ICS65.020.01CCSB051310IDB1310/T251—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由廊坊市農業農村局提出。本文件起草單位：廊坊市興延科技服務有限公司、廊坊師范學院。本文件主要起草人：蘇彥蘋、申彥平、馮雪、王秋芬、褚卓棟、孫艷香、張程亮、梁金明、袁志剛、張方悅。DB1310/T251—20211軟棗獼猴桃組織培養育苗技術規程本文件規定了軟棗獼猴桃組培育苗的術語和定義、培養基制備、初代培養、繼代培養、煉苗、移栽、大田移栽及管理、苗木出圃標準、保管、包裝及運輸、技術檔案管理。本文件適用于廊坊及氣候相近地區軟棗獼猴桃組織培養育苗生產。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6001—1985育苗技術規程GB19174—2010獼猴桃苗木LY/T1882—2010林木組織培養育苗技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。組培苗根據植物細胞全能性，將植物的體細胞、組織或器官進行離體培養，經過不同的細胞分化途徑重建形成不同的器官，誘導培育出的完整植株。外植體是指用于植物組織培養的接種材料，它包括植物體的各種器官、組織、細胞和原生質體等。繼代培養將誘導產生的芽、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養物重新分割，接種到新鮮培養基上進一步擴大培養的過程。4培養基制備培養基配方基本培養基采用MS培養基，具體的外植體誘導培養基及繼代培養基配方表見附錄A。母液配制2入不銹鋼鍋，加熱至沸騰，使培養基完全溶解，然后用1.0mol/L鹽酸或1.0mol/L氫氧化鈉溶液調整pH培養基配制完成后，在24h內完成滅菌。將分裝好的培養基放入滅菌鍋內，求操作，滅菌氣壓0.11MPa,溫度121℃,滅菌時間20min~25min。培養基滅菌完成后待溫度下降到80℃內使用完，2℃~4℃冷藏保存應在14d內使用完。4月至9月，選擇連續2d以上晴天的傍晚，采集母株樹冠外圍中上部幼嫩新梢，剪除葉片作為外植水的容器中，在23℃~25℃培養箱中催芽，每2d～3d換一次水，待葉芽萌動長出新梢后，采集幼嫩新可用濕潤毛巾等保濕材料包裹后保存0.5h～4.0h;用泡沫保鮮箱配備冰袋低溫保藏48.0h,注意3用自來水沖洗外植體表面，將外植體剪成4.0cm~6.0cm的帶芽莖段，放入裝有0.3%～0.5%中性洗接種前使用75%酒精將超凈工作臺的臺面及內壁擦拭干凈，然后啟動超凈工作30min。關閉紫外燈后開啟超凈工作臺風機，鼓風10min用75%酒精對雙手及手腕消毒，將預處理后的材料置于已消毒的超凈工作臺的莖段置于已滅菌的燒杯中，先用75%酒精浸泡外植體30s,無菌水清洗3次，每次30s,再鈉溶液滅菌10min,無菌水清洗3次，每次30s,用無菌濾紙吸干外植體表面的水分。也可選用其它外植于超凈工作臺上將已消毒的外植體莖段兩端各剪掉1mm,垂直插入誘導培養基，每個培養瓶接種3個莖段，均勻分布，接種后將培養瓶瓶口在酒精燈火焰上灼燒1s～2s,迅速蓋好瓶蓋，在培養瓶瓶壁上標明品種名稱、接種日期、接種人等信息，放入培養室培養。培養室溫度控制在(25±1)℃,光照強度為15001x～30001x,光照時數為16h/d。割成帶1個芽的莖段，轉接至繼代培養基中。接至新配制的繼代培養基中。此后定期將繼代培養基中的不當不定芽高度達3cm以上時，先將培養瓶置于溫度在20℃~30℃的溫室進行閉瓶煉苗3d,再打開培DB1310/T251—20214容器規格為直徑5.0cm～6.0cm、高度10.0cm～12.0cm的塑料營養缽或無紡布育苗袋。基質將蛭石和泥炭土按1:1體積比混合均勻，裝入容器備用。基質消毒移栽前1d～2d用500倍～800倍的50%多菌靈溶液澆透。溫室移栽及管理8.4.1溫室移栽移栽時間在3月～4月進行。用自來水清洗干凈不定芽基部的培養基，剪去部分老葉及基部的愈傷組織，只留兩葉一心，將不定芽基部用1mg/mL的萘乙酸溶液速蘸5s～10s，快速移栽到營養缽或育苗袋中，并澆透水。移栽時注意輕拿輕放以免損傷不定芽，移栽后7d內用塑料薄膜或保鮮膜覆蓋以保濕。8.4.2溫濕度控制移栽后保持溫室溫度在23℃~28℃,空氣濕度85%以上。8.4.3水肥管理移栽7d～14d后去除薄膜，澆水以見干見濕為原則，保證基質不缺水即可。移栽苗長出新葉后，每隔7d～10d噴施1次葉面肥，連續噴3次～4次。8.4.4病蟲害防治病蟲害防治遵照GB/T6001—1985的要求執行。9大田移栽及管理溫室幼苗高10cm以上時，澆一次透水，選擇在風小、光照弱的天氣的傍晚，去除營養缽或育苗袋，將帶土坨的幼苗按株距20cm、行距40cm移栽到大田。移栽后澆一次透水，以后根據土壤水分狀況及時灌水。前期可追施氮肥，中后期適當增加磷鉀肥的使用，并做好病蟲害防治及人工除草和松土。10苗木出圃標準側根數量≥4條，側根長度≥20cm，當年生苗主干高度≥100cm、地徑≥0.4cm、主干完全木質化。11保管、包裝及運輸按照GB19174—2010中第7章執行。12技術檔案管理按照GB/T6001—1985中第13章執行。DB1310/T251—20215（資料性）軟棗獼猴桃組培苗培養基配方表A.1軟棗獼猴桃組培苗培養基配方表見表A.1。表