和表達(dá)的過程農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后，會(huì)使植物細(xì)胞形成腫瘤當(dāng)植物體受到損傷后，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌向這些細(xì)胞移動(dòng)，受感染的植物細(xì)胞產(chǎn)生正常細(xì)胞所不能產(chǎn)生的生物堿，被農(nóng)桿菌用作碳源和氮源。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）③原理Ⅰ.當(dāng)植物體受到損傷后，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌向這些細(xì)胞移動(dòng)，農(nóng)桿菌能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA（可轉(zhuǎn)移DNA）轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并將其整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。Ⅱ.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法就是將目的基因插到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA特定區(qū)段上通過T-DNA將其插入植物細(xì)胞染色體的DNA上，使目的基因得到穩(wěn)定的遺傳和表達(dá)二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）①原理二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）②

過程

兩次拼接第一次拼接：目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上；第二拼接（非人工操作）：被插入目的基因的T-DNA拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）④

過程

兩次導(dǎo)入第一次導(dǎo)入：目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌；第二導(dǎo)入（非人工操作）：將含有目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）⑤處理方法Ⅰ.將新鮮的從葉片上取下的圓形小片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)，然后篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，并通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育出完整的轉(zhuǎn)基因植物受體細(xì)胞：體細(xì)胞

二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）⑤處理方法Ⅱ.將花序直接浸沒在含有農(nóng)桿菌的溶液中一段時(shí)間，然后培養(yǎng)植株并獲得種子，在進(jìn)行篩選、鑒定等。受體細(xì)胞：受精卵

二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用的方法）⑥優(yōu)點(diǎn)T-DNA轉(zhuǎn)化頻率很高

，Ti質(zhì)粒上可插入幾百至幾千個(gè)堿基大小的DNA片段，成本低、操作相對(duì)簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)基因后代的遺傳組成比較容易分析。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（2）花粉管通道法（我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方法）①處理方法Ⅰ.子房注入法：用微量注射器將含有目的基因的DNA溶液直接注入子房中二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（2）花粉管通道法（我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方法）①處理方法Ⅱ.柱頭滴加法：在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2：目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（2）花粉管通道法（我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方法）②優(yōu)點(diǎn)Ⅰ.利用植物授粉后形成的天然花粉管通道，將外源基因攜帶進(jìn)入胚囊，此時(shí)的受精卵未形成細(xì)胞壁，且正在進(jìn)行活躍的DNA復(fù)制，容易將外源DNA片段整合到受體基因組中。受體細(xì)胞：受精卵Ⅱ.操作簡(jiǎn)單、技術(shù)成本低，免去了組織培養(yǎng)以及誘導(dǎo)再生植株的全套人工培養(yǎng)過程二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)3：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到大腸桿菌受體細(xì)胞呢？二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)3：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到大腸桿菌受體細(xì)胞呢？資料3：大腸桿菌在0℃的CaCl2低滲溶液中會(huì)發(fā)生膨脹，菌體細(xì)胞質(zhì)膜的磷脂層會(huì)形成特殊結(jié)構(gòu)。當(dāng)外源DNA接觸菌體細(xì)胞質(zhì)膜外側(cè)時(shí)，Ca會(huì)與DNA分子結(jié)合形成復(fù)合物，吸附在質(zhì)膜的外表面上，42℃的熱激處理會(huì)使細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜的特殊結(jié)構(gòu)出現(xiàn)許多通透性增強(qiáng)的膜間隙，外源DNA分子便通過膜間隙進(jìn)入菌體細(xì)胞。問題3：歸納導(dǎo)入大腸桿菌中的步驟二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞任務(wù)二：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞活動(dòng)3：如何將連有g(shù)fp基因的表達(dá)載體導(dǎo)入到大腸桿菌受體細(xì)胞呢？問題3：歸納導(dǎo)入大腸桿菌中的步驟步驟1：用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞被稱為感受態(tài)細(xì)胞。步驟2：是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定

溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞3：目的基因?qū)朐思?xì)胞（1）受體細(xì)胞原核細(xì)胞